一种白介素-33抑制剂多肽及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制白介素-33，能治疗胰腺癌的多肽。其序列为KVLLSYYESQHPSNESGDDGG是全新的序列，本发明的有益效益是该多肽可体内抑制白介素-33表达，治疗胰腺癌。抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖；提高在体内荷瘤小鼠生存率；具有药用价值。
【专利说明】一种白介素-33抑制剂多肽及其应用
[0001]【技术领域】:
本发明涉及药物领域，具体涉及用于抑制IL-33表达，治疗胰腺癌的白介素-33抑制剂多肽。
[0002]【背景技术】:
胰腺癌是一种恶性程度很高的消化道肿瘤，预后很差。胰腺癌的病理类型很多，其中来自导管立方上皮细胞的导管腺癌最多见，约占99%，它致密而坚硬，浸润性强，而且没有明显界限，常伴有纤维化增生及炎症反应，与慢性炎症肿块难以区别，易造成误诊。尽管胰腺癌的病因尚不明确，受遗传和环境的多因素影响。但越来越多的证据表明，胰腺癌和慢性炎症之间必然存在关联。胰腺纤维化是由于过多的细胞外基质(ECM)在胰腺内沉积所致，这是慢性胰腺炎和胰腺癌共有的病理学特性，胰腺组织中存在一种在形态和生物学特性上与肝星状细胞(HSCs)相似的肌成纤维样细胞，称作胰腺星状细胞(PSCs)，该细胞可表达A-平滑肌肌动蛋白(A-SMA)，合成过多的胶原和ECM，在胰腺纤维化过程中发挥重要作用。研究表明，胰腺的肌纤维母细胞、胰腺腺泡和导管上皮细胞中观察到IL-33的高表达。已证实IL-33参与了胰腺纤维化和慢性胰腺炎的病理生理，并可以刺激胰腺肌纤维母细胞的增殖和迁移，进而参与胰腺癌的发生发展。
[0003]IL-33在胰腺炎还是胰腺癌病理过程中，与很多细胞因子相互作用。(I)慢性纤维化过程中IL-33不断地促进内皮细胞的增殖、迁移和分化，进而促进血管发生，降低细胞间粘连蛋白相互作 用提高血管渗透性，为肿瘤的发生提供条件；(2) IL-33又能和IL-1协同上调IL-6的分泌。IL-6是重要的亲炎症介质，在多种人类肿瘤中起到促进肿瘤生长和抑制细胞凋亡的作用。主要通过JAK/STAT途径调节NF- K B, NF- κ B又调节肿瘤血管生成和侵袭，并有可能导致对化疗耐药的特殊肿瘤细胞的产生，其中包括胰腺癌细胞；(3) IL-33还可以单独刺激IL-8的释放。在肿瘤细胞及其微环境中，IL-8和其受体的表达增加，促进内皮细胞和肿瘤细胞的增殖和存活，并增强细胞在肿瘤部位的迁移。IL-33功能升高是胰腺癌发生的一个重要因素。因此，抑制IL-33表达，抑制胰腺癌发展，是治疗胰腺癌的新靶点。但是，尚未有开发成熟的IL-33抑制剂多肽的治疗胰腺癌的药物。
[0004]
【发明内容】
:
本发明提供全新的序列，该序列IL-33抑制剂多肽，对胰腺癌具有很好的疗效。
[0005]技术方案
本发明技术方案是提供一种白介素-33抑制剂多肽，其序列为KVLLSYYESQHPSNES⑶DGG，及在治疗胰腺癌药物中的应用。
[0006]本发明中的白介素-33抑制剂多肽2序列KVLLSYYESQHPSNES⑶DGG，可以靶向抑制白介素-33表达，抑制IL-33的效应，达到治疗胰腺癌的效果。
[0007]一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。
[0008]所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。
[0009]所述的白介素-33抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。[0010]有益结果:
发明人经过大量实验获知白介素-33抑制剂多肽2具有全新的序列，该多肽可体内抑制白介素-33表达，治疗胰腺癌。抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖；提高在体内荷瘤小鼠生存率；具有潜在的新药开发价值。
【具体实施方式】
[0011]本发明涉及多肽(KVLLSYYESQHPSNES⑶DGG)由吉尔生化(上海)合成。
[0012]实施例1
白介素-33抑制剂多肽对人胰腺癌细胞ASPC-1增殖的作用。
[0013]采用MTT比色法。将对数生长的ASPC-1细胞，以1.0X 105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物白介素-33抑制剂多肽和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率=(1-实验组吸光值/对照组吸光值)X 100%。计算出实验药物的IC50为7.43 μ M0当浓度为7.43 μ M时，对ASPC-1增殖抑制率为70.32%。
[0014]实施例2
白介素-33抑制剂多肽对人胰腺癌细胞ASPC-1裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验取对数生长期的人胰腺癌细胞ASPC-1细胞株，在无菌条件下制备成5Χ 1Vml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测I次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天I次；紫杉醇组10mg/kg,每周给药I次；恩度组2.5mg/kg,每天给药I次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天给药I次。试验结束后，小鼠处死,手术剥取瘤块称重。
[0015]表1多肽对人胰腺癌细胞ASPC-1裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
_— 起始略(g)g始终本体茕(g:!~iti ** (g) 抑縣
(mg/kg)动β切物
Ψ?数
闕—22,531222.79111.52?—
蒙杉 B1023.91S21.3260.417**72.11%
I,?2.522.01822.4480.93334,47%
多肽,?2022.48822.8180.351**76.19%
多駄中102L3S821.9780.371**74.21%
多歡低521,59S22.88B0.429”68.73 %
因此，多肽对人胰腺癌细胞ASPC-1裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人胰腺癌细胞ASPC-1移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应，存活率提闻。[0016]实施例3
用肿瘤模型检测白介素-33抑制多肽对肿瘤中白介素-33表达的影响。
[0017]取实施例2处死后的肿瘤组织进行白介素-33免疫结果实验，采用Motic ImagesAdvanced 3.2图像分析仪，在200倍镜下连续观察5个视野检测，测量灰度值，以灰度值表示白介素-33阳性表达的高低，灰度值越小，说明白介素-33阳性表达越低；灰度值越大，说明白介素-33阳性表达越高。结果，白介素-33抑制多肽具有抑制肿瘤白介素-33白表达的 作用。
【权利要求】
1.白介素-33抑制剂多肽，其特征在于其序列为KVLLSYYESQHPSNES⑶DGG。
2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。
4.如权利要求1所述的白介素-33抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。
5.如权利要求 1所述的白介素-33抑制剂多肽，在治疗胰腺癌药物中的应用。
【文档编号】A61K38/16GK104031128SQ201410281948
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月23日 优先权日:2014年6月23日
【发明者】罗瑞雪 申请人:苏州普罗达生物科技有限公司