具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法
【专利摘要】本发明属于纳米复合材料领域，公开了一种具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，以纳米四氧化三铁为核，使用二氧化硅包裹，由异硫氰酸荧光素标记，通过表面修饰3-氨丙基三乙氧基硅烷使其氨基化，然后通过羧氨交联接枝乳糖酸，最后通过活化羧基与前列腺癌干细胞抗原抗体(PSCA)。本发明方法简单，操作方便，得到的纳米颗粒具有主动靶向，生物相容性好，毒副作用小，单分散性与稳定性好，磁性与荧光性能稳定等优点。
【专利说明】具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法
【技术领域】:
[0001 ] 本发明涉及具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，属于生物医学【技术领域】。
【背景技术】:
[0002]Fe304纳米颗粒是一种典型的磁性材料，由于Fe304纳米粒子兼有纳米粒子的量子尺寸效应和表面效应以及磁性材料特有的磁响应性，使得它具有常规粒子所不具备的特殊性能:(l)Fe304纳米粒子具有优良的磁敏感性。磁性Fe304纳米粒子具有很强的磁性，可以在很弱的外加磁场中获得很强的磁感应，并且能够定向移动；(2)在一定尺寸分布范围内具有超顺磁性。当磁性纳米粒子的粒径小于16nm时,其各向异性减小到可以与热运动能相比拟，易磁化方向呈现无规律的变化，于是便产生了超顺磁性；(3)在外加交变电磁场的作用下能产生热量等。磁性Fe304纳米粒子在交变磁场的诱导下，可以产生高温、高热。
[0003]Fe304纳米粒子具有优异的磁性 能和良好的生物相容性，在细胞分离、靶向给药、癌症热疗、磁共振成像等领域有广阔的应用前景，是当今纳米生物医学领域的研究热点之一。磁性Fe304纳米粒子由于兼有纳米级材料的量子尺寸效应和磁性材料的磁偶极子引力作用，使得磁性纳米粒子团聚严重、化学稳定性差、易氧化、表面羟基不足，这些缺点直接限制了 Fe304纳米粒子的应用。而通过表面修饰,不但可以改善Fe304纳米粒子在溶液中的分散性能和稳定性，还可以调节纳米粒子与其他物质的相容性和反应特性。经过修饰的磁性纳米粒子必须具有以下几个特点，才可以用于医学领域:(1)亲水性，磁性纳米粒子表面的疏水基团必须被替换为亲水基团，否则在生物体内会严重团聚，同时这也是对磁性纳米粒子进行紀向改性的第一步；(2)生物相容性，纳米粒子本身必须具有良好的生物相容性，这样才不会被生物体的免疫系统识别为有害物质而遭到排除；(3)毒性，应用于生物医学领域的磁性纳米粒子必须是无毒或者低毒的，这样才不会对病人造成伤害；(4)形状，有研究表明，形状不规则例如棒状、孺虫状的纳米粒子较之球形纳米粒子更不容易被生物体的免疫系统识别为抗原。提高纳米粒子的长宽比例可以显著优化纳米材料在血液中的长程循环性能。类似的，高纵横比的磁性纳米粒子较之球形的磁性纳米粒子也具有更长的血液循环时间。这些结果表明，研究者们需要进一步确定何种长宽比例对磁性纳米粒子的药代动力学影响最大。(5)表面电荷，不同的电荷会影响磁性纳米粒子与某些蛋白质或细胞的结合；
(6)磁性，磁性纳米粒子应当可以轻易地被外加磁场操纵。所以选择理想的包覆材料，也是重要的研究。
[0004]介孔二氧化硅材料因具有大比表面积、高孔容、均匀可调的孔径、无毒性、良好的化学稳定性、易修饰等独特的组织和结构性能而成为一种理想的包覆材料。Fe304@Si02复合纳米粒子,兼有Fe304纳米粒子独特的磁性能和Si02纳米粒子生物相容性好、易表面修饰的优点。用二氧化娃对Fe304纳米粒子包覆,不但可以提高磁性纳米粒子的抗氧化能力和在液体介质中的分散性能，而且由于Si02纳米粒子表面极易功能化，可以容易地实现与各种有机分子和生物分子的链接，为进一步的表面修饰和应用奠定了基础。[0005]众所周知，荧光标记是监测活体中药物传输路线的一种实时、简单且有效的方法。因此，光功能化介孔二氧化硅药物缓释体系具有识别、跟踪和监测药物释放效率和疾病诊疗效果的能力，已经逐渐成为药物缓释领域另一个研究热点。目前，用于合成复合材料的荧光粉主要包括有机染料、量子点和稀土荧光粉。有机染料，例如荧光素异硫氰酸酯(FITC)、罗丹明(RITC)等，是一种传统的荧光材料。最大的缺点是容易发生光漂白和光淬灭，不适合敏感检测和实时跟踪。然而有机染料掺杂的二氧化硅复合材料的设计合成不但克服了有机染料的上述弊端，而且荧光强度比对应的单个染料分子明显增强。
[0006]目前，光磁功能化介孔二氧化硅材料的研究主要包括以下三个方面:(1)氧化铁和有机染料功能化的介孔二氧化硅/无孔二氧化硅复合材料；(2)氧化铁和量子点功能化的介孔二氧化硅/无孔二氧化硅复合材料；(3)氧化铁和稀土荧光粉功能化的无孔二氧化硅复合材料；多功能介孔二氧化硅复合材料既可以用于靶向给药系统又可以用于成像和光热治疗，而多功能无孔二氧化硅复合材料则很难被用作药物缓释载体。
[0007]很多专利都涉及关于多功能介孔二氧化硅的制备及应用。如:中国专利文献“基于荧光介孔二氧化硅蛋黄-蛋壳纳米胶囊的制备”
[0008](CN 102350281 A)公开了一种以荧光介孔二氧化硅为蛋壳，磁性纳米材料为蛋黄的纳米胶囊:中国专利文献“一种多功能纳米颗粒及其制备”(CN 103566381 A)公开了一种磁性纳米颗粒的制备，并在二氧化硅的表面修饰了亲水基团与靶向试剂；中国专利文献“一种多功能肿瘤成像剂制备方法与应用”(CN 102614532 A)公开了一种通过微乳液方法制备包裹荧光染料和磁性纳米颗粒为核二氧化硅为壳的纳米颗粒，表面修饰了多肽；中国专利文献“多功能的偏心介孔二氧化硅纳米粒子的制备方法”(CN103211767A)公开了一种将聚丙烯酸连接在氨基修饰过的二氧化硅表面，并将其作为载体构建了一个PH响应的控制药物传输系统；中国专利文献“多功能核壳结构药物载体及其制备”(CN 101670107 A)公开了一种通过溶胶-凝胶制备双层二氧化过包裹四氧化三铁，最后加荧光冲国专利文献“多功能核壳结构荧光编码磁性微球及其制备方法”(CN 102120168 A)公开了一种通过调节两种荧光素的不同配比达到制备多种荧光编码磁性微球。而关于通过以纳米四氧化三铁为核，使用二氧化硅包裹，由异硫氰酸荧光素标记，通过表面修饰3-氨丙基三乙氧基硅烷使其氨基化，然后通过羧氨交联接枝乳糖酸，最后通过活化羧基与前列腺癌干细胞抗原抗体(PSCA)，得到主动靶向功能的双模态介孔硅纳米粒子实现方法的专利，还没有类似的报道。
【发明内容】
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[0009]本发明的目的在于提供一种具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，以纳米四氧化三铁为核，使用二氧化硅包裹，由异硫氰酸荧光素标记，通过表面修饰3-氨丙基三乙氧基硅烷使其氨基化，然后通过羧氨交联接枝乳糖酸，最后通过活化羧基与前列腺癌干细胞抗原抗体(PSCA)，该方法简单，操作方便，得到的纳米颗粒具有主动靶向，生物相容性好，毒副作用小，单分散性与稳定性好，磁性与荧光性能稳定等优点。
[0010]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法:首先制备异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，再以氨水作为催化剂，在四氧化三铁纳米溶液中，加入四乙氧基硅烷和异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，反应得到具有双功能团的介孔二氧化硅纳米颗粒，再用3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰氨基，进而为纳米颗粒修饰乳糖酸提供功能基团，交联乳糖酸以后，利用碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺与乳糖酸的羧基形成半稳定的氨活性NHS酯，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗发生缩合反应形成酰胺键，实现抗体交联，得到主动祀向功能的双模态介孔娃纳米粒子。
[0011]进一步的，所述光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法具体包括以下步骤:
[0012](1)将0.01g~1g0.01mmol~1mmol的异硫氰酸突光素和0.1Og~1g0.1mmol~1mmol的3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到1ml~10ml的乙醇中，在10°C~60°C下,避光通氮气0.1mol~5mol反应1h~28h,得到异硫氰酸突光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，记做FITC-APTES ；
[0013](2)将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液0.1ml~1ml0.001 g/ml~1g/ml分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min,加入氨水0.1ml~1ml,浓度为0.lmol/1~20mol/l作为催化剂，在10°C~6CTC下,剧烈揽拌1min~6.5h,搅拌速度为60r/s，加入0.01ml~5ml的四乙氧基硅烷，在10°C~60°C下，反应2h~24h，加入步骤(1)合成的异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷0.1ml~20ml，继续搅拌2h~24h,在Ih~1h内逐滴加入0.01ml~1ml的四乙氧基硅烷,避光剧烈搅拌Ih~10h，搅拌速度为60r/s，得到双功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存；
[0014](3)将0.01g~1g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min使其充分溶解，在30min~5h内逐滴加完0.1ml~20ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，50°C~240V下，剧烈搅拌Ih~24h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次；
[0015](4)取0.1ml~1ml lmg/ml~10mg/ml的含半乳糖基的乳糖酸分子,在冰水浴下向其中加入0.1ml~1ml0.lmg/ml~10mg/ml的1-(3- 二甲基氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐和0.1mL~1ml0.lmg/ml~10mg/ml N-羟基丁二酰亚胺，超声反应20min~2h,使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液混合，持续搅拌Ih~19h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ；
[0016](5)将0.1Omg~1mg碳二亚胺盐酸盐和0.01mg~20mg N-羟基硫代琥拍酰亚胺，混合在Iml~1ml的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，缓冲液浓度为0.01mol/l~10mol/l，pH为4~9.5，最后加入1ml~50ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在10°C~60°C避光搅拌20h~40h,搅拌速度60r/s ;碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥拍酰亚胺与乳糖酸的羧基形成半稳定的氨活性NHS酯，透析分离后加入到pH为4~8.5，浓度为0.001mol/l~1mol/I的Iml~50ml的磷酸盐缓冲液中，再加入0.1 μ I~100 μ I的10 μ g/ml~100 μ g/ml的前列腺干细胞抗原，在10°C~60°C避光反应4h~22h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0017]进一步的，所制备的异硫氰酸荧光素修饰的氨丙基三乙氧基硅烷保存在4°C下。[0018]进一步的，所述步骤(2)中，逐滴滴加四乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在Ih~1h滴加完。
[0019]进一步的，所述步骤(2)中，乙醇和水的混合液中乙醇和水的体积比为5:2。
[0020]进一步的，所述步骤(3)中，逐滴滴加3-氨丙基三乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在30min~5h滴加完。
[0021]进一步的，所述步骤(3)中，乙醇和水的混合液中乙醇和水的体积比为5:1。
[0022]进一步的，所述步骤(4)中，冰水浴的的温度为零摄氏度；
[0023]进一步的，所述步骤(4)中，活化的乳糖酸溶液和步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液 的混合比例为1:3。
[0024]本发明的有益效果:
[0025]1、本发明方法简单，快速，操作方便，重复性好，具有通用型，实验条件易实现；
[0026]2、本发明得到的纳米颗粒分散性好，稳定性好，介孔可装载需要的药物；
[0027]3、本发明的纳米颗粒具有多种功能，既具备了磁性纳米颗粒的功能，又具备荧光探针的功能；
[0028]4、本发明得到的纳米颗粒具有很好的生物相容性，无生物毒性；
[0029]5、本发明纳米颗粒的表面修饰了 APTES，具有丰富的氨基，有利于再修饰，并可广泛应用于生物载药；
[0030]6、本发明个步骤条件简单，温和，自然环保。
【专利附图】
【附图说明】:
[0031]图1为本发明制备前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的过程原理图。
[0032]图2为前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的透射电镜图。
[0033]图3为前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的在体磁共振成像图，图中A-第一天，B-第二天，C-第三天，D-第四天，E-第五天。
[0034]图4为前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的荧光光谱图。
[0035]图5为前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的荧光显微图像。
【具体实施方式】:
[0036]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0037]如图1所示，本法明为具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤:
[0038](I)将0.01g~1g0.01mmol~1mmol的异硫氛酸突光素和0.1Og~1g0.1mmol~1mmol的3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到1ml~10ml的乙醇中，在10°C~60°C下,避光通氮气0.1mol~5mol反应1h~28h,得到异硫氰酸突光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，记做FITC-APTES ；
[0039](2)将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液0.1ml~1ml0.001g/ml~1g/ml分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min,加入氨水0.1ml~1ml,浓度为0.lmol/1~20mol/l作为催化剂，在10°C~6CTC下,剧烈揽拌1min~6.5h,搅拌速度为60r/s，加入0.01ml~5ml的四乙氧基硅烷，在10°C~60°C下，反应2h~24h，加入步骤(1)合成的异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷0.1ml~20ml，继续搅拌2h~24h,在Ih~1h内逐滴加入0.01ml~1ml的四乙氧基硅烷,避光剧烈搅拌Ih~10h，搅拌速度为60r/s，得到双功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存；
[0040](3)将0.01g~1g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min使其充分溶解，在30min~5h内逐滴加完0.1ml~20ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，50°C~240°C下，剧烈搅拌Ih~24h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次；
[0041](4)取0.1ml~10mllmg/ml~10mg/ml的含半乳糖基的乳糖酸分子,在冰水浴下向其中加入0.1ml~1ml0.lmg/ml~10mg/ml的1-(3- 二甲基氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐和0.1mL~1ml0.lmg/ml~10mg/ml N-羟基丁二酰亚胺，超声反应20min~2h,使乳糖酸的羧酸基团 活化，然后将活化的乳糖酸溶液与步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液混合，持续搅拌Ih~19h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ；
[0042](5)将0.1Omg~1mg碳二亚胺盐酸盐和0.01mg~20mg N-羟基硫代琥拍酰亚胺，混合在Iml~1ml的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，缓冲液浓度为0.01mol/l~10mol/l，pH为4~9.5，最后加入1ml~50ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在10°C~60°C避光搅拌20h~40h,搅拌速度60r/s ;碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥拍酰亚胺与乳糖酸的羧基形成半稳定的氨活性NHS酯，透析分离后加入到pH为4~8.5，浓度为0.001mol/l~1mol/I的Iml~50ml的磷酸盐缓冲液中，再加入0.1 μ I~100 μ I的10 μ g/ml~100 μ g/ml的前列腺干细胞抗原，在10°C~60°C避光反应4h~22h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0043]作为本发明的更具体的实施方式，上述所制备的异硫氰酸荧光素修饰的氨丙基三乙氧基硅烷应保存在四摄氏度下。
[0044]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(2)中，逐滴滴加四乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在Ih~10滴加完。
[0045]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(2)中，乙醇和水混合液的体积比为5:2。
[0046]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(3)中，逐滴滴加3-氨丙基三乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在30min~5h滴加完。
[0047]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(3)中，乙醇和水混合液的体积比为5:1。[0048]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(4)中，冰水浴的的温度为零摄氏度；
[0049]作为本发明的更具体的实施方式，步骤(4)中，活化的乳糖酸溶液和步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液的混合比例为1:3。
[0050]为了简便，下述化合物使用英文简称:
[0051]1、异硫氰酸荧光素:FITC ;2、3-氨丙基三乙氧基硅烷=APTES ;3、四乙氧基硅烷:TEOS ;4、异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷:FITC-APTES ;5、乳糖酸:LA ;6、
1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺:EDC;7、N-羟基丁二酰亚胺:NHS ;8、光磁多功能介孔硅=FMNPs ;9、碳二亚胺盐酸盐:EDAC ;10、N-羟基硫代琥珀酰亚胺:Sulfo_NHS ;11、
2-吗啉乙磺酸:MES;12、前列腺干细胞抗原:PSCA。
[0052]实施例1
[0053]将0.01g0.01mmol 的 FITC 和 0.1Og0.1mmol 的 APTES 加入到 1ml 的乙醇中，在10°C下，避光通氮气0.1mol,反应10h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液0.1ml0.001 g/ml分散在1ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2，超声20min,加入0.lmol/1的氨水0.1ml作为催化剂,在10°C下，剧烈搅拌1min,搅拌速度60r/s，加入0.01ml的TE0S，在I (TC下，反应2h，加入FITC-APTES0.1ml，继续搅2h，在Ih内逐滴加完0.01ml的TE0S，避光剧烈搅拌10h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用Iml的水做第一次离心洗涤，Iml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将0.01g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在1ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声20min使其充分溶解，在30min内逐滴加完0.1ml的APTES，在50°C下，剧烈搅拌lh，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用Iml的水做第一次离心洗涤，Iml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml的水做第三次离心洗涤三次。取0.1mllmg/ml的LA，在冰水浴下向其中加入0.1ml0.lmg/ml的EDC和0.1mL0.lmg/ml NHS，超声反应20min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌lh，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将0.1Omg的EDAC和0.01mg的Sulfo-NHS，混合在Iml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为0.01mol/l, pH为4，最后加入1ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在10°C避光搅拌20h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到Iml的pH为4浓度为
0.0Olmol/1磷酸盐缓冲液中，再加入0.1μ I的10 μ g/ml的PSCA，在I (TC避光反应4h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0054]实施例2
[0055]将0.1g0.1mmol 的 FITC 和 0.20g0.5mmol 的 APTES 加入到 20ml 的乙醇中，在 20°C下，避光通氮气0.5mol,反应12h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液0.2ml0.0I g/ml分散在20ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2，超声30min，加入lmol/1的氨水0.5ml作为催化剂，在20°C下，剧烈搅拌30min,搅拌速度60r/s,加入0.1ml的TE0S，在20°C下，反应5h，加入FITC-APTES0.5ml，继续搅5h，在2h内逐滴加完0.1ml的TE0S，避光剧烈搅拌12h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用2ml的水做第一次离心洗涤，2ml的乙醇做第二次离心洗涤，2ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将0.1g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在20ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声30min使其充分溶解，在60min内逐滴加完0.5ml的APTES，在80°C下，剧烈搅拌3h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用2ml的水做第一次离心洗涤，2ml的乙醇做第二次离心洗涤，2ml的水做第三次离心洗涤三次。取lml2mg/ml的LA，在冰水浴下向其中加入1ml lmg/ml的EDC和0.5mLlmg/ml NHS,超声反应30min,使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌3h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将Img的EDAC和0.1mg的Sulfo-NHS，混合在2ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为0.lmol/l，pH为5，最后加入5ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在20°C避光搅拌24h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到5ml的pH为4.5浓度为0.01mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入I μ I的20 μ g/ml的PSCA，在20°C避光反应6h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0056]实施例3
[0057]将Iglmmol的FITC和lg2mmol的APTES加入到30ml的乙醇中，在25 °C下，避光通氮气lmol，反应14h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液
0.5ml0.1 g/ml分散在30ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声40min,加3mol/l的氨水Iml作为催化剂，在25°C下，剧烈搅拌50min，搅拌速度60r/s，加入0.5ml的TEOS，在25°C下，反应7h，加入FITC-APTESlml，继续搅8h，在3h内逐滴加完Iml的TE0S，避光剧烈搅拌14h,搅拌速度60r/s,得到功能团的纳米颗粒,记做FMNPs,用3ml的水做第一次离心洗涤，3ml的乙醇做第二次离心 洗涤，3ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将Ig的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在30ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声40min使其充分溶解，在90min内逐滴加完Iml的APTES，在100°C下，剧烈搅拌5h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用3ml的水做第一次离心洗涤，3ml的乙醇做第二次离心洗涤，3ml的水做第三次离心洗漆三次。取2ml3mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入2ml2mg/ml的EDC和lmL2mg/ml NHS，超声反应40min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌5h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将2mg的EDAC和Img的Sulfo-NHS，混合在3ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为lmol/1，pH为6，最后加入1ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在25 °C避光搅拌26h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入1ml的pH为5浓度为0.lmol/Ι的磷酸盐缓冲液中，再加入10 μ I的30 μ g/ml的PSCA，在25°C避光反应8h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0058]实施例4
[0059]将2g2mmol的FITC和2g3mmol的APTES加入到40ml的乙醇中，在30°C下，避光通氮气1.5mol,反应16h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液Imllg/ml分散在40ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5: 2，超声50min,加入5mol/l的氨水2ml作为催化剂，在30°C下，剧烈搅拌70min，搅拌速度60r/s，加入1ml的TE0S，在30°C下，反应9h，加入FITC-APTES5ml，继续搅llh，在4h内逐滴加完2ml的TE0S，避光剧烈搅拌16h,搅拌速度60r/s,得到功能团的纳米颗粒,记做FMNPs,用4ml的水做第一次离心洗涤，4ml的乙醇做第二次离心洗涤，4ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将2g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在40ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声50min使其充分溶解，在2h内逐滴加完3ml的APTES，在120°C下，剧烈搅拌7h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用4ml的水做第一次离心洗涤，4ml的乙醇做第二次离心洗涤，4ml的水做第三次离心洗漆三次。取3ml4mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入3ml3mg/ml的EDC和3mL3mg/ml NHS，超声反应50min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为，1: 3，持续搅拌7h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将3mg的EDAC和3mg的Sulfo-NHS,混合在4ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为2mol/l，pH为6.5，最后加入15ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在30°C避光搅拌28h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入15ml的pH为5.5浓度为lmol/Ι的磷酸盐缓冲液中，再加入20 μ I的40 μ g/ml的PSCA，在30°C避光反应10h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0060]实施例5
[0061]将3g3mmol的FITC和3.5g4mmol的APTES加入到50ml的乙醇中，在35°C下，避光通氮气2mol，反应18h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液3ml2g/ml分散在50ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声60min,加入7mol/l的氨水3ml作为催化剂，在35°C下，剧烈搅拌90min，搅拌速度60r/s，加入1.5ml的TE0S，在35°C下，反应llh，加入FITC-APTES7ml，继续搅14h，在5h内逐滴加完3ml的TE0S，避光剧烈搅拌18h,搅拌速度60r/s,得到功能团的纳米颗粒,记做FMNPs,用5ml的水做第一次离心洗涤，5ml的乙醇做第二次离心洗涤，5ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将3g的双功能团的纳米颗粒FMN Ps分散在50ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声60min使其充分溶解，在2.5h内逐滴加完5ml的APTES，在140°C下，剧烈搅拌9h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用5ml的水做第一次离心洗涤，5ml的乙醇做第二次离心洗涤，5ml的水做第三次离心洗漆三次。取4ml5mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入4ml4mg/ml的EDC和4mL4mg/ml NHS，超声反应60min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌9h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将4mg的EDAC和5mg的SuIfo-NHS，混合在5ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为3mol/l，pH为7，最后加入20ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在35°C避光搅拌30h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到20ml的pH为6浓度为2mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入30 μ I的50 μ g/ml的PSCA,在35°C避光反应12h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0062]实施例6
[0063]将4g4mmo1的FITC和5g5mmol的APTES加入到60ml的乙醇中，在40°C下，避光通氮气2.5mol,反应20h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液5ml3g/ml分散在70ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声70min,加入9mol/l的氨水5ml作为催化剂，在40°C下，剧烈搅拌llOmin，搅拌速度60r/s，加入2ml的TEOS，在40°C下，反应13h，加入FITC-APTES9ml，继续搅17h，在6h内逐滴加完4ml的TEOS，避光剧烈搅拌20h，搅拌速度是60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用6ml的水做第一次离心洗涤，6ml的乙醇做第二次离心洗涤，6ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将4g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在70ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声70min使其充分溶解，在3h内逐滴加完7ml的APTES，在160°C下，剧烈搅拌13h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用6ml的水做第一次离心洗涤，6ml的乙醇做第二次离心洗涤，6ml的水做第三次离心洗漆三次。取5ml6mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入5ml5mg/ml的EDC和5mL5mg/mlNHS，超声反应70min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3 ;持续搅拌llh，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将5mg的EDAC和7mg的Sulfo-NHS，混合在6ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为4mol/l，pH为7.5，最后加入25ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在40°C避光搅拌32h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到25ml的pH为6.5浓度为3mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入40 μ I的60 μ g/ml的PSCA,在40°C避光反应14h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0064]实施例7
[0065]将5g5mmol的FITC和6g6mmol的APTES加入到70ml的乙醇中，在45°C下,避光通氮气3mol，反应22h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液6ml5g/ml分散在90ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声80min,加入氨水6ml作为催化剂，在45°C下，剧烈搅拌130min，搅拌速度60r/s，加入2.5ml的TEOS，在45°C下，反应15h，加入FITC-APTES13ml，继续搅20h，在7h内逐滴加完5ml的TE0S，避光剧烈搅拌22h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用7ml的水做第一次离心洗涤，7ml的乙醇做第二次离心洗涤，7ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将5g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在90ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声80min使其充分溶解，在3.5h内逐滴加完1ml的APTES，在180°C下，剧烈搅拌15h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用7ml的水做第一次离心洗涤，7ml的乙醇做第二次离心洗涤，7ml的水做第三次离心洗漆三次。取6ml7mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入7ml7mg/ml的EDC和7mL7mg/mlNHS,超声反应80min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌13h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将6mg的EDAC和1mg的Su If o-NHS，混合在7ml的MES冲液中，缓冲液浓度为6mol/l，pH为8，最后加入30ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在45°C避光搅拌34h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到30mol/l的pH为7，浓度为5mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入50 μ I的70 μ g/ml的PSCA，在45°C避光反应16h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。[0066]实施例8
[0067]将6g6mmol的FITC和?.5g7mmol的APTES加入到80ml的乙醇中，在50°C下，避光通氮气3.5mol，反应24h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液7ml7g/ml分散在IlOml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声90min,加入15mol/I的氨水7ml作为催化剂，在50°C下，剧烈搅拌150min，搅拌速度60r/s，加入3ml的TE0S，在50°C下，反应17h，加入FITC-APTES15ml，继续搅22h，在8h内逐滴加完7ml的TE0S，避光剧烈搅拌24h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用8ml的水做第一次离心洗涤，8ml的乙醇做第二次离心洗涤，8ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将6g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在IlOml乙醇和水的混合液中，混合比例为5: 1，超声90min使其充分溶解，在4h内逐滴加完14ml的APTES，在200°C下，剧烈搅拌18h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用8ml的水做第一次离心洗涤，8ml的乙醇做第二次离心洗漆，8ml的水做第三次离心洗漆三次。取7ml8mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入8ml8mg/ml的EDC和8mL8mg/ml NHS，超声反应90min，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌15h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将7mg的EDAC和15mg的Sulfo-NHS，混合在8ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为8mol/l，pH为8.5，最后加入40ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在50°C避光搅拌36h，搅拌速度60r/s ；透析分离后加入到35ml的pH为7.5，浓度为7mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入70 μ I的80 μ g/ml的PSCA，在50°C避光反应18h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0068]实施例9 [0069]将8g8mmol的FITC和9g9mmol的APTES加入到90ml的乙醇中，在55°C下,避光通氮气4mol，反应26h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液9ml9g/ml分散在130ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声10min,加入18mol/l的氨水9ml作为催化剂，在55°C下，剧烈搅拌170min，搅拌速度60r/s，加入4ml的TE0S，在55°C下，反应20h，加入FITC-APTES18ml，继续搅23h，在9h内逐滴加完9ml的TE0S，避光剧烈搅拌26h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用9ml的水做第一次离心洗涤，9ml的乙醇做第二次离心洗涤，9ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将Sg的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在130ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声10min使其充分溶解，在4.5h内逐滴加完18ml的APTES，在220°C下，剧烈搅拌20h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用9ml的水做第一次离心洗涤，9ml的乙醇做第二次离心洗涤，9ml的水做第三次离心洗漆三次。取8ml9mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入9ml9mg/ml的EDC和9mL9mg/ml NHS，超声反应lOOmin，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌17h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ;将9mg的EDAC和18mg的Su If o-NHS，混合在9ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为9mo 1/1，pH为9，最后加入45ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在55°C避光搅拌38h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到40mol/l的pH为8，浓度为9mol/l的磷酸盐缓冲液中，再加入90 μ I的90 μ g/ml的PSCA，在55°C避光反应20h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0070]实施例10
[0071]将1glOmmol 的 FITC 和 1glOmmol 的 APTES 加入到 10ml 的乙醇中，在 60°C下，避光通氮气5mol，反应28h，得到FITC-APTES ;将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液10mll0g/ml分散在150ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:2,超声2h,加入20mol/l的氨水1ml作为催化剂，在60°C下，剧烈搅拌210min，搅拌速度60r/s，加入5ml的TEOS，在60°C下，反应24h，加入FITC-APTES20ml，继续搅24h，在1h内逐滴加完1ml的TEOS，避光剧烈搅拌28h，搅拌速度60r/s，得到功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用1ml的水做第一次离心洗涤，1ml的乙醇做第二次离心洗涤，1ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存，将1g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在150ml乙醇和水的混合液中，混合比例为5:1，超声2h使其充分溶解，在5h内逐滴加完20ml的APTES，在240°C下，剧烈搅拌24h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用1ml的水做第一次离心洗涤，1ml的乙醇做第二次离心洗漆，1ml的水做第三次离心洗漆三次。取10mll0mg/ml的LA,在冰水浴下向其中加入10mll0mg/ml的EDC和10mL10mg/ml NHS，超声反应2h，使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与氨基修饰的FMNPs溶液混合，混合比例为1:3，持续搅拌19h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ；将1mg的EDAC和20mg的Sulfo-NHS，混合在1ml的MES缓冲液中，缓冲液浓度为1mol/
I,pH为9.5，最后加入50ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在60°C避光搅拌40h，搅拌速度60r/s ;透析分离后加入到50mol/l的pH为8.5，浓度为lOmol/Ι的磷酸盐缓冲液中，再加入100 μ I的100 μ g/ml的PSCA，在60°C避光反应22h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
[0072]本发明的前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的透射电镜图如图2所示；前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的在体磁共振成像图如图3所示；前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的荧光光谱图如图4所示；前列腺癌干细胞抗原抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的荧光显微图像如图5所示。上述图像表明纳米颗粒分散性好，稳定性好，有磁性纳米颗粒的功能，而且荧光性能增强。
【权利要求】
1.具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:该制备方法为:首先制备异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，再以氨水作为催化剂，在四氧化三铁纳米溶液中，加入四乙氧基硅烷和异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷，反应得到具有双功能团的介孔二氧化硅纳米颗粒，再用3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰氨基，进而为纳米颗粒修饰乳糖酸提供功能基团，交联乳糖酸以后，利用碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺与乳糖酸的羧基形成半稳定的氨活性NHS酯，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗发生缩合反应形成酰胺键，实现抗体交联，得到主动靶向功能的双模态介孔娃纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:该方法具体包括以下步骤: (1)将0.01g~1g0.01mmol~1mmol的异硫氛酸突光素和0.1Og~1g0.1mmol~1mmol的3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到1ml~10ml的乙醇中，在10°C~60°C下，避光通氮气0.1mol~5mol反应1h~28h,得到异硫氰酸突光素修饰的3-氨丙基三乙氧基娃烷，记做 FITC-APTES ； (2)将柠檬酸保护的四氧化三铁纳米颗粒水溶液0.1ml~1ml0.001g/ml~10g/ml分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min,加入氨水0.1ml~1ml,浓度为0.lmol/1~20mol/l作为催化剂，在10°C~60°C下，剧烈搅拌1min~6.5h,搅拌速度为60r/s，加入0.01ml~5ml的四乙氧基硅烷，在10°C~60°C下，反应2h~24h，加入步骤(1)合成的异硫氰酸荧光素修饰的3-氨丙基三乙氧基硅烷0.1ml~20ml，继续搅拌2h~24h,在Ih~1h内逐滴加入0.01ml~1ml的四乙氧基硅烷,避光剧烈搅拌Ih~10h，搅拌速度为60r/s，得到双功能团的纳米颗粒，记做FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次，干燥保存； (3)将0.01g~1g的双功能团的纳米颗粒FMNPs分散在40ml~130ml乙醇和水的混合液中，超声20min~120min使其充分溶解，在30min~5h内逐滴加完0.1ml~20ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，50°C~240°C下，剧烈搅拌Ih~24h，搅拌速度60r/s，得到氨基修饰的FMNPs，用Iml~1ml的水做第一次离心洗涤，Iml~1ml的乙醇做第二次离心洗涤，Iml~1ml的水做第三次离心洗涤三次； (4)取0.1ml~10mllmg/ml~10mg/ml的含半乳糖基的乳糖酸分子,在冰水浴下向其中加入0.1ml~1ml0.lmg/ml~10mg/ml的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.1mL~1ml0.lmg/ml~10mg/ml N-羟基丁二酰亚胺，超声反应20min~2h,使乳糖酸的羧酸基团活化，然后将活化的乳糖酸溶液与步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液混合，持续搅拌Ih~19h，使乳糖酸活化的羧基与氨基修饰的FMNPs氨基结合，从而得到有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs ； (5)将0.1Omg~1mg 碳二亚胺盐酸盐和0.01mg~20mg N-羟基硫代琥拍酰亚胺，混合在Iml~1ml的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，缓冲液浓度为0.01mol/l~10mol/l，pH为4~9.5，最后加入1ml~50ml有乳糖酸修饰的氨基功能化FMNPs，在10°C~60°C避光搅拌20h~40h,搅拌速度60r/s ;碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥拍酰亚胺与乳糖酸的羧基形成半稳定的氨活性NHS酯，透析分离后加入到pH为4~8.5，浓度为0.0Olmol/1~1mol/I的Iml~50ml的磷酸盐缓冲液中，再加入0.1 μ I~100 μ I的10 μ g/ml~100 μ g/ml的前列腺干细胞抗原，在10°C~60°C避光反应4h~22h，半稳定的氨活性NHS酯与前列腺干细胞抗原抗体表面的氨基发生缩合反应形成酰胺键连接，从而实现抗体交联，得到表面修饰有抗体前列腺干细胞抗原的双功能介孔二氧化硅。
3.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所制备的异硫氰酸荧光素修饰的氨丙基三乙氧基硅烷保存在4°C下。
4.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)中，逐滴滴加四乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在Ih~1h滴加完。
5.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)中，乙醇和水的混合液中乙醇和水的体积比为5:2。
6.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)中，逐滴滴加3-氨丙基三乙氧基硅烷的时间间隔是以每滴10微升计算间隔时间，在30min~5h滴加完。
7.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)中，乙醇和水的混合液中乙醇和水的体积比为5:1。
8.根据权利要求2所述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(4)中，冰水浴的的温度为零摄氏度。
9.根据权利要求2所 述的具有抗体介导的光磁双模态介孔硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(4)中，活化的乳糖酸溶液和步骤(3)制备的氨基修饰的FMNPs溶液的混合比例为1:3。
【文档编号】A61K47/04GK104027824SQ201410289389
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月24日 优先权日:2014年6月24日
【发明者】詹勇华, 李英超, 韩青林, 李智敏, 梁继民, 田捷 申请人:西安电子科技大学