多功能融合多肽及其制备方法和应用的制作方法

多功能融合多肽及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了多功能融合多肽及其制备方法和应用，属于生物工程制药领域。该多功能融合多肽为六种多肽中一种或其任意多种组合，可用于实体肿瘤、类风湿性关节炎以及新生血管性眼病的预防和治疗。本发明的多肽是通过人工合成方法制备，其特征在于通过抑制血管内皮细胞增殖和迁移，抑制血管新生，继而治疗与血管新生相关的疾病，包括实体肿瘤、类风湿性关节炎以及新生血管性眼病等。
【专利说明】多功能融合多肽及其制备方法和应用

【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及一类多功能融合多肽及其制备方法和在制备治疗 实体肿瘤、类风湿性关节炎以及新生血管性眼病药物中的应用。

【背景技术】
[0002] 血管新生（angiogenesis)，指在原始血管丛或已存在血管的基础上以发芽方式 形成新生血管的过程，从伤口治愈、胎盘形成以至胚胎发育等，血管新生在当中扮演着重要 的角色。但与此同时，血管生成在多种病理条件下也会发生，所述病理条件包括：肿瘤生长 和转移；炎性障碍，例如类风湿性关节炎、银屑病、骨关节炎、炎性肠病、克隆病、溃疡性结 肠类以及其它炎性障碍；眼部新血管生成，如早产儿视网膜病变、局部缺血性视网膜病变、 视网膜静脉或动脉闭塞、糖尿病性视网膜病变、脉络膜新生血管形成、年龄相关性黄斑变性 (AMD)、角膜新生血管形成、新生血管性青光眼或角膜移植以及多种其它眼病中的新血管生 成。
[0003] 恶性肿瘤是人类健康的首要杀手，无限生长、侵袭和转移是肿瘤的恶性标志，也是 导致治疗失败和死亡的主要原因。因此，控制肿瘤的生长、侵袭和转移是改善预后、提高生 存率的主要措施。1971年Folkman首先提出肿瘤生长依赖血管新生的理论，肿瘤血管生成 是肿瘤生长和转移的形态学基础，它不仅向肿瘤提供营养和氧气，也向宿主输出大量的肿 瘤细胞导致肿瘤的生长和转移。绝大多数恶性实体肿瘤如卵巢癌、肝癌、宫颈癌和乳腺癌等 都是血管依赖性肿瘤，因此，抑制肿瘤血管形成是重要的抗癌措施。
[0004] 关节炎是危害人体健康的最常见疾病之一，特别是类风湿性关节炎，国内外很多 研究者都在探讨其病因，寻找有效的预防和治疗方法以改变其预后不良的状况。类风湿关 节炎（rheumatoid arthritis, RA)是一种病因至今尚未肯定的慢性进行性的关节炎，通常 认为它是一种自身免疫性疾患，是机体防御系统自相残杀所造成的结果，另外遗传、感染、 寒冷潮湿等均可能是致病的因素。RA的病理过程中，血管新生是一种标志性的组织学改变， 新生血管形成伴随滑膜增生和炎细胞浸润，是RA中血管翳形成及关节破坏的基础。因此， 抑制新生血管的形成是治疗这类疾病的关键，通过抑制血管生成不仅可阻止向滑膜输送氧 气和营养物质，并且可直接导致血管退化，从而抑制RA滑膜增生。
[0005] 眼部新生血管主要包括虹膜新生血管（NVI)、脉络膜新生血管（CNV)和视网膜新 生血管等，许多眼部病变与新生血管的发生有着密切的关系，常见新生血管性眼病主要包 括新生血管性角膜疾病、新生血管性视网膜疾病、新生血管性脉络膜疾病、新生血管性青光 眼等几大类。这些新生血管性病变多与眼组织的缺血、缺氧及炎症反应有关，由于新生血管 不具备血管的正常生理结构，通透性高，容易破裂使血液流入玻璃体腔内，致使眼底出血， 使患者视力模糊或者完全失去视觉，严重影响患者生活质量。因此，抑制血管新生是治疗上 述血管新生性眼病的重要途径。
[0006] 内皮抑素（ES或Endostatin)，是大分子胶原蛋白XVIII的羧基末端非胶原区片 段，由183个氨基酸残基组成，相对分子质量为20kD。内皮抑素是通过抑制肿瘤新生血管 形成从而阻断其营养供应的血管生成抑制因子，由于它能特异地作用于内皮细胞，对正常 组织内的血管不会造成明显的影响，因此具有无毒副作用、不产生耐药性等优势。动物体内 试验表明内皮抑素具有一定的抗肿瘤效果，但在临床试验中其抗肿瘤效果并不显著，最终 被FDA驳回。相关文献报道内皮抑素的第6-49个氨基酸和第134-178个氨基酸均能够抑 制人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移，且活性甚至高于内皮抑素本身。因此将内皮抑素截短， 选取其中的活性片段进行研究，不仅利于研究整个大分子的机理，同时能降低开发成本，为 该类多肽的开发提供参考。
[0007] 整合素是一类识别多种细胞外基质成分的受体家族，广泛分布于细胞表面，能介 导细胞与细胞外基质及细胞与细胞之间的相互黏附，并能通过连接胞内细胞骨架蛋白和 细胞外基质分子的相互作用参与血管生成。该类受体由α和β两条链组成，目前已发现 15种α链和9种β链，不同的α链和β链的组合决定配体的特异性，整合素 α?β?、 α2β1、α3β1、α6β1、α6β4、α5β1、ανβ3、ανβ5参与血管生成和细胞迁移，其中 α ν β 3可影响癌变中的几个关键过程。α ν β 3可以表达于多种细胞类型，能识别配体分子 中的精-甘-天冬序列（Arg-Gly-Asp，RGD)，并参与肿瘤的血管生成、侵袭、转移、炎症、伤 口愈合和凝血等生理和病理过程。因此，R⑶序列可以作为一种载体，靶向运输到肿瘤血管 新生部位，从而对新生血管性疾病达到更高效率的治疗。
[0008] 基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP)家族是一类结构相似和功能 相关的蛋白内切酶，MMPs在生理状态下参与胚胎形成、新生血管的形成及伤口的愈合，在病 理状态下参与组织重构、风湿性关节炎、恶性肿瘤转移、动脉粥样硬化（AS)和急性冠脉综 合征（ACS)的病理进程。它们不仅能切割各种细胞外基质，为炎症细胞和肿瘤细胞的转移 打开"通路";可以切割细胞因子或趋化因子，影响炎症细胞的募集；还可以切割各种膜连接 分子，包括受体和细胞间连接分子，从而调节这些分子的功能。
[0009] 基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是基质金属蛋白酶的 典型代表，研究发现MMP-9可以在几个方面促进肿瘤生长：首先，MMP-9是肿瘤部位血管增 生的"开关"，它可以切割细胞外基质，释放连接于基质上的VEGF，促进血管增生，血管增生 是肿瘤生长的前提条件；MMP-9还可以通过从细胞外基质释放VEGF的方式促进淋巴管增 生，促进肿瘤转移；其次，肿瘤细胞以及进入肿瘤组织的巨噬细胞和T细胞表面都表达有 TNF-α前体，几种金属蛋白酶（包括MMP-9)可以切割并释放有活性的TNF-α，促进血管增 生和抑制肿瘤细胞的凋亡。另外，肿瘤部位的炎症细胞表达的MMP-9可以通过两个方面激 活TGF- β途径，一是把TGF- β前体切割成有活性的TGF- β，二是切割TGF- β连接蛋白， 把TGF-β从细胞外基质上释放出来，活化的TGF-β抑制免疫系统，却不抑制肿瘤本身的生 长，从而间接的促进肿瘤生长。
[0010] ΜΜΡ抑制剂不但可抑制肿瘤的生长和转移，还具有靶向功能，不但可早期检测到肿 瘤组织，还可以把目的物带到肿瘤部位。ΜΜΡ-9多肽抑制剂的优势在于，其序列可以连接 到其它有抗肿瘤活性的多肽或蛋白质上，新的分子不但可以抑制ΜΜΡ-9活力，还可以通过 ΜΜΡ-9多肽抑制剂部分把有抗肿瘤活性的成分富集于肿瘤部位，提高其抗肿瘤效果。
[0011] 多功能融合多肽是近年在治疗新生血管性疾病中引起极大重视的一类药物， 针对肿瘤血管形成分子机制所设计的抗血管生成类药物主要包括内源性多功能融合多 肽、VEGF通路抑制剂、C0X-2抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂等。在这些多功能融合多 肽中，尤其以血管抑素和内皮抑素最引人注目，但其缺陷也非常明显：作用靶点不明确， 对血管的专一性和选择性不强，治疗效果有限，导致用药量较大，产生不同程度的耐药 性。因此，一个好的抗血管生成药物应该对新生血管的标记分子具有选择性，以达到对新 生血管的靶向性作用，从整体上提高药物对血管生成的抑制效果。CN102746380所报道 Pro-Pyr-Cys-Bip-Arg-Gly-Glu (其中 Pyr 为 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip 为 L-4, 4' -联 苯丙氨酸）多肽片段具有抑制基质金属蛋白酶-8、基质金属蛋白酶_9和肿瘤坏死因子释放 酶的活力，因此该多肽具有抗肿瘤的作用。但并未有进一步的文献公开在其他领域的效果 和应用。


【发明内容】

[0012] 1、发明目的
[0013] 针对现有的多功能融合多肽作用靶点不明确，对血管的专一性和选择性不强等问 题，本发明提供了一种多功能融合多肽及其制备方法和应用，其对多种实体肿瘤、类风湿性 关节炎以及新生血管性眼部疾病有很好的预防和治疗效果，增加其适应症范围。
[0014] 2、技术方案
[0015] 多功能融合多肽，其结构为下述的一种：
[0016] 多肤 I :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇-(D_Pyr)-(D_Cys)_Bi p-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp (其中 Pyr 为 3-(3-批陡基）_L_ 丙氨酸， Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸）；
[0017] 多肤 II :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-G ly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu (其中 Pyr 为 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸， Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸）；
[0018] 多肤III :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) _Bi p-Arg-Gly-Glu (其中Pyr为3-(3-吡啶基）-L-丙氨酸，Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸）；
[0019] 多肤IV :Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Al a-Asp-Arg-Ala (其中Pyr为3-(3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸）；
[0020] 多肤 V :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala_Asp-Arg-Ala ;
[0021] 多肤VI :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp。
[0022] 上述多功能融合多肽中的任意两种或两种以上的组合。
[0023] 上述多功能融合多肽多肽在制备治疗实体肿瘤、类风湿性关节炎以及新生血管性 眼病药物中的应用。
[0024] 所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肺脏、肝脏、胃、乳腺、 肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱或睾丸的原发或继发的癌、黑色 素瘤、血管瘤以及肉瘤。
[0025] 所述的多功能融合多肽在制备治疗在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物中的 应用。
[0026] 所述新生血管性眼病包括虹膜新生血管性眼病、脉络膜新生血管性眼病、视网膜 新生血管性眼病或角膜新生血管性眼病。
[0027] 所述的多功能融合多肽的制备方法，以Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin为起 始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十四肽，接肽工作完成后充分洗涤，然后切肽、 后处理即得多功能融合多肽粗品。将粗品溶解，用制备型高效液相经过两次纯化，浓缩冻干 得到纯品，最后经过第三次纯化得到多肽。
[0028] 3、有益效果
[0029] 本发明公开的多肽具有抑制新生血管生成和抑制包括MMP9在内的几种基质金属 蛋白酶活力两种作用，在多肽I、II、V和VI中加入RGD序列（Arg-Gly-Asp)，使该多肽序列 对整合素具有靶向结合作用和亲和性，并通过抑制胞内细胞骨架蛋白和细胞外基质分子的 相互作用，来抑制细胞与细胞外介质及细胞与细胞间的信号传导，从而抑制血管生成。前期 研究发现多肽能够抑制内皮细胞的增殖、迁移，并发现其能抑制多种肿瘤细胞的生长；进一 步研究证实其对类风湿性关节炎有一定的治疗作用，此外对眼科疾病也就有很好的治疗效 果。说明本发明涉及的多肽设计科学合理，可行有效，能作为治疗或预防血管及炎症相关疾 病，并极大地拓展了该多肽的治疗谱，为将来药物开发提供新的思路和前景。
[0030] 多肽I -VI是新的氨基酸序列，本申请在前人的基础上构建新的多肽序列，新序 列拓展了原来多肽的应用范围，将其应用于治疗类风湿性关节炎和新生血管性眼病领域。
[0031] 研究发现，本发明中的多肽序列Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala具有抑制血管生成的 作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)序列是整合素的一个重要配体，含有RGD序列的多 肽X-Arg-Gly-Asp(X可以是1个或多个非极性氨基酸）能够特异性的识别整合素。本发明 的多功能融合多肽多肽是在具有抑制血管生成作用的序列Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala的C 端或N端连接上与整合素家族具有特异结合能力的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)序列 和（或）基质金属蛋白酶抑制剂多肽序列Pr〇-Pyr-Cys-Bip-Arg-Gly-Glu(为增加整个分 子的柔性在多肽I -VI中加入4个Gly为linker)，构建出了一系列具有靶向性的抑制新生 血管生成的多肽，且保证所获得序列的不同功能片段相互不受影响，各自发挥作用。
[0032] 经过大量实验获知该类多功能融合多肽在体外能够明显抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的增殖、迁移，对人宫颈癌HeLa细胞、人结肠癌HCT116细胞、人脑胶质瘤U87细胞、 人乳腺癌MDA-MB-231等肿瘤细胞的增殖有显著的抑制作用。
[0033] 本发明的多肽I -VI可以靶向到RA中血管翳形成过程中的新生血管内皮，抑制新 生血管形成，进而达到预防或治疗类风湿性关节炎的效果。发明人经过大量实验获知多肽 I -VI能够抑制佐剂型大鼠类风湿关节炎和DBA/1小鼠胶原型类风湿性关节炎的发展，体 内实验证明具有显著的治疗类风湿型关节炎的效果，并且副作用少，用量小成本降低。
[0034] 经过大量实验获知该类多功能融合多肽多肽均能够抑制人视网膜血管内皮细胞 (HRCEC)的增殖，在一定范围内呈剂量依赖关系。通过多功能融合多肽多肽对小鼠角膜新生 血管和兔虹膜新生血管的作用，表明多肽I、多肽II、多肽III、多肽IV、多肽V和多肽VI六种 多功能融合多肽均能够抑制角膜和虹膜新生血管的生长，有潜力开发为治疗角膜新生血管 性眼病和虹膜新生血管性眼病的药物，具有潜在的治疗新生血管性疾病的作用。
[0035] 脉络膜位于眼球后部，实验证明多功能融合多肽多肽能够改善脉络膜血流，说明 用药后，通过全身循环或巩膜-葡萄膜-视神经途径，能尽快到达脉络膜，对年龄相关性黄 斑变性（AMD)的脉络膜新生血管形成有抑制作用，可望用于早期AMD以及其它脉络膜新生 血管性疾病的预防或治疗。同时通过多功能融合多肽多肽对大鼠脉络膜新生血管的作用， 表明六种多功能融合多肽多肽能够抑制大鼠脉络膜新生血管的生成，说明六种多功能融合 多肽对包括年龄相关性黄斑变性在内的脉络膜新生血管性眼病具有一定的治疗作用。
[0036] 对0IR小鼠模型施用多肽I、多肽II、多肽III、多肽IV、多肽V和多肽VI后，六种多 肽均能够改善视网膜病理性新生血管的形成，减少视网膜中新生血管丛。说明本发明的多 功能融合多肽能够抑制小鼠眼部视网膜的新生血管形成，在一定程度上能够预防或治疗视 网膜新生血管性眼病。
[0037] 本申请多肽I - VI科学合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤、类风湿性 关节炎以及新生血管性眼病的治疗药物，极大拓展了该多功能融合多肽的治疗谱，为将来 药物开发提供新的思路和前景。

【专利附图】

【附图说明】
[0038] 附图1多功能融合多肽多肽I对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0039] 附图2多功能融合多肽多肽II对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0040] 附图3多功能融合多肽多肽III对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0041] 附图4多功能融合多肽多肽IV对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0042] 附图5多功能融合多肽多肽V对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0043] 附图6多功能融合多肽多肽VI对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0044] 附图7多功能融合多肽多肽对BALB/c小鼠角膜新生血管的作用；
[0045] 附图8多功能融合多肽多肽对大鼠脉络膜新生血管的作用；
[0046] 附图9多功能融合多肽多肽在0IR小鼠中对视网膜血管的作用；
[0047] 附图10多功能融合多肽多肽I对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)的迁移抑制作用；
[0048] 附图11多功能融合多肽多肽II对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)迁移抑制作用；
[0049] 附图12多功能融合多肽多肽III对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)迁移抑制作用；
[0050] 附图13多功能融合多肽多肽IV对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)迁移抑制作用；
[0051] 附图14多功能融合多肽多肽V对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)迁移抑制作用；
[0052] 附图15多功能融合多肽多肽VI对人脐静脉内皮细胞（HUVEC)迁移抑制作用；
[0053] 附图16多功能融合多肽多肽对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用；
[0054] 附图17多功能融合多肽多肽对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用；
[0055] 附图18多功能融合多肽多肽对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用；
[0056] 附图19多功能融合多肽多肽对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用。

【具体实施方式】
[0057] 实施例1多功能融合多肽多肽的制备及检验
[0058] 多肽采用固相合成法合成，采用制备型HPLC进行分离纯化，分析型RP-HPLC测定 多肽的纯度。
[0059] 多肽I - VI固相合成法是以Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin (吉尔生化有限 公司）为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十四肽，接肽工作完成后充分洗涤， 然后切肽、后处理即得多功能融合多肽粗品。将粗品溶解，用制备型高效液相经过两次纯 化，浓缩冻干得到纯品，最后经过第三次纯化得到多肽精制品。该方法不仅能保证合成的效 率，还可提高产物纯度。
[0060] 1.接肽（包括接二肽至二十四/十七/十三肽）的步骤如下：
[0061] 称取Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin适量，倒入玻璃砂芯反应柱中，加入 CH2C12适量使树脂充分膨胀。
[0062] a.脱帽：加入六氢吡啶/DMF的脱帽液适量，反应一段时间后将脱帽液抽干，中间 用DMF洗涤一次，然后再加入一次脱帽液适量反应，脱去Fmoc保护基。
[0063] b.洗涤：将脱帽液抽干，用DMF洗涤树脂几次，充分洗净副产物。
[0064] c.缩合：将用于接肽的保护氨基酸和激活剂溶于DMF和缩合剂中，摇匀，温度控制 在34°C左右，在反应釜中充分反应。
[0065] d.洗涤：将反应液抽干，用DMF充分洗涤树脂，洗净副产物。
[0066] 所述切肽的步骤如下：
[0067] 将抽干的树脂装入圆底烧瓶中，加入裂解液充分裂解合好的二十四肽中间体，用 砂芯漏斗将树脂与多肽分离，所述的裂解液的体积组成为：三氟乙酸：苯酚：水：苯甲硫醚：EDT = 90 :3 :3 :2 :2。
[0068] 2.后处理步骤如下：先加无水乙醚到切割液中将多肽析出，然后离心，把清液倒 掉，然后再用无水乙醚洗涤多肽，抽干得多肽粗品。
[0069] 3.纯化的步骤如下：
[0070] a.溶解：称取粗品配制成5-20g/L的溶液，用0. 45 μ m的混合滤膜过滤。
[0071] 制备：通过半制备型高效液相色谱进行一次纯化、二次纯化和三次纯化得到多肽 精制合格品，流动相：A相乙腈，B相0. 1 % TFA水溶液。
[0072] ①一次纯化：用30% -40%的乙腈和60% -70%的缓冲溶液，流速为50mL/ min-100mL/min，冲洗10min平衡制备柱。溶解过滤后的粗品用输液泵上样。
[0073] 表1 一次纯化洗脱梯度
[0074]

【权利要求】
1. 多功能融合多肽，其特征在于结构为下列中的一种： 多肤 I :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇-(D_Pyr)-(D_Cys)-Bip-Ar 区-617-6111--617-617-617-617-六找-617-六8口，其中？71'为3-(3-批陡基）-1^-丙氨酸，81口为 L-4, 4' -联苯丙氨酸； 多肤 II :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gl y-Pr〇- (D-Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu，其中 Pyr 为 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip 为 L-4, 4' -联苯丙氨酸； 多肤III :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Ar g-Gly-Glu，其中Pyr为3-(3-吡啶基）-L-丙氨酸，Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸； 多肤IV :Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-As p-Arg-Ala，其中Pyr为3-(3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip为L-4, 4' -联苯丙氨酸； 多肤 V :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala_Asp-Arg-Ala ; 多肤VI :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp。
2. 根据权利要求1所述的多功能融合多肽，其特征在于为多肽中的其中任意两种或两 种以上的组合。
3. 根据权利要求1所述的多功能融合多肽在制备治疗实体肿瘤、类风湿性关节炎以及 新生血管性眼病药物中的应用。
4. 根据权利要求3中所述的多功能融合多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在 于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肺脏、肝脏、胃、乳腺、肾脏、 胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱或睾丸的原发或继发癌、黑色素瘤、血 管瘤以及肉瘤。
5. 根据权利要求3中所述的多功能融合多肽在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物 中的应用。
6. 根据权利要求3中所述的多功能融合多肽在制备治疗新生血管性眼病药物中的应 用，其特征在于所述新生血管性眼病包括虹膜新生血管性眼病、脉络膜新生血管性眼病、视 网膜新生血管性眼病或角膜新生血管性眼病。
7. 根据权利要求1中所述的多功能融合多肽的制备方法，其特征在于以 Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至二十四 肽，接肽工作完成后充分洗涤，然后切肽、后处理即得多功能融合多肽粗品，将粗品溶解，用 制备型高效液相经过两次纯化，浓缩冻干得到纯品，最后经过第三次纯化得到多肽。
【文档编号】A61P29/00GK104045718SQ201410324568
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年7月8日 优先权日:2014年7月8日
【发明者】康梦实, 李梦玮 申请人:南京安吉生物科技有限公司