金铁锁有效成分的提取方法
【专利摘要】本发明涉及中草药有效成分的提取方法，具体来说是一种金铁锁有效成分的提取方法，步骤包括：(1)将新鲜的金铁锁洗净后烘干，然后粉碎成粉末；(2)将所得药材投入超声提取罐，加入乙醇，常温浸渍，超声提取；(3)滤液先用乙醚重复萃取，然后再用正丁醇萃取，用硅胶柱进行分离，按氯仿、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液再用Lober?Rp-8-Merck柱分离纯化，纯化时按洗脱液、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液减压浓缩后即为金铁锁有效成分；本发明方法可快速地从金铁锁中提取有效成分，所用试剂毒性低，提取效率比传统方法的2.5～5％提高至7％。
【专利说明】
【技术领域】
[0001]本发明涉及中草药有效成分的提取方法，具体来说是一种金铁锁有效成分的提取 方法。 金铁锁有效成分的提取方法
【背景技术】
[0002]金铁锁为石竹科（Caryophyllaceae)植物金铁锁（psam- mosiiene tunicoides W.C.Wu C_Y_WU)的干燥根，是我国西南特有的单属种植物和传统的药用植物，主要分布于 四川、云南、西藏、贵州等省。现已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》中，属国家二 级重点保护植物。金铁锁以根入药，具有散瘀、定痛、止血、消痈排脓之功，用于跌打损伤、风 湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗，是云南白药的重要组成药物之一。在中药制剂中，常用金铁 锁与其他中药配伍制成中药制剂使用。金铁锁的主要化学成分是三萜、三萜皂苷、环肽以及 内酰胺，此外，还含有氨基酸和有机酸等。现代药理研究证明，金铁锁总苷（金铁锁总提取 物）是金铁锁特征性成分和有效成分，具有显著的镇痛、抗炎及对小鼠细胞免疫功能的促 进和调节等诸多功效。
[0003] 但是目前金铁锁中有效成分的提取方法提取效率普遍偏低，无法满足生产需求， 而且还导致大量原料药的浪费。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对现有技术中提取率地的问题，提供一种金铁锁有效成分的提 取方法。
[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种金铁锁有效成分的提取方法，包 括如下步骤：
[0006] (1)将新鲜的金铁锁洗净后烘干，然后粉碎成粉末；
[0007] (2)将步骤⑴中所得药材投入超声提取罐，加入药材2. 5?3. 0倍质量、浓度为 90?％ %的乙醇，常温下浸渍4?6h后，调节温度至35?55°C超声提取1?1.5h，提取 时每隔lOtnin搅拌一次，然后进行过滤，得一次滤液和药渣，药渣再次重复提起一次，合并 两次滤液；
[000S] (3)步骤⑵中的滤液先用乙醚重复萃取3次，然后再用正丁醇萃取3次，用硅胶 柱进行分离，按氯仿、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液再用LoberRp-8-Merck柱分离纯 化，纯化时按洗脱液、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液减压浓缩后即为金铁锁有效成分
[0009] 进一步的：步骤（1)中，所述粉碎细度为250目。
[0010] 进一步的：步骤（2)中，所述超声提取时，频率为15?30Hz。
[0011] 进一步的：所述超声提取时，频率为20Hz。
[0012] 进一步的：步骤⑶中，硅胶分离时，氯仿、甲醇和水的体积比为65:35:8。
[0013] 进一步的：步骤⑶中，分离纯化时，洗脱液、甲醇和水的体积比为7:3?8:2。 [0014] 本发明的有益技术效果是：本发明方法可快速地从金铁锁中提取有效成分，所用 试剂毒性低，提取效率比传统方法的2. 5?5%提高至7%。
【具体实施方式】
[0015]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0016] 实施例1
[0017] (1)将新鲜l〇〇kg的金铁锁洗净后烘千，然后粉碎成粉末，粉碎细度为250目；
[0018] (2)将步骤（1)中所得药材投入频率为20Hz的超声提取罐，加入药材250kg质量 浓度为90 %的乙醇，常温下浸渍4h后，调节温度至35°C超声提取1. 5h，提取时每隔10min 搅拌一次，然后进行过滤，得一次滤液和药渣，药渣再次重复提起一次，合并两次滤液；
[0019] ⑶步骤⑵中的滤液先用乙醚重复萃取3次，然后再用正丁醇萃取3次，用 硅胶柱进行分离，按氯仿、甲醇和水（65: 35:8)顺序进行洗脱，最后洗脱液再用Lober Rp-8-Merck柱分离纯化，纯化时按洗脱液、甲醇和水（7:3:2)顺序进行洗脱，最后洗脱液减 压浓缩后得到金铁锁有效成分7kg。
[0020] 本实施例中金铁锁有效成分提取率为7. 0%。
[0021] 实施例2
[0022] (1)将新鲜l〇〇kg的金铁锁洗净后烘干，然后粉碎成粉末，粉碎细度为250目；
[0023] (2)将步骤（1)中所得药材投入频率为30Hz的超声提取罐，加入药材3〇〇kg质量 浓度为95%的乙醇，常温下浸渍5h后，调节温度至40°C超声提取lh，提取时每隔10min搅 拌一次，然后进行过滤，得一次滤液和药渣，药渣再次重复提起一次，合并两次滤液；
[0024] (3)步骤（2)中的滤液先用乙醚重复萃取3次，然后再用正丁醇萃取3次，用 硅胶柱进行分离，按氯仿、甲醇和水（65:35:8)顺序进行洗脱，最后洗脱液再用Lober Rp - S-Merck柱分离纯化，纯化时按洗脱液、甲醇和水（7:8:2)顺序进行洗脱，最后洗脱液减 压浓缩后得到金铁锁有效成分7. 3kg。
[0025] 本实施例中金铁锁有效成分提取率为7. 3%。
[0026] 实施例3金铁锁有效成分对体外5种肿瘤细胞的抑制作用
[0027] 细胞：乳腺癌细胞（MCF-7)、人结肠癌细胞C%、人肝癌细胞BEL-7401、人卵巢癌细 胞（SK0V3)、人胃癌细胞（BGC-823)，上述5种肿瘤细胞均由中国医学科学院肿瘤医院提供。
[0028] 实验方法：各种肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期的细胞，调 节细胞悬液浓度；取96孔细胞培养板，每孔加入细胞悬液18 μ L (3000个/孔），于37。〇， 5% C02培养箱中培养2h。金铁锁总皂苷溶解在生理盐水中，终浓度为4 μ g/mL、16 μ g/mL、 64 μ g/mL、256 μ g/mL、512 · μ g/mL，各20 μ L/孔，每浓度8个复孔，正常对照组加入等量 1M0培养基，同时设顺铂阳性对照2〇 μ L，终浓度为312 μ g/mL，于37°C, 5% C02培养箱中 培养48h。弃去培养液，每孔加入200 μ LMTT溶液（原液5mg/mL),继续培养4h。弃去MTT， 每孔加入200 μ L二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检 测仪0D 540nm处测量各孔的吸光值。计算抑制率和IC5(I值。
[0029] 实验结果显示（见表1)，金铁锁皂苷1· 6 μ g/mL对部分肿瘤细胞株如人胃癌细胞 (BGC-S23)、和乳腺癌细胞（MCF-7)的增殖没有明显的抑制作用，但随着药物剂量的增加至 6· 4μ g/mL、25· 6μ g/mL、52· 1 μ g/mL时，对各肿瘤细胞株均呈现明显的生长抑制作用，并具 有一定的浓度依赖关系,最高抑制率达Π .4% (人胃癌细胞株BGC-823)和71.9% (人结 肠癌细胞C26)。数据还显示，人结肠癌细胞C26对金铁锁总皂苷最为敏感，ic5()值最小仅 为9. 02 μ g/mL，说明金铁锁总皂苷抗癌作用效价较强，作用强度接近临床常用化疗西药如 顺怕等。
[0030] 表1金铁锁总皂苷对5种肿瘤细胞的抑制率及IC50值
[0031]
【权利要求】
1. 金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于，包栝如下步骤： (1) 将新鲜的金铁锁洗净后烘千，然后粉碎成粉末； (2) 将步骤（1)中所得药材投入超声提取罐，加入药材2. 5?3. 0倍质量、浓度为90? 95%的乙醇，常温下浸渍4?6h后，调节温度至35?55°C超声提取1?1.5h，提取时每隔 lOmin搅拌一次，然后进行过滤，得一次滤液和药渣，药渣再次重复提起一次，合并两次滤 液； (3) 步骤（2)中的滤液先用乙醚重复萃取3次，然后再用正丁醇萃取3次，用硅胶柱进 行分离，按氯仿、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液再用LoberRp-8-Merck柱分离纯化， 纯化时按洗脱液、甲醇和水顺序进行洗脱，最后洗脱液减压浓缩后即为金铁锁有效成分。
2. 根据权利要求1所述金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述粉 碎细度为250目。
3. 根据权利要求1所述金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于：步骤（2)中，所述超 声提取时，频率为15? 3〇Hz。
4. 根据权利要求2所述金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于：所述超声提取时，频 率为20Hz。
5. 根据权利要求1所述金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于：步骤（3)中,硅胶分 离时，氯仿、甲醇和水的体积比为 65:35:8。
6. 根据权利要求1所述金铁锁有效成分的提取方法，其特征在于：步骤（3)中,分离纯 化时，洗脱液、甲醇和水的体积比为 7 :3?8 :2。
【文档编号】A61K36/36GK104189055SQ201410436640
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月30日 优先权日:2014年8月30日
【发明者】颜仕奇 申请人:宁蒗万嘉生物开发有限公司