一种制备杏鲍菇低分子量多糖的方法
【专利摘要】本发明涉及一种杏鲍菇低分子量多糖及其制备方法，属于农产品精深加工【技术领域】。具体地，本发明的制备方法如下：将新采杏鲍菇子实体粉碎，获得胶浆；调节胶浆温度和pH，使之自身酶解；调节酶解液的pH和温度提取；将提取液经离心分离，收集滤液；将滤液上柱大孔吸附树脂进行脱色和纯化；调节多糖洗脱液pH和温度，加入葡聚糖酶，进行酶解；升温消减酶解液酶活；用陶瓷膜进行纯化和浓缩，获得杏鲍菇多糖浓缩液；多糖浓缩液加入辅料，离心喷雾干燥，即获得低分子量杏鲍菇多糖产品。本发明方法工艺路线合理，适宜工业化大规模生产，多糖纯度高，而且工艺环保，无污染。
【专利说明】一种制备杏鲍薛低分子量多糖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农产品精深加工【技术领域】，涉及从食用真菌杏鲍菇中分离纯化和制备 低分子量多糖的工艺方法。
【背景技术】
[0002] 杏鲍燕（Pleurotus eryngii)又称刺疗侧耳，其子实体色泽雪白，质地脆嫩。现代 药理学研究表明，杏鲍菇具有抗氧化、降血脂、抑制肿瘤、抗病毒、抗过敏、抗衰老、降低胆固 醇和增强机体免疫的功效。食用真菌子实体和菌丝体都可作为多糖提取的原料。采用生物 发酵技术生产杏鲍菇菌丝体，培养周期短、产品质量稳定，但是以菌丝体作为原料制备多糖 存在设备投资大、技术和管理要求高。所以，目前真菌多糖的提取原料仍为子实体。
[0003] 目前，食用菌多糖常用的提取方法是水提醇沉法，即用热水提取食用菌多糖，然后 用乙醇进行沉淀获得粗多糖，但这种方法存在使用有机溶剂、收率和效率低的缺点。食用菌 多糖由胞外多糖和胞内多糖组成，具有药理学功能的多糖主要是胞内多糖。近年来，出现许 多新的多糖提取方法，如酶解提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等，这些方法提高了 多糖的提取收率，但都有缺点。例如酶解提取法虽然有反应条件温和、对多糖结构破坏小等 优点，但酶价格高，生产成本较高，不适合大规模应用；超声波和微波提取法虽然能有效提 高提取收率，缩短提取时间，但存在设备投资高、设备处理量有限等缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一是克服现有技术所存在的上述缺陷，提供一种具有降血压和降 血脂功能的杏鲍菇低分子量多糖。
[0005] 本发明采用的技术方案如下：
[0006] -种杏鲍菇低分子量多糖，其特征在于其制备方法包含以下步骤：
[0007] (1)先将采集的新鲜杏鲍菇子实体进行初步粉碎，然后按照每公斤杏鲍菇5-10公 升水比例加水，再用带有冷却装置的工业胶体磨进行超微粉碎，获得杏鲍菇胶浆；
[0008] (2)向步骤（1)制得的杏鲍菇胶浆中加入无机碱适量，调节pH至4. 5-6. 5,温度 40-55°C，自身酶解2-5小时；
[0009] (3)在步骤（2)酶解结束后，再将pH调节至8. 0-10. 0,升温至60-90°C，提取多糖 5-10小时；
[0010] (4)将步骤（3)提取的多糖，通入循环水冷却至常温，然后通过离心机进行离心分 离,去除菌渣,收集滤液,并加酸调节pH至中性；
[0011] (5)将步骤（4)制得并调节pH至中性的多糖滤液上样非极性大孔吸附树脂D101、 HP20或X-5,收集多糖洗脱液；
[0012] (6)向步骤（5)中收集的杏鲍菇多糖洗脱液中，加无机酸或无机碱调节pH至 4. 5-5. 5、温度45-65°C，加入3-15U/mL的葡聚糖酶，酶解1-5小时；
[0013] (7)在步骤（6)酶解结束后，将酶解液升温至80-90°C处理10_20min，消减酶活；
[0014] (8)将步骤（7)中消减酶活的酶解液用截留分子量为5000-15000Dal的超滤膜过 滤纯化；
[0015] (9)在经步骤（8)浓缩和纯化后的多糖浓缩液中加入辅料乳糖或微晶纤维素，或 预胶化淀粉适量，然后在65-75°C温度下离心喷雾干燥，即制得低分子量杏鲍菇多糖。
[0016] 上述步骤（1)所说的水为符合国家标准的自来水或纯净水。
[0017] 上述步骤（2)所说的无机碱可是氢氧化钠，也可以是氢氧化钾或氨水。
[0018] 上述步骤（4)所说的酸可以是稀盐酸，也可以是稀硫酸或磷酸。
[0019] 本发明的目的之二是提供一种杏鲍菇低分子量多糖在制备治疗降血压、降血脂、 抗氧化、抑制肿瘤、抗病毒、抗过敏、抗衰老、降低胆固醇和增强机体免疫药物以及营养品、 保健品、食品饮料或化妆品方面的用途。
[0020] 本发明与现有技术相比具有如下进步或意料不到的技术效果。
[0021] 1.本发明方法工艺路线合理，适宜工业化大规模生产，而且工艺环保，无污染。
[0022] 2.多糖纯度高，杏鲍菇多糖含量高，达到85以上，最高可达91%以上。
[0023] 3.本发明方法收率高，达50%以上，最高可达57%以上。
[0024] 4.临床实验证实，本发明杏鲍菇低分子量多糖作为药物使用时，药效显著，作为治 疗高血压的药物使用时，具有疗效确切，疗程短，治愈率高等优点。
【具体实施方式】
[0025] 以下将通过实施例对本发明的【具体实施方式】进行详细说明，但实施例并不限制本 发明的保护范围。
[0026] 实施例1
[0027] (1)取200kg新采集的杏鲍菇子实体，先进行初步粉碎，然后加入1500L纯净水，用 带有冷却装置的工业胶体磨进行超微磨浆粉碎，获得杏鲍菇胶浆；
[0028] (2)向步骤（1)制得的杏鲍菇胶浆加入氢氧化钠，调节pH至5.0,温度45°C，自酶 解2. 5小时；
[0029] (3)上述自酶解结束后将pH调节至9.0,升温至80°C，提取多糖8小时；
[0030] (4)将步骤（3)提取的多糖，通入循环水冷却降至常温，然后通过离心机进行离心 分离,去除菌渣,收集滤液,并加入0. 5M(M为mol/L，下同）稀盐酸，调节pH至中性；
[0031] (5)将步骤⑶收集并调节pH至中性的多糖，上样非极性大孔吸附树脂D101，吸 附饱和后洗脱，收集洗脱液；
[0032] (6)在步骤（5)收集的杏鲍菇多糖洗脱液中，加入稀盐酸调节pH至5.0,温度 50°C，加入6U/mL的葡聚糖酶，酶解3小时；
[0033] (7)将步骤（6)制得的酶解液升温至80°C处理lOmin，消减酶活；
[0034] (8)将步骤（7)中的酶解液用截留分子量为5000_15000Dal的超滤膜过滤纯化；
[0035] (9)在经步骤⑶超滤膜浓缩和纯化制得的的多糖浓缩液中加入乳糖适量， 在70°C温度下，离心喷雾干燥，即制得低分子量杏鲍菇多糖，经测定杏鲍菇多糖含量达到 87%，总收率达到54. 6%，分子量范围7000-9000dal。
[0036] 实施例2
[0037] (1)将300kg新采集的杏鲍菇子实体进行初步粉碎，然后加自来水1500L，用带有 冷却装置的工业胶体磨进行超微磨浆粉碎，获得杏鲍菇胶浆；
[0038] (2)向步骤⑴加入氢氧化钠，调节pH至4. 5,温度40°C，自酶解2小时；
[0039] (3)自酶解结束后，将pH调节至8.0,升温至60°C，提取多糖10小时；
[0040] (4)将步骤（3)提取的多糖，用循环水冷却降至常温，然后通过离心机进行离心分 离,去除菌渣,收集滤液,并加入0. 5M稀硫酸，调节pH至中性；
[0041] (5)将步骤⑶收集并调至中性的多糖滤液，上非极性大孔吸附树脂D101，吸附饱 和后洗脱，收集洗脱液；
[0042] (6)在步骤（5)收集的多糖洗脱液中，加入稀盐酸调节pH至5.5,温度65°C，加入 15U/mL的葡聚糖酶，酶解1小时；
[0043] (7)上述酶解结束后，将酶解液升温至80°C处理lOmin，消减酶活；
[0044] (8)将步骤（7)中的酶解液用截留分子量为5000_15000Dal的超滤膜过滤纯化；
[0045] (9)经超滤膜浓缩和纯化后，在多糖浓缩液中加入微晶纤维素适量，在75°C温 度下，用离心喷雾干燥机干燥，即制得低分子量杏鲍菇多糖，经测定杏鲍菇多糖含量达到 91%，总收率达到50.2%，分子量范围6000-8000(1&1。
[0046] 实施例3
[0047] (1)将500kg新采集的杏鲍菇子实体进行初步粉碎，然后加入5000L自来水，用带 有冷却装置的工业胶体磨进行超微磨浆粉碎，获得杏鲍菇胶浆；
[0048] (2)向步骤⑴加入氢氧化钠，调节pH至6. 5,温度55°C，自酶解5小时；
[0049] (3)上述自酶解结束后，将pH调节至10. 0,升温至90°C，提取10小时；
[0050] (4)将步骤（3)提取的多糖，通入循环水冷却降至常温，然后通过离心机进行离心 分离,去除菌渣,收集滤液,并加入0. 5M稀盐酸，调节pH至中性。
[0051] (5)将步骤（4)收集并调至中性的多糖滤液，上样非极性大孔吸附树脂D101，吸附 饱和后洗脱，收集洗脱液；
[0052] (6)在步骤（5)收集的杏鲍菇多糖溶液中，加入稀盐酸调节pH至5. 5,温度65°C， 加入12U/mL的葡聚糖酶，酶解5小时；
[0053] (7)将步骤（6)制得的酶解液升温至90°C，处理lOmin，消减酶活；
[0054] (8)将步骤（7)中的酶解液用截留分子量为5000-15000Dal的超滤膜过滤纯化；
[0055] (9)在经步骤（8)超滤膜浓缩和纯化的多糖浓缩液中加入预胶化淀粉辅料，在 70°C温度条件下，离心喷雾干燥即制得低分子量杏鲍菇多糖，经测定杏鲍菇多糖含量达到 85. 6%，总收率达到57. 6%，分子量范围8000-10000dal。
[0056] 4临床实验：
[0057] 4. 1 -般资料：根据世界卫生组织/国际高血压学会（WHO/ISH)颁布的新的高血 压治疗指南进行确定，即在未服用降压药物下，收缩压> 18.7kPa(140mmHg)和（或）舒张 压> 12. OkPa (90mmHg)，确诊的高血压患者80例。将所有患者随机分成2组：对照组90例、 治疗组90例，两组患者性别、患病程度均无统计学意义（P > 0. 05)，具有可比性。
[0058] 4. 2治疗方法：
[0059] 治疗组：口服本发明方法制备的杏鲍菇低分子量多糖，一天两次，早晚服用，每次 0. 4g，连续服用30天。
[0060] 对照组：口服苯磺酸氨氯地平，每次1片，每日1次，连续服用30天。
[0061] 4.3疗效标准：
[0062] 治愈：收缩压彡18. 7kPa (HOmmHg)和舒张压彡12. OkPa (90mmHg)，且头晕、头痛等 症状消失。
[0063] 有效：收缩压彡18. 7kPa (HOmmHg)和（或）舒张压彡12. OkPa (90mmHg)，但血压 有所降低，且头晕、头痛等症状大为改善。
[0064] 无效：为血压无变化,其他症状恶化或无变化。
[0065] 4. 5治疗结果：两组治疗结果见表1。
[0066] 表1.治疗效果
[0067]
【权利要求】
1. 一种杏鲍菇低分子量多糖，其特征在于，其制备方法包含以下步骤： (1) 将采集的新鲜杏鲍菇子实体进行初步粉碎，按照每公斤杏鲍菇5-10公升水比例加 水，用带有冷却装置的工业胶体磨进行超微粉碎，得杏鲍菇胶浆； (2) 向步骤（1)制得的杏鲍菇胶浆中加入无机碱，调pH至4. 5-6. 5,升温至40-55°C，自 身酶解2-5小时； (3) 在步骤（2)酶解结束后，将pH调至8. 0-10. 0,升温至60-90°C，提取多糖5-10小 时； (4) 将步骤（3)提取的多糖，冷却降至常温，离心分离，去除菌渣，收集滤液，并调pH至 中性； (5) 将步骤（4)制得多糖滤液上样非极性大孔吸附树脂D10UHP20或X-5,收集多糖洗 脱液； (6) 向步骤（5)中收集的杏鲍菇多糖洗脱液中，加无机酸或无机碱调pH至4. 5-5. 5,升 温至45-65°C，加入3-15U/mL的葡聚糖酶，酶解1-5小时； (7) 在步骤（6)酶解结束后，将酶解液升温至80-90°C，处理10_20min，消减酶活； (8) 将步骤（7)中消减酶活的酶解液用截留分子量为5000-15000Dal的超滤膜过滤纯 化； (9) 在经步骤（8)浓缩和纯化后的多糖浓缩液中加入辅料乳糖或微晶纤维素，或预胶 化淀粉适量，然后在65-75°C温度下离心喷雾干燥，即制得低分子量杏鲍菇多糖。
2. 如权利要求1所述杏鲍菇低分子量多糖，其特征在于：其制备方法步骤（1)中的所 述的水为符合国家标准的自来水或纯净水。
3. 如权利要求1所述杏鲍菇低分子量多糖，其特征在于：其制备方法步骤（2)中加入 的无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水中的一种。
4. 如权利要求1所述杏鲍菇低分子量多糖，其特征在于：其制备方法步骤（4)所述的 酸为稀盐酸、稀硫酸或磷酸中的一种。
5. 如权利要求1所述杏鲍菇低分子量多糖在制备治疗降血压、降血脂、抗氧化、抑制肿 瘤、抗病毒、抗过敏、抗衰老、降低胆固醇和增强机体免疫药物以及营养品、保健品、食品饮 料或化妆品方面的用途。
6. 如权利要求1所述杏鲍菇低分子量多糖在制备治疗降血压或降血脂药物中的用途。
【文档编号】A61K31/715GK104293857SQ201410486515
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月22日 优先权日:2014年9月22日
【发明者】孙效峰, 陈思洁, 董惠钧, 高雯, 高博, 高士友 申请人:山东效峰生物科技股份有限公司