原儿茶醛在制备防治支气管哮喘的药物中的用途
【专利摘要】本发明公开了原儿茶醛在制备预防和/或治疗支气管哮喘的药物中的用途。具体地，当在哮喘早期应用原儿茶醛时，不但可明显控制哮喘气道炎症，还能够通过改善哮喘肺部血液循环、降低血液粘滞度以改善哮喘缺氧状态，保护肺部血管内皮细胞，抑制肥大细胞脱颗粒，抑制成纤维细胞分泌胶原蛋白和促进其凋亡以及镇静等作用，从多方面、多环节缓解或者抑制气道重构的发生，在抑制气道重构形态学改变上，效果优于醋酸泼尼松，且无副作用。
【专利说明】原儿茶醛在制备防治支气管哮喘的药物中的用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药【技术领域】，尤其涉及原儿茶醛在制备防治支气管哮喘的药物中的 用途。
【背景技术】
[0002] 支气管哮喘（以下简称哮喘）是世界范围内严重威胁公众健康的一种主要慢性呼 吸道炎症性疾病。按照目前的国际医学理论，哮喘的发病机制是T辅助细胞THl、TH2失衡 所致，呼吸道的应变性炎症是基础，气道高反应性是呼吸道炎性介质浸润所引起。目前，用 于治疗哮喘的西药有很多种，包括糖皮质激素类、β 2受体激动剂、茶碱类和部分抗过敏药 物。近20年来哮喘的治疗重心放在了包括吸入糖皮质激素（ICS)在内的慢性抗炎治疗上， 并取得了巨大成功。但是近20年来的流行病学调查并没有发现哮喘发病率和死亡率有所 降低。此外，虽然激素控制哮喘相当有效，但长期应用有可能引发诸如肾上腺皮质抑制、骨 质疏松和生长受抑、口腔念珠菌感染、皮肤菲薄等意想不到的副作用。而且，一小部分患者 对于激素抵抗，即不敏感。因此，寻找有效而低毒的中药治疗将会是哮喘治疗的新途径。
[0003] 如美国专利申请号为09/800, 815、名称为"草药治疗过敏和哮喘"，公开了以中药 经验处方"加味三子汤"为基础的技术方案，该技术方案是提取紫苏子、葶苈子、杏仁、黄芩、 苦参、当归、白芍、葛根、桔梗、甘草、大枣、生姜和珍珠母十三味中草药的有效成分，用现代 医学研究体系评价组方各成分解除气道炎症、降低高反应性的作用机理，进一步研究其毒 性反应。研究结果表明，该组分具有抗气道高应答、抗气道炎症和调节T辅助细胞（ΤΗ1、 ΤΗ2)应答类型的作用，可用于过敏性哮喘的治疗；但由于该组分中有十三味中草药，中草 药的种类太多，究竟是哪几种中草药在其中承担了主要作用，尚不得知，因此，药品质量难 于保证，不便于产业化生产该药物。
[0004] 原儿茶醛化学名3, 4-二羟基苯甲醛，为冬青科植物四季青和鼠尾草植物丹参等 中药中分离得到的活性成分。药理实验显示，原儿茶醛具有抑制血小板聚集和增加冠脉流 量的作用，对金色葡萄球菌有一定的抑制作用，能减轻冠心病患者胸闷及心绞痛症状。然 而，还没有报道原儿茶醛在治疗哮喘中的用途。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提出原儿茶醛在制备预防和/或治疗支气管哮喘的药物中的 应用；所述药物活性成分单一（即原儿茶醛），便于控制药品质量和产业化生产药物。
[0006] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：
[0007] 本发明提供了原儿茶醛在制备预防和/或治疗支气管哮喘的药物中的用途。
[0008] 上述用途中，作为优选，所述原儿茶醛是从纯中药丹参制备而得。
[0009] 优选地，所述药物包括原儿茶醛和药学上可接受的辅料。
[0010] 优选地，所述药物为口服制剂。
[0011] 进一步优选地，所述口服制剂为片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸或口腔 速崩片。
[0012] 在优选的实施方案中，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份的原料制成：
[0013] 原儿茶醛 100份 填充剂 60-90份 崩解剂 20-30份
[0014] 3%聚乙烯吡咯烷_水溶液 20-30份 _滑剂 i-4份。
[0015] 上述实施方案中，作为优选，所述填充剂为糖粉和/或乳糖；
[0016] 优选地，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠；
[0017] 优选地，所述润滑剂为硬脂酸镁。
[0018] 在进一步优选的实施方案中，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份的原料 制成：
[0019] 原儿茶酸 100# 糖粉 30-40份 乳糖 30-50份 羧Φ堪淀粉钠 20-25份 3%聚乙烯吡咯烷AM水溶液 20-25份 润相'剂 1.5-3.5
[0020] 在进一步优选的实施方案中，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份的原料 制成：
[0021] 原儿茶Il 100份 麵 32-38份 乳糖 35-45份 羧Φ基淀粉钠 22-24份 3%聚乙烯吡咯烷酬水溶液 22-24份 润滑剂 2-3 #<?
[0022] 在进一步优选的实施方案中，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份的原料 制成：
[0023] 原儿茶酸 _份 糖粉 35份 乳糖 40份 羧Φ基淀粉_ 23份 3%聚乙烯吡咯烷_水溶液 23份 润滑剂 2份。
[0024] 本发明的发明人发现，原儿茶醛或者以原儿茶醛为活性成分制备的药物，当在哮 喘早期应用时，不但可明显控制哮喘气道炎症，还能够通过改善哮喘肺部血液循环、降低血 液粘滞度以改善哮喘缺氧状态，保护肺部血管内皮细胞，抑制肥大细胞脱颗粒，抑制成纤维 细胞分泌胶原蛋白和促进其凋亡以及镇静等作用，从多方面、多环节缓解或者抑制气道重 构的发生，在抑制气道重构形态学改变上，效果优于醋酸泼尼松，且无副作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1是实施例4中建模及给药时间流程图。
[0026] 图2显示OVA及药物对BALF中嗜酸性粒细胞计数的影响。
[0027] 图3显示OVA及药物对BALF中IL-4水平的影响。
[0028] 图4显示OVA及药物对BALF中IFN- γ水平的影响。
[0029] 图5显示OVA及药物对BALF中IL-13水平的影响。
[0030] 图6显示OVA及药物对气道平滑肌层和上皮层厚度的影响。
[0031] 图7显示OVA及药物对支气管和血管旁胶原蛋白沉积的影响。
[0032] 图8-1为空白对照组的BABL/c小鼠目标气道HE染色结果（X 100倍），可见气道 周围未见或少见炎症细胞浸润；
[0033] 图8-2为模型组的BABL/c小鼠目标气道HE染色结果（X 100倍），可见目标气道 和周围三支大血管周围炎症细胞浸润，成片或成团分布，目标气道上皮层和平滑基层较对 照组增厚明显，肺间隔明显增宽；
[0034] 图8-3是醋酸泼尼松给药组的BABL/c小鼠目标气道HE染色结果（X 100倍），与 模型组相比，气道和血管周围炎症细胞浸润明显减轻，无成团分布，肺泡间隔增宽不明显；
[0035] 图8-4是原儿茶醛高剂量给药组的BABL/c小鼠目标气道HE染色结果（X100倍）， 可见气道上皮层和平滑基层无明显增厚，肺泡间隔增宽也不明显，但气道和血管周围炎症 细胞浸润与对照组相比仍有明显增加，偶见少量成团分布；
[0036] 图8-5是原儿茶醛低剂量给药组的BABL/c小鼠目标气道HE染色结果（X100倍）， 可见目标气道和血管周围炎症细胞浸润成团分布，肺泡间隔仍有增宽，气道上皮层和平滑 肌层厚度较模型组减少不明显。
[0037] 图9-1为对照组的BABL/c小鼠目标气道AB-PAS染色结果（X 100倍），其为目标 气道AB-PAS染色低倍镜观，未见阳染的杯状细胞或酸性粘液物质；
[0038] 图9-2为模型组的BABL/c小鼠目标气道AB-PAS染色结果（X 100倍），其为目标 气道AB-PAS染色低倍镜观，可见气道上皮层阳染（紫红色）的杯状细胞明显增多；
[0039] 图9-3为醋酸泼尼松给药组的BABL/c小鼠目标气道AB-PAS染色结果（X 100倍）， 其为目标气道AB-PAS染色低倍镜观，可见目标气道阳染的杯状细胞较模型组明显减少，但 与对照组相比仍明显增多；
[0040] 图9-4为原儿茶醛高剂量给药组的BABL/c小鼠目标气道AB-PAS染色结果（X 100 倍），其为目标气道AB-PAS染色低倍镜观，目标气道仅见少量阳染的杯状细胞；
[0041] 图9-5为原儿茶醛低剂量给药组的BABL/c小鼠目标气道AB-PAS染色结果（X 100 倍），其为目标气道AB-PAS染色低倍镜观，可见气道上皮层阳染的杯状细胞与模型组相比 无明显减少。
[0042] 图10-1为对照组的BABL/c小鼠目标气道Masson染色结果（X100倍），其为目标 气道和血管周围胶原纤维Masson染色低倍镜下观，可见目标气道和血管周围少量胶原纤 维沉积，染成蓝色；
[0043] 图10-2为模型组的BABL/c小鼠目标气道Masson染色结果（X100倍），其为目标 气道和血管周围胶原纤维Masson染色低倍镜下观，可见目标气道基底膜下网状层、平滑肌 周围和血管周围大量胶原纤维沉积，周边肺间质区也可见明显蓝染的胶原纤维沉积；
[0044] 图10-3为醋酸泼尼松给药组的BABL/c小鼠目标气道Masson染色结果（X100 倍），其为目标气道胶原纤维染色低倍镜观，可见目标气道基底膜下网状层和平滑肌周围胶 原纤维沉积明显减少，但血管尤其是动脉周围仍有大量胶原纤维沉积；
[0045] 图10-4为原儿茶醛高剂量给药组的BABL/c小鼠目标气道Masson染色结果 (X100倍），其为目标气道和血管周围胶原纤维染色低倍镜下观，可见目标气道基底膜下 网状层、平滑肌和血管周围胶原纤维沉积明显减少，接近或达到对照组水平；
[0046] 图10-5为原儿茶醛低剂量组的BABL/c小鼠目标气道Masson染色结果（X100 倍），其为目标气道和血管周围胶原纤维染色低倍镜下观，可见目标气道周围胶原纤维沉积 较少，但血管周围胶原纤维仍较对照组明显增多。
【具体实施方式】
[0047] 下面结合附图并通过【具体实施方式】来进一步说明本发明的技术方案。
[0048] 实施例1原儿茶醛的制备
[0049] 取丹参药材50kg，去除杂质，切成长3cm_5cm的段状，先后用饮用水及蒸馏水冲洗 干净。浙干晾干，粉碎为10-18目粉末。将丹参粉末放入提取罐中，加入10倍量的蒸馏水， 煎煮2小时，过滤，保留第一次煎液；药渣再加8倍量蒸馏水煎煮1. 5小时，过滤，保留第二 次煎液；药渣再加8倍量蒸馏水煎煮1. 5小时，过滤，保留第三次煎液。去除药渣，然后合 并三次煎液。煎液用盐酸调至中性，用填充了弱碱性大孔吸附树脂D301M的吸附柱进行吸 附，待吸附剂饱和后，用50%乙醇溶液洗脱，用0. 4%的氢氧化钠水溶液洗脱，收集洗脱液， 浓缩至约1L，用盐酸调至PH值为2,用填充了弱极性吸附剂AB-8的吸附柱进行酸性条件吸 附，用纯水40L洗脱，再改用5 %乙醇液洗脱，收集洗脱液，真空泵抽滤，最后将滤液浓缩至 100ml。静止，得到原儿茶醛结晶体约61. 5g。经HPLC检测，纯度达到95%。
[0050] 实施例2原儿茶醛片剂的制备
[0051] 称取实施例1制备的原儿茶醛100. 〇g，糖粉35. 0g，乳糖40. 0g，羧甲基淀粉钠 23. Og充分混合均匀，过100目筛，加入适量3% PVP水溶液制软材，20目筛制粒。60°C干燥 3小时，18目筛整粒，加入2. Og硬脂酸镁，混合均匀后浅凹冲压片，调节片重约200mg (其中 原儿茶醛IOOmg)，即得。
[0052] 实施例3原儿茶醛胶囊的制备
[0053] 称取实施例1制备的原儿茶醛100. 0g，糖粉35. 0g，乳糖40. 0g，羧甲基淀粉钠 23. Og充分混合均匀，过100目筛，加入适量3% PVP水溶液制软材，20目筛制粒。60°C干燥 3小时，18目筛整粒，加入2. Og硬脂酸镁，灌胶囊，每粒约200mg (其中原儿茶醛IOOmg)，即 得。
[0054] 实施例4原儿茶醛对哮喘的治疗功效
[0055] 1材料与方法
[0056] I. 1实验动物
[0057] SPF级6周?8周龄BALB/c小鼠32只，雌性（由广东医学院实验动物中心提供，动 物合格证号：SCXK (粤）2004-20082007A034)，体重20g±2g。分笼饲养于室温24°C?28°C、 湿度在50%?60%的清洁环境中，隔日更换垫料，自由摄水、摄食（广东医学院动物中心提 供的标准饲料），每周称体重一次。
[0058] 1. 2主要试剂和仪器
[0059] 1.2.1主要药品
[0060] 醋酸泼尼松片（5mg/片）广东邦民制药厂有限公司国药准字H44021838
[0061] 原儿茶醛 广东医学院药学院提供（制备方法同实施例1)
[0062] 氢氧化铝凝胶 广西南宁百会药业集团有限公司国药准字H45020626
[0063] 1. 2. 2主要试剂
[0064] 试剂 厂家
[0065] 吐温80 汕头市西陇化学厂
[0066] 1.3主要溶液的配制
[0067] ⑴醋酸泼尼松混悬液的配置：取醋酸泼尼松片8片于研钵中，加入Ig吐温80 -起 研磨，然后加入蒸馏水稀释至100ml，得0. 4mg/ml混悬液。小鼠灌胃给药用量为0. lml/10g， 即 4mg · kg-1 · cf1。
[0068] ⑵原儿茶醛水溶液的制备：取实施例1制备的原儿茶醛200mg，加入蒸馏水稀释至 100ml，得2mg/ml混悬液，小鼠灌胃给药用量为0. lml/10g，即20mg .kg-1 .(Γ1，设为高剂量。 取实施例1制备的原儿茶醛lOOmg，加入蒸馏水稀释至100ml，得lmg/ml混悬液，小鼠灌胃 给药用量为〇· lml/10g，即IOmg · kg< · cf1，设为低剂量。
[0069] 1.4实验方法和步骤
[0070] 1. 4. 1实验动物与分组
[0071] 6周?8周龄雌性BALB/c小鼠50只，随机分为5组，每组10只。
[0072] 对照组（CON):第0、7、14天给予0. 5ml含2. 5mg氢氧化铝凝胶的生理盐水腹腔注 射+多点皮下注射致敏，第21天开始雾化吸入生理盐水，每天一次，每次30min。第28天开 始每天灌胃给予蒸馏水〇. ImVlOg体重，隔日灌胃给予蒸馏水30分钟后再雾化生理盐水激 发，每周3次，连续8周；
[0073] 模型组（OVA):第0、7、14天给予致敏液0.5ml腹腔注射加多点皮下注射致敏，第 21天开始以1% OVA雾化激发，每天一次，每次30min。第28天开始隔日雾化1% OVA激发， 连续8周（见图1);
[0074] 醋酸泼尼松（Prednisone acetate)预防组（0VA+PA):致敏和激发同模型组，第28 天开始每天灌胃给予醋酸泼尼松混悬液〇. ImVlOg体重，隔日灌胃给药30分钟后再雾化激 发，雾化方法及时间同模型组；
[0075] 原儿茶醛高剂量组（0VA+PCAH):致敏和激发同模型组，第28天开始每天灌胃给予 原儿茶醛高剂量0. ImVlOg体重，隔日灌胃给药30分钟后再雾化激发，雾化方法及时间同 模型组。
[0076] 原儿茶醛低剂量组（0VA+PCAL):致敏和激发同模型组，第28天开始每天灌胃给予 原儿茶醛低剂量0. ImVlOg体重，隔日灌胃给药30分钟后再雾化激发，雾化方法及时间同 模型组。
[0077] 1. 4. 2观察指标
[0078] 最后一次激发48h后处死小鼠，检测支气管肺泡灌洗液（BALF)中嗜酸性粒细胞 (EOS)计数、IL-4、IL-13和IFN- γ水平，病理切片结合HE染色、AB-PAS染色和Masson染 色，以Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测量上皮层厚度、平滑肌层厚度、杯状细胞计数、 杯状细胞面积百分比、气道旁和血管旁胶原蛋白沉积情况。
[0079] 2 MM
[0080] 2. I BALF 中 EOS 计数情况
[0081] 结果见表1，图2,结果显示：模型组小鼠 BALF中EOS计数显著增加，与对照组相 t匕，有显著性差异（P〈〇. 001);醋酸泼尼松预防给药组BALF中EOS计数与对照组相比差异 没有统计学意义（P>〇. 05)，与模型组相比EOS计数显著降低（P〈0. 001);原儿茶醛高剂量组 BALF中EOS计数较模型组显著降低（P〈0. 001)，但仍较对照组高（P〈0. 01);原儿茶醛低剂 量组BALF中EOS计数较对照组亦显著降低，差异有显著性（P〈0. 001)，与对照组相比仍然有 显著性差异（P〈〇.〇〇l)。
[0082] 表1、小鼠 BALF中嗜酸性粒细胞（EOS)计数（Χ±? η = 10) f
【权利要求】
1. 原儿茶醛在制备预防和/或治疗支气管哮喘的药物中的用途。
2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述原儿茶醛是从纯中药丹参制备而得； 优选地，所述药物包括原儿茶醛和药学上可接受的辅料。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药物为口服制剂。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂、胶囊、软胶囊、颗粒 齐U、口服液、滴丸或口腔速崩片。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份 的原料制成： 原儿茶K 100份 填充剂 60-90份 崩解剂 20-30份 3%聚乙烯吡咯烷酮水溶液 20-30份 润滑剂 1-4份。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述填充剂为糖粉和/或乳糖； 优选地，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠； 优选地，所述润滑剂为硬脂酸镁。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份 的原料制成： 原儿茶醛 100份 糖粉 30-40份 乳糖 30-50份 羧甲裉淀粉钠 20-25份 3%聚乙烯吡咯烷fi水溶液 20-25份 润滑剂 1.5-3.5份^
8. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份 的原料制成： 原儿茶醛 100份 糖粉 32-38份 乳糖 35-45份 羧中墙淀粉钠 22-24份 3%聚乙烯吡咯烷《水溶液 22-24份 润滑剂 2-3份。
9.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂或胶囊，由如下重量份 的原料制成： 原儿茶隱 100份 糖粉 35份 乳糖 40份 羧甲基淀粉钠 23份 3%聚乙烯吡嗒烷if水溶液 23份 润滑剂 2份1)
【文档编号】A61K31/11GK104274431SQ201410512840
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年9月29日 优先权日:2014年9月29日
【发明者】覃冬云, 张剑凯, 邬永富, 彭锦, 赵智丽, 许卫铭 申请人:广东医学院