一种防治水产动物链球菌病的中药组合物的制作方法
【专利摘要】本发明属水产养殖疾病防控领域，涉及一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，是将金银花、马兜铃粉碎后混合得到混合料，然后用乙醇溶液提取，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓度，备用。本发明针对罗非鱼的链球菌病进行针对性筛选和组合，将天然中草药进行科学配伍，协同作用，能有效地抑制环境中链球菌的生长繁殖，降低链球菌病爆发的风险，可对罗非鱼链球菌病进行安全高效防治，具有高效、低毒、来源广泛、不易引起病原菌耐药等特点，有利于水产养殖业的健康发展。
【专利说明】一种防治水产动物链球菌病的中药组合物
【技术领域】
[0001] 本发明属水产养殖疾病防控领域，涉及一种链球菌病的防治药物，具体是一种防 治水产动物链球菌病的中药组合物。
【背景技术】
[0002] 链球菌是广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌，大部分为过氧化氢酶阴性的兼性厌 氧菌，呈球形或卵圆形，直径小于2i!m呈链状排列，最适生长温度为20?34°C，是人、畜、 鱼共患的病原菌，常感染猪、牛、羊、马、鸡等畜禽，最近在水貂、犊牛和兔等类禽畜也发现有 链球菌，可引起化脓创和败血症，也表现为各种局限性感染，危害严重。对水生生物危害方 面，链球菌广泛危害罗非鱼、虹鳟、斑点叉尾、牙鲆和多耙等淡海水养殖鱼类，其对温水性鱼 类，尤其是对罗非鱼的危害最为严重。我国是全球最大的罗非鱼养殖国，2007年罗非鱼养殖 产量达161. 25万吨，占全球罗非鱼产量的62. 1%，罗非鱼产品的出口已成为我国水产品出 口创汇的主要品种之一。随着养殖集约化程度的不断提高，链球菌对罗非鱼的养殖以及罗 非鱼产业的发展造成了巨大影响，该病发病速度快、流行范围广、死亡率高，2009年广东、海 南、福建和广西地区养殖罗非鱼链球菌发病率为20?50 %，死亡率达50?70% ;2011年 以来，罗非鱼链球菌病不仅发病时间提前，而且危害范围扩大，逐渐向原来不发病的小规格 鱼种和鱼苗蔓延，损失极为惨重。目前，链球菌病已成为制约罗非鱼养殖可持续健康发展的 最主要因素之一。
[0003] 链球菌具有多种耐药和免疫逃避途径，耐药途径方面，仅针对阳离子抗菌肽的耐 药途径就存在改变细胞表面电荷、青霉素结合蛋白调节、菌毛调节等途径；在免疫逃避方 面，研究较多的有荚膜多糖抗原、Alp家族、0蛋白、C5a肽酶、Lmb、FbsA、Sip等介导的途 径，其中荚膜多糖抗原含有末端唾液酸的成分，是抗吞噬细胞功能的重要因子，0蛋白具有 与人IgA和因子H结合能力，有助于免疫逃避。随着罗非鱼链球菌病爆发日益频繁，许多养 殖场为了控制病害的发生和蔓延，滥用和乱用抗生素等违禁药物进行疾病防控的现象也大 幅增加，导致养殖罗非鱼产品违禁药物残留严重，已严重影响养殖罗非鱼产品品质，对消费 者健康和养殖产品出口造成了巨大的潜在威胁。
[0004] 中草药具有天然、毒副作用少、残留少、致病菌不易产生抗药性、资源丰富等优势， 因其含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、黄酮、茶多酚、低聚糖、精油等，能促进机体 的健康、减少抗生素的使用，其作用既针对致病微生物本身直接的抑制和杀灭作用，又可提 高饲喂动物免疫技能和抗应激能力，因此在动物疾病和预防中发挥了重要的作用。将中草 药成分作为药物或者饲料添加剂，用于防治水产养殖中容易出现的病害完全符合发展无公 害水产业、生产绿色水产品的病害防治准则，尤其适用于当前水产业集约化、规模化生产的 需要，便于进行高密度养殖病害的菌体防治，又可增强水产动物的免疫机能，提高养殖的养 成率。因此针对链球菌存在的问题，亟需开发一种防治水产养殖动物链球菌病的中药组合 物，以降低链球菌的耐药性和避免抗生素的药物残留，促进水产养殖业的健康和可持续发 展。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，将天然中草药进 行科学配伍，协同作用，可对罗非鱼链球菌病进行安全高效防治，具有高效、低毒、来源广 泛、不易引起病原菌耐药等特点。
[0006] 本发明所采用的技术方案：
[0007] -种防治水产动物链球菌病的中药组合物，是将金银花、马兜铃粉碎后混合得到 混合料，然后用60?80%的乙醇溶液在常温或加热至60°C以下提取1?4h，减压蒸馏回收 全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓度，备用。所 述混合料中金银花与马兜铃的重量比为1:1。
[0008] 在提取过程中，乙醇溶液与混合料的体积质量比为18?22 :1(L:kg)。
[0009] 应用方法：将中药组合物提取液拌入饲料中（分为1号饲料和2号饲料，1号饲料 每千克饲料拌200ml药液，2号饲料每千克饲料拌100ml药液），首次投喂采用1号饲料投 喂，之后采用2号饲料投喂，按鱼体重的1?2%进行投喂，一天投喂两次，连续投喂14d。
[0010] 本发明针对罗非鱼的链球菌病进行针对性筛选和组合，将天然中草药进行科学配 伍，协同作用，能有效地抑制环境中链球菌的生长繁殖，降低链球菌病爆发的风险，可对罗 非鱼链球菌病进行安全高效防治，同时也能避免抗生素的滥用，具有高效、低毒、来源广泛、 不易引起病原菌耐药等特点，有利于水产养殖业的健康发展。
【具体实施方式】
[0011] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施例用于 说明本发明，但不用来限制本发明的范围。所述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为 常规方法。
[0012] 实施例一
[0013] 分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶 液与混合料的体积质量比为20 :1的比例用60%的乙醇溶液提取4h，提取温度50°C。减压 蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。
[0014] 实施例二
[0015] 分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶 液与混合料的体积质量比为22 :1的比例用70%的乙醇溶液提取3h，提取温度40°C。减压 蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。
[0016] 实施例三
[0017] 分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶 液与混合料的体积质量比为19 :1的比例用80%的乙醇溶液提取2h，提取温度30°C。减压 蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。
[0018] 试验：
[0019] 1、抑菌效果
[0020] 采用60%、70%和80%乙醇、料液比1:18. 7(g/ml)、浸提温度39°C、浸提时间2h 的提取方法分别提取金银花、马兜铃，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。
[0021] 采用琼脂扩散法测实施例所得提取液的抑菌效果，以金银花、马兜铃的单质提取 液为对照，结果见表1。
[0022] 表1各提取液的抑菌效果
[0023]
【权利要求】
1. 一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，其特征在于：是将金银花、马兜铃粉碎 后混合得到混合料，然后用60?80%的乙醇溶液在常温或加热至60°C以下提取1?4h，减 压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓 度，备用；所述混合料中金银花与马兜铃的重量比为1:1。
2. 根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：乙醇溶液与混合料的体积质量比 为 18 ?22 :1。
【文档编号】A61P31/04GK104257721SQ201410568884
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】郭伟良, 周永灿, 胡文婷, 谢珍玉, 王世锋, 邓恒为, 王文慧 申请人:海南大学