妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法
【专利摘要】本发明涉及一种妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，采用300ml密封三联袋系统，增加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血，采血后混匀并储存于4±2.0℃储血冰箱内；贮血时机为手术前15-35天；采集自体血的对象为有自体输血指证的产妇，自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、病情稳定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇。本发明为妊娠晚期贮存式自体输血技术规范建立提供科学依据，从而更好地在产科患者中应用贮存式自体输血，使其更加安全，更加有效，更加经济，从而更好促进贮存式自体输血在产科的推广应用。
【专利说明】妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法。
【背景技术】
[0002] 吧存式自体输血（preoperative autologous blood donation, PABD):是在手术 数周乃至数月前预先采集病人自身血液保存，在其需要输血治疗时进行回输保存的血液。 在欧美等一些发达国家，随着人口逐渐进入老龄化，志愿献血者数量不断下降，血液来源也 逐渐减少，同时伴随着手术和非手术病人的数量增多和用血量的上升，尤其是整形、心血管 和肿瘤等手术输血需求的惊人增加，血源紧缺已经成为一个问题。这也促使医务工作者考 虑采用其它方式来满足临床用血，比如发展自体输血，尤其是贮存式自体输血，是一种较好 的替代途径。
[0003] 产科贮存式自体输血以其独特的优点和优势在妇产科领域得到了广泛的应用。尤 其是在产科，因为平产或剖腹产手术时间有预期，产前经过充分的检查诊断，产科医生对患 者是否出血和出血量有比较准确地估计和把握，对一些稀有血型和不规则抗体阳性的孕 妇，选择贮存式自体输血更能成为分娩安全的一份意外保险。
[0004] 在对产妇自体输血贮存过程中，由于产妇的血液凝血状态和血流变功能有其的独 特性，随着孕周的增加，血液日趋高凝状态，纤维蛋白原含量逐渐升高，因产妇自体血在血 液贮存过程中时间较长，较高浓度纤维蛋白、与凝血因子容易发生血凝反应而形成小凝块。 在本院自体输血实践操作中，妊娠期自体血液采用标准抗凝比例进行贮存，而且随时间增 力口，血液凝集增加，会导致血液部分凝固，导致输血不畅或无法输注，严重影响自体全血的 回输，造成浪费和自体输血无效。这一因素限制贮存式自体输血在产科大规模推广应用的 原因。因此，妊娠未期自体输血患者采用常规抗凝作自体血保存是不合适的，因为产科妊 娠未期的高凝状态会导致常规抗凝的自体血因血液部分凝固，保存期出现轻度溶血；第二 在经过储存自体血出库时因达不到出库标准，导致自体输血失败引起医疗纠纷；第三在产 科需要自体血回输时，因自体血血粘度高，输血速度缓慢，达不到抢救用血的要求。
[0005] 基于此，提出本发明。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术的上述技术问题，本发明的目的是提供一种妊娠晚期贮存式自体成 分输血系统的建立方法，通过研究妊娠晚期自体全血在贮血过程中血液质量变化规律，用 改变血液抗凝比例与自体血成分分离两种技术，解决妊娠晚期因血液高凝无法进行贮存式 自体贮血和自体血回输血困难问题。
[0007] 为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
[0008] 妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，采用300ml密封三联袋系统，增 加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血，采血后混匀并储存于4±2. (TC储血冰箱内。 [0009] 所述的贮血时机为手术前15-25天。
[0010] 所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，所述的自体采血指征为排 除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、 病情稳定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准： Hb>105g/L, Plt>100X 109/L〇
[0011] 妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，采用300ml密封三联袋系统，所 述密封三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血，并将自体血在6小时内分离 制备成分血，全程保证在冷链状态；所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血浆。
[0012] 所述成分血的制备步骤如下：
[0013] (1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致；
[0014] (2)将准备进行离心的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登记，登记内容涉 及血液品种、献血编号、离心机机号、离心日期、时间、转速和温度；
[0015] (3)配平离心：将登记后的全血放置到离心机专用套筒中，然后用血液配平仪进 行配平；
[0016] (4)配平后，放置入离心机中进行离心；所述的离心参数为：离心温度2_6°C，离心 速度5000g，离心时间10分钟；
[0017] (5)观察步骤（4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常，然后在 低温操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋，即制得血浆用；并将另一转移 袋内红细胞添加液加入红细胞内，将保养液与红细胞充分摇匀，即成红细胞悬液；
[0018] (6)热合封口、检查热合点是否密闭，检查母袋与转移袋的献血编号是否一致，观 察红细胞内有无凝块、破损等异常情况。
[0019] 所述的贮血时机为手术前15-35天。
[0020] 所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，所述的自体采血指征为排 除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、 病情稳定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准： Hb>105g/L, Plt>100X 109/L〇
[0021] 本发明的有益效果如下：
[0022] 本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，通过研究妊娠晚期自体全 血在贮血过程中血液质量变化规律，用改变血液抗凝比例与自体血成分分离两种技术，解 决妊娠晚期因血液高凝无法进行贮存式自体贮血和自体血回输血困难问题。本发明为妊娠 晚期贮存式自体输血技术规范建立提供科学依据，对妇产科贮存式自体输血进行完善和补 充，从而更好地在产科患者中应用贮存式自体输血，使其更加安全，更加有效，更加经济，从 而更好促进贮存式自体输血在产科的推广应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1为对比例1中刚采集时红细胞形态图，未形成凝集；
[0024] 图2为对比例1中采集24小时的红细胞形态图，部分形成线串样凝集；
[0025] 图3为对比例1中保存3天时红细胞形态图，红细胞呈形成线串样凝集；
[0026] 图4为对比例1中保存7天时红细胞形态图，红细胞呈紧密线串样并轻微变形；
[0027] 图5为对比例1中保存14天时红细胞形态图，出现粘液结构并呈团状；
[0028] 图6为对比例1中保存21天时红细胞形态图，红细胞连接成网状结构并部分溶 血；
[0029] 图7为对比例1中全血保存时间对游离红细胞与凝集红细胞团百分比关系图；
[0030] 图8为对比例1中保存时间对血液PT值的影响情况图；
[0031] 图9为对比例1中保存时间对血液APTT值的影响情况图；
[0032] 图10为对比例1中保存时间对血液FIB值的影响情况图；
[0033] 图11为对比例1中标准抗凝全血在不同储存时间内，血粘度全血切率1及红细胞 聚集指数指标变化趋势图；
[0034] 图12为对比例1中标准抗凝自体血在不同储存时间的PH及乳酸变化趋势图；
[0035] 图13为实施例1中保存24小时时红细胞形态图，红细胞散在分布；
[0036] 图14为实施例1中保存7天时红细胞形态图，部分细胞出现棘状突起，可见少量 凝集；
[0037] 图15为实施例1中保存14天时红细胞形态图，红细胞出现线串样凝集；
[0038] 图16为实施例1中保存35天时红细胞形态图，红细胞线串样凝集更加致密，部分 破碎；
[0039] 图17为实施例1中扩大抗凝比例妊娠期全血在不同保存时间的游离红细胞比例 图；
[0040] 图18为实施例2中保存24小时时红细胞形态图，红细胞散在分布；
[0041] 图19为实施例2中保存7天时红细胞形态图，红细胞呈散在分布，出现微量棘状 突起；
[0042] 图20为实施例2中保存14天时红细胞形态图，红细胞呈散在分布，棘状突起增 多；
[0043] 图21为实施例2中保存21天时红细胞形态图，红细胞无凝集出现，异形红细胞增 多；
[0044] 图22为实施例2中保存28天时红细胞形态图，红细胞无凝集，部分细胞发生破 碎；
[0045] 图23为实施例2中保存35天时红细胞形态图，红细胞的无凝集出现，发生细胞破 碎增多；
[0046] 图24为妊娠全血保存血液凝集机理图。
【具体实施方式】
[0047] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于 此。
[0048] 本发明中涉及的"增加血袋中的抗凝剂容量"是指在300ml密封三联袋中采集 200ml的自体血，"正常量"是指指在300ml密封三联袋中采集300ml的自体血。
[0049] 实施例1
[0050] 本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，采用300ml密封三联袋系 统，增加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血，采血后混匀并储存于4±2. (TC储血冰 箱内。共25例。
[0051] 本实施例中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，自体采血指征为排 除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、 病情稳定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准： Hb>105g/L，Plt>100X 109/L。贮血时机为手术前 15-25 天。
[0052] 实施例2
[0053] 本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，采用300ml密封三联袋系 统，密封三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血，并将自体血在6小时内分离 制备成分血，全程保证在冷链状态；所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血浆。285 例完成全程临床应用研究，其中50例完成全程血液质量检测。
[0054] 本实施例2中成分血的制备步骤如下：
[0055] (1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致；
[0056] (2)将准备进行离心的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登记，登记内容涉 及血液品种、献血编号、离心机机号、离心日期、时间、转速和温度；
[0057] (3)配平离心：将登记后的全血放置到离心机专用套筒中，然后用血液配平仪进 行配平；
[0058] (4)配平后，放置入离心机中进行离心；所述的离心参数为：离心温度2_6°C，离心 速度5000g，离心时间10分钟；
[0059] (5)观察步骤（4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常，然后在 低温操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋，即制得血浆用；并将另一转移 袋内红细胞添加液加入红细胞内，将保养液与红细胞充分摇匀，即成红细胞悬液；
[0060] (6)热合封口、检查热合点是否密闭，检查母袋与转移袋的献血编号是否一致，观 察红细胞内有无凝块、破损等异常情况。
[0061] 本发明中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，自体采血指征为排除心 血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、病情稳 定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准：Hb>105g/ L，Plt>100X 109/L。贮血时机为手术前15-25天。
[0062] 对比例1
[0063] 采用300ml密封三联袋系统，密封三联袋系统中的抗凝剂容量为正常量，采集 300ml自体血；采用CPDA全血保养液抗凝。共30例。
[0064] 本发明中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，自体采血指征为排除心 血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、病情稳 定无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准：Hb>105g/ L，Plt>100X 109/L。贮血时机为手术前15-20天。
[0065] 对对比例1进行各项指标测试
[0066] 一、妊娠期全血保存期间血液质理变化规律
[0067] 标本采集与处理：采集标准抗凝的全血保存在含有CPDA保养液血袋（山东威高， 血袋批号：20090929、血袋内含红细胞保养液42ml)中，进行全血混匀后采用无菌接管技术 从全血中分享50ml血液储存于储存于4±2. (TC储血冰箱。用于观察全血保存期间血液质 理变化规律。观察采用时间点0天，3天5天7天14天及21天。样品数目30袋，均来来妊 娠自体输血患者，贮血时机一般选于手术前15-20天。
[0068] 血液外观质量判断：在观察时间点定期，观察血液外观，分离标本前先肉眼观察血 液的凝集状况，然后将血液轻微混匀，观察血液溶血情况，溶血判断标准：血细胞与血浆层 出现红色，或者离心后血浆层可见红色。
[0069] 血液细胞形态观察：采用奥林巴斯CX31显微镜成像系统，玻璃压片观察。倍数： 50X10倍。同时计数200个红细胞，计算游离红细胞和凝集红细胞团比例。凝集红细胞团 判断标准：3个及3个红细胞凝集在一起判断为一个凝集红细胞团。
[0070] 二、凝血功能检测（PT、APTT和FIB检测）：检测时（采集后1小时）、采集后3天， 7天，14天PT、APTT和FIB检测，血液标本离心速度3000G/minl0分钟。采用法国STAGO Compact型全自动血凝分析仪，试剂PT批号：111469,有效期：2015-09 ;试剂APTT批号： 111430,有效期：2015-10 ;试剂FIB批号：11452,有效期：2015-10 ;质控品批号：111033,有 效期：2015-05。
[0071] 血粘度指标检测指标，取新鲜血（采集后1小时）、3天、5天及7天，及14天时相 点，取标本前先将血液摇匀，每次取血5ml，作血液流变学检测。采用MOPEL R80型电脑全自 动血液流变学测定仪，检测全血高切粘度（切变率200S)、中切变率分别为30S (中切1)、低 切粘度1及低切粘度5、血浆粘度、红细胞压积，根据全血粘度计算RBC聚集指数。
[0072] 扩大抗凝比例的妊娠期全血保存效果监测及与标准抗凝比例全血保存比较
[0073] 扩大抗凝比例的妊娠期全血保存效果监测妊娠晚期全血保存在含有扩大抗凝比 例CPDA保养液血袋（山东威高，血袋批号：20090929、血袋内含红细胞保养液42ml)中，进 行全血混匀后采用无菌接管技术从全血中分享50ml血液储存于储存于4±2. (TC储血冰 箱。用于观察扩大抗凝比例的妊娠期全血保存保存期间血液质理变化规律。观察采用时间 点0天，7天，14天及35天。样品数目25袋，均来来妊娠自体输血患者，观察血液外观，并 取血Iml观察储存期间红细胞形态。
[0074] 血液细胞形态观察：采用奥林巴斯CX31显微镜成像系统，玻璃压片观察。倍数： 50X10倍。同时计数200个红细胞，计算游离红细胞和凝集红细胞团比例。凝集红细胞团 判断标准：3个及3个红细胞凝集在一起判断为一个凝集红细胞团。
[0075] 出库前测定电解质与血浆血红蛋白浓度输血前混匀全血，在输血器抽取在5ml全 血于干燥试管中，测定K+、Na+与血浆血红蛋白浓度。比较标准抗凝妊娠期自体全血保存与 扩大抗凝比例的在妊娠期自体全血保存质量方面的区别。
[0076] 三、自体悬浮红细胞的质量指标评价：
[0077] 血液细胞形态观察：标准抗凝的自体全血，采用成分分离后，分成自体新鲜冰冻血 浆及自体悬浮红细胞。对自体悬浮红细胞进行并行留样，对自体悬浮红细胞混匀后采用无 菌接管技术从全血中分享30ml血液储存于储存于4±2. (TC储血冰箱。用于观察自体悬浮 红细胸形态变化规律。观察采用时间点〇天，7天，14天及21天、35天。样品数目51例。
[0078] 根据2013版国家血液标准，比较血站悬浮红细胸（共40例）与自体红细胞的储 存未期血液外观、游离血红蛋白、红细胞比容、血红蛋白浓度及储存未期溶血率。
[0079] 四、妊娠晚期自体血采三种不同保存方法血液临床输血效果评价比较。
[0080] 外观大样本比较三组妊娠晚期自体血储存在回输前对三组血液进行外观质量情 况分析，观察有无凝块、溶血。
[0081] 回输过程中观察滴速和输注效果（有无不良反应反馈），并登记护士输血的反馈 和抱怨。通过三组比较来判断自体成分血能否解决自体全血在输注时所导致的回输困难等 问题，及分析产妇贮存式自体成分血相对于产妇贮存式自体全血的是否具有显著优点，综 合评价自体成分血的效果。
[0082] 统计分析统计学处理采用SPSS 19. . 0软件包进行统计分析，计量资料用x±s表 示，成组设计资料的结果比较采用单因表方差检验，回输情况分析用卡方检验，P〈〇. 05表 示差异有统计学意义。
[0083] 五、结果
[0084] 1、妊娠期晚期患者血液质量特点
[0085] 以同期妇科择期手术的自体输血作为自体输血标准抗凝对照组：妇科肿瘤病人 10例，其它择期妇科手术病人：14例，共24例。作为对照组分析妊娠期晚期患者血液质量 特点，采血前血常规和凝血功能情况，两组间Hb浓度、HCT有显著性差异（P〈0. 01)，产科组 自体输血患者Hb浓度比妇科组略低（P〈〇. 05)。产科组血凝功能呈高凝状态，PT值与FIB 值显著高于妇科自体输血组（P〈〇. 01)，而APTT两组间无显著性差异。具体见表1 :
[0086] 表1 :产科组与妇科组两组贮存式自体输血患者血常规和凝血功能分析
[0087]
【权利要求】
1. 妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于：采用300ml密封 三联袋系统，增加血袋中的抗凝剂容量比例仅采集200ml自体血，采血后混匀并储存于 4±2. 0°C储血冰箱内。
2. 如权利要求1所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于：所 述的贮血时机为手术前15-25天。
3. 如权利要求1所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于： 所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，所述的自体采血指征为排除心血管 系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、病情稳定 无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准：Hb>105g/L， Plt>100X109/L。
4. 妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于：采用300ml密闭三联 袋系统，所述密闭三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血，并将自体血在6小 时内分离制备成分血，全程保证在冷链状态；所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血 浆。
5. 如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于所述 成分血的制备步骤如下： (1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致；(2)将准备进行离心 的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登记，登记内容涉及血液品种、献血编号、离心机 机号、离心日期、时间、转速和温度； (3) 配平离心：将登记后的全血放置到离心机专用套筒中，然后用血液配平仪进行配 平； (4) 配平后，放置入离心机中进行离心；所述的离心参数为：离心温度2-6°C，离心速度 5000g，离心时间10分钟； (5) 观察步骤（4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常，然后在低温 操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋，即制得血浆用；并将另一转移袋内 红细胞添加液加入红细胞内，将保养液与红细胞充分摇匀，即成红细胞悬液； (6) 热合封口、检查热合点是否密闭，检查母袋与转移袋的献血编号是否一致，观察红 细胞内有无凝块、破损等异常情况。
6. 如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于：所 述的贮血时机为手术前15-35天。
7. 如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法，其特征在于： 所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇，所述的自体采血指征为排除心血管 系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后，无产兆、病情稳定 无阴道出血，胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇；且产妇满足标准：Hb>105g/L， Plt>100X109/L。
【文档编号】A61M1/02GK104368052SQ201410660507
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月19日 优先权日:2014年11月19日
【发明者】丁杰锋 申请人:绍兴市妇幼保健院