一种索马鲁肽口服微粒制剂及其制备方法与流程

本发明涉及药物制剂
技术领域：
，尤其涉及一种索马鲁肽口服微粒制剂及其制备方法。
背景技术：
：近年来，作为严重影响人类健康和生活质量的慢性非传染性疾病，糖尿病及其并发症已经成为全球关注的健康问题，使得各国政府都给予糖尿病治疗药物研发极大的关注。而对于众多的药品生产企业而言，早日攻克糖尿病，不仅是其所负社会责任之所系，也是巨额经济效益之所趋。糖尿病患病率增速很快，并呈现年轻化趋势，其中一个重要原因是不健康的生活方式所导致的肥胖所引起的。ii型糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，目前认为肥胖是糖尿病的主要危险因素。从临床看，肥胖的ii型糖尿病患者具有高血糖、高血脂、高血压等三高特征，在诱发糖尿病的各种复杂因素中，肥胖是最危险的信号，要防治糖尿病，就必须要控制体重。索马鲁肽(索马鲁肽)是一款新的长效胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物，以葡萄糖浓度依赖性机制促胰岛素分泌并抑制胰高血糖素分泌，可使2型糖尿病患者血糖水平大幅改善，并且低血糖风险较低。同时，索马鲁肽还能够通过降低食欲和减少食物摄入量，具有明显的减肥效果。该药由诺和诺德研制开发，目前处于临床开发阶段。目前，索马鲁肽药物的剂型有两种，分别为注射液和口服剂，注射液为每周皮下注射一次，这对于需要长期治疗甚至终身治疗的糖尿病患者来说是个痛苦，不仅顺应性差，还容易导致感染，给患者带来身体和心理上的负担。因此，诺和诺德正在开发索马鲁肽口服片剂，每日口服一次。但是，从结构上看，semeglutide是glp-1(7-37)链上8位的ala替换成aib，34位的lys替换成arg，26位的lys接上十八烷酸脂肪链，可见，semeglutide的结构内存在较长的脂肪链，疏水性增加，口服给药的缓释效果和难以得到保证。技术实现要素：有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种索马鲁肽口服微粒制剂及其制备方法，该制剂粒径小，缓释效果好，包封率高。本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂由索马鲁肽、peg、壳聚糖、离子诱导剂和冻干保护剂制得；其中，peg修饰索马鲁肽或修饰壳聚糖。聚乙二醇(peg)的毒性小、无抗原性、具有良好的两亲性，生物相容性已获fda认可，聚乙二醇化修饰技术通过共价键，将聚乙二醇与被修饰药物偶联，改善药物的理化性质和生物学活性。本发明将peg修饰在索马鲁肽上或修饰在壳聚糖上，当peg修饰索马鲁肽时，壳聚糖为载体；而当peg修饰壳聚糖时，peg修饰的壳聚糖为载体。本发明将药物与载体共同制备成为口服微粒制剂，从而使本发明制备的长效口服微粒制剂，粒径小，缓释效果好，包封率高。在本发明中，peg修饰在索马鲁肽上或修饰在壳聚糖上，不同接枝率的peg影响药物微粒给药的吸收促进作用。接枝率不合适，药物微粒容易发生聚集发生沉淀，突释释放的药量也增加；而适宜的接枝率则能使药物更易保留于微粒中，因此，为了本发明得到更好的效果，peg修饰的索马鲁肽的接枝率为0.5％～30％；peg修饰的壳聚糖的接枝率为0.5％～30％。作为优选，peg修饰的索马鲁肽的接枝率为3％～20％；peg修饰的壳聚糖的接枝率为3％～20％。优选的，peg修饰的索马鲁肽的接枝率为3％～10％；peg修饰的壳聚糖的接枝率为3％～10％。在本发明中，壳聚糖为n-三甲基壳聚糖、羧甲基壳聚糖或l-半胱氨基酸-壳聚糖。本发明利用无毒副作用的离子诱导剂对壳聚糖进行离子诱导凝胶化，带有阴离子的离子诱导剂在适宜的条件下与壳聚糖的伯氨基的阳离子交联，把药物包裹在其中形成载药微粒。在本发明中，离子诱导剂为tpp或海藻酸钠。在本发明中，离子诱导剂的质量分数0.05％～2％，优选的，离子诱导剂的质量分数为0.5％～1％。保护剂能够在冷冻干燥过程及冻干后储存阶段保护药物药效的成分。在本发明中，冻干保护剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖或海藻糖。优选的，冻干保 护剂为甘露醇。本发明中，冻干保护剂的质量分数为1％～10％；优选的，冻干保护剂的质量分数为3％～5％。索马鲁肽的脂肪链长，疏水性大，索马鲁肽经过peg修饰，亲水性大大增强。peg修饰后，索马鲁肽不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖dpp-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果，同时，用peg修饰索马鲁肽后，天然构象产生一定的刚性，不易伸展失活，减少了分子内部基团的热震荡，增加了药物的稳定性。索马鲁肽修饰peg，则壳聚糖为载体，载体的质量分数为0.1％～5％；优选的，载体的质量分数为1％～3％。载体与离子诱导剂的质量比是制备和影响药物微粒特征的主要影响因素，载体浓度增加和二者的质量比降低会导致微粒粒径增大，载体浓度增加微粒的zeta电位增高，为了得到均匀、分散性好的药物微粒，作为优选，载体与离子诱导剂的质量比为(3：1)～(12：1)；优选的，载体与离子诱导剂的质量比为(3：1)～(6：1)。在本发明中，peg修饰的索马鲁肽的制备方法为：以醋酸为溶剂将索马鲁肽在edc和nhs存在条件下活化后，与peg混合反应，制得peg修饰的索马鲁肽。作为优选，edc与nhs的质量比为1：1。活化的条件为搅拌。作为优选，活化的时间为1h。作为优选，索马鲁肽与peg的摩尔比为1：1。与peg混合反应的条件为震荡反应。作为优选，反应的温度为30℃，反应时间为24小时。制得peg修饰的索马鲁肽后，经过透析、冷冻干燥，获得peg修饰的索马鲁肽粉末。作为优选，透析的渗透膜的孔径为2.5nm，透析时间为5天。本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括壳聚糖、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的索马鲁肽，所述壳聚糖、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的索马鲁肽的质量比为(0.15～12)：(0.05～1)：(0.1～5)：10。作为优选，所述壳聚糖、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的索马鲁肽的质量比为(0.1～15)：(0.05～5)：(0.03～5)：100。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括n-三甲基壳聚糖、tpp、甘露醇和peg修饰的索马鲁肽。在此实施例中，n-三甲基壳聚糖、tpp、甘露醇和peg修饰的索马鲁肽的质量比为2.5：0.5：5：100。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括羧甲基壳聚糖、海藻酸钠、蔗糖和peg修饰的索马鲁肽。在此实施例中，羧甲基壳聚糖、海藻酸钠、蔗糖和peg修饰的索马鲁肽的质量比为5：0.1：3：200。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括l-半胱氨基酸-壳聚糖、tpp、乳糖、peg修饰的索马鲁肽。在此实施例中，l-半胱氨基酸-壳聚糖、tpp、乳糖、peg修饰的索马鲁肽的质量比为10：0.5：10：100。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括l-半胱氨基酸-壳聚糖、海藻酸钠、peg修饰的索马鲁肽。在此实施例中，l-半胱氨基酸-壳聚糖、海藻酸钠、peg修饰的索马鲁肽的质量比为15：0.5：5：100。本发明所述的壳聚糖为壳聚糖或壳聚糖的衍生物，是天然甲壳素的n-脱乙酰衍生物，具有良好的组织相容性和体内可降解性，无毒。本发明在壳聚糖中引入亲水性的基团，合成peg与壳聚糖的接枝共聚物，制备获得peg修饰的壳聚糖，破坏了壳聚糖分子链排列的规整性，削弱了壳聚糖分子链间的氢键作用，使得溶解性得到大大改善，使得药物生物相容性增加。将peg修饰的壳聚糖运用于本发明中，作为载体，能有效保护索马鲁肽避免酶的破坏，并且其特有的生物粘附性能使得索马鲁肽能较长时间地滞留在胃肠中，提高了索马鲁肽口服的生物利用度，同时改善了细胞毒性。在本发明中，述peg修饰的壳聚糖的制备方法为：以醋酸为溶剂将壳聚糖在edc和nhs存在条件下活化后，与peg混合反应，制得peg修饰的壳聚糖。作为优选，edc与nhs的质量比为1:1。活化的条件为搅拌。作为优选，活化的时间为1h。作为优选，壳聚糖与peg的摩尔比为1：1。与peg混合反应的条件为震荡反应。作为优选，反应的温度为30℃，反应时间为24小时。制得peg修饰的壳聚糖后，经过透析、冷冻干燥，获得peg修饰的壳聚糖粉末。作为优选，透析的渗透膜的孔径为2.5nm，透析时间为5天。本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括索马鲁肽、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的壳聚糖，所述索马鲁肽、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的壳聚糖的质量比为10：(0.05～1)：(0.1～5)：(0.15～12)。作为优选，所述索马鲁肽、离子诱导剂、冻干保护剂和peg修饰的壳聚糖的质量比为(50～200)：(0.5～2)：(1～5)：(3～6)。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括索马鲁肽、tpp、甘露醇、peg修饰的壳聚糖。在此实施例中，索马鲁肽、tpp、甘露醇、peg修饰的壳聚糖的质量比为200：2：5：6。在一些实施例中，本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂中包括索马鲁肽、海藻酸钠、甘露醇、peg修饰的壳聚糖。在一些实施例中，索马鲁肽、海藻酸钠、甘露醇、peg修饰的壳聚糖的质量比为100：1.2：2：6。在另一些实施例中，索马鲁肽、海藻酸钠、甘露醇、peg修饰的壳聚糖的质量比为50：0.5：1：3。在另一些实施例中，索马鲁肽、海藻酸钠、甘露醇、peg修饰的壳聚糖的质量比为150：1.5：3：4.5。本发明将peg修饰在索马鲁肽上或修饰在壳聚糖上，当peg修饰索马鲁肽时，壳聚糖为载体；而当peg修饰壳聚糖时，peg修饰的壳聚糖为载体。本发明将药物与载体共同制备成为口服微粒制剂。本发明制得的微粒载药量大、粒径分布均匀、粒径在100nm～1μm，释药稳定，包封率高。本发明提供的索马鲁肽的口服微粒制剂的制备方法，包括：将peg修饰的索马鲁肽与壳聚糖混合后，与离子诱导剂混合，经离心取沉淀，在冻干保护剂存在条件下冻干，制得索马鲁肽的口服微粒制剂；或者，将peg修饰的壳聚糖与索马鲁肽混合后，与离子诱导剂混合，经 离心取沉淀，在冻干保护剂存在条件下，冻干制得索马鲁肽的口服微粒制剂。其中，以壳聚糖为载体，peg修饰的索马鲁肽为药物，其制备方法为：将peg修饰的索马鲁肽与壳聚糖混合后，与离子诱导剂混合，经离心取沉淀，在冻干保护剂存在条件下冻干，制得索马鲁肽的口服微粒制剂；其中，将peg修饰的索马鲁肽与壳聚糖混合后，室温下搅拌1h。所述室温为10℃～30℃。所述搅拌的转速为400r/min～800r/min。所述壳聚糖为与离子诱导剂混合后，调节ph值为3.5～6.5，室温下搅拌1h～24h。所述室温为10℃～30℃。优选的，调节ph值为3.5～5.5，室温下搅拌6h～16h。离心的转速为8000rpm～15000rpm，时间为10min～60min。优选的，离心的转速为8000rpm～12000rpm，时间为20min～45min。其中，以peg修饰的壳聚糖为载体，索马鲁肽为药物，其制备方法为：将peg修饰的壳聚糖与索马鲁肽混合后，与离子诱导剂混合，经离心取沉淀，在冻干保护剂存在条件下，冻干制得索马鲁肽的口服微粒制剂。其中，将peg修饰的壳聚糖与索马鲁肽混合后，室温下搅拌1h。所述室温为10℃～30℃。所述搅拌的转速为400r/min～800r/min。与离子诱导剂混合后，调节ph值为3.5～6.5，室温下搅拌1h～24h。所述室温为10℃～30℃。离心的转速为8000rpm～15000rpm，时间为10min～60min。本发明提供的制剂可以添加药学上可接受的辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。本发明将peg修饰在索马鲁肽上或修饰在壳聚糖上，当peg修饰索马鲁肽时，壳聚糖为载体；而当peg修饰壳聚糖时，peg修饰的壳聚糖为载体。本发明将药物与载体共同制备成为口服微粒制剂。本发明制得的微粒的包封率可达80％以上、粒径分布均匀、粒径在100nm～1μm，zeta电位较高，为35～41。释药稳定，持续释药时间长达30天。附图说明图1实施例9制备的微粒粒径分布；图2实施例12制备的微粒粒径分布；图3示实施例9制得的微粒的缓释效果；图4示实施例12制得的微粒的的缓释效果。具体实施方式本发明提供了一种索马鲁肽口服微粒制剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明采用的药物或仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1～4表1实施例1～4壳聚糖(g/mol)peg(g/mol)peg-壳聚糖的量(g)接枝率实施例1110.3g30％实施例2220.15％实施例3550.0250.5％实施例410100.010.1％称取壳聚糖溶解于醋酸5ml中，加入edc(至浓度为0.1mol/l)nhs(至浓度为0.1mol/l)，搅拌1h，称取peg加入到溶液中，恒温水浴30℃，震荡反应24小时，透析袋中透析5天，冷冻干燥得到peg-壳聚糖。实施例5～8表2实施例5～8称取索马鲁肽溶解于醋酸5ml中，加入edc(至浓度为0.1mol/l)nhs(至浓度为0.1mol/l)，搅拌1h，称取peg加入到溶液中，恒温水浴30℃，震荡反应24小时，透析袋中透析5天，冷冻干燥得到peg-索马鲁肽。实施例9取50mg索马鲁肽加入到100ml质量分数为3％的peg-壳聚糖(实施例1制得，peg接枝率30％)水溶液中，磁力搅拌1h，添加50ml质量分数为1％的海藻酸钠溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph3.5，再继续搅拌6h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，8000rpm，30min，加入20ml质量分数为5％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例10取200mg索马鲁肽加入到200ml质量分数为3％的peg-壳聚糖(实施例2制得，peg接枝率5％)水溶液中，磁力搅拌1h，添加200ml质量分数为1％的tpp溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph6.5，再继续搅拌24h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，15000rpm，60min，加入50ml质量分数为10％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例11取100mg索马鲁肽加入到50ml质量分数为12％的peg-壳聚糖(实施例3制得，peg接枝率0.5％)水溶液中，磁力搅拌1h，添加20ml质量分数为6％的海藻酸钠溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph4.0，再继续搅拌8h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，8000rpm，40min，加入40ml质量分数为5％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例12取150mg索马鲁肽加入到150ml质量分数为3％的peg-壳聚糖(实施例4制得，peg接枝率0.1％)溶液中，磁力搅拌1h，添加150ml质量分数为1％的海藻酸钠溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph4.5，再继续搅拌10h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，10000rpm，50min，加入60ml质量分数为5％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂，微粒可制备成片剂，胶囊剂、颗粒剂或散剂。实施例13取100mgpeg-索马鲁肽(实施例5制得，peg接枝率20％)加入到50ml质量分数为5％的n-三甲基壳聚糖溶液中，磁力搅拌1h，添加100ml质量分数为0.5％的tpp溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph4.0，再继续搅拌10h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，10000rpm，40min，加入250ml质量分数为2％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例14取200mgpeg-索马鲁肽(实施例7制得，peg接枝率5％)加入到500ml质量分数为1％的羧甲基壳聚糖溶液中，磁力搅拌1h，添加到100ml质量分数为0.1％的海藻酸钠溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph5.0，再继续搅拌16h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，12000rpm，45min，加入到100ml质量分数为3％蔗糖溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例15取100mgpeg-索马鲁肽(实施例8制得，peg接枝率3％)加入到250ml质量分数为4％的l-半胱氨基酸-壳聚糖溶液中，磁力搅拌1h，添加100ml质量分数为0.5％的tpp溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph5.5，再继续搅拌8h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，8000rpm，20min，加入50ml质量分数为6％乳糖溶液，冷冻干燥，得到索马 鲁肽微粒冻干制剂。实施例16取100mgpeg-索马鲁肽(实施例8制得，peg接枝率3％)加入到300ml质量分数为0.5％的l-半胱氨基酸-壳聚糖中，磁力搅拌1h，添加500ml质量分数为0.1％的海藻酸钠溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph3.5，再继续搅拌6h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，8000rpm，30min，加入500ml质量分数为1％海藻酸钠溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。对比例1取50mg索马鲁肽加入到150ml质量分数为1％的壳聚糖溶液中，磁力搅拌1h，添加10ml质量分数为2％的tpp溶液，添加完毕，用0.1mol/l盐酸或0.1mol/l氢氧化钠调ph3.5，再继续搅拌12h，即得索马鲁肽微粒溶液，离心去除上清液，8000rpm，30min，加入100ml质量分数为5％甘露醇溶液，冷冻干燥，得到索马鲁肽微粒冻干制剂。实施例17采用激光粒度仪及zeta电位仪测定实施例9～16和对比例1的微粒粒径和zeta电位。结果如表3。其中，实施例9制得的微粒的粒径分布图如图1；图2示实施例12制得的微粒的粒径分布图如图2。表3微粒的粒径分布液体性状平均粒径(μm)zeta电位实施例9乳光0.7±0.06835.78±1.61实施例10乳光0.7±0.03634.02±1.53实施例11沉淀2.0±0.07128.72±1.04实施例12沉淀6.0±0.04735.63±1.47实施例13乳光0.5±0.07441.25±1.32实施例14乳光0.5±0.05140.58±1.02实施例15乳光0.5±0.04637.50±1.47实施例16乳光0.6±0.06936.25±1.97对比例1沉淀5.0±0.06725.97±1.43图1结果显示，实施例9制备的微粒粒径分布比较集中，基本位于0.35～0.8μm，0.4～0.75μm居多。图2结果显示，实施例12制备的微粒粒径分布基本位于5～13μm，6～12μm居多，微粒粒径较大。表1结果显示，实施例9～10、实施例13～16制备的微粒溶液呈稳定的乳光状态，粒径和zeta电位都比较合理。实施例18药物包封率测定：收集实施例9～16和对比例1离心后的上清液，用0.22μm的膜过滤，用紫外分光光度计测定，根据标准曲线计算出索马鲁肽微粒的包封率。结果如图表2，结果显示本发明实施例9～16制备的索马鲁肽微粒的包封率可到80％以上，显著高于对比例1(p<0.05)。表4药物包封率(％)实施例19体外释放率的测定：将100mg实施例9～16和对比例1制备的索马鲁肽微粒分别加入2l模拟胃液(ph1.2)和模拟小肠(ph6.8)的缓冲液中，37±0.5℃条件下缓慢振摇，隔段时间取样5ml用紫外分光光度计在280nm处测定索马鲁肽的量，通过标准曲线计算索马鲁肽的累计释放量，时间间隔为0、0.5d、1d、2d、3d、6d、9d、12d、15d、20d、25d、30d。实施例9制得的微粒的缓释效果如图3；实施例10、实施例13～16制得的微粒的缓释效果与此相似。从图可以看出，该索马鲁肽微粒可持续释放一个月，释放率达85％以上。图4示实施例12制得的微粒的的缓释效果图2，实施例11和对比例1制 得的微粒的缓释效果与此相似。从图可以看出，该马鲁肽微粒很快释放完全，具有突释作用，没有长效的作用。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12