一种靶向肿瘤低氧微环境的中药小分子组合在肿瘤治疗中的应用的制作方法

文档序号:12322955阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种靶向肿瘤低氧微环境的中药小分子组合在肿瘤治疗中的应用,依次包括以下步骤:

a)对数生长期的人肺癌A549细胞5×103个/孔接种于 96孔板,培养24h后,应用 Lipofectamine2000将构建的低氧诱导因子1α启动子偶联的荧光素酶表达质粒对A549细胞进行转染,建立筛选肿瘤低氧诱导因子1α调节剂的细胞模型;细胞继续培养 12h 后加入5~20µmol/L的筛选复合药物,转入低氧环境下作用 24h;吸取培养上清,1500转离心 10 min,用VEGF ELISA 试剂盒检测培养上清中的VEGF含量,细胞中加入磷酸缓冲盐溶液稀释的荧光素,作用5~10min后用多功能微板读数仪检测各孔荧光强度;根据各加入筛选复合药物的孔相对于未加筛选复合药物的孔的荧光相对值和相对于未加筛选复合药物孔的VEGF相对含量作为评价筛选复合药物调节肿瘤细胞低氧的强弱;荧光相对值为0.8~1.0,VEGF相对含量<0.5时,调节能力为弱;荧光相对值0.5~0.8时,VEGF相对含量0.5~0.8时,调节能力为中等; 荧光相对值<0.5时,VEGF相对含量>0.8时,调节能力为强;选择荧光相对值<0.5,VEGF相对含量>0.8时的筛选复合药物进行肿瘤防治试验;

b)将雌性昆明小鼠的皮肤组织在培养皿中进行体外培养,各皮肤组织的尺寸大小相等,并将皮肤组织分为模型组、组合物高剂量组、组合物中剂量组、组合物低剂量组,每组20个,模型组中不添加筛选复合药物,组合物高剂量组中保持培养皿中培养基中筛选复合药物为300~700mg/kg,组合物中剂量组中保持培养皿中培养基中筛选复合药物为100~300mg/kg,组合物低剂量组中保持培养皿中培养液中筛选复合药物为20~80mg/kg,模型组添加等剂量的生理盐水;于实验第1天在皮肤组织上涂200μl二甲基苯蒽丙酮液,每周1次,共4次;第22天起在相同部位涂0.25%巴豆油丙酮液200μl,每周2次,连续15周;计数各组出现皮肤肿瘤的组数和每组皮肤出现的肿瘤数。

2.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤低氧微环境的中药小分子组合在肿瘤治疗中的应用,其特征在于:所述的筛选复合药物包括桂皮醛、姜辣素、吴茱萸碱、三七皂苷,且按照桂皮醛:姜辣素:吴茱萸碱:三七皂苷为8:1:1:1:1:1的比例组成,上述筛选复合药物使的荧光相对值<0.5时,VEGF相对含量>0.8时,调节能力为强。

3.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤低氧微环境的中药小分子组合在肿瘤治疗中的应用,其特征在于:所述的组合物高剂量组中保持培养皿中培养基中筛选复合药物为500mg/kg,组合物中剂量组中保持培养皿中培养基中筛选复合药物为200mg/kg,组合物低剂量组中保持培养皿中培养液中筛选复合药物为50mg/kg。

4.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤低氧微环境的中药小分子组合在肿瘤治疗中的应用,其特征在于:所述的低氧环境中O2含量为3% ,CO2含量为5%,其余为氮气。

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