妇科千金方组合物联合抗生素在制备治疗胸腺疾病药物方面的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及一种妇科千金方组合物联合抗生素在制备治疗胸腺疾病药物方面的应用。

技术背景

胸腺(thymus)胸腺位于胸腔前纵隔，为机体的重要淋巴器官。其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，其还可以分泌胸腺激素及激素类物质，具内分泌机能的器官。胸腺被喻为人的“寿命时钟”，近年的研究表明与人的寿命长短密切相关。

胸腺是人体免疫特别是细胞免疫的重要器官，故胸腺有病变时，将对机体免疫功能带来严重影响，使机体免疫自稳功能紊乱并伴发自身免疫性疾病。胸腺疾病可按其大小分类，小于正常的胸腺分原发性先天性胸腺发育不全，继发于肾上腺皮质功能亢进、妊娠、授乳、营养不良、类固醇和细胞毒药物治疗及放射线照射等；大于正常的胸腺有胸腺瘤、胸腺其他肿瘤、转移瘤、胸腺囊肿、创伤后出血等。

很多疾病可引起胸腺增生，如：严重或反复的感染、烧伤、结节病、单纯红细胞再生障碍性贫血和一些复杂的全身内分泌疾病(包括：肾上腺、胰腺、卵巢、肾等)。

阿奇霉素适用于敏感细菌所引起的感染，包括支气管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮肤和软组织感染，急性中耳炎，鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染。近年也有见使用于治疗盆腔炎。

目前未见中药组合物与阿奇霉素联合应用于制备治疗胸腺疾病药物的相关技术报道。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是填补现有妇科千金片联合阿奇霉素的应用技术不足，提供一种妇科千金方组合物联合抗生素在制备治疗胸腺疾病的药物方面的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供妇科千金方组合物联合抗生素在制备治疗胸腺疾病的药物方面的应用，尤其是应用于制备治疗改善胸腺充血、水肿和/或增生肥大药物方面的应用；所述抗生素为阿奇霉素；所述妇科千金方组合物的活性成分由千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、当归和党参组成。

提供妇科千金方组合物联合抗生素在制备降低胸腺脏器指数药物方面的应用，

优选地，所述中药组合物中，当归、党参、穿心莲和单面针的掺入量各为药材总重量的9％；金樱根、鸡血藤、功劳木和千斤拔的掺入量各为药材总重量的16％。

优选地，所述中药组合物中，穿心莲和单面针的掺入量各为药材总重量的9％；金樱根、功劳木和千斤拔的掺入量各为药材总重量的16％。

所述中药组合物的制备方法可参照株洲千金药业股份有限公司妇科千金片或胶囊的制备方法。

本发明的有益效果是：

本发明提供了妇科千金方组合物联合抗生素在制备治疗胸腺疾病药物方面的应用，阿奇霉素适用于敏感细菌所引起的感染，包括支气管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮肤和软组织感染，急性中耳炎，鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染。本发明将其与由千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、当归和党参八味药组成的中药组合物联合应用，在治疗胸腺疾病尤其是改善胸腺充血、水肿以及增生肥大方面具有良好的应用效果，并通过大量动物实验证明所述中药组合物和阿奇霉素发挥协同作用，对改善胸腺脏器指数趋向正常方面具有确切的影响作用，为中药组合物和阿奇霉素的新领域应用都提供了有力技术支持。

附图说明

图1 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF组治疗前后子宫脏器系数变化情况。

图2 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF组治疗前后胸腺脏器系数变化情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明。下述实施例仅用于示例性说明，不能理解为对本发明的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的原料为常规市购或商业途径获得的原料，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使用的方法和设备。

实施例1

1.实验菌种：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，大肠埃希菌(ATCC25922)购买于中国国家菌种库。受试菌株冻干粉用无菌M-H(B)培养基混悬后均匀铺于无菌M-H(A)平板表面，35℃孵育过夜复活，18h后平板表面生长出菌苔，选取其中长势良好的单一菌团，重新涂抹于M-H(A)斜面，相同条件下孵育18h，密封，4℃条件下冷藏保存；试验前一天取斜面菌涂抹于M-H(A)平板，35℃孵育过夜，即可使用。所有操作均在超净工作台完成。

2.菌液制备方法

方法一：(高浓度菌液制备)

挑3-4个单菌落于40毫升的M-H(B)培养基中。受试菌隔夜增菌培养16小时(37℃，水浴摇床振摇16小时)，次日取出原菌液用全波长多功能读数议测OD值(细菌生长饱和期)；取20mL，分装于离心管中，每管2mL，离心10000-15000rpm/min，10分钟，弃取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理盐水混匀后，再离心15000rpm/min，10分钟，弃取上清液中的生理盐水，收集细菌细胞菌体2mL。将相同方法培养的金色葡萄球菌和大肠埃希菌按1：1混合即获得4mL混合菌液。将该菌液为100菌液浓度，用生理盐水进行10倍稀释，稀释至0.1×100，0.01×100，备用(共3个剂量)。

方法二：(低浓度菌液制备)

挑单一菌落(包括金色葡萄球菌和大肠埃希菌)于2毫升的生理盐水中，分别配制成为0.5麦氏浓度(约1×108CFU·mL^－1)细菌混悬液，将金色葡萄球菌和大肠埃希菌混悬液混合，即得到混合菌液4mL。将该菌液设置成为10A菌液浓度，用生理盐水进行对倍稀释，稀释至0.5×10^A，0.25×10^A，备用(共3个剂量)。

3.药品与试剂：M-H(A)培养基(OXOID公司，生产批号：CM0337A)；M-H(B)培养基(OXOID公司，生产批号：CM0405B)；乌拉坦溶液(20％)；生理盐水(四川科伦药液股份有限公司，生产批号：M12012004)；其他试剂和耗材均由成都雅荣生化设备经营部购买提供。

4.仪器：电热恒温培养箱(上海一恒科技有限公司，BPH-9162)；优普系列超纯水机(成都超纯科技有限公司，UpK-1-10T)；微量加样器(EppendorfResearch，10、100、100uL)；空气浴振荡器(哈尔滨市东联电子技术开发，HZQ-C)；自动电热压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂，LDZX-40BI)；全波长多功能读数议(美国Thermo)；菌落计数仪。

5.模型制备

具体操作方法：大鼠称重标记，腹部常规消毒，20％乌拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，用1mL注射器抽取预先制备的混合菌液，左手持鼠尾提起大鼠，用10mL注射器磨去针头尖，于阴道底部的子宫颈分叉处小心进入一侧宫腔内，针头在宫腔内来回抽拉2次以机械性损伤子宫内膜组织，然后朝卵巢方向推注菌液0.1mL，同样操作步骤将0.1mL菌液注入另一侧子宫，注射完毕后，倒置大鼠5min，以防菌液漏出。分别于24h，48h观察记录各组大鼠感染情况，以大鼠无死亡，于造模后24h、72h、96h后分别阴道刮片，进行菌落培养，选择菌落计数≥30，≤100的感染菌量作为最佳感染菌量。将该菌量作为体内感染的菌量。受试大鼠感染菌量为：

表1

所有实验动物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常规消毒腹部，用无菌棉签伸入宫口，来回抽拉2次后，将棉签放入含2mL生理盐水的试管中，获得含测试品混悬液，取出棉签，再用新的无菌棉签充分蘸取混合液均匀涂抹于无菌M-H(A)平板表面，35℃孵育过夜，18h后进行菌落计数。240h牺牲动物，观察子宫感染情况。各组典型鼠感染菌落计数，结果如下表2：

表2受试大鼠感染菌量

所有实验动物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常规消毒腹部，用无菌落计数结果显示，3组鼠所感染菌量符合实验要求。同时，解剖后可见子宫等直观可见炎性充血与炎性水肿。

6.试验过程

模型及分组150只大鼠(雌性SPF级SD大鼠，220g±20g，由四川省医学科学院实验动物研究所购得，实验动物生产许可证号：SCXK(川)2008-24)。16只用于空白，另行饲养。其余均采用造模方法麻醉后注射混合菌液。观察5日，每日均随机抽取6只及空白组2只麻醉后采集阴道分泌物用于细菌涂片。5日后存活大鼠随机分为5组，即model、AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF(分别表示不予治疗的模型组、单独使用阿奇霉素组、阿奇霉素清热合并组、阿奇霉素缺当归合并组、阿奇霉素全方合并组)。

model：不予治疗的模型组；

AZM：阿奇霉素

model：不予治疗的模型组；

AZM：阿奇霉素治疗的模型组。

AZMQR：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

AZMDG：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、党参参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

AZMFF：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、当归、党参参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

1.受试剂量

(1)AZM剂量：本实施例对阿奇霉素(AZM)的可选受试剂量进行了分析和确定，目的为选择一个试用后作用强度适中、时长适中的受试剂量，同时明确同中药合并用药时的时程长度。预试60、30、20、10mg/kg.d三天，发现原设定剂量过高，最终采用10mg/kg.d。

(2)受试药物剂量：

原设定各中药组合物的剂量为2.058g/kg.d，但预试发现，此剂量采用最大给容积配制的给药液为稀浆状，无法通过灌胃针头。随调整最终全方AZMFF给药剂量为最大给药量1.66g/kg.d，调整缺当归组剂量AZMDG为1.41g/kg.d、清热组剂量AZMQR为1.16g/kg.d。

2.给药时间

除空白和模型外，造模后第六日开始给予相应药物。AZM与各中药分别给予，相差时间约2小时。所有给药组在8点左右均先给予相应剂量的AZM，两个小时后开始给予相应的中药生理盐水水混物。

3.样本收集

第1日给予AZM两小时后，经尾静脉采集各组大鼠末梢静脉血。从第二日始各给药组大鼠每日两次采血，于给予阿奇前和给予中药前各经尾静脉采集一次，每次采集血量约0.3mL，取样时间误差约30min。于给药第2、4、6、8日给予AZM两小时后，各组麻醉后牺牲约2～4只大鼠，采集下腔动脉抗凝全血，并同时收集牺牲大鼠的靶器官(子宫、孵巢、胸腺、脾脏)。

4.送样测试

所有时间点0.3mL及末次全血，分取约0.2mL血浆用于UPLC-MS检测AZM浓度。末次抗凝全血送检血细胞计数、血流变。子宫从子宫体中部切分，取1/2福尔马林固定后用于病理送检。子宫、孵巢、胸腺、脾脏称重并计算脏器系数。脏器系数又称脏体比，是实验动物某脏器的重量与其体重之比值。正常时各脏器与体重的比值比较恒定。动物染毒后，受损脏器重量可以发生改变，故脏器系数也随之而改变。脏器系数增大，表示脏器充血、水肿或增生肥大等；脏器系数减小，表示脏器萎缩及其他退行性改变。

实验结果见图1和图2所示。图1和图2中，从左至右分别显示为AMZ、AMZDG、AZMFF、AZMQR、Model和正常组normal的指数变化情况。结果显示，实验动物造模后，子宫和胸腺均充血、水肿，脏器系数与正常组比较均升高，给予不同的药物组合治疗后，各系数都降低，趋向于回复正常水平。各治疗组之间的治疗效果比较，子宫脏器系数：AZMDG>AZMQR>AZMFF>AZM；胸腺脏器系数：AZMFF>AZMDG>AZM>AZMQR。妇科千金方组合物联合阿奇霉素主要在改善胸腺充血、水肿、增生等方面具有良好的应用效果。

实施例2本发明中药组合物联合阿奇霉素在胸腺相关疾病辅助治疗方面的试验

重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头传递功能障碍的获得性自身免疫学疾病。其确切的发病机理目前仍不明确，但有关该病的研究比较多，其中，研究最多的是有关重症肌无力与胸腺的关系。研究证明，血清中的抗Achr抗体的增高和突触后膜上的沉积所引起的有效的Achr数目的减少，是本病发生的主要原因。而胸腺是Achr抗体产生的主要场所，因此，本病的发生一般与胸腺有密切的关系。本实施例基于前期对胸腺脏器指数的影响作用研究，旨在了解本发明中药组合物联合重症肌无力疾病治疗过程中作为辅助性治疗所起到的作用。

病例选择标准：根据1997年全国神经免疫学大会制定的诊断标准：①临床表现：活动后加重、休息后减轻的随意肌无力，呈晨轻暮重；②药理学：胆碱酯酶抑制剂治疗有效和箭毒类药物使之加重；③电生理学：低频重复电刺激示复合动作电位波幅递减大于10％和单纤维肌电图示颤抖增宽；④免疫学：血清乙酰胆碱受体抗体增高；⑤免疫病理学：神经肌肉接头处突触后膜皱折减少、变平坦和乙酰胆碱受体减少。以上五项中，第一项和第二项符合即可诊断，后三项可作为研究酌情增加。再参照《实用中西医结合诊断治疗学》的中医辨证分型，脾肾气虚证：主症为眼睑下垂，复视，四肢无力，甚或抬颈无力，声嘶；次症为面色少华，气短神疲，纳差，或畏寒肢冷，腰膝酸软，大便稀溏；舌淡，苔白腻或薄白腻；脉缓或沉弱无力者，均符合者，排除年龄<5岁或年龄>65岁者、有药物过敏史或高敏体质者、合并肝、肾、心血管系统、造血系统、内分泌系统等严重疾病者；孕妇及哺乳期妇女、病人及家属非自愿或不能积极配合及参与其他药物研究者。

共治疗观察31例，其中确定20例伴有胸腺均充血、水肿，胸腺脏器系数与正常组比较均升高，将所述20例随机分为两组。两组在性别、年龄、病程、疾病性质、兼症等方面统计学比较差异无统计学意义(P＞0.05)，，有可比性。

治疗方法：

治疗组：予强的松片30～50mg晨起顿服，2个月后隔周减2.5mg，直至停药。同时配合服用胃黏膜保护剂等。同时给予妇科千金片(胶囊)(株洲千金药业股份有限公司出品，参照产品说明书服用剂量)和阿奇霉素(参照阿奇霉素规定剂量)，阿奇霉素与妇科千金片分开服用，相差时间约2小时。

对照组：予强的松片30～50mg晨起顿服，2个月后隔周减2.5mg，直至停药。同时配合服用胃黏膜保护剂等。

疗效观察：3个月为一个疗程。连续用药3个疗程后观察症状、体征改善情况及不良反应。

试验结果：疗效方面，

对照组(10例)临床痊愈1例(10％)，基本痊愈2例(20％)，显效3例(30％)，好转3例(30％)，无效1例(10％)。

治疗组(10例)临床痊愈1例(10％)，基本痊愈3例(30％)，显效5例(50％)，好转1例(20％)，无效0例(0％)。治疗组最短见效10天。治疗组10例复查胸腺，充血、水肿情况显著改善，胸腺脏器系数基本回复正常水平。

治疗组愈显率、有效率均高于对照组，P＜0.05，具有统计学意义。

本发明中药组合物和阿奇霉素的联合使用可明显靶向改善胸腺充血水肿，在于胸腺相关的疾病治疗中可探寻联合用药机制。