中药组合物联合抗生素在制备治疗子宫疾病药物方面的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及一种中药组合物联合抗生素在制备治疗子宫疾病药物方面的应用。

技术背景

子宫炎是盆腔生殖器官炎症之一，为妇女常见病，炎症可局限于一个部位，也可几个部位同时发病，临床上尤以后一种情况为多见，急性炎症有可能引起弥漫性腹膜炎、败血症以致感染性休克等严重后果；子宫水肿一般由于急性炎症引起，会导致月经量过多，如果不及时治疗可能导致慢性子宫肥大等；子宫肥大，是指子宫均匀增大，本病的基本病理改变是子宫肌层内平滑肌细胞及血管壁的变化。子宫呈均匀增大，肌层肥厚达2.5～3.2cm。切面呈灰白色或粉红色，硬度增加，纤维束呈编织状排列。动静脉明显扩张，在新生的血管周围有成团的弹力纤维增生。伴有不等程度子宫出血的一种疾病。主要临床症状为白带增多，月经量过多，持续天数延长；月经期延长，但经量不多等，另外，由于结缔组织增生及炎症沿宫颈旁或经宫骶韧带向盆腔扩散，有腰骶部疼痛或会阴部坠胀感。导致子宫肥大的原因包括子宫增生，原发性子宫血管病变，雌激素持续刺激和功能性子宫出血，慢性附件炎、盆腔结缔组织炎及子宫慢性肌炎导致的子宫肌层内胶原纤维增生，盆腔淤血引起子宫结缔组织增生，支原体、衣原体、细菌、病毒等病原体感染等原因。目前一般子宫肥大等情况多考虑保守治疗，雄激素治疗可减小流血量，保守治疗无效者，可考虑全子宫切除术，给患者带来很大伤害。

阿奇霉素适用于敏感细菌所引起的感染，包括支气管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮肤和软组织感染，急性中耳炎，鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染。近年也有见使用于治疗盆腔炎。

目前未见中药组合物与阿奇霉素联合应用于制备治疗子宫疾病药物的相关技术报道。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是填补现有中药组合物联合阿奇霉素的应用技术不足，提供一种中药组合物联合抗生素在制备治疗子宫疾病药物方面的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供中药组合物联合抗生素在制备治疗子宫疾病的药物方面的应用，尤其是应用于制备治疗改善子宫充血、水肿和/或增生肥大药物方面的应用；所述抗生素为阿奇霉素；所述中药组合物的活性成分由千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木(十大功劳)、单面针、鸡血藤和党参组成。

优选地，所述中药组合物中，党参、穿心莲和单面针的掺入量各为药材总重量的9％；金樱根、鸡血藤、功劳木和千斤拔的掺入量各为药材总重量的16％。

优选地，所述中药组合物中，穿心莲和单面针的掺入量各为药材总重量的9％；金樱根、功劳木和千斤拔的掺入量各为药材总重量的16％。

所述中药组合物的制备方法可参照株洲千金药业股份有限公司妇科千金片的制备方法。

本发明的有益效果是：

本发明提供了一种新的中药组合物联合阿奇霉素的联合应用，阿奇霉素适用于敏感细菌所引起的感染，包括支气管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮肤和软组织感染，急性中耳炎，鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染。本发明将其与由千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木(十大功劳)、单面针、鸡血藤和党参七味药组成的中药组合物联合应用，在治疗子宫疾病尤其是改善子宫充血、水肿以及增生肥大方面具有良好的应用效果，并通过大量动物实验证明所述中药组合物和阿奇霉素发挥协同作用，对改善子宫脏器指数趋向正常方面具有确切的影响作用，为中药组合物和阿奇霉素的新领域应用都提供了有力技术支持。

附图说明

图1 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治疗组动物子宫病理切片图。

图2 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF组治疗前后子宫脏器系数变化情况。

图3 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF组治疗前后胸腺脏器系数变化情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明。下述实施例仅用于示例性说明，不能理解为对本发明的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的原料为常规市购或商业途径获得的原料，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使用的方法和设备。

实施例1

1.实验菌种：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，大肠埃希菌(ATCC25922)购买于中国国家菌种库。受试菌株冻干粉用无菌M-H(B)培养基混悬后均匀铺于无菌M-H(A)平板表面，35℃孵育过夜复活，18h后平板表面生长出菌苔，选取其中长势良好的单一菌团，重新涂抹于M-H(A)斜面，相同条件下孵育18h，密封，4℃条件下冷藏保存；试验前一天取斜面菌涂抹于M-H(A)平板，35℃孵育过夜，即可使用。所有操作均在超净工作台完成。

2.菌液制备方法

方法一：(高浓度菌液制备)

挑3-4个单菌落于40毫升的M-H(B)培养基中。受试菌隔夜增菌培养16小时(37℃，水浴摇床振摇16小时)，次日取出原菌液用全波长多功能读数议测OD值(细菌生长饱和期)；取20mL，分装于离心管中，每管2mL，离心10000-15000rpm/min，10分钟，弃取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理盐水混匀后，再离心15000rpm/min，10分钟，弃取上清液中的生理盐水，收集细菌细胞菌体2mL。将相同方法培养的金色葡萄球菌和大肠埃希菌按1：1混合即获得4mL混合菌液。将该菌液为100菌液浓度，用生理盐水进行10倍稀释，稀释至0.1×100，0.01×100，备用(共3个剂量)。

方法二：(低浓度菌液制备)

挑单一菌落(包括金色葡萄球菌和大肠埃希菌)于2毫升的生理盐水中，分别配制成为0.5麦氏浓度(约1×108CFU·mL^－1)细菌混悬液，将金色葡萄球菌和大肠埃希菌混悬液混合，即得到混合菌液4mL。将该菌液设置成为10A菌液浓度，用生理盐水进行对倍稀释，稀释至0.5×10^A，0.25×10^A，备用(共3个剂量)。

3.药品与试剂：M-H(A)培养基(OXOID公司，生产批号：CM0337A)；M-H(B)培养基(OXOID公司，生产批号：CM0405B)；乌拉坦溶液(20％)；生理盐水(四川科伦药液股份有限公司，生产批号：M12012004)；其他试剂和耗材均由成都雅荣生化设备经营部购买提供。

4.仪器：电热恒温培养箱(上海一恒科技有限公司，BPH-9162)；优普系列超纯水机(成都超纯科技有限公司，UpK-1-10T)；微量加样器(EppendorfResearch，10、100、100uL)；空气浴振荡器(哈尔滨市东联电子技术开发，HZQ-C)；自动电热压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂，LDZX-40BI)；全波长多功能读数议(美国Thermo)；菌落计数仪。

5.模型制备

具体操作方法：大鼠称重标记，腹部常规消毒，20％乌拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，用1mL注射器抽取预先制备的混合菌液，左手持鼠尾提起大鼠，用10mL注射器磨去针头尖，于阴道底部的子宫颈分叉处小心进入一侧宫腔内，针头在宫腔内来回抽拉2次以机械性损伤子宫内膜组织，然后朝卵巢方向推注菌液0.1mL，同样操作步骤将0.1mL菌液注入另一侧子宫，注射完毕后，倒置大鼠5min，以防菌液漏出。分别于24h，48h观察记录各组大鼠感染情况，以大鼠无死亡，于造模后24h、72h、96h后分别阴道刮片，进行菌落培养，选择菌落计数≥30，≤100的感染菌量作为最佳感染菌量。将该菌量作为体内感染的菌量。受试大鼠感染菌量为：

表1

所有实验动物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常规消毒腹部，用无菌棉签伸入宫口，来回抽拉2次后，将棉签放入含2mL生理盐水的试管中，获得含测试品混悬液，取出棉签，再用新的无菌棉签充分蘸取混合液均匀涂抹于无菌M-H(A)平板表面，35℃孵育过夜，18h后进行菌落计数。240h牺牲动物，观察子宫感染情况。各组典型鼠感染菌落计数，结果如下表2：

表2受试大鼠感染菌量

所有实验动物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常规消毒腹部，用无菌落计数结果显示，3组鼠所感染菌量符合实验要求。同时，解剖后可见子宫等直观可见炎性充血与炎性水肿。

6.试验过程

模型及分组150只大鼠(雌性SPF级SD大鼠，220g±20g，由四川省医学科学院实验动物研究所购得，实验动物生产许可证号：SCXK(川)2008-24)。16只用于空白，另行饲养。其余均采用造模方法麻醉后注射混合菌液。观察5日，每日均随机抽取6只及空白组2只麻醉后采集阴道分泌物用于细菌涂片。5日后存活大鼠随机分为5组，即model、AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF(分别表示不予治疗的模型组、单独使用阿奇霉素组、阿奇霉素清热合并组、阿奇霉素缺当归合并组、阿奇霉素全方合并组)。

model：不予治疗的模型组；

AZM：阿奇霉素治疗的模型组。

AZMQR：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

AZMDG：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、党参参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

AZMFF：阿奇霉素+中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、当归、党参参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物)联合治疗模型组。

1.受试剂量

(1)AZM剂量：本实施例对阿奇霉素(AZM)的可选受试剂量进行了分析和确定，目的为选择一个试用后作用强度适中、时长适中的受试剂量，同时明确同中药合并用药时的时程长度。预试60、30、20、10mg/kg.d三天，发现原设定剂量过高，最终采用10mg/kg.d。

(2)受试药物剂量：

原设定各中药组合物的剂量为2.058g/kg.d，但预试发现，此剂量采用最大给容积配制的给药液为稀浆状，无法通过灌胃针头。随调整最终全方AZMFF给药剂量为最大给药量1.66g/kg.d，调整缺当归组剂量AZMDG为1.41g/kg.d、清热组剂量AZMQR为1.16g/kg.d。

2.给药时间

除空白和模型外，造模后第六日开始给予相应药物。AZM与各中药分别给予，相差时间约2小时。所有给药组在8点左右均先给予相应剂量的AZM，两个小时后开始给予相应的中药生理盐水水混物。

3.样本收集

第1日给予AZM两小时后，经尾静脉采集各组大鼠末梢静脉血。从第二日始各给药组大鼠每日两次采血，于给予阿奇前和给予中药前各经尾静脉采集一次，每次采集血量约0.3mL，取样时间误差约30min。于给药第2、4、6、8日给予AZM两小时后，各组麻醉后牺牲约2～4只大鼠，采集下腔动脉抗凝全血，并同时收集牺牲大鼠的靶器官(子宫、孵巢、胸腺、脾脏)。

4.送样测试

所有时间点0.3mL及末次全血，分取约0.2mL血浆用于UPLC-MS检测AZM浓度。末次抗凝全血送检血细胞计数、血流变。子宫从子宫体中部切分，取1/2福尔马林固定后用于病理送检。子宫、孵巢、胸腺、脾脏称重并计算脏器系数。脏器系数又称脏体比，是实验动物某脏器的重量与其体重之比值。正常时各脏器与体重的比值比较恒定。动物染毒后，受损脏器重量可以发生改变，故脏器系数也随之而改变。脏器系数增大，表示脏器充血、水肿或增生肥大等；脏器系数减小，表示脏器萎缩及其他退行性改变。

实验结果见图1至图3所示。图1中，从左至右分别为AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治疗组动物子宫病理切片图。结果显示，实验动物造模后，子宫和胸腺均充血、水肿，脏器系数与正常组比较均升高，给予不同的药物组合治疗后，各系数都降低，趋向于回复正常水平。各治疗组之间的治疗效果比较，子宫脏器系数：AZMDG>AZMQR>AZMFF>AZM；胸腺脏器系数：AZMFF>AZMDG>AZM>AZMQR。本发明中药组合物联合阿奇霉素在改善子宫充血、水肿、增生等方面具有良好的应用效果，本发明中药组合物联合阿奇霉素在降低胸腺脏器指数方面的应用效果接近妇科千金片联合阿奇霉素的应用效果。

实施例2应用例

1.研究对象：选择门诊自愿者2015年1月至2016年3月，因阴道不规则出血、月经过多、痛经经诊断性刮宫病理诊断为子宫内膜增生的患者30例，年龄35～50岁，5例痛经，15例子宫增大。

2.方法：所有患者在治疗前均常规检查血常规、肝和肾功能、卵泡刺激素(FSH)，黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)及孕酮(P)，采用B超检查测量子宫大小及内膜厚度。刮宫后第5天开始口服本发明中药组合物(以千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、鸡血藤、党参参照株洲千金药业妇科千金片的配方比例和方法制得组合物，汤剂或片剂)和阿奇霉素(参照阿奇霉素规定剂量)，阿奇霉素与本发明中药组合物分开服用，相差时间约2小时。治疗期间每月复诊1次，复查血常规、肝和肾功能，了解用药后不良反应及月经情况。2个月后停药，停药后l周内重复上述检查及诊断性刮宫病理学检查。随访时间为6个月，无失访病例。

3.统计学处理：采用t检验。

4.应用结果：

临床症状：有阴道出血者均在用药后3～7天内血止，停药后28例(93％)恢复月经，恢复时间为15～45天。用药后5例痛经症状均缓解，15例子宫增大者子宫有不同程度缩小。随访30例患者均无复发，诉无明显不良反应。B超检查显示，治疗后患者子宫内膜厚度为(6.5±1.9)mm～(4～10mm)，明显薄于治疗前的(14.4±4.9)mm～(5～22mm)，P<0.05。病理学检查示，治疗后30例子宫内膜为增殖期子宫内膜，内膜转化率为100％。表明子宫内膜增生受到明显抑制，子宫出血有效控制。