本发明涉及生产工艺领域，具体来说是一种皱皮木瓜中总酚酸的提取分离以及纯化方法的工艺，用于工业生产提高总酚酸含量。
背景技术：
皱皮木瓜【Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai】为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠的果实，又名贴梗海棠、贴梗木瓜、铁脚梨。原产于我国，主要分布于华东、华中及西南各地。皱皮木瓜中含有有机酸、黄酮类化合物、齐墩果酸、皂苷类、超氧化物歧化酶等多种活性成分，有“百益之果”的盛名，是药食兼用的植物品种。
酚酸化合物是水果、蔬菜和谷物中的一类酚类物质。近年来大量研究报道酚酸具有多种生物活性，如抗氧化，抗肿瘤，抑菌，减肥，护肝，提高免疫力，改善情绪，抗炎，抗病毒和保护心血管等。皱皮木瓜中含有的总酚酸物质提取效率较低，不能较好利用这种物种资源会造成一定程度的浪费。
大孔吸附树脂(macro-reticular resin)是吸附性和分子筛原理相结合的分离材料，其吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果；分子筛性是由于本身多孔性结果的性质决定的。根据树脂骨架的材料不同，大孔树脂可分为极性和非极性两大类。在水溶液中吸附力较强且有良好的吸附选择性。因此适用于从水溶液中分离极性低或者非极性的化合物，组分间极性差别越大，分离越好。有机化合物根据吸附力的不同和分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而达到分离的目的。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种适宜工业生产的皱皮木瓜总酚酸物质的提取及纯化方法。本发明所提供的提取纯化方法采用了先醇提后树脂纯化的工艺，提取率高，适合工业化生产。
实现本发明上述目的所采用的技术方案为：
一种皱皮木瓜中总酚酸的提取和纯化工艺，包括以下步骤：(1)将皱皮木瓜原药材粉碎后，将粉碎后的粉末用体积浓度为50％～70％的乙醇溶液在70℃～90℃条件下加热回流3～5h，料液比为1：20～40，过滤后，收集滤液；
(2)将滤液浓缩至恒重，得到浸膏，福林酚法测定浸膏中的总酚酸的含量；
(3)将浸膏用去离子水溶解后配制成酚酸溶液，备用；
(4)选择所使用的大孔树脂的型号，将所选择的大孔树脂进行装柱，对树脂预处理后，将酚酸溶液进行动态上样吸附；
(5)用去离子水洗去树脂表面的物质以及一部分可溶于水的糖类物质；
(6)最后将树脂用乙醇洗脱，解吸吸附在树脂内的酚酸，所收集的洗脱液即为皱皮木瓜中总酚酸。
步骤(1)中用体积浓度为60％的乙醇溶液在90℃条件下加热回流5h，料液比为1：40。
步骤(4)中所使用的大孔树脂的型号为D101，树脂柱的径高比是1:4，上样浓度为1mg/mL，上样流速为2BV/h，上样体积为20BV。
步骤(6)中以4BV/h的流速洗脱4BV，收集洗脱液，洗脱液中总酚酸类物质含量大于60％。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明在常规的纯化方法的基础上，利用大孔树脂吸附解吸原理，设计出一系列试验考察相关因素，最终得到了一整套最佳的技术方案，该技术方案可获得较好的提取率。具体而言，本发明中首先根据大孔树脂型号的不同，对酚酸类物质的吸附和解吸能力不同，筛选出最合适的大孔树脂型号。同时，本发明提供的提取纯化工艺步骤简单，生产效率高，适合工业化生产。
附图说明
图1为本发明的方法流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局限于以下实施例。
实施例1
本实施例中所提供的提取纯化的方法如图1所示，本实施例中对各工艺参数的选择以及树脂种类的选择分别进行了重复性试验，以期得到最佳技术条件。
1)实验所用大孔树脂的主要特征
根据大孔树脂的极性及其它物理参数，筛选了如下6种型号的树脂，D101、AB-8、NKA-9、S-8、HPD750、D1400，进行预处理。
2)树脂的静态吸附和解吸试验
分别称取上述各型号树脂，置于锥形瓶，向其中加入一定浓度酚酸浸膏去离子水的溶解液，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，振荡24h，达到吸附平衡后过滤，将滤液进行福林酚法测定酚酸物质的浓度。
将上述过滤的树脂中加入50％的乙醇溶液，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，振荡24h，充分解吸后过滤，福林酚法测定酚酸物质的浓度。综合了吸附率和解吸率大小，树脂型号选择为D101，该树脂吸附率为91.78％，解吸率为85.34％。
吸附量＝(m0-m1)/G；
吸附率＝(m0-m1)/m0；
解吸率＝m2/(m0-m1)。
注：
m0：吸附前酚酸质量，mg；
m1：吸附后酚酸质量，mg；
m2：解吸的酚酸质量，mg；
G：大孔树脂质量，g。
3)静态吸附时间考察
取步骤2)中筛选出的D101树脂，装入锥形瓶，加入一定浓度的酚酸浸膏去离子水溶解液，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，每隔1h取出一组，得到过滤的溶液，福林酚法测定酚酸物质的含量，记录第1、2、3、4、5、12、24h酚酸的含量，结果发现12小时后的吸附平衡吸附率保持在90.49％。
4)静态吸附浓度考察
设置不同浓度梯度的酚酸浸膏去离子水溶解液，加入D101树脂于锥形瓶，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，参照步骤3)的时间振荡12h，充分解吸后过滤，福林酚法测定酚酸物质的含量，浓度为1.74mg/ml时吸附率最大能达到94.77％。
5)不同浓度乙醇溶液对洗脱效果的影响
称量D101大孔树脂，加入一定浓度的酚酸浸膏去离子水溶解液入锥形瓶，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，振荡12h，充分吸附后过滤，在原锥形瓶中分别加入等体积浓度为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％乙醇溶液，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，振荡24h，充分解吸，将滤液用福林酚法测定酚酸物质的含量。根据解吸率获得最佳的乙醇洗脱浓度为60％，此浓度下解吸率为92.88％。
6)乙醇溶液解吸时间考察
称量D101大孔树脂，装入锥形瓶，加入一定浓度的酚酸浸膏去离子水溶解液，封口膜封口，置于恒温振荡器，25℃，120r/min，12h后取出锥形瓶，吸取液体，测定酚酸物质的含量1，加入等体积60％的乙醇溶液解吸，记录第1、2、3、4、5、12、24h后取出的锥形瓶中溶液酚酸的含量2，根据解吸情况确定2小时后吸附平衡解吸率为91.76％。
7)动态吸附的上样流速考察
取D101大孔树脂装柱，将浓度为1mg/ml的酚酸浸膏去离子水溶解液分别以1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h、5BV/h的流速进行树脂柱的上样，10BV后停止上样，测定流出液的酚酸含量，1BV/h吸附率最大，为97.39％，但是保证生产上节约时间，确定最佳上样流速为2BV/h，此时吸附率为96.18％。
8)动态吸附最佳上样浓度的考察
取D101大孔树脂装柱，参考步骤7)上样流速，将浓度设置为0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的酚酸浸膏去离子水溶解液以2BV/h的流速上样，收集10BV后，测定收集液的酚酸含量，确定上样浓度为1.0mg/ml，此时吸附率为96.13％。
9)动态吸附上样量考察
取D101树脂装柱，以步骤7)的流速和步骤8)的浓度上样40BV，以1BV为单位收集流出液，测定每个BV的酚酸浓度，直到第20BV酚酸有明显泄漏，最后确定上样20BV。
10)水洗流速及用量的考察
10-1、取D101树脂装柱，以步骤7)的流速和步骤8)的浓度上样上样10BV，不同的水洗流速洗脱，以1BV为单位收集流出液，测定每个BV的酚酸浓度，流速为2BV/h时洗出酚酸量最少，最后确定为2BV/h进行去离子水洗脱。
10-2、取树脂装柱，以步骤7)的流速和步骤8)的浓度上样20BV，步骤10-1)水洗流速洗脱，以1BV为单位收集流出液，测定每个BV的酚酸浓度，直至第5BV酚酸泄漏量明显减少，确定进行去离子水洗脱的体积为4BV。
11)动态解吸乙醇溶液浓度考察
取D101树脂装柱，以步骤7)、8)、9)结论，收集流出液1，以步骤10)结论，收集洗脱液2，不同的乙醇浓度梯度洗脱，流速为2BV/h，每两个柱体积收集一份，测定每2BV的酚酸浓度，为动态解吸乙醇浓度提供参考，取D101树脂装柱，重复步骤7)、8)、9)结论，收集流出液1，重复步骤10)结论，收集洗脱液2，设置考察浓度为20％，40％，60％，80％的乙醇溶液为上样洗脱浓度，流速为2BV/h，测定每个BV的酚酸浓度，浓度为60％时洗出酚酸量最多，解吸率为71.70％，确定60％的乙醇进行洗脱。
12)动态洗脱流速的考察
取D101大孔树脂装柱，重复步骤7)、8)、9)结论，收集流出液1，重复步骤10)结论，收集洗脱液2，使用步骤11)的60％乙醇用不同流速上样，测定每个BV的酚酸浓度，合并所有相同流速收集液，测定酚酸浓度最后确定最佳的洗脱流速为4BV/h，解吸率为84.69％。
13)洗脱剂最大体积的考察
取D101大孔树脂装柱，以步骤7)、8)、9)结论，收集流出液1，以步骤10)结论，收集洗脱液2，使用步骤11)60％乙醇及步骤12)的4BV/h流速上样，测定每个BV的酚酸浓度，第5个柱体积酚酸量极少，确定洗脱剂的体积为4BV。
实施例2
取约5gD101大孔树脂，装柱，醇洗后水洗至无醇味，浓度近似1.0mg/ml的皱皮木瓜浸膏水溶液上样，上样流速2BV/h，上样量20BV，收集流出液S-1，去离子水洗脱，洗脱流速2BV/h，用量4BV，收集流出液S-2，60％乙醇溶液洗脱，洗脱流速4BV/h，用量4BV，收集流出液C-3，分别测定三次流出液的酚酸浓度，获得流出液C-3的质量。重复三次此实验，获得吸附率和洗脱率，及纯化后皱皮木瓜总酚酸的含量，结论见下表。