五谷虫制品用于制备治疗结肠癌的药品、保健品或食品中的应用的制作方法

文档序号:12208229阅读:973来源:国知局

本发明涉及一种肿瘤治疗领域,尤其涉及五谷虫制品用于制备治疗结肠癌的药品、保健品或食品中的应用。



背景技术:

五谷虫为丽蝇科(Calliphoridae)昆虫大头金蝇(ChrysomyiamegacephalaFab.)或其他近缘昆虫的干燥幼虫体,在古代医书中就有记载,用于治疗小儿疳积、脓包疮。

目前记载五谷虫具有以下药理作用:1.平喘作用,五谷虫所含的总氨基酸是平喘的有效成分;2.对肠平滑的作用,五谷虫乙醇提取物和五谷虫总氨基酸粗提取物对组胺所致离体家兔和豚鼠的回肠平滑肌痉挛均有明显的争痉作用;3.毒性,五谷虫的毒性很小。

中国发明专利申请(申请号CN200510060277.4申请日2005.08.04)一种具有抗肿瘤生物活性蝇蛆的养殖方法。养殖的蝇蛆经过国家新药筛选中心几年来多次检测有对肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、等肿瘤细胞生长有很强的抑制率,其抗肿瘤生物活性都在75%~97%。

中国发明专利申请(申请号CN200710067951.0申请日2007.04.10)公开了一类抗肿瘤化合物,该组份从外源物质诱导的蝇蛆中提取、分离获得,具有抑制人原髓细胞白血病HL-60和人肺腺癌A549细胞增殖生长的作用。

中国发明专利申请(申请号CN201310223817.0申请日2013.06.06)公开了一种五谷虫抗肿瘤新用途,通过五谷虫抑制小鼠肿瘤重量的作用来表现,五谷虫能抑制肿瘤细胞的生长,对肿瘤细胞具有杀伤作用,能够在制备抗肿瘤药物或保健品中应用,具体公开了小鼠肉瘤S180的生长抑制。

结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤,好发于直肠与乙状结肠交界处,以40~50岁年龄组发病率最高,男女之比为2~3:1。发病率占胃肠道肿瘤的第3位。结肠癌主要为腺癌、黏液腺癌、未分化癌。大体形态呈息肉状、溃疡型等。结肠癌可沿肠壁环行发展,沿肠管纵径上下蔓延或向肠壁深层浸润,除经淋巴管、血流转移和局部侵犯外,还可向腹腔内种植或沿缝线、切口面扩散转移。慢性结肠炎患者、结肠息肉患者、男性肥胖者等为易感人群。



技术实现要素:

本发明的第一个目的是提供五谷虫制品用于制备治疗结肠癌的药品中的应用。

本发明的第二个目的是提供五谷虫制品用于制备抑制结肠癌的保健品中的应用。

本发明的第二个目的是提供五谷虫制品用于制备抑制结肠癌的食品中的应用。

作为优选,上述的五谷虫制品为五谷虫干粉和\或五谷虫提取物以及五谷虫干粉和\或五谷虫提取物制备的制剂。

作为再优选,所述的制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、复方颗粒剂、保健酒、蛋白粉、口服液或冻干粉。

作为优选,上述的五谷虫提取物包括五谷虫全虫或五谷虫干粉的水提取物和有机溶剂提取物中的一种或多种。

作为再优选,所述的有机溶剂提取物中的有机溶剂包括乙醇、石油醚或己烷中的一种或多种。

本发明的五谷虫制品为一种天然的产品,五谷虫制品有效成分是五谷虫全虫,现代医学研究证明:五谷虫中含蛋白质、脂肪、几丁聚糖、含抗菌肽以及18种氨基酸。本发明的五谷虫干粉中包括了五谷虫全虫的所有有效成分,五谷虫提取物主要是以脂肪酸和/或蛋白质、多肽、氨基酸等。经研究发现,五谷虫制品可以有效抑制结肠癌生长,且五谷虫制品不具有临床上常用的化疗药的耐药及其毒副作用。

具体实施方式

实施例1

1、种蝇选择

动物学鉴定:丽蝇科Calliphoridae昆虫大头金蝇Chrysomyia megacephala(Fab.)。成蝇体长8~11毫米,绿蓝色、头部宽,顶部黑色;复眼大,深红色,额中条褐红色,颜和颊部橙黄色,触角及小颚须褐色。胸、腹部绿蓝色,带有紫色光泽。第1腹节及第2,3腹节后缘黑色。雌蝇的额部及中条在中部处向外侧略为凸出。雄蝇复眼上部2/3有大形的小眼面,下方1/3则为小形的小眼面,二者界面清晰。前胸气门黑色,中胸气门浅褐色;有气门。腋瓣带棕色,上有小毛。幼虫成熟时黄白色,前端尖细,后端截平。体节14,头部1节,胸部3节,腹部10节,但通常只见8节。体表由小棘形成的环。后气门略高出表面,较扁于上方,气门环不完全;后气门间距不大于后气门的横径;第1气门裂垂直形;前气门具有10—13个指状突。

2、种蝇采集

(1)种蝇箱的制作:可以选用木质、玻璃、陶瓷制作,圆形或长方形均可,顶部留一个直径25厘米的口,并制作一个用透气的网状盖,以防种蝇逃逸。

(2)种蝇饲料配置:奶粉+红糖,1:1混合,加15%的水调和,放置于种蝇箱内。

(3)打开种蝇箱网状盖,置于28--38摄氏度,湿度小于65%的环境内。

让外界的大头金蝇进入箱内觅食,对不符合要求的蝇种进行分拣丢弃,并盖上网状盖,使其滞留于种蝇箱内觅食、产卵。

3、养殖硬件与养殖饲料

(1)蝇房建造:按养殖规模,可以选用砖石,玻璃、塑料、钢架结构材料,离地面2米左右的墙体上间隔1.5--2米设置通风窗,为防止其他苍蝇或昆虫进入,宜设有纱窗与外界隔离,在养殖箱上方一米制成可活动的通风管道,便于废气收集,防止异味散发污染环境,废气统一通过臭氧除臭装置处理后排出。为防止蝇种进入废气收集管道,宜在各进气口设置纱窗隔断。

(2)养殖箱制作:可以选用木质、陶瓷、水泥材料,制成长方形箱体,底部设置止水密封装置,箱体上方留一个直径30--40厘米的圆孔,即可。各养殖箱下方设有污水收集通道,统一进入污水池处理后排放。

(3)保温:为符合养殖产品的标准化要求,可以附设加温、降温设施。在炎热时季可在蝇房顶面设置防嗮遮阳设施。

(4)养殖饲料:猪内脏、淡水鱼、牛蛙、奶粉、蜂蜜。

4、养殖工艺步骤

(1)蝇种:采集的蝇种移植到提前一天放有淡水鱼的种蝇箱内,培养2天,待其在箱内产卵。

(2)收集蝇卵:待种蝇在蝇种箱内产卵,即可将蝇卵收集,转移到加有饲料的蝇房养殖箱内进行孵化、养殖,饲料和蝇卵的比例为每5克蝇卵,加入15公斤的饲料。

(3)孵化养殖:蝇卵孵化后,即可在养殖箱内获得所需的饲料,一般需要72小时,虫体长到长度1--1.2厘米,直径2.5--3毫米时。

(4)活性催化:在养殖箱内加入用200毫升预配的5%蔗糖(w/w)水溶液和1%的超氧化物歧化酶(LA-SOD)(酶系活力大于300万单位/克)500毫升,2小时后取出活体五谷虫,用清水反复冲洗干净,即刻放入—38摄氏度以下的冰柜内速冻。

(5)清洗干燥:低温速冻两天后,取出,在清水中融化,再仔细清洗,沥干水分,使用真空低温干燥设备干燥到水分含量低于10%。

试验例1

一、实验目的

评价五谷虫全虫粉对人结肠癌细胞HT-29的体外抗肿瘤作用。

二、主要实验仪器与材料

1.主要仪器

可调波长式微孔板酶标仪。

2.主要试剂

五谷虫整体物,本公司培养;DMEM高糖完全液体培养基,购自南京凯基生物公司;MTT.三、实验方法和步骤

实验方法:

MTT原理:MTT,一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT,同时在细胞色素C的作用下,生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan),甲臜的多少可以用酶标仪在490nm处进行测定。在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶,因此加入MTT不会有反应。

实验步骤:

五谷虫样品处理。以1:5的比例,蒸馏水10摄氏度浸泡24小时,过滤去渣,每毫升相当于原料样品0.2克,备用。

1:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入150ul,铺板使待测细胞调密度1*105/孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。

2:5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入3个浓度梯度的药物(分段提取化合物为0.063mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml;整体化合物为0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml),每孔50ul,设3个复孔.同时零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜);5%CO2,37℃孵育48小时,倒置显微镜下观察。

3:每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml),继续培养4h;终止培养,小心吸去孔内培养液每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上振荡10min,使结晶物充分溶解。酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

4:按下列公式计算被测化合物对癌症细胞生长的抑制率。

抑制率=(1-对照组OD值/给药组OD值)×100%

四、实验结果:

表一:各被测整体物对HT-29细胞生长的抑制率

本次MTT实验检测结果表明:整体物样品对人结肠癌细胞的抑制生长作用都很明显。

试验例2

王**,性别:女,年龄:31,住址:长兴。

2010年3月份患者因出现间断性全腹隐痛,疼痛部位不定,右下腹有肿块。遂前往医院进行检查,确诊为横结肠低分化腺癌。患者于2010年4月2日在复旦大学附属肿瘤医院行手术。

2010年6月,结肠癌术后3月复查,发现肝内多发性占位,直径2厘米,腹膜后见多发小淋巴结转移。进行过放疗。

2011年7月15日开始服接受抗肿瘤五谷虫口服治疗,四个月后复查,肝区转移灶大片低密度影明显减少,最大直径由2厘米缩小到0.3厘米。胸片未见异常,腹部彩超正常,身体状况良好.

至今,患者服用近2年,复查指标检查报告显示,大部分检测指标正常,恢复情况良好,仍坚持服药巩固治疗。

试验例3

杨**,性别:女,年龄:42,住址:广德县

患者杨金凤,女,42岁,2011年8月份于湖州中心医院诊断为结肠中分化腺癌、双肺、纵膈淋巴结转移,接受手术治疗后,于10月份于浙江省肿瘤医院行三次化疗治疗后,患者自感身体不适,病情没有得到有效控制且出现复发趋势,遂患者放弃继续接受化疗治疗并办理出院。

病案简介:

患者出院后,于2012年2月开始口服抗肿瘤五谷虫治疗,期间患者未接受其他药物及手段治疗,用药前病情:两肺纹理稍多,两肺野可见多发小结节状高密度影,边界不清,肺门及纵膈淋巴结肿大,直径2.6厘米,脾肿大,可达8个肋单元。白球比列1.05。

用药9个月,2012年11月13日复查,影像报告显示,高密度阴影周边尚清,淋巴结缩小到0.6厘米,脾脏稍大。各项肿瘤标志物检查正常,体重增加4.8公斤。患者身体状况恢复良好,无明显不适、疼痛,尚在巩固治疗。饮食可。能完成一般家务事宜。

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