本发明涉及生物医用材料领域，尤其是一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料。
背景技术：
普鲁兰多糖是一种由出芽短梗霉发酵产生的胞外水溶性多糖，由于其无毒无害，成膜性，生物相容性良好等优良特性而被众多学者所研究。研究表明，这种新型高分子多糖材料保水性能优良，可以有效地防止细胞和生物组织的脱水，且分子结构中羟基众多，可以对其进行化学修饰，接枝功能性生物分子或药物，具有促进细胞生长或抑制细菌的作用。
壳聚糖是由自然界广泛存在的几丁质经过脱乙酰作用得到的，其本身及衍生物均具有止血、止痛和抑制微生物生长等作用，这些对于创面的愈合都有积极的意义；因此壳聚糖已应用在人造皮肤、骨组织修复材料、自吸收手术缝合线、伤口敷料及药物缓释材料等领域。
海藻酸钠使用时在伤口表面形成水凝胶，不仅能给伤口愈合提供湿润的环境，而且在伤口愈合过程逐渐被生物降解在渗液内，创面上没有纤维残留，当它与创面渗液接触时，通过离子交换生成可溶性的海藻酸钠，置换出的钙离子会缓慢的将纤维转变成粘性的海藻酸钠溶液，新生的组织不会因敷料的粘连而再次损伤，可以加速创面止血。
随着现代医疗水平的不断提高，传统型敷料已经不能满足人们对不同种类伤口修复的要求。由于创面形式及愈合阶段不同，对伤口敷料的要求也不尽相同，因此单一材料制备的伤口敷料不能满足伤口愈合的整体需要；复合型敷料是由两种或多种不同材料（或同种材料不同形式）形成的覆盖物，它的出现弥补了单种或单型材料制成的伤口敷料的不足。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明提供一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料，对创面有保持湿润和抗菌作用，能够加速伤口愈合，不粘连伤口，不会造成二次损伤。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料，包括羧基化普鲁兰多糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠和透明质酸；利用酸酐水解后与羟基发生酯化反应，使普鲁兰多糖主链上的羟基被部分羧基化修饰，然后利用这一改性材料与羧甲基壳聚糖、海藻酸钠和透明质酸通过二次冻干交联的方式制备。
所述的羧基化普鲁兰多糖的制备方法如下：
（1）称取13~18 g普鲁兰多糖置于300 mL去离子水中，搅拌使其溶解；
（2）待普鲁兰多糖彻底溶解后，加入DMAP及NaOH使溶液pH在8~9，在65 ℃搅拌1 ~2 小时；
（3）向上述反应溶液中加入丁二酸酐25~28 g，调节反应溶液pH为8~9，在65 ℃搅拌22~26小时；
（4）反应溶液冷却至室温后，将反应液缓慢逐滴加入1400~1600 mL的冷却80 %乙醇/水混合液中进行沉降，过滤收集沉淀；
（5）重复上述步骤2~3次，直至沉降液pH接近中性；
（6）对收集的沉淀进行真空干燥并粉碎，得到羧基化普鲁兰多糖。
一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料的制备方法如下：
（1）按照1~5 wt%的质量分数称取羧基化普鲁兰多糖，搅拌并溶解于去离子水中，制备羧基化普鲁兰多糖溶液a；
（2）将羧甲基壳聚糖溶解于去离子水中，配置成质量分数为1~5 wt%的羧甲基壳聚糖溶液b；
（3）用去离子水将海藻酸钠配制成为7~15 wt%的海藻酸钠溶液c；
（4）羧基化普鲁兰多糖溶液a、羧甲基壳聚糖溶液b和海藻酸钠溶液c按照3~8：2.5~7：0.5~1.5的质量比混合均匀，静置冷却至室温后，在该溶液中加入添加0.3~1.5 %的透明质酸，搅拌至均匀；
（5）量取相同体积上述溶液倒入24孔板中，置于3~6 ℃环境中静置除去气泡后对溶液进行冷冻干燥处理，得到未交联的海绵状材料；
（6）将材料从24孔板中取出，浸泡于含EDCI/NHS的75~85 %的乙醇溶液中，在室温下交联反应22~26小时；
（7）反应完成后，用去离子水浸泡清洗，去除催化剂，再次进行冷冻干燥，得到一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料。
本发明的有益效果是，一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料，对创面有保持湿润、抗菌作用；没有热敏反应，安全、无毒，相容性好；具有一定的柔韧性和强度，既能够吸收过多渗液，同时也可以为伤口提供湿性愈合环境，加速伤口愈合，不粘连伤口，不会造成二次损伤；促愈合疗效明显。
具体实施方式：
实施例一
所述的羧基化普鲁兰多糖的制备方法如下：
（1）称取15 g普鲁兰多糖置于300 mL去离子水中，不断搅拌使其溶解；
（2）待普鲁兰多糖彻底溶解后，加入DMAP及NaOH，保持溶液pH在8~9，65 ℃加热搅拌1小时；
（3）向上述反应溶液中分批加入共26 g丁二酸酐并调节反应液pH，使之稳定在8~9，继续于65 ℃下搅拌反应24 小时；
（4）待反应液冷却至室温后，取下装置，将反应液缓慢逐滴加入1500 mL的冷却80 %乙醇/水混合液中进行沉降，过滤收集沉淀；
（5）重复上述步骤2~3次，直至沉降液pH接近中性；
（6）对收集的沉淀进行真空干燥并粉碎，得到羧基化普鲁兰多糖。
一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料的制备方法如下：
（1）按照3 wt%的质量分数称取羧基化普鲁兰多糖，搅拌并溶解于去离子水中，制备羧基化普鲁兰多糖溶液a；
（2）称取羧甲基壳聚糖，溶解于去离子水中，配置成质量分数为3 wt%的羧甲基壳聚糖溶液b；
（3）用去离子将海藻酸钠配制成为8 wt%的海藻酸钠溶液c；
（4）羧基化普鲁兰多糖溶液a、羧甲基壳聚糖溶液b和海藻酸钠溶液c按照5：4.5：0.5的质量比混合均匀，静置冷却至室温后，在该溶液中加入添加1 %的透明质酸，搅拌至均匀；
（5）量取相同体积上述溶液倒入24孔板中，置于4 ℃环境中静置，除去气泡后对溶液进行冷冻干燥处理，得到未交联的海绵状材料；
（6）将材料从24孔板中取出，浸泡于含EDCI/NHS的80 %的乙醇溶液中，在室温下交联反应24小时；
（7）反应完成后，用去离子水浸泡清洗，去除催化剂，再次进行冷冻干燥 ，得到一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料。
实施例二
所述的羧基化普鲁兰多糖的制备方法如下：
（1）称取13g普鲁兰多糖置于300 mL去离子水中，搅拌使其溶解；
（2）待普鲁兰多糖彻底溶解后，加入DMAP及NaOH使溶液pH在8~9，在65 ℃搅拌1.5 小时；
（3）向上述反应溶液中加入丁二酸酐27 g，调节反应溶液pH为8~9，在65 ℃搅拌22小时；
（4）反应溶液冷却至室温后，将反应液缓慢逐滴加入1600 mL的冷却80 %乙醇/水混合液中进行沉降，过滤收集沉淀；
（5）重复上述步骤2~3次，直至沉降液pH接近中性；
（6）对收集的沉淀进行真空干燥并粉碎，得到羧基化普鲁兰多糖。
一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料的制备方法如下：
（1）按照2 wt%的质量分数称取羧基化普鲁兰多糖，搅拌并溶解于去离子水中，制备羧基化普鲁兰多糖溶液a；
（2）将羧甲基壳聚糖溶解于去离子水中，配置成质量分数为2 wt%的羧甲基壳聚糖溶液b；
（3）用去离子水将海藻酸钠配制成为7wt%的海藻酸钠溶液c；
（4）羧基化普鲁兰多糖溶液a、羧甲基壳聚糖溶液b和海藻酸钠溶液c按照7：2.5：0.5的质量比混合均匀，静置冷却至室温后，在该溶液中加入添加0.3~1.5 %的透明质酸，搅拌至均匀；
（5）量取相同体积上述溶液倒入24孔板中，置于5 ℃环境中静置除去气泡后对溶液进行冷冻干燥处理，得到未交联的海绵状材料；
（6）将材料从24孔板中取出，浸泡于含EDCI/NHS的75 %的乙醇溶液中，在室温下交联反应22小时；
（7）反应完成后，用去离子水浸泡清洗，去除催化剂，再次进行冷冻干燥，得到一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料。
实施例三
所述的羧基化普鲁兰多糖的制备方法如下：
（1）称取16 g普鲁兰多糖置于300 mL去离子水中，搅拌使其溶解；
（2）待普鲁兰多糖彻底溶解后，加入DMAP及NaOH使溶液pH在8~9，在65 ℃搅拌2 小时；
（3）向上述反应溶液中加入丁二酸酐25 g，调节反应溶液pH为8~9，在65 ℃搅拌26小时；
（4）反应溶液冷却至室温后，将反应液缓慢逐滴加入1400 mL的冷却80 %乙醇/水混合液中进行沉降，过滤收集沉淀；
（5）重复上述步骤2~3次，直至沉降液pH接近中性；
（6）对收集的沉淀进行真空干燥并粉碎，得到羧基化普鲁兰多糖。
一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料的制备方法如下：
（1）按照5 wt%的质量分数称取羧基化普鲁兰多糖，搅拌并溶解于去离子水中，制备羧基化普鲁兰多糖溶液a；
（2）将羧甲基壳聚糖溶解于去离子水中，配置成质量分数为3 wt%的羧甲基壳聚糖溶液b；
（3）用去离子水将海藻酸钠配制成为10 wt%的海藻酸钠溶液c；
（4）羧基化普鲁兰多糖溶液a、羧甲基壳聚糖溶液b和海藻酸钠溶液c按照3：6：1的质量比混合均匀，静置冷却至室温后，在该溶液中加入添加1.5 %的透明质酸，搅拌至均匀；
（5）量取相同体积上述溶液倒入24孔板中，置于3 ℃环境中静置除去气泡后对溶液进行冷冻干燥处理，得到未交联的海绵状材料；
（6）将材料从24孔板中取出，浸泡于含EDCI/NHS的85 %的乙醇溶液中，在室温下交联反应24小时；
（7）反应完成后，用去离子水浸泡清洗，去除催化剂，再次进行冷冻干燥，得到一种新型复合交联普鲁兰多糖的伤口敷料。