一种甘肃道地药材铁棒锤的炮制工艺及其质量检测方法与流程

本发明属于中药炮制领域，涉及一种甘肃道地药材铁棒锤的炮制工艺及其质量检测方法。

背景技术：
铁棒锤是为毛茛科乌头属植物铁棒锤AconitumpendulumBusch[A.szecheny-ianumGay.]和伏毛铁棒锤A.flavumHand.-Mazz.[A.anthoraL.var.gilvumMaxim.]的块根。铁棒锤为甘肃省道地药材，药性：苦、辛，温。有大毒。具有活血祛瘀，祛风除湿，消肿止痛之功效。主治跌打损伤。骨折淤肿疼痛，风湿腰痛，痈肿恶疮，无名肿毒，瘰疬未溃者，毒蛇咬伤，冻疮。目前，铁棒锤的炮制方式多采用砂烫法，铁棒锤主要药效成分为生物碱类，其中新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱为主要生物碱，现有研究表明，新乌宁碱毒性较大，3-乙酰乌头碱和12-表乙酰去氢乌头碱毒性较小，并且有较强的生物活性，研究表明，加热炮制可降低新乌宁碱的含量，但随着加热炮制，其生物活性成分3-乙酰乌头碱和12-表乙酰去氢乌头碱也在降低，这是业界的一个难题。此外，现有对铁棒锤炮制过程进行研究，描述了炮制参数，但经验性太强，炮制过程难以把握，生产参数也不明确，并且许多报道中对温度的测量及过程控制多传承经验操作，不具有可控性。基于此，本发明的发明人作为甘肃省铁棒锤药材研究的重要单位甘肃中医药大学的科研人员，对铁棒锤已经进行了多年的研究，发明人经过反复的实验研究，确定了铁棒锤的炮制工艺，为其生产和质量控制提供准确的实验依据。并且，在对铁棒锤多年的持续研究中意外发现，铁棒锤对哮喘具有一定的治疗效果，但是科研人员研究发现，只有采用特定的炮制方法对铁棒锤进行炮制后，对哮喘有一定的治疗效果，生铁棒锤、炒铁棒锤等其他铁棒锤炮制品基本无效，发明人对此课题进行了多年的研究，发明了一种铁棒锤的炮制品药物制剂，该药物对哮喘具有非常好的治疗效果，在进行一系列科学、规范的实验研究后，得到了本发明的技术方案。

技术实现要素：
本发明的目的是提供一种铁棒锤炮制品。本发明的另一目的是提供该铁棒锤炮制品的制备方法。本发明的还提供该铁棒锤炮制品的质量检测方法。本发明的还提供该铁棒锤炮制品橡胶膏剂的制备方法本发明的还提供该铁棒锤炮制品橡胶膏剂在制备治疗哮喘药物中的应用。本发明的目的是通过以下方式实现的：一种铁棒锤炮制品，该铁棒锤炮制品是采用如下方法制备：取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润12～36h，焖润后晾干，加8～12倍量的中砂，在255～265℃下，炒制5～8min，冷却，即得铁棒锤炮制品。所述的铁棒锤炮制品，优选为，采用如下方法制备：取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品。一种铁棒锤炮制品的检测方法，该铁棒锤炮制品是采用如下方法制备的：取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润12～36h，焖润后晾干，加8～12倍量的中砂，在255～265℃下，炒制5～8min，冷却，即得铁棒锤炮制品；采用高效液相色谱法同时测定铁棒锤炮制品中新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱成分的含量，测定步骤为：（1）色谱条件：SyncronisC色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动性进行梯度洗脱，洗脱顺序：0～15min，甲醇保持在15%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液保持在85%；16～20min，甲醇从15%线性上升为20%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至80%；21～30min，甲醇从20%线性上升为40%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从80%线性下降至60%；0～20min时，检测波长235nm，检测新乌宁碱、3-乙酰乌头碱；21～30min时，检测波长365nm，检测12-表乙酰去氢乌头碱，柱温30～40℃，流速0.5～1.5mL·min-1，进样量5～20μL；（2）混合对照品溶液的制备：取新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释成含新乌宁碱，3-乙酰乌头碱，12-表乙酰去氢乌头碱的混合对照品溶液，即得；（3）供试品溶液的制备：精密称定铁棒锤炮制品粉末，置具塞锥形瓶中，精密加入65～75%甲醇，密塞，称定质量，加热回流，放冷，再称定质量，用65～75%甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（4）测定：取混合对照品溶液、供试品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，测定。所述的铁棒锤炮制品的检测方法，优选为，该铁棒锤炮制品是采用如下方法制备的：取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；优选为，采用高效液相色谱法同时测定铁棒锤炮制品中新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱成分的含量，测定步骤为：（1）色谱条件：SyncronisC色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动性进行梯度洗脱，洗脱顺序：0～15min，甲醇保持在15%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液保持在85%；16～20min，甲醇从15%线性上升为20%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至80%；21～30min，甲醇从20%线性上升为40%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从80%线性下降至60%；0～20min时，检测波长235nm，检测新乌宁碱、3-乙酰乌头碱；21～30min时，检测波长365nm，检测12-表乙酰去氢乌头碱，柱温36℃，流速1.0mL·min-1，进样量20μL；（2）混合对照品溶液的制备：取新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释成每1mL含新乌宁碱0.750mg，3-乙酰乌头碱0.800mg，12-表乙酰去氢乌头碱0.220mg的混合对照品溶液，即得；（3）供试品溶液的制备：精密称定本发明铁棒锤炮制品粉末0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（4）测定：取混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定。一种铁棒锤炮制品橡胶膏剂，该铁棒锤炮制品橡胶膏剂是采用如下方法制备：（1）取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润12～36h，焖润后晾干，加8～12倍量的中砂，在255～265℃下，炒制5～8min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成小块，即得。所述的铁棒锤炮制品橡胶膏剂，优选为，该铁棒锤炮制品橡胶膏剂是采用如下方法制备：（1）取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶、松香、羊毛脂、凡士林、液体石蜡、氧化锌、汽油，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成小块，即得。一种铁棒锤炮制品橡胶膏剂在制备治疗哮喘药物中的应用，该铁棒锤炮制品橡胶膏剂是采用如下方法制备：（1）取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶、松香、羊毛脂、凡士林、液体石蜡、氧化锌、汽油，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成小块，即得；采用高效液相色谱法同时测定铁棒锤炮制品橡胶膏剂中新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱成分的含量，测定步骤为：（1）色谱条件：SyncronisC色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动性进行梯度洗脱，洗脱顺序：0～15min，甲醇保持在15%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液保持在85%；16～20min，甲醇从15%线性上升为20%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至80%；21～30min，甲醇从20%线性上升为40%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从80%线性下降至60%；0～20min时，检测波长235nm，检测新乌宁碱、3-乙酰乌头碱；21～30min时，检测波长365nm，检测12-表乙酰去氢乌头碱，柱温36℃，流速1.0mL·min-1，进样量20μL；（2）混合对照品溶液的制备：取新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释成每1mL含新乌宁碱0.750mg，3-乙酰乌头碱0.800mg，12-表乙酰去氢乌头碱0.220mg的混合对照品溶液，即得；（3）供试品溶液的制备：取铁棒锤炮制品橡胶膏剂1片，精密称定，剪成1cm×1cm的碎片，置50mL圆底烧瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（4）测定：取混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定。一种铁棒锤炮制品橡胶膏剂在制备治疗关节炎物中的应用，该铁棒锤炮制品橡胶膏剂是采用如下方法制备：（1）取铁棒锤药材，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶、松香、羊毛脂、凡士林、液体石蜡、氧化锌、汽油，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成小块，即得；采用高效液相色谱法同时测定铁棒锤炮制品橡胶膏剂中新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱成分的含量，测定步骤为：（1）色谱条件：SyncronisC色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动性进行梯度洗脱，洗脱顺序：0～15min，甲醇保持在15%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液保持在85%；16～20min，甲醇从15%线性上升为20%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至80%；21～30min，甲醇从20%线性上升为40%，0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液从80%线性下降至60%；0～20min时，检测波长235nm，检测新乌宁碱、3-乙酰乌头碱；21～30min时，检测波长365nm，检测12-表乙酰去氢乌头碱，柱温36℃，流速1.0mL·min-1，进样量20μL；（2）混合对照品溶液的制备：取新乌宁碱、3-乙酰乌头碱、12-表乙酰去氢乌头碱对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释成每1mL含新乌宁碱0.750mg，3-乙酰乌头碱0.800mg，12-表乙酰去氢乌头碱0.220mg的混合对照品溶液，即得；（3）供试品溶液的制备：取铁棒锤炮制品橡胶膏剂1片，精密称定，剪成1cm×1cm的碎片，置50mL圆底烧瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（4）测定：取混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定。通过如下实验研究验证本发明的技术效果：实验一：铁棒锤炮制品橡胶膏剂对关节炎治疗作用的实验研究1材料与方法1.1实验动物SD大鼠60只，雄性，体重（100±20）g，甘肃中医药大学医学实验中心提供，动物合格证号：SCXK（甘）2011-0001-0001011；实验设施合格证号：SYXK（甘）2011-0001-0000314，饲养于甘肃中医药大学医学实验中心。1.2实验药物1.2.1铁棒锤炮制品橡胶膏剂A处方：铁棒锤药材1000g制备方法：（1）取铁棒锤药材1000g，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶10kg、松香10kg、羊毛脂3kg、凡士林1.0kg、液体石蜡0.5kg、氧化锌10kg、汽油30kg，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成5cm×7cm的小块1000块，即得。1.2.2铁棒锤炮制品橡胶膏剂B处方：铁棒锤药材1000g制备方法：（1）取铁棒锤药材1000g，切成片状，加10倍量的中砂，在260℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶10kg、松香10kg、羊毛脂3kg、凡士林1.0kg、液体石蜡0.5kg、氧化锌10kg、汽油30kg，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成5cm×7cm的小块1000块，即得。1.2.3铁棒锤炮制品橡胶膏剂C处方：铁棒锤药材1000g制备方法：（1）取铁棒锤药材1000g，切成片状，用米醋焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在220℃下，炒制3min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶10kg、松香10kg、羊毛脂3kg、凡士林1.0kg、液体石蜡0.5kg、氧化锌10kg、汽油30kg，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成5cm×7cm的小块1000块，即得。1.2.4铁棒锤炮制品橡胶膏剂D处方：铁棒锤药材1000g制备方法：（1）取铁棒锤药材1000g，切成片状，用黄酒焖润24h，焖润后晾干，加10倍量的中砂，在300℃下，炒制6min，冷却，即得铁棒锤炮制品；（2）取步骤（1）的铁棒锤炮制品，粉碎成细粉，加水搅拌制成相对密度为1.10的流浸膏；（3）取步骤（2）的流浸膏，加入橡胶膏剂的常规基质，该常规基质为橡胶10kg、松香10kg、羊毛脂3kg、凡士林1.0kg、液体石蜡0.5kg、氧化锌10kg、汽油30kg，混匀，制成涂料，进行涂膏，切段，盖衬，切成5cm×7cm的小块1000块，即得。1.3造模取适量的牛Ⅱ型胶原（北京博蕾德生物科技有限公司）溶于0.01mol/L的乙酸溶液中（1ml乙酸溶液中溶解2mg胶原），在4℃下过夜充分溶解后加入等量福氏不完全佐剂，在冰...