本发明属于口服乳剂技术领域，具体涉及一种双嘧达莫口服乳剂给药系统及其制备方法。
背景技术：
双嘧达莫又名潘生丁，作为一种较强的扩冠脉药物用于急、慢性冠脉功能不全、心绞痛,具有抗血栓形成作用，可抑制血小扳聚集，高浓度可抑制血小板释放，双嘧达莫对冠状血管有较强的扩张作用，可显著增加冠脉流量，增加心肌供血量。长期以来在临床上成功用于防治心绞痛，预防心肌梗死复发及血栓形成等。近年来有研究发现，双嘧达莫有广谱抗病毒活性，能抑制病毒特异性增殖过程，还能诱生干扰素增强机体对病毒的免疫功能，临床应用广泛，尤其在儿科应用普遍。对小RNA病毒、正粘液病毒和某些DNA病毒有抑制作用。目前临床还用于婴幼儿病毒性腹泻、小儿病毒性急性上呼吸道感染、小儿手足口病、水痘、小儿疱疹性咽峡炎、流行性腮腺炎、乙型肝炎、流行性乙型脑炎、慢性肾功能衰竭、以及过敏性疾病、儿童哮喘、新生儿硬肿症等疾病。
在治疗小儿秋季腹泻方面：双嘧达莫抑制二氧嘧啶核苷通过细胞膜进入FL细胞，同时可以选择性抑制病毒RNA的合成，而不会影响宿主正常的细胞内RNA的合成。双嘧达莫还可影响体内前列腺素的代谢，减慢肠道活动，使其分泌减少，进而增加肠道对水和电解质的吸收，恢复肠道功能。
在治疗小儿病毒性上呼吸道感染方面：双嘧达莫具有广谱抗病毒活性，能完全抑制病毒特异的增殖过程。其机制是阻止二氧嘧啶核苷、腺苷、脱氧胞嘧啶核苷等进入细胞内，从而选择性地抑制病毒RNA的合成，而治疗量的双嘧达莫对宿主的RNA合成无影响。双嘧达莫还能诱生干扰素，增加机体对病毒的免疫功能。同时研究证明双嘧达莫可抑制血小板、上皮细胞和红细胞摄取腺苷，治疗浓度时该抑制作用成依赖性，局部腺苷浓度增高使cAMP增多，同时双嘧达莫可抑制各种组织中的磷酸二酯酶(PDF)，治疗浓度抑制环磷酸鸟苷二酯酶(cGMP-PDE)，对cAMP-PDE的抑制作用弱，因而强化内皮舒张因子(EDRF)引起的cGMP的浓度增高。而cAMP既可稳定细胞膜，抑制过敏性递质的释放和减轻支气管黏膜的充血水肿，又具有扩张平滑肌的作用。同时双嘧达莫能扩张冠状动脉等血管，降低血液黏稠度，从而对改善微循环、减轻肺水肿有一定作用，且安全范围较大。
由于双嘧达莫亲脂性强，溶出度差，口服生物利用度仅为50％左右。鉴于以上原因导致生物利用度低的缺点，有必要采用制剂学手段以提高其生物利用度。而且目前国内己上市的产品只有片剂，分散片，缓释胶囊，注射剂。鉴于双嘧达莫在小儿相关疾病的应用日渐增多，且以上剂型均不适合儿童使用，开发一款适合于儿童使用的剂型，提高儿童服药顺应性，改善口感，提高生物利用度成为现在迫切需要解决的问题。
将双嘧达莫制作成口服乳制剂，具有其他剂型所无法比拟的优势。首先液体剂型方便儿童服用，不会出现吞咽困难，无需用水送服，改善病人患者对服用药物的恐惧心理，使病人患者(尤其儿童)从心理上乐于接受，病人患者(尤其儿童)服药依从性好。口服乳制剂可改善药品溶出度，促进药物吸收，提高生物利用度，经高压匀质后乳剂剂的粒径小且分布均匀，稳定性好。本发明药物包装为单剂量，且剂量根据儿童用量，制备儿童最小单次剂量包装，使服药剂量准确，避免过量或剂量人为分割不准确而引起的儿童用药安全隐患。
现有专利比如中国专利CN201010105210.9公开了双嘧达莫自乳化给药系统及其制备方法，该专利的目的是改善双嘧达莫的溶出度；口服后能显著促进药物吸收，提高生物利用度，减小个体差异；其制得的双嘧达莫自乳化给药系统，加水后经轻微搅拌或口服给药后在体内通过胃肠道蠕动能自发形成乳滴粒径为10～500nm的乳液。但是众所周知乳剂在轻微搅拌或胃肠道蠕动下，很难形成稳定的乳状液体，且粒径大，乳剂的稳定性至今仍是工艺上面临解决的问题。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种双嘧达莫口服乳剂给药系统及其制备方法。
本发明具体技术方案如下：
本发明提供了一种双嘧达莫乳剂，所述双嘧达莫乳剂包括如下重量份数的成分：双嘧达莫1～2.5份、乳化剂5～75份、助乳化剂0.1～15份、油25～150份以及水250～500份；
所述油包括大豆油、芝麻油、蓖麻油、茶油、花生油、玉米油、橄榄油、油酸乙酯、油酸丁酯、长链甘油三酯以及中链甘油三酯中的至少一种；
所述乳化剂包括吐温类、司盘类、泊洛沙姆类、大豆磷脂、卵磷脂、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、丝氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、脑磷脂、氢化磷脂以及蔗糖脂肪酸酯类中的至少一种；
所述助乳化剂包括油酸钠、油酸、黄原胶、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、甘油、丙二醇、海藻酸钠、琼脂、瓜尔豆胶、果胶、单硬脂酸甘油脂、硬脂酸、聚乙二醇、月桂酸单甘油酯、聚甘油脂以及聚维酮中的至少一种。
上述配比经过优化，可显著提高双嘧达莫乳剂的均一性和稳定性，在保证药效的同时使其更易于服用和储存。
进一步地，所述乳化剂为重量份数比为3～5:1～4:1的大豆磷脂、泊洛沙姆以及丝氨酸磷脂。
使用上述乳化剂组合，可以显著改善双嘧达莫乳剂的质地，提高乳剂的均匀性和稳定性，使乳剂质地均匀、不易分层。
进一步地，所述助乳化剂为重量份数比为2～3:1～2:1的海藻酸钠、油酸钠以及月桂酸单甘油酯。
使用上述助乳化剂组合，可以调节乳化剂的HLB值，提升乳化剂的乳化作用，形成的乳滴更小，使乳剂更加稳定、均匀。
进一步地，所述双嘧达莫乳剂还包括重量份数为0.5～1份的甜味剂、1～2份的芳香剂以及0.25～0.5份的防腐剂。
进一步地，所述甜味剂包括蔗糖、木糖醇、葡萄糖、甜菊糖苷、阿斯巴甜以及果糖中的至少一种。
进一步地，所述芳香剂包括橘子香精、菠萝香精、草莓香精、苹果香精、香蕉香精、柠檬香精、樱桃香精、牛奶香精以及巧克力香精中的至少一种。
甜味剂和芳香剂可以提升乳剂的口感，掩盖不良味道，更利于使用者特别是儿童服用。
进一步地，所述防腐剂包括对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸乙酯、羟苯甲酸丙酯、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸钠、双乙酸钠、丙酸钙、乳酸钠、氯化胆碱以及纳他霉素中的至少一种。
进一步地，所述防腐剂为重量份数比为2～3:1～2:1的丙酸钙、氯化胆碱以及纳他霉素。
使用上述防腐剂组合，可以有效抑制乳剂中有害微生物的滋生，提高乳剂的稳定性、延长保存期限。
本发明另一方面提供了一种制备上述所述的双嘧达莫乳剂的方法，包括如下步骤：
(1)油相的制备：向所述油中加入双嘧达莫、2/3重量份数的乳化剂以及1/2重量份数的助乳化剂，充分搅拌后置于水浴中恒温至50-80℃，制得油相；
(2)水相的制备：向1/2重量份数的水中加入1/3重量份数的乳化剂以及1/2重量份数的助乳化剂，充分搅拌后置于水浴中恒温至50-80℃，制得水相；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在4000～12000r/min的条件下搅拌1～5min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入1/2重量份数的水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，在50～100Mpa的条件下均质5～10次，放凉后充氮灌装，105℃灭菌30min，或采用巴氏灭菌法进行灭菌，得到成品乳剂。
进一步地，所述方法包括如下步骤：
(1)油相的制备：向所述油中加入双嘧达莫、2/3重量份数的乳化剂以及1/2重量份数的助乳化剂，充分搅拌后置于水浴中恒温至50-80℃，制得油相；
(2)水相的制备：向1/2重量份数的水中加入1/3重量份数的乳化剂以及1/2重量份数的助乳化剂，再加入所述甜味剂或所述芳香剂，充分搅拌后置于水浴中恒温至50-80℃，制得水相；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在4000～12000r/min的条件下搅拌1～5min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入1/2重量份数的水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，加入所述防腐剂，在50～100Mpa的条件下均质5～10次，放凉后充氮灌装，105℃灭菌30min，或采用巴氏灭菌法进行灭菌，得到成品乳剂。
本发明的有益效果是：本发明提供的双嘧达莫乳剂质地均匀、稳定性好，药品溶出度提高、易于被人体吸收、生物利用率高。经高压匀质后乳剂的粒径小且分布均匀，稳定性好。显著改善了双嘧达莫的溶出度，提高口服生物利用度，经过初乳的高剪切-高压匀质后，乳剂粒径小且分布均匀，稳定性好，使药物口感顺滑，液体剂型更易吞咽，无需冲泡使用方便，减小胃肠道不良反应，提高患者服药顺应性；乳剂中还可加入甜味剂、芳香剂等矫味剂，可有效掩盖药物不良味道，多种口味也为儿童提供了多种选择。安全性高，服药简单方便。采用充氮灌装，105℃灭菌30min或采用巴氏灭菌生产工艺，可以少加或不加防腐剂，得到成品乳剂品质更高，进一步增加了儿童用药的安全性。
具体实施方式
实施例1
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
实施例2
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
实施例3
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向茶油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至60℃；
(2)水相的制备：向125份水中加入油酸钠和海藻酸钠，充分搅拌后置于水浴中恒温至70℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在4000r/min的条件下搅拌5min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入125份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，在50Mpa的条件下均质10次，放凉后充氮灌装，105℃灭菌30min，得到成品乳剂。
实施例4
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向橄榄油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至50℃；
(2)水相的制备：向125份水中加入油酸钠和海藻酸钠，充分搅拌后置于水浴中恒温至80℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在12000r/min的条件下搅拌1min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入125份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，在100Mpa的条件下均质5次，放凉后充氮灌装，采用巴氏灭菌法进行灭菌，得到成品乳剂。
实施例5
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向大豆油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至60℃；
(2)水相的制备：向250份水中加入油酸钠、海藻酸钠、蔗糖以及鲜奶香精，充分搅拌后置于水浴中恒温至60℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在10000r/min的条件下搅拌3min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入250份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，加入丙酸钙、氯化胆碱以及纳他霉素，在80Mpa的条件下均质8次，放凉后充氮灌装，105℃灭菌30min，得到成品乳剂。
实施例6
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向茶油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至60℃；
(2)水相的制备：向250份水中加入油酸钠、海藻酸钠、阿斯巴甜和巧克力香精，充分搅拌后置于水浴中恒温至70℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在4000r/min的条件下搅拌5min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入250份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，加入丙酸钙、氯化胆碱以及纳他霉素，在50Mpa的条件下均质10次，放凉后充氮灌装，采用巴氏灭菌法进行灭菌，得到成品乳剂。
实施例7
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向橄榄油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至50℃；
(2)水相的制备：向250份水中加入油酸钠、海藻酸钠、甜菊糖苷以及柠檬香精，充分搅拌后置于水浴中恒温至80℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在12000r/min的条件下搅拌1min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入水补至250份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，加入丙酸钙、氯化胆碱以及纳他霉素，在100Mpa的条件下均质5次，放凉后充氮灌装，105℃灭菌30min，得到成品乳剂。
实施例8
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法如下：
(1)油相的制备：向蓖麻油中加入双嘧达莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、丝氨酸磷脂以及月桂酸单甘油酯，充分搅拌后置于水浴中恒温至80℃；
(2)水相的制备：向250份水中加入油酸钠、海藻酸钠、木糖醇以及菠萝香精，充分搅拌后置于水浴中恒温至50℃；
(3)初乳的制备：将所述水相置于组织捣碎机中，在8000r/min的条件下搅拌3min；将所述油相缓慢加入所述水相中，边加入边搅拌，全部加入后继续以上述条件搅拌5min；加入250份水后继续搅拌10min即制得初乳；
(4)乳剂的制备：将所述初乳倒入高压匀质机进料口中，加入丙酸钙、氯化胆碱以及纳他霉素，在70Mpa的条件下均质8次，放凉后充氮灌装，采用巴氏灭菌法进行灭菌，得到成品乳剂。
对照例1
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例1。
对照例2
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例1。
对照例3
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例1。
对照例4
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例5。
对照例5
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例5。
对照例6
一种双嘧达莫乳剂，由如下重量份数的成分组成：
所述双嘧达莫乳剂的制备方法同实施例5。
实验例1
物理稳定性实验
以实施例1～4中提供的乳剂作为实验组1～4，以对照例1～3中提供的乳剂作为对照组1～3，进行如下实验：
(1)极端温度贮存实验
在60℃下敞口放置15天，分别于第5天、第10天和第15天取样，比较各组乳剂的稳定性。首先将各组乳剂置于洁净的透明容器中，肉眼观察、比较各组乳剂的性状；然后取各组乳剂置于15ml尖底离心管中，以4000r/min的转速离心10min，比较各组乳剂的性状。
通过肉眼观察，各组乳剂均为乳白色液体、带有微黄颜色，流动性好、无分层，无粘壁性、也无漂油，表明各组乳剂均质地均一、质感良好；经过离心，各实验例中乳剂的颜色和气味均无明显变化，也未出现肉眼可见的不均匀、分层等现象；各对照例中乳剂在前10天无明显变化，但在第15天时出现不同程度的颜色变深、油相水相分层等现象。这表明各实验例中乳剂较各对照例中乳剂稳定性更好、货架寿命更长，能够耐受较高的温度。
(2)强光照射试验
将乳剂放在装有日光灯的光照箱内，于照度为4500lx±500lx的条件下放置15天，分别于第5天、第10天和第15天取样，按照实验例1中所述的肉眼观察和离心方法比较各组乳剂的稳定性。
通过比较，各实验例中乳剂的颜色和气味均无明显变化，也未出现肉眼可见的不均匀、分层等现象；各对照例中乳剂在前10天无明显变化，但在第15天时出现颜色变深、油相水相分层等现象。这表明各实验例中乳剂较各对照例中乳剂稳定性更好、货架寿命更长，能够耐受较长时间的光照。由此可知，大豆磷脂+泊洛沙姆+丝氨酸磷脂的乳化剂组合加上海藻酸钠+油酸钠+月桂酸单甘油酯的助乳化剂组合共同使用时，乳剂的稳定性优于使用其中个别几种或其他种类乳化剂和助乳化剂时的乳剂稳定性。
实验例2
微生物稳定性实验
以实施例5～8中提供的乳剂作为实验组1～4，以对照例4～6中提供的乳剂作为对照组1～3，进行如下实验：
(1)菌液制备
a.将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种于5ml营养肉汤培养液的试管中，37℃培养18～24h。
b.将白色念珠菌和黑曲霉菌分别接种于10ml萨布罗氏培养液中，置于20～25℃下培养，白色念珠菌培养48小时，黑曲霉菌培养7d。
c.用0.1％蛋白胨水稀释菌液，使其每毫升含菌量为1*108个，并立即使用。
(2)测定方法
A.以实施例6～8做为实验组1～3，以对照例3～4作为对照组1～2，取10ml各组乳剂样品于灭菌锥形瓶中，每组样品做三组平行，另取0.1％灭菌蛋白胨水10ml一份作空白对照。以上各菌液各取1ml分别加入上述供试品和对照管中，使其各菌数控制在106～107之间，摇匀置于20～25℃避光贮存，分别于第0h、24h、48h、7d、14d取样测定细菌和霉菌的存活数。
b.取上述接种的供试液和对照液各1ml，用0.1％的蛋白胨水按1:10稀释至适宜含菌数，然后取适宜浓度的供试液和对照液1ml于平皿中，每组3个平皿，再注入培养基，分别在适宜条件下进行培养。细菌用营养琼脂培养基，在30～37℃下培养48h后计算菌落数。霉菌用萨布罗氏琼脂培养基，白色念球菌在20～25℃下培养72h、黑曲霉在20～25℃下培养5d后计算菌落数。
表3各组乳剂菌数变化情况
由表1可知，实验组1～4在培养过程中细菌和真菌的菌体个数均出现显著降低，并且在培养48h以后菌体个数适中保持在0.01*103以下，表明实验组各组对细菌和真菌均具有良好的抑制能力。对照组1～3组在培养过程中细菌和真菌的菌体个数也出现明显降低，但对照组各组的降低幅度显著小于实验组各组，并且在培养至14天时，对照组各组真菌的菌体个数又出现上升趋势，表明对照组各组也具有一定的抑菌性能，但其抑菌能力显著低于实验组各组。由此可知，丙酸钙+氯化胆碱+纳他霉素的防腐剂组合，其抑菌能力显著高于使用其中个别几种防腐剂或其他防腐剂时的抑菌能力。
实验例3
动物实验
1.实验材料
药品：利巴韦林片，由马应龙药业集团股份有限公司生产，批号150401；
样品：实施例1制得的双嘧达莫口服乳；
甲型流感病毒A/PR8/34，由中国预防医学科学院病毒研究所提供。
2.实验动物
昆明种小鼠30只，每只体重20±2g，由哈尔滨肿瘤医院动物室提供。
3.实验方法
(1)将30只小鼠随机分为3组，每组10只；
(2)用乙醚将小鼠轻度麻醉，阴性对照组小鼠以生理盐水滴鼻，每鼠30μL；阳性对照组和实验组分别以4倍LD50(半数致死量，LD50＝10-471)的甲型流感病毒(A/PR8/34)液滴鼻感染，每鼠30μL，感染量为1倍LD50；
(3)滴鼻感染半小时后，用生理盐水0.2ml对阴性对照组小鼠进行灌胃，用利巴韦林溶液对阳性对照组小鼠进行灌胃(将利巴韦林片研碎后加生理盐水混合，使利巴韦林浓度为10mg/kg)，用4mg/kg的双嘧达莫乳剂对给药组小鼠进行灌胃，每天灌胃一次，连续7天。
(4)实验结果观测记录
A.对各组小鼠的生长情况及行为变化进行常规观察；
B.计算肺指数：最后一次给药后.以脱颈椎法处死各组小鼠，摘取小鼠完整肺组织，用洁净纱布吸干水分，称重后按照如下公式计算各组小鼠的肺指数：
肺指数＝肺全重(g)/体重(g)x10
4.实验结果
(1)各组小鼠生长情况及行为变化常规观察
阴性对照组小鼠感染病毒后2天内未出现明显异常症状.第3天开始出现呼吸急促，行动迟缓，毛发无光泽，饮食减少、消瘦等表现，第4日开始出现死亡.7天内共死亡4只；给药组和阳性对照组小鼠未出现明显的病态症状，亦无小鼠死亡。饮食正常，毛色稍欠光泽。体重增长缓慢。
(2)观察肺指数
*表示P<0.05，即有显著性差异。
与阴性对照组比较，阳性对照组和给药组均能降低上呼吸道感染小鼠肺指数.与阴性对照组组比较具有显著性差异(P<0.05)。表明双嘧达莫口服乳剂能有效抑制甲型流感病毒引起的小鼠上呼吸道感染。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。