中药单体及其组合物在防晒美白抗衰老化妆品中的应用的制作方法

本发明属于中药及化妆品领域，涉及一种天然植物单体延胡索甲素和辛夷脂素及其组合的新用途，具体涉及延胡索甲素和辛夷脂素在制备防晒和美白化妆品中的应用，该成分的单体和组合物可以应用于皮肤护理方面，尤其是皮肤防晒美白护理化妆品。

背景技术：

近年来，大自然环境污染和大气层破坏程度的增大使得照射到地面的紫外线不断增加，皮肤衰老、日光性皮炎甚至皮肤癌患者数量显著增加，因此寻找安全、有效、稳定的化妆品防晒剂一直是众多研发人员关注的重点。

在三种不同波长范围的紫外线类型中，两部分紫外线可以照射到地面，即波长在320-400nm的长波长紫外线UVA以及290-320nm的中波长紫外线UVB。UVA的穿透力极强，可以透过皮肤表层到达真皮层深部，引起皮肤过早衰老；而UVB主要作用于细胞表面，引起皮肤晒黑，长期还会导致红斑生成、脱皮，甚至损伤细胞DNA，引发皮肤癌症。当然，UVA与UVB对皮肤的损害具有协同作用，UVA可以显著加重UVB所产生的急性损伤，提高致癌可能性，因此，日常防护紫外线十分重要。

目前市面上的防晒化妆品层出不穷，其防晒能力主要由防晒剂决定。钛白粉、氧化锌等物理防晒剂可有效屏蔽掉紫外线对皮肤的伤害，但用量过大时或长期使用透气性较差，对皮肤也有刺激性和光催化性，毛孔容易堵塞；二苯甲酮衍生物等化学防晒剂也应用广泛，但由于其容易引起皮肤过敏、发生光解反应等，长期使用，产生的中间产物易对皮肤造成损伤。

人们生活水平的提高使得人们对化妆品的要求不断提高，天然、稳定且防晒效果显著的化妆品备受青睐。多年的探索研究发现，一些中药对于皮肤光损伤和光老化能起到有效的防治作用，这些中药可以清除氧自由基、修复胶原纤维、改善微循环等，现已发现如山奈根提取物、姜黄根茎提取物、芦荟提取物等具有良好的防晒效果。从植物中提取防晒成分药性稳定、药力持久，对皮肤无刺激、安全有效，因此具有广阔的发展前景，是化妆品用品市场发展方向之一。

现有的天然植物来源的防晒剂多为中草药提取物，活性显著，但由于提取物本身是含有多种不同化合物的混合物，成分复杂，机制也不完全清晰。而从中草药中提取出的植物单体则分子量小，结构明确，性质稳定，天然无毒害，且能作用于明确的生物靶点，易阐明作用机制，有效防护及修复紫外线对皮肤造成的损伤，因而在开发新的防晒剂上有很大的优势。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对现有的防晒化妆品对皮肤刺激性，长期大量时间造成的皮肤依赖性以及毛孔堵塞等问题，提供一种更安全有效的具有防晒功效的天然植物单体组合物。

本发明提供了天然植物单体延胡索甲素和辛夷脂素及其组合物在化妆品防晒、美白和抗衰老中的应用。

为了实现本发明的目的，采取了如下技术方案：

一种具有防晒、美白、抗衰老功效的全天然植物单体组合物，该组合物由天然植物单体延胡索甲素及辛夷脂素组成，所述延胡索甲素和辛夷脂素的质量比为0.08～7:1；优选地为，质量比为1:12，3:16，9:28，1:2，3:4，9:8，7:4，3:1，27:4。

其中，所述天然植物单体延胡索甲素及辛夷脂素均为粉末状；所述天然植物单体延胡索甲素及辛夷脂素可以溶于水中。所述组合物可添加到化妆品基质中制备化妆品。

延胡索甲素(d-Corydaline)，是一种生物碱类化合物，主要可以从中药延胡索的块茎中分离而得，延胡索甲素的分子式为C₂₂H₂₇NO₄，分子量是369.44，其结构如式(I)所示。纯化的延胡索甲素(HPLC纯度>99％)，白色粉末，易溶于乙醇、DMSO等。目前发现的生理活性主要涉及镇痛、消炎、抗菌、抗肿瘤等方面，但还未见有报道公开其在抵抗紫外线、美白以及保护皮肤方面的作用。

辛夷脂素(Fargesin)，属于木脂素类化合物，一般来源于木兰科植物望春花的干燥花蕾，分子式C₂₁H₂₂O₆，分子量为370.40，结构式如式(II)所示。纯化的辛夷脂素(HPLC纯度>99％)，白色粉末，易溶于乙醇等。目前发现的生理活性主要涉及抗过敏、抗氧化、抗肿瘤等方面，亦未见报道发现其抵抗紫外线、美白及其保护皮肤方面的作用。

本发明首次提出了延胡索甲素和辛夷脂素在皮肤抗紫外线、防晒、美白、抗衰老方面的作用，并通过体外和体内实验验证了延胡索甲素和辛夷脂素抗紫外线的作用及其协同作用。实验结果表明延胡索甲素和辛夷脂素能有效增强皮肤抵抗紫外线的能力，避免皮肤晒红晒伤。所述原料延胡索甲素和辛夷脂素天然绿色、无毒无刺激性，制备方法工艺简单，生产成本低，产品对皮肤作用温和且安全有效。

本发明还提出了如上所述的组合物在制备促进皮肤弹性和保湿保水化妆品中的应用。

本发明还提出了延胡索甲素在抵抗紫外线对皮肤造成损伤、制备防晒、美白类化妆品中的应用。其中，延胡索甲素的作用浓度为30μg/mL时效果最好。

本发明还提出了延胡索甲素在制备促进皮肤弹性和保湿保水化妆品中的应用。其中，延胡索甲素浓度为30μg/mL时效果最好。

本发明还提出了辛夷脂素在制备抵抗紫外线对皮肤造成的损伤、制备防晒、美白和抗衰老功效的化妆品中的应用。其中，辛夷脂素浓度为40μg/mL时效果最好。

本发明还提出了辛夷脂素在制备促进皮肤弹性和保湿保水化妆品中的应用。其中，辛夷脂素浓度为40μg/mL时效果最好。

本发明中，所述的化妆品是外用化妆品。

本发明中，所述具有防晒功效的化妆品是外用化妆品。

本发明中，所述具有美白功效的化妆品是外用化妆品。

本发明中，所述具有抗衰老功效的化妆品是外用化妆品。

本发明中，所述具有防晒、美白和抗衰老功效的化妆品可以是为霜剂、乳剂、面膜、爽肤水、护肤水、软膏、油剂、凝胶、气雾剂、溶液剂、或涂膜剂。

本发明还提出了一种具有防晒和美白和抗衰老功效的化妆品，其中，延胡索甲素和辛夷脂素组合物的质量百分比为0.002％～1.75％，余量为化妆品基质。优选地，延胡索甲素和辛夷脂素组合物的质量百分比为0.17％，余量为化妆品基质。

本发明还提出了一种具有防晒和美白和抗衰老功效的化妆品，其中，延胡索甲素和辛夷脂素分别占所述化妆品的质量百分比为：延胡索甲素0.09％，辛夷脂素0.08％，余量为化妆品基质。

本发明还提出了一种具有防晒和美白和抗衰老功效的化妆品，其中，延胡索甲素和辛夷脂素分别占所述化妆品的质量百分比为：延胡索甲素0.15％、辛夷脂素0.2％，余量为化妆品基质。

其中，所述化妆品基质为纯水，6％甘油，5％矿油，4％棕榈酸异丙酯，3.5％辛酸/癸酸甘油三酯，2％硬脂醇聚醚-2，2％硬脂醇聚醚-21，1.5％鲸蜡硬脂醇，1％聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20，0.8％甘油硬脂酸酯，0.2％尿囊素，0.2％羟苯甲酯，0.15％双(羟甲基)咪唑烷基脲，0.1％羟苯丙酯，0.05％EDTA二钠。

本发明的有益效果在于，本发明首次将延胡索甲素和辛夷脂素应用于化妆品，两者均能抵抗紫外线对皮肤造成的损伤，两者组合后的组合物能大大提高防晒功效，且安全稳定，保持皮肤湿润，延缓皮肤衰老，美白皮肤。本发明具有防晒功效的植物单体组合物可作为有效活性成分制成膏霜、喷雾剂、粉剂等多种剂型，用于化妆品。

附图说明

图1是延胡索甲素对人永生化表皮细胞活性的影响。

图2是辛夷脂素对人永生化表皮细胞活性的影响。

图3是不同浓度的延胡索甲素对紫外线照射细胞的保护作用。

图4是不同浓度的辛夷脂素对紫外线照射细胞的保护作用。

图5是延胡索甲素、辛夷脂素及其组合物对紫外线照射细胞的保护作用。

图6是延胡索甲素和辛夷脂素不同配比组合物对紫外线照射细胞的保护作用。

图7是延胡索甲素、辛夷脂素及其组合物对紫外线照射裸鼠皮肤的防护作用效果。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

实施例1.延胡索甲素、辛夷脂素对人皮肤成纤维细胞活性的影响。

将生长良好的人永生化表皮细胞HaCaT细胞接种于96孔细胞培养板，每孔2*10⁴个细胞，体积为100μL，培养过夜后弃原有培养基，分别加入DMEM稀释的吴茱萸内酯、升麻素100μL，延胡索甲素、辛夷脂素的浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、300μg/mL。24h后加入MTS(美国麦迪逊Promega)，置于细胞培养箱中30min后，酶标仪检测其在490nm下的吸光值。结果如图1和图2所示，当延胡索甲素浓度等于或低于150μg/mL，辛夷脂素浓度等于或低于200μg/mL时，不会对细胞活性产生影响。

实施例2.延胡索甲素、辛夷脂素对紫外线照射细胞的保护作用。

将人永生化表皮细胞HaCaT细胞以2*10⁴个每孔接种到96孔板中，24h内细胞贴壁后，将原有细胞培养基换成含有药物的1640培养基100μL，延胡索甲素浓度为(0、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL)，辛夷脂素浓度为(0、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL)。药物孵育2～3h后，用PBS替换药物培养基并进行细胞阳光紫外模拟仪(购自法国)照射，照射剂量为80mJ/cm²UVB，其中一组细胞不给药也不照紫外作为实验对照组。紫外照射结束后，再将PBS用原药物剂量的1640培养基替换，继续在CO₂培养箱中培养24h。最后检测细胞活力，酶标仪检测吸光值。结果统计见如图3和图4所示。经过紫外线照射后，HaCaT细胞活性显著性降低，产生了半致死现象，加入延胡索甲素、辛夷脂素后，细胞活性增强，与UV对照组(即，紫外照射后，不添加延胡索甲素或辛夷脂素的组)相比，差异显著，具有统计学意义，**:p<0.01，***:p<0.001，其中延胡索甲素浓度为30μg/mL时抗紫外的保护作用最明显，辛夷脂素浓度为40μg/mL时抗紫外的保护作用最明显。

实施例3.延胡索甲素、辛夷脂素及其组合物对紫外线照射细胞的保护作用。

为评价本发明防晒成分延胡索甲素和辛夷脂素的协同作用，通过对细胞活性的检测，在细胞水平探究了延胡索甲素、辛夷脂素以及两者组合物对抗紫外线的能力。

人永生化表皮细胞HaCaT细胞铺板96孔板，实验过程参考实施例2，延胡索甲素浓度为30μg/mL，辛夷脂素浓度40μg/mL，两者药物组合物分别使用其单独使用时50％的浓度(即延胡索甲素浓度为15μg/mL，辛夷脂素浓度20μg/mL)。药物孵育2～3h后，80mJ/cm²UVB紫外照射细胞。过程参考实施例2，结果统计见如图5所示。经过紫外线照射后，HaCaT细胞活性显著性降低，产生了半致死现象，但加入延胡索甲素、辛夷脂素及两者组合物后，细胞活性增强，与UV对照组(即，紫外照射后，不添加延胡索甲素或辛夷脂素的组)相比，差异显著，加入延胡索甲素和辛夷脂素的组合物，差异显著，具有统计学意义，***:p<0.001。

实施例4.延胡索甲素和辛夷脂素不同质量配比组合物对紫外线照射细胞的保护作用。

为评价本发明组合物延胡索甲素和辛夷脂素不同的质量配比对紫外线照射细胞的保护作用，类似地，通过细胞活性的检测，在细胞水平探究了组合物延胡索甲素和辛夷脂素的最优配比。

实验过程参考实施例2，其中对照组为不处理的细胞，0为不给药物但是照射紫外线的细胞，将延胡索甲素浓度为30μg/mL和辛夷脂素浓度为40μg/mL分别看做100％，药物组合物质量配比分别为：组合物1为1:9(即3μg/mL延胡索甲素和36μg/mL辛夷脂素)、组合物2为2:8(即6μg/mL延胡索甲素和32μg/mL辛夷脂素)、组合物3为3:7(即9μg/mL延胡索甲素和28μg/mL辛夷脂素)、组合物4为4:6(即12μg/mL延胡索甲素和24μg/mL辛夷脂素)、组合物5为5:5(即15μg/mL延胡索甲素和20μg/mL辛夷脂素)、组合物6为6:4(即18μg/mL延胡索甲素和16μg/mL辛夷脂素)、组合物7为7:3(即21μg/mL延胡索甲素和12μg/mL辛夷脂素)、组合物8为8:2(即24μg/mL延胡索甲素和8μg/mL辛夷脂素)、组合物9为9:1(即27μg/mL延胡索甲素和4μg/mL辛夷脂素)，计算方法以此类推。结果见图6，细胞在照射紫外线后，HaCaT细胞出现了半致死现象，但在加入药物组合物后，与UV对照组(即，紫外照射后，不添加延胡索甲素或辛夷脂素的组)相比，细胞存活率显著增加，均具有统计学意义，**:p<0.01，***:p<0.001，其中组合物6即当两个药物质量配比为6:4时，细胞存活率最高。

实施例5.空白膏霜和药物膏霜的配制。

本实施例的具有防晒功效的植物单体组合物，按质量百分数计算，按以下组份配制。药物添加浓度为细胞使用浓度的50倍。

本实施例将延胡索甲素、辛夷脂素的药物组合物制成化妆品膏剂，其中，延胡索甲素0.15％、辛夷脂素0.2％，或延胡索甲素0.09％和辛夷脂素0.08％，基础配方成分比例为(质量百分比)：0.05％EDTA二钠，0.2％尿囊素，6％甘油，5％矿油，0.8％甘油硬脂酸酯，4％棕榈酸异丙酯，3.5％辛酸/癸酸甘油三酯，2％硬脂醇聚醚-2，2％硬脂醇聚醚-21，0.2％羟苯甲酯，0.1％羟苯丙酯，1.5％鲸蜡硬脂醇，1％聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20，0.15％双(羟甲基)咪唑烷基脲，其余为水(以上质量百分比均为占所化妆品膏剂总质量的百分比)。

原料均为市售产品，吴茱萸内酯和升麻素单体均购自上海诗丹德有限公司。

本实施方式配制的膏霜涂布均匀、手感细腻、易吸收，可进行裸鼠抵抗紫外线损伤能力试验和人体试验。

实施例6.延胡索甲素、辛夷脂素以及两者组合物对紫外线照射的裸鼠皮肤的保护作用。

紫外线的照射能够引起皮肤起皮、起皱等现象的发生。在本实施例中分别给10只裸鼠的后背皮肤左半边涂上上述制备的化妆品基础配方膏霜、右半边涂抹含本发明药物的膏霜，每天左右半边分别涂抹0.1克空白膏霜和药物膏霜后进行UV照射，每天用动物阳光紫外模拟仪(购自法国)照射剂量UVA(3J/cm²)和UVB(0.3J/cm²)，其连续实验5天后，观察实验结果并拍照见图7。实验结果显示，没有添加药物的基础膏霜涂抹在裸鼠左边背部，在UV照射后，裸鼠后背左半边皮肤产生了明显的起皮和红肿现象。而右半边涂抹了本发明含药物膏霜的右半边皮肤，在UV照射后，仍然表现得比较光滑，无起皮和红肿现象，与对照组比较差异非常明显，而且药物组合组比单体药物组效果更加明显。说明这两组药物都能够有效的保护裸鼠皮肤免受UV照射带来的损害，是一种效果和作用都非常良好的防晒化妆品添加剂。

实施例7.延胡索甲素、辛夷脂素以及两者组合物对UV照射后裸鼠皮肤弹性、水分和黑色素含量的实验结果。

将连续在阳光紫外模拟仪照射两周的实验动物用皮肤弹性水分及黑色素测试仪(Cutometer MPA 580，德国)检测裸鼠背部左右边皮肤弹性和黑色素含量，A组为涂抹延胡索甲素组、B组为涂抹辛夷脂素组、C组为涂抹延胡索甲素和辛夷脂素的组合物膏霜组，实验结果如下表1。裸鼠右侧皮肤的弹性在涂抹药物后有明显提高，而黑色素含量则明显降低，与对照组实验前后比较有显著性差异。也就是说，药物的使用能增加皮肤弹性以及降低黑色素的生成，并对皮肤细胞具有很好的保护作用，应当是一个很有效的防晒剂，同时还有美白、抗衰老的作用。

表1药物对小鼠皮肤弹性和黑色素的影响

(实验后的数据—实验前的数据)/实验前的数据×100％的平均值

注：与对照组比较，*:p<0.05，**:p<0.01，***:p<0.001。

实施例8.延胡索甲素和辛夷脂素组合物对人手臂皮肤在阳光照射前后的实验结果比较。

实验前用皮肤弹性水分及黑色素测试仪(Cutometer MPA 580，德国)检测每个人左右手臂正面的皮肤弹性、水分、黑色素含量的基础值，选取左右手臂没有显著差异的人员参与本实验，共20个志愿者参加本次实验，男女各10人。

实验在7月份夏天进行，志愿者都穿短袖衣服，正式开始实验，发给每位志愿者两瓶化妆品，在志愿者左手手臂正面只涂化妆品基础配方空白膏霜作为对照(以下称对照组)，右手手臂正面涂抹含有药物组合物的化妆品基础膏霜作为实验组(以下称药物组)，每天涂抹一次，每次大约0.5克。要求志愿者每天将涂抹过含或不含药物的化妆品基础膏霜的双手手臂在太阳光下至少照射半小时，实验二周后，再检测左右手臂皮肤的弹性、含水量以及黑色素含量情况。

实验结果表明，所有涂抹含有药物组化妆品的志愿者手臂均没有引起任何皮肤过敏症状。实验结果还表明，药物组涂抹过的手臂实验前后比较皮肤弹性的百分比均有明显升高，而黑色素含量的百分比则明显降低，与对照组实验前后比较有明显的差异，见表2。说明含药物组的防晒作用效果明显，主要能增加皮肤弹性和明显降低黑色素生成，并对皮肤细胞具有很好的保护作用效果，是一种非常理想的防晒美白化妆品添加剂，同时具有一定的抗衰老作用。

表2药物对人体皮肤弹性、含水量和黑色素的影响

(实验后的数据—实验前的数据)/实验前的数据×100％的平均值

注：与对照组比较，*:p<0.05，**:p<0.01。

本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。