本发明涉及中医药领域，具体涉及一种含有猫尾草的中药组合物的制备方法及其在抑制猪病毒性腹泻药物中的应用。
背景技术：
猪的病毒性腹泻病是一种较常见的猪群疾病，其致病病毒主要有猪流行腹泻病毒、猪轮状病毒、猪伪狂犬病毒和猪传染性胃肠炎病毒等，感染其中一种或多种之后，染病猪群多出现水样腹泻和呕吐等症状，且发病急，传播快，一周龄内仔猪出现症状后极易在2-7天内迅速死亡，死亡率可达100％。成年猪可在3-7天的腹泻后逐渐康复，但可能形成僵猪。猪的病毒性腹泻是一种世界范围内的流行病，严重危害仔猪、成猪的健康，提高了猪的养殖成本，减少经济利益，对猪的养殖业造成较大的影响。
对于猪病毒性腹泻的防治，目前除了对猪的生活环境进行清洁消毒之外，以疫苗接种为主，提高猪的免疫，预防疾病的发生。猪的病毒性腹泻疫苗分为强度疫苗和灭活疫苗，强毒疫苗是用本场发病猪的肠内容物和粪便混入饲料喂食妊娠母猪，使其产生抗体，从而保护仔猪，但是该方法没有消除病毒的存在，极易反复感染。而灭活疫苗的毒株毒力不稳定，有毒力返强或毒力太弱不能形成免疫应答等隐患。
除疫苗接种之外，防治猪病毒性腹泻还可以使用抗生素等药物来控制因病毒感染而导致的细菌感染，从而提高猪的成活率，但是抗生素的滥用会产生对环境的污染，甚至可能会筛选出超级细菌，从而使得疫情的防治变得更加困难，此外如果处理不当，残存在猪肉内的抗生素有可能会对人体产生不利的影响，因此对于猪病毒性腹泻的防治有潜在的风险。
而中草药作为纯天然来源的药物，往往具有抗病毒，抗菌等功效，并能增强机体免疫力，还可以补充一些营养成分，因此既可以作为药物防治疾病，又可以提升猪的品质。因此以中草药为主要原料来制备猪的病毒性腹泻药物拥有极大的前景，并引起了国内外畜牧业的关注。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种中药组合物及其制备方法和应用，使得该中药组合物能以来源充足的中草药为原料而且能有效防治猪病毒性腹泻，提高抗病毒效果。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种中药组合物，由8-15份猫尾草、1-5份黄芪、1-5份甘草和1-5份光萼猪屎豆制成。作为优选，由10份猫尾草、3份黄芪、3份甘草、4份光萼猪屎豆制成。
猫尾草，豆科狸尾草属植物，生于干燥旷野坡地、路旁或灌丛中，含有4’-亚甲基二氧异黄酮，水飞蓟宾，染料木素等多种黄酮类物质，分布于中国华南、江西、云南及东南亚、澳大利亚等地，性甘，微苦，具有清肺止咳，散瘀止血的功效，主治蛇咬伤。
黄芪，豆科黄芪属植物，生于林缘，灌丛或疏林下，广泛分布于全国各地。现代科学研究表明，黄芪可增强机体免疫，且有保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压等功能，并有广泛的抗菌作用。
甘草，豆科甘草属植物，是一种常见的中草药，在我国主要分布在新疆、内蒙古、宁夏、甘肃、山西等地的干旱或者半干旱沙土、沙漠边缘和黄土丘陵地带。气微，味甜而特殊。主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。
光萼猪屎豆，豆科野百合属植物，生于田园路边及荒山草地，主要分布于中国华南，以及湖南、福建、台湾、四川、云南等地。具有清热解毒，散结祛瘀的功效，可外用治疮痛、跌打损伤等。
在本发明提供的一些实施例中，致病病毒为猪流行性腹泻病毒。
在本发明提供的另一些实施例中，致病病毒为猪传染性胃肠炎病毒。
作为优选，猪群为仔猪，公猪成猪和母猪成猪。
本发明所述中药组合物可采用醇提或水煎的方法来制备，采用醇提法制备时，按重量份计，称取8-15份猫尾草、1-5份黄芪、1-5份甘草和1-5份光萼猪屎豆混合并粉碎，将粉碎得到的混合物用乙醇加热回流提取后过滤，滤液浓缩后即为中药组合物，其中，所述混合物和乙醇的质量比优选为1:3-10，所述乙醇的体积百分数优选为40-95％，更优选为60％，提取时间优选为30-60min，提取次数优选为2次，浓缩的倍数优选为3倍，原料药优选10份猫尾草、3份黄芪、3份甘草和4份光萼猪屎豆。
在采用水煎法制备时，按重量份计，称取8-15份猫尾草、1-5份黄芪、1-5份甘草和1-5份光萼猪屎豆混合并粉碎，将粉碎得到的混合物用水煎煮提取后过滤，滤液浓缩为浸膏后即为中药组合物，其中，所述混合物和水的质量比优选为1:3-10，提取时间优选为30-60min，提取次数优选为2次，原料药优选10份猫尾草、3份黄芪、3份甘草和4份光萼猪屎豆。
本发明具有如下优点：由以上技术方案可知，本发明选用猫尾草为原料，并辅以黄芪、甘草和光萼猪屎豆制备成一种新型的、具有抑菌作用的中药组合物，本发明所述中药组合物原料药不但来源充足，而且抑菌效果优于现有产品，可以广泛应用到抗病毒药剂特别是猪的病毒性腹泻抗病毒药剂的制备中。
具体实施方式
本发明公开了一种中药组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述产品和方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种中药组合物及其制备方法和应用做进一步说明。
实施例1：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草150g、黄芪10g、甘草10g和光萼猪屎豆10g，粉碎后加入1600ml体积分数为60％的乙醇加热回流提取2次，每次40min，醇提后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例2：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草100g、黄芪30g、甘草40g和光萼猪屎豆40g，粉碎后加入630ml体积分数为95％的乙醇加热回流提取2次，每次30min，醇提后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例3：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草80g、黄芪30g、甘草50g和光萼猪屎豆50g，粉碎后加入2100ml体积分数为40％的乙醇加热回流提取2次，每次1h，醇提后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例4：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草150g，黄芪50g、甘草10g和光萼猪屎豆10g，粉碎，加入1110ml水煎煮2次，每次1h，水煎后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例5：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草120g，黄芪30g、甘草20g和光萼猪屎豆20g，粉碎，加入570ml水煎煮2次，每次1h，水煎后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例6：用本发明所述制备方法制备中药组合物
称取猫尾草100g，黄芪30g、甘草40g和光萼猪屎豆40g，粉碎，加入2100ml水煎煮2次，每次30min，水煎后过滤，滤液浓缩至浸膏即得。
实施例7：抗病毒活性试验
试验病毒：引起猪病毒性腹泻的猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒。
试验细胞：永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02。
试验分组：试验分为对照组和试验组，对照组施用市售中成药维迪康；实验组分别施用实施例1至6提供的中药组合物。
永生化猪小肠上皮细胞系(ZYM-SIEC02)，使用RPMI-1640培养基，配置完毕后加入100mL/L的牛血清并调节pH为中性。使用细胞维持液为不加牛血清的中性RPMI-1640培养基。将细胞置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，随后取适量接种于96孔板后培养24h生长为单层，吸弃培养液。取本发明所述制备方法制备的中药组合物用细胞维持液稀释为200μg/mL并在各孔分别加入50μL，随即将50μL病毒悬液分别加入相应的培养孔。每块孔板同时设阳性药物对照组(200μg/mL维迪康稀释液各50μL)。轻摇混匀后置于CO2培养箱中37℃培养24h，随后在酶标仪上测OD值，并计算半数细胞死亡所需浓度(IC50),依此数值大小表示抗病毒活性。实验结果如表1所示：
表1 抗病毒活性检测结果
由表1的试验数据可知，本发明实施例1至6提供的中药组合物对引起猪病毒性腹泻的猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒有较强的抑制作用，与阳性对照药物的抗病毒活性相当。
实施例8：中药组合物在养殖厂仔猪群中的猪病毒性腹泻治疗效果试验
对养殖厂264头发病仔猪随机分为8组，每组均在饥饿一顿后按常规量减半喂食饲料，并按每公斤体重10ml进行注射补盐(补盐液为0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白对照组不再进行任何处理，阳性药物对照组采用市售的中成药维迪康，口服量分别为每公斤体重50mg。试验组施用本发明实施例1至6提供的中药组合物，口服量同样分别为每公斤体重50mg。7天后观察一次仔猪的健康状况，如果水样腹泻停止，粪便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，则为治愈，上述有一项恢复者则为有效，如果症状没有缓解甚至死亡，则为无效。试验结果如表2所示：
表2 仔猪群中猪病毒性腹泻治疗效果试验检测结果
由表2的试验数据可知，本发明提供的中药组合物对养殖厂的仔猪的猪病毒性腹泻有较好的治疗效果，同市售维迪康相比，其治愈率和有效率总和则明显更高，说明本发明所提供的中药组合物在仔猪中的抗病毒效果要优于现有产品的效果，可更有效地抑制病毒活性，提高仔猪的生存率，为养猪场提供良好的饲养环境。
实施例9：中药组合物在养殖厂公猪成猪群中的猪病毒性腹泻治疗效果试验
对养殖厂320头发病公猪成猪随机分为8组，每组均在饥饿一顿后按常规量减半喂食饲料，并按每公斤体重10ml进行注射补盐(补盐液为0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白对照组不再进行任何处理，阳性药物对照组采用市售的中成药维迪康，口服量分别为每公斤体重50mg。试验组施用土本发明实施例1至6提供的中药组合物，口服量为每公斤体重50mg。7天后观察一次公猪成猪的健康状况，如果水样腹泻停止，粪便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，则为治愈，上述有一项恢复者则为有效，如果症状没有缓解甚至死亡，则为无效。试验结果如表2所示：
表2 公猪成猪群中猪病毒性腹泻治疗效果试验检测结果
由表2的试验数据可知，空白对照组由于未施药，公猪成猪治愈率为零；而试验组和阳性对照组在施药后，公猪成猪的治愈率和有效率极大地增加了，且试验组的公猪成猪的无效率整体低于阳性对照组，这表明试验组的药效要好于阳性对照组的药效，说明本发明提供的中药组合物可提高公猪成猪的成活率。
实施例10：中药组合物在养殖厂母猪成猪群中的猪病毒性腹泻治疗效果试验
对养殖厂280头发病母猪成猪随机分为8组，每组均在饥饿一顿后按常规量减半喂食饲料，并按每公斤体重10ml进行注射补盐(补盐液为0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白对照组不再进行任何处理，阳性药物对照组采用市售的中成药维迪康，口服量为每公斤体重50mg。试验组施用本发明实施例1至6提供的中药组合物，口服量为每公斤体重50mg。7天后观察一次母猪成猪的健康状况，如果水样腹泻停止，粪便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，则为治愈，上述有一项恢复者则为有效，如果症状没有缓解甚至死亡，则为无效。试验结果如表3所示：
表3 母猪成猪群中猪病毒性腹泻治疗效果试验检测结果
由表3的试验数据可知，空白对照组由于未施药，母猪成猪仅有一例症状缓解；试验组和阳性对照组由于施药后，母猪成猪的成活率极大地增加了，且试验组的治愈率和有效率要优于阳性对照组。结果表明本发明提供的中药组合物可提高母猪成猪的成活率。