本发明属于生物医药技术领域，更具体地说，涉及一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物。同时，本发明还涉及一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物的制备方法。
背景技术：
目前全球有糖尿病(DM)患者4.14亿，预计到2040年将会达到6.42亿，另据《美国医学会杂志》报道，中国成年人有近12％患有DM，前驱DM的患病率大约为50％。我国已经成为世界上患DM人数最高的国家。有关DM对中枢神经系统的影响早已引起人们的广泛重视。早在20世纪20年代，MileS和Root首先报道了DM影响认知功能。1965年提出“DM脑病”的概念。2006年Mijnhout提出了“DM相关的认知障碍(DACD)”。之后许多研究表明DM患者存在一系列神经心理学和神经行为学的变化，同时有60-70％的DM患者伴有轻、中度认知功能障碍，部分患者认知损伤不断加重，最终发展为痴呆，痴呆一旦形成，治疗效果甚微。目前，治疗认知障碍的药物有乙酰胆碱酯酶抑制剂、谷氨酸受体(NMDA)调控剂、多肽类等药物，治疗糖尿病的药物有双胍类、磺脲类等药物，但针对糖尿病致认知障碍药物没有明确的成品药。
西洋参为五加科植物西洋参(PanaxquinquefoliusL.)的根，西洋参性寒，具有补气养阴，清热生津，滋阴降火的作用。近期临床研究发现，糖尿病患者单独服用西洋参，可提高机体免疫力，有助于修复胰岛功能，消除胰岛素抵抗，提高血清胰岛素。同时降血脂和血小板聚集率，明显改善糖尿病症状。同时，西洋参中主要成分人参皂苷能够明显改善学习记忆能力。
石菖蒲为天南星科多年生草本植物石菖蒲(Acorus tatarinowii Schott)的干燥根，味辛性温，具芳香之气，行散之力较强，为宣气通窍之佳品。既能芳香化湿、醒脾健胃，又能醒神益智。
研究显示西洋参能够改善糖代谢异常及由糖尿病或其他原因所致的认知障碍或痴呆。为提高生物利用度、降低药物不良反应及提高中枢神经系统的靶向性，本发明以西洋参、石菖蒲药对，对DM认知障碍加以干预，配伍石菖蒲一方面是借鉴古方中人参和菖蒲为一经典药对，另一方面石菖蒲具有促进药物吸收、提高血脑屏障通透性、醒脑开窍的作用，配伍药物应用于治疗脑部疾病优势更为明显，因此本发明提出一种防治糖尿病致认知障碍的药物组合物及制备方法。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物及其制备方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为西洋参和石菖蒲，且西洋参和石菖蒲两种药材的重量比1-4:1-3。
优选的，所述西洋参和石菖蒲两种药材的最佳重量比3:2。
本发明还提供一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物的应用，所述的西洋参石菖蒲药物组合物应用在治疗糖尿病认知障碍。
本发明还提供一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
S1、将西洋参的干燥块根磨碎成细粉，加入8倍体积的70％乙醇，78-82℃水浴回流提取3h，提取2次；
S2、过滤：收集滤液，56-62℃回收溶剂至无醇味；
S3、然后用0.5g·mL-1的滤液通过D101大孔树脂，5倍柱体积水洗，3倍柱体积20％乙醇洗脱，6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，流速5mL·min-1；
S4、收集70％乙醇洗脱液，流速1mL·min-1，收集富集液，富集液58-62℃回收溶剂至无醇味，得到西洋参提取物；
S5、将石菖蒲的干燥的根粉碎成细粉，过38-42目筛，加入12倍双蒸水，浸泡2h后回流提取9h，期间收集提取的挥发油，用1％吐温80水溶液溶解，即得到石菖蒲挥发油提取液；
S6、将S4中得到的西洋参提取物和S5中的石菖蒲挥发油提取液通过电力搅拌器混合均匀，即可得到药物组合物。
优选的，所述西洋参提取物至少包括人参皂苷。
本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种防治糖尿病认知障碍的药物组合物及其制备方法，该药物组合物能够促进西洋参在体内吸收，同时相对在治疗糖尿病认知障碍中活性更好。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：药物组合物(西洋参-石菖蒲)在大鼠血液及脑脊液中主要化学成分分析
糖尿病目前发病率很高，同时百分之六七十会发生认知障碍，糖尿病病程多呈热燥偏盛—气阴两虚—阴阳两虚的衍变过程，针对气阴两虚证用西洋参、石菖蒲药对，对其干预，西洋参具有益气养阴补气生津的功效，同时糖尿病病程中伴有挟痰，石菖蒲则开窍豁痰，并且通过血脑屏障，为确定石菖蒲对西洋参是否具有促进作用，考察西洋参及西洋参、石菖蒲药对灌胃给药后，测定人参皂苷在大鼠体内含量。由于疾病模型大鼠代谢因素很多，因此选择用正常大鼠作为实验动物。
取西洋参100g，加入8倍体积的70％乙醇，80℃水浴回流提取3h，提取2次，过滤，收集滤液，60℃回收溶剂至无醇味，后用0.5倍柱体积上样液(0.5g·mL-1)通过D101大孔树脂，5倍柱体积水洗，3倍柱体积20％乙醇洗脱，6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，流速1mL·min-1。富集液60℃回收溶剂至无醇味，定容至100mL；同时取石菖蒲100g，加入12倍双蒸水，浸泡2h后回流提取9h，期间收集提取的挥发油，用1％吐温80水溶液定容至100mL。
Wistar大鼠20只，随机分为西洋参组，药物组合物组，每组10只，雌雄各半。西洋参组灌胃给予西洋参提取物(6g生药·kg-1·d-1)，药物组合物组，是将得到的西洋参提取液和石菖蒲挥发油提取液(体积比为3：2)通过电力搅拌器混合均匀，灌胃给予药物组合物(西洋参提取物6g生药·kg-1·d-1，石菖蒲挥发油提取液4g生药·kg-1·d-1)给药3天，每天2次。全程自由饮水，于最后一次给药之前禁食12h，在末次给药后1.5h，3％戊巴比妥钠麻醉，颈静脉采血3mL，3500rpm离心10min，吸取上层血清1.5ml血清，置具塞离心管中。按血清样品预处理方法操作，残渣用甲醇60μL溶解(相当于血清样品浓缩25倍)；同时于小脑延髓池抽取脑脊液，3500rpm离心10min，吸取上层脑脊液200μL，置具塞离心管中。按脑脊液预处理方法操作，残渣用甲醇60μL溶解(相当于脑脊液样品浓缩3.3倍)，涡旋3min后超声1min，13000rmp(4℃)离心15min，取上清液，UPLC-MS/MS分别进样10uL分析。得到西洋参组和药物组合物组在大鼠体内移行成分中原型成分人参皂苷入血，入脑含量见表1，表2。
表1大鼠体内移行成分中原型成分人参皂苷入血含量(n＝10)单位：ng/mL
与西洋参组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有非常显著性差异
表2大鼠体内移行成分中原型成分人参皂苷入脑含量(n＝10)单位：ng/mL
与西洋参组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有非常显著性差异
结果表明，药物组合物组中石菖蒲能够促进西洋参中主要成分人参皂苷类在血液及脑脊液中的吸收。因此，为治疗糖尿病致认知障碍药物提供理论依据。实施例2Morris水迷宫测定药物组合物(西洋参-石菖蒲)对糖尿病大鼠认知障碍的干预作用
取西洋参1000g，加入8倍体积的70％乙醇，80℃水浴回流提取3h，提取2次，过滤，收集滤液，60℃回收溶剂至无醇味，后用0.5倍柱体积上样液(0.5g·mL-1)通过D101大孔树脂，5倍柱体积水洗，3倍柱体积20％乙醇洗脱，6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，流速1mL·min-1。富集液60℃回收溶剂至无醇味，定容至1000mL；同时取石菖蒲1000g，加入12倍双蒸水，浸泡2h后回流提取9h，期间收集提取的挥发油，用1％吐温80定容至1000ML。
Wistar大鼠，清洁级，雌性，体质量180-220g，共100只，大鼠随机分成5组，分别为：空白对照组；糖尿病模型组；西洋参石菖蒲组；西洋参组；阳性药组；每组实验动物分两批，每组20只，给药12周。给药剂量为西洋参组灌胃给予西洋参提取物(1.08g生药·kg-1·d-1)，药物组合物组，是将得到的西洋参提取液和石菖蒲挥发油提取液(体积比为1：1)通过电力搅拌器混合均匀，灌胃给予药物组合物(西洋参提取物1.08g生药·kg-1·d-1，石菖蒲挥发油提取液0.72g生药·kg-1·d-1)，阳性药组灌胃给予多奈哌齐(2mg·kg-1·d-1)，空白对照组，模型组给予等体积生理盐水，每日灌胃给药2次。
上述大鼠实验前稳定3d，观察大鼠的摄食、粪便、活动等一般状况。分别于实验分组第80日进行Morris水迷宫试验，Morris水迷宫为直径150cm，高50cm的圆形水池，水池内壁被漆为黑色，水池被4个等距点分为4个象限，分别在4个象限池壁的中心贴上不同标记物，为三角形，正方形，圆形和五角星白色纸片。平台放入其中一个象限的中心，低于水面2cm，控制水温在23.0±2.0℃。对大鼠进行Morris水迷宫学习训练，实验时将大鼠在除目标象限(平台所在象限)之外的三个象限随机面对池壁放入水中，记录大鼠的登台时间(逃避潜伏期，以下统称潜伏期)作为评价学习成绩的指标，潜伏期下降即学习成绩提高。实验前将大鼠放上平台站10s，找到平台后允许大鼠在平台上停留10s，潜伏期为大鼠找到平台的时间；如果大鼠在90s内未找到平台，则潜伏期记为90s，然后将大鼠引导登上平台允许其在平台上停留10s，让其根据四个象限的参照物进行空间学习记忆，并减少大鼠紧张。每次训练完成后将大鼠取出擦干，以防止低体温造成的应激。每只大鼠隔20min重复上述实验过程。训练过程中连续两次找到平台的大鼠，可认为记住平台位置，第6次仍然记不住平台位置的大鼠则为学习能力异常的大鼠。
Morris水迷宫测定糖尿病大鼠学习记忆水平。结果显示，在糖尿病模型建立80d，模型组与对照组比较，糖尿病模型潜伏期较长，存在显著性差异，说明糖尿病大鼠存在认知障碍；西洋参组、药物组合物组与模型组比较，西洋参组和药物组合物(西洋参-石菖蒲)组潜伏期时间短，存在显著性差异。说明时西洋参及药物组合物对糖尿病认知障碍具有一定治疗作用，西洋参-石菖蒲药对治疗效果更显著。Morris水迷宫测定糖尿病大鼠潜伏期见表3。
表3 Morris水迷宫测定糖尿病大鼠潜伏期
与对照组相比，*p＜0.05有显著性差异，**p＜0.01有非常显著性差异
与模型组相比较，▲P<0.05有显著性差异，▲▲p＜0.01有非常显著性差异
实施例3社交行为试验测定药物组合物(西洋参-石菖蒲)对糖尿病大鼠社交障碍的干预作用
取西洋参1000g，加入8倍体积的70％乙醇，80℃水浴回流提取3h，提取2次，过滤，收集滤液，60℃回收溶剂至无醇味，后用0.5倍柱体积上样液(0.5g·mL-1)通过D101大孔树脂，5倍柱体积水洗，3倍柱体积20％乙醇洗脱，6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，流速1mL·min-1。富集液60℃回收溶剂至无醇味，定容至1000mL；同时取石菖蒲1000g，加入12倍双蒸水，浸泡2h后回流提取9h，期间收集提取的挥发油，用1％吐温80定容至1000mL。
Wistar大鼠，清洁级，雌性，体质量180-220g，共100只，大鼠随机分成5组，分别为：空白对照组；糖尿病模型组；西洋参石菖蒲组；西洋参组；阳性药组；每组实验动物分两批，每组20只，给药12周。给药剂量为西洋参组灌胃给予西洋参提取物(1.08g生药·kg-1·d-1)，药物组合物组，是将得到的西洋参提取物和石菖蒲挥发油提取液(体积比为2：1)通过电力搅拌器混合均匀，灌胃给予药物组合物(西洋参提取物1.08g生药·kg-1·d-1，石菖蒲挥发油提取液0.72g生药·kg-1·d-1)，阳性药组灌胃给予多奈哌齐(2mg·kg-1·d-1)，空白对照组，模型组给予等体积生理盐水，每日灌胃给药2次。
在造模第80d对各组大鼠进行社交行为测试，测试在规格为100cm×100cm×40cm旷场箱内进行，旷场箱内放一个直径14cm的自制放鼠装置，此装置不妨碍大鼠之间的交流。实验前2d将所有的大鼠单独放在旷场箱内自由活动5min，每天2次，连续2d，以减轻大鼠对新环境的焦虑。实验前1h将被测鼠单笼隔离。放鼠装置放在旷场箱的中间，里面放入一只和测试鼠同批次的正常社交的大鼠，所有被测鼠均与这一只鼠进行社交行为测试，测试时间为5min。使用软件记录被测大鼠的路程、平均速度、与装置鼠的接触次数、接触时间等指标。以与装置鼠的接触次数小于等于1次作为评价糖尿病社交障碍的标准。
详见表4，表5。模型组大鼠与装置鼠的接触次数及接触时间均显著低于对照组(p＜0.01)，故可以说明模型组的社交能力显著低于对照组。与模型组比较，西洋参组，药物组合物(西洋参-石菖蒲组)社交能力虽然没有显著高于模型组，但是，模型组的社交障碍发生率为83.33％，西洋参组的社交障碍发生66.66％，药物组合物组56.25％，表明，药物组合物能够明显改善糖尿病大鼠社交障碍的发生率。
结果表明，西洋参组和药物组合物(西洋参-石菖蒲)均可改善大鼠社交能力。
表4两组大鼠社交行为的接触次数和接触时间
与对照组相比，*p＜0.05有显著性差异，**p＜0.01有非常显著性差异
与模型组相比较，▲P<0.05有显著性差异，▲▲p＜0.01有非常显著性差异
表5两组大鼠社交行为的静止次数和静止时间
与对照组相比，*p＜0.05有显著性差异，**p＜0.01有非常显著性差异
与模型组相比较，▲P<0.05有显著性差异，▲▲p＜0.01有非常显著性差
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。