本发明涉及美容产品
技术领域：
，具体涉及一种富血小板血浆组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：皮肤由表皮、真皮、皮下组织三层组成，是维护人体生命和健康的重要组成部分，覆盖于人体表面，直接与外界接触，是机体的第一道屏障，极易受到环境的影响而导致损伤。在人年龄的増长及外机环境因素(如应激反应、污染、紫外线等)作用下，皮肤会渐渐地表现衰老，出现皮肤功能和美观的衰落，其皮肤衰老的体表特征为出现色斑、皱纹和皮肤松弛下垂等。皱纹的形成主要是由于内部的原因，体细胞老化是中老年人产生皱纹最根本的原因。这是遗传学的规律，随着年龄的增长，细胞活性逐渐降低，代谢能力减弱，造成新生细胞数目增速低于细胞老化速度，老化细胞水合能力低下和光老化作用增强，导致皮肤缩水性和保湿性下降，加重纤维组织恶化，皮肤干燥易出细纹。另外，皮肤老化也伴随着汗腺系统衰退，皮脂分泌不足，加剧皮肤坏损和干燥程度，诱发皱纹产生。色斑的形成是由于皮肤产生黑色素过多所致，而黑色素形成又与酪氨酸酶密切相关。在人的表皮基底层细胞间，分布着黑色素细胞，它含有的酪氨酸酶可以将酪氨酸氧化成多糖，中间再经过一系列的代谢过程，最后便可生成黑色素。黑色素生成越多，皮肤就越黝黑；反之，则皮肤就越白皙。面部的老化虽然是正常人的自然生理过程，但由于人的社会性特点，这种老化表现会给人们造成很大的心理压力。为了解决上述问题，人们开发了无数的美容产品。富血小板血浆(Platelet-richplasma，PRP)是通过离心自体全血而得到的高浓度血小板血浆，含有丰富的生长因子，如血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等。这些生长因子对促进细胞的增殖与分化，增加胶原合成能力，促进基质合成和沉降及组织的形成有着极其重要的作用，并且生长因子之间有良好的协同作用。另外，PRP的血清中还含有大量的细胞粘合蛋白：纤维素、纤粘连蛋白和亲玻粘连蛋白，为皮肤修复提供了良好的3D立体结构支架，还可以收紧松弛的皮肤。在修复皮肤损伤有良好的应用前景。肉毒杆菌毒素作为一种神经毒素，注射于局部后能阻断乙酰神经胆碱的释放，从而阻断神经对肌肉的传导，从而使肌肉麻痹，达到除皱美容的目的。通常注射2～3天出现肌肉运动的减弱。但最终轴突可萌芽形成新运动终板，同时无功能的运动单位被吸收，从而肌肉功能逐渐得以恢复。肉毒杆菌毒素主要是用来去除动态的皱纹，可以用于去除面上半部的额头纹(抬头纹)、眉间纹和眼眶周围的鱼尾纹，也可用于去除面部以下的下颏和前颈部皱纹。酪氨酸酶抑制剂通过抑制酪氨酸酶活性，减少人体因紫外线、光过敏、感光食物等因素，形成大量黑色素，出现斑点、肤色变黑等状况，从而达到美白、淡斑的效果。现有技术中，PRP可通过细胞活性因子激活多条细胞通路，逐步改善细胞，持续时间长，但见效缓慢；单独使用肉毒杆菌毒素后4～48小时内即可发挥作用，一般能维持3～6个月，如要维持效果需要持续注射，一般一年内要注射3-4次，在使用后需要长时间(1-2个月)的恢复期，僵硬、不自然等副作用对于期间的正常生活影响较大；天然酪氨酸酶抑制剂如氧化白藜芦醇目前主要应用于口服保健品，需要长期服用，见效缓慢。技术实现要素：本发明目的是提供一种富血小板血浆组合物及其制备方法和应用，以解决现有技术的不足。本发明采用以下技术方案：一种富血小板血浆组合物，包括如下组分：a、富血小板血浆b、肉毒杆菌毒素c、天然酪氨酸酶抑制剂。进一步地，含血小板浓度为8×107/mL-1×109/mL，肉毒杆菌毒素1-20U/mL，天然酪氨酸酶抑制剂浓度为0.1-2mg/mL。进一步地，所述富血小板血浆制备方法如下：在无菌条件下，将外周血分装到PRP触变分离胶提取管中，1500-2000g离心8-12min，触变分离胶上层的血浆即为富血小板血浆；提取的富血小板血浆中含浓度至少为300×109个细胞/L的血小板，红细胞浓度低于0.3×1012个细胞/L。进一步地，所述天然酪氨酸酶抑制剂包括氧化白藜芦醇、白藜芦醇、熊果苷或桑皮苷。一种富血小板血浆组合物的制备方法，包括如下步骤：步骤1、制备富血小板血浆；肉毒杆菌毒素用生理盐水稀释；天然酪氨酸酶抑制剂用少量溶剂溶解后再用生理盐水稀释，滤膜过滤除菌；步骤2、将步骤1的富血小板血浆、生理盐水稀释后的肉毒杆菌毒素、滤膜过滤后的天然酪氨酸酶抑制剂按比例混合，得到所述富血小板血浆组合物。进一步地，步骤1中生理盐水稀释的天然酪氨酸酶抑制剂用0.22μm滤膜过滤除菌。上述富血小板血浆组合物在美容方面的应用。进一步地，所述美容为面部美容。进一步地，将所述富血小板血浆组合物在脸部美容者的脸部进行皮内点状注射，间隔5-6mm，每点注射0.02-0.06ml，注射量在3-8ml。进一步地，将所述富血小板血浆组合物0.5-2ml直接涂抺在皮肤上皱纹处，敷用15～30min，间隔1天涂抹一次，持续2周。本发明的有益效果：1、单独使用肉毒杆菌毒素需要1-2个月的恢复期，PRP富含的细胞生长因子能够激活细胞活性，天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)也可以加速细胞的更新，联合PRP和天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)可以明显改善使用肉毒杆菌毒素带来的面部表情呆板，局部麻木等症状，而且能有效延长作用时间，使效果持续到8-12个月。2、天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)目前主要应用于口服保健品，需要长期服用，见效缓慢，PRP富含的细胞生长因子能促进细胞对天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)的吸收，加强天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)对酪氨酸酶抑制能力，减少黑色素形成，提高美白效果。综上，本发明可以减缓肉毒杆菌毒素使用后的副反应，缩短恢复期，使效果持续时间延长；同时提高天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)吸收效率，使美白效果得到极大的提高。本发明富血小板血浆组合物融合了PRP、肉毒杆菌毒素、天然酪氨酸酶抑制剂(如氧化白藜芦醇)三者的美容优势，三者共同作用可以产生速效、中效、长效的美白除皱效果。具体实施方式下面结合实施例对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。一种富血小板血浆组合物，包括如下组分：a、富血小板血浆b、肉毒杆菌毒素c、天然酪氨酸酶抑制剂。在富血小板血浆组合物中，含血小板浓度为8×107/mL-1×109/mL，肉毒杆菌毒素1-20U/mL，天然酪氨酸酶抑制剂浓度为0.1-2mg/mL。所述富血小板血浆制备方法如下：在无菌条件下，将5-12mL外周血分装到PRP触变分离胶提取管中，1500-2000g离心8-12min，触变分离胶上层的血浆即为富血小板血浆；提取的富血小板血浆中含浓度至少为300×109个细胞/L的血小板，红细胞浓度低于0.3×1012个细胞/L。所述天然酪氨酸酶抑制剂包括氧化白藜芦醇、白藜芦醇、熊果苷或桑皮苷。一种富血小板血浆组合物的制备方法，包括如下步骤：步骤1、制备富血小板血浆；肉毒杆菌毒素用生理盐水稀释；天然酪氨酸酶抑制剂用少量溶剂溶解后再用生理盐水稀释，滤膜过滤除菌。其中，富血小板血浆制备方法如下：在无菌条件下，将5-12mL外周血分装到PRP触变分离胶提取管中，1500-2000g离心8-12min，触变分离胶上层的血浆即为富血小板血浆；提取的富血小板血浆中含浓度至少为300×109个细胞/L的血小板，红细胞浓度低于0.3×1012个细胞/L。天然酪氨酸酶抑制剂包括氧化白藜芦醇、白藜芦醇、熊果苷或桑皮苷。步骤2、将步骤1的富血小板血浆、生理盐水稀释后的肉毒杆菌毒素、滤膜过滤后的天然酪氨酸酶抑制剂按比例混合，得到所述富血小板血浆组合物。得到所述富血小板血浆组合物。制备的富血小板血浆组合物中含血小板浓度为8×107/mL-1×109/mL、肉毒杆菌毒素1-20U/mL、天然酪氨酸酶抑制剂浓度为0.1-2mg/mL。上述富血小板血浆组合物在美容方面的应用。所述美容为面部美容。将所述富血小板血浆组合物在脸部美容者的脸部进行皮内点状注射，间隔5-6mm，每点注射0.02-0.06ml，注射量在3-8ml。或者将所述富血小板血浆组合物0.5-2ml直接涂抺在皮肤上皱纹处，敷用15～30min，间隔1天涂抹一次，持续2周。以下实施例涉及的肉毒杆菌毒素：兰州生物制品研究所有限公司的衡力A型肉毒素50单位，用生理盐水4ml稀释成25U/ml；氧化白藜芦醇：纯度≥98％，购自梯希爱(上海)化成工业发展有限公司，使用前按4mg/10μL溶于DMSO中，完全溶解后，缓慢加入1mL生理盐水中，氧化白藜芦醇终浓度4mg/mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。PRP触变分离胶提取管为BDPRP专用采血管，货号：362761。实施例1选取10名女性脸部美容者，年龄21-60岁，有不同程度的额纹、鱼尾纹、面部皮肤松弛、毛孔粗大，色斑、黑眼圈等情况。PRP制备：无菌条件下，抽取脸部美容者静脉外周血9-12ml，注入PRP触变分离胶提取管中，1800g离心10min，吸取分离胶上层血浆3-4ml。10名脸部美容者PRP提取如表1所示。将得到的富血小板血浆分别与浓度为4mg/mL的氧化白藜芦醇和25U/mL的肉毒杆菌毒素按体积比3:1:1混匀，得到10组6ml富血小板血浆组合物，血小板浓度为2.4×108—5.2×108/mL，氧化白藜芦醇终浓度为0.8mg/mL，肉毒杆菌毒素为5U/mL。将得到的10组富血小板血浆组合物分别在对应脸部美容者脸部进行皮内点状注射，间隔约5-6mm，每点注射约0.05ml，总注射量为4.6-6.0ml，在注射后每月随访，持续一年。实验结果如表2所示。整个过程中，无过敏现象发生，较少出现面部僵直现象，且很快恢复。所有脸部美容者的皮肤都得到了不同程度的改善，治疗过程中，深皱纹逐渐平坦，浅皱纹消失，持续时间为8-12个月。面部皮肤变的有光泽，色斑变小，颜色变浅，毛孔缩小，并能显著改善黑眼圈和眼袋情况。表1表2编号注射量(ml)除皱效果维持时间(月)15.5825.61035.21145.5955.3865.8976.01284.6895.410105.710当前第1页1 2 3