使用富血小板血浆进行组织的修复和复壮的制作方法
【专利摘要】本申请涉及用于改善皮肤状况的美容方法。所述方法通常包括在进行微针操作之后向受试者施用富血小板血浆和培养的自体细胞。所述富血小板血浆和自体细胞能够被局部施加于皮肤表面或被注射进入真皮或皮下组织。所述方法可以被用于改善状况，如痤疮疤痕、创伤性疤痕、色素沉着过多、细纹、皱纹、拉伸纹和毛发脱落。
【专利说明】使用富血小板血浆进行组织的修复和复壮 发明领域
[0001 ] 本申请设及用于给受试者施用富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)组合 物的方法。具体地，所述方法可W设及在进行微针操作之后向皮肤表面局部施用所述PRP组 合物，或者注射所述PRP组合物进入皮下或皮肤组织。所述PRP组合物通常会包括培养的自 体细胞，例如培养的自体成纤维细胞。可W使用该组合物治疗状况(condition),如瘦疮瘤 痕、创伤性瘤痕、色素沉着过多、细纹、皱纹、拉伸纹(stretch mark)和毛发脱落。
[0002] 发明背景
[0003] 注射合成材料进入身体、并且特别是进入脸W实现美容的结果开始于十九世纪 末。例如，在第一次世界大战之前的几年中注射石蜡W纠正面部轮廓缺陷在短暂的一段时 间内得到认可。但是，并发症W及长期结果不理想导致该做法被摸弃。可注射硅胶在20世纪 60年代早期变得可用，但是并发症(如对硅胶的局部和全身性反应、注射物的迁移和局部组 织损害)限制了它的使用。
[0004] 由非生物材料的注射所获得的不良结果促使了尝试使用外源蛋白质(例如牛去端 肤胶原(atelocollagen))作为可注射填充剂材料W纠正皮肤缺陷和/或美容上改善皮肤的 外观。但是，使用去端肤胶原被证明不是很令人满意的，因为发生该材料的吸收时没有被宿 主材料置换，并且患者对去端肤胶原的重复注射常产生免疫反应和耐药性。由于牛去端肤 胶原的局限性，已经开发了源自胎盘或自体组织的人胶原产品和其它自体细胞组合物，但 是它们作为注射物使用也已经提供了不令人满意的结果。
[0005] 在过去的15至20年中，应用于损伤的或衰老的皮肤W改善其外观的操作是微针 刺(micro-needling)。微针装置在皮肤中产生微小的伤口，其通过身体的自然愈合过程刺 激胶原的产生。但是，由微针刺所产生的胶原的量通常不如其它皮肤表面重建技术所看到 的多。临床医生也已经试图在微针刺之后将各种类型的细胞施加于皮肤上。然而，因为细胞 不能被成功吸收，其结果欠佳。
[0006] 因此，人们希望有用于治疗或美容上改善皮肤状况的替代方法。
[0007] 发明概述
[0008] 本文描述了用于美容上改善皮肤状况的方法，其包括在进行微针刺操作之后向所 述皮肤施用富血小板血浆组合物、自体细胞组合物或其组合。微针刺在所述皮肤表面产生 孔，其改善所述富血小板血浆或自体细胞组合物在所述皮肤表面下的吸收，从而提供增强 的组织再生。鉴于富血小板血浆是从受试者自己的血液制成的，没有所述受试者对该组合 物产生免疫反应的风险。富血小板血浆的另一个好处是其具有随着时间的推移形成组织而 不是如上述许多组合物所经历的退化的能力。本文所述的方法和组合物也可W有助于改善 除皮肤状况之外的状况。
[0009] 在一般情况下，所述用于美容上改善皮肤状况的方法包括：1)从受皮肤状况影响 的受试者获得血液样品；2)从所述血液样品制备富血小板血浆组合物;3)制备自体细胞组 合物;4)在受所述皮肤状况影响的皮肤区域上进行微针刺操作，接着向受影响的区域局部 施用所述富含血小板组合物和所述自体细胞组合物。所述方法可用于治疗皮肤状况，如瘦 疮瘤痕、创伤性瘤痕、色素沉着过多、细纹、皱纹、拉伸纹和毛发脱落。
[0010] 如下面进一步描述的，所述富血小板血浆组合物能够作为自体细胞组合物的载 体。在运种情况下，可W产生各种类型自体细胞的悬浮液在局部施用于所述皮肤上之前并 与所述富血小板血浆进行组合。为所述自体细胞提供支架的细胞外基质材料还可W被添加 至所述富血小板血浆和自体细胞组合物中，或被分开施加于所述皮肤，或被分开注射进入 所述真皮或皮下组织。各种细胞生长因子也可W被添加至所述PRP或自体细胞组合物中，或 被W组合物的形式分开地施加于所述皮肤表面，或被分开地注射进入所述真皮或皮下组 织。
[0011] 当其不用作载体时，所述富血小板血浆组合物和自体细胞组合物能够被W任何期 望的顺序进行层加。例如，所述富血小板血浆可W首先施加，接着是所述自体细胞组合物， 或反之亦然。也可W根据需要重复组合物的层加。可W在任何层上施加组织封闭剂W帮助 将局部施加的PRP和/或自体细胞组合物保持在所述皮肤内。在其它情况下，所述富血小板 血浆、自体细胞组合物和/或细胞外基质材料被组合并注射进入所述皮肤或所述皮肤下，例 如进入所述表皮、真皮或皮下组织，W改善皮肤状况。能够单独或与自体细胞和/或PRP-起 局部施加于所述皮肤表面的其它示例性组合物可W包含细胞生长因子、细胞外基质材料 (如人羊膜细胞外基质或猪膀脫细胞外基质）、条件培养基或其组合。同样地，所述组合物能 够被W任何期望的顺序进行层积。运些相同的组合物也可W被注射进入所述真皮或皮下组 织。
[001引发明详述
[0013]本文描述的是用于向受试者施用富血小板血浆(PRP)组合物W复壮(rejuvenation) 组织(例如皮肤组织）的各种方法。所述方法通常会包括在所述皮肤表面形成微穿孔W增强 其中PRP组合物的吸收。可W将自体细胞添加至所述PRP组合物中然后施用于所述受试者， 或者可W将所述细胞作为分开的组合物进行施用，例如在施用PRP组合物之前或之后W层 的形式进行施加。所述组合物的层加（layering)可W改善在微针刺之后它们进入所述皮肤 的吸收。除了 PRP施用之外，也可W用多个细胞组合物的层加施用或包含多个细胞类型的组 合物的施用改善皮肤外观。例如，可W使用本文所述的方法和组合物改善皮肤松弛、肤色不 佳和面色暗淡。
[0014] 微针刺
[0015] 微穿孔通常由微针刺装置形成。可W使用任何合适的微针刺装置。例如，可W使用 其中针被设置在可旋转的鼓上并在皮肤上手动滚过的装置(皮肤滚动器，dermarollers)、射 频微针刺装置或自动微针刺装置。示例性的自动微针刺装置包括但不限于Dermapen淆 微针刺装置（Dermapen ,Salt Lake City,UT)和Micropen? 微针刺装置化cl ipse Aesthetics，LLC，Dallas，ΤΧ)。在该方法的一些变化中，采用自动化微针刺装置可能是有益 的。自动化微针刺装置能够提供一致的针穿透深度并且便于在鼻、眼或口周围的狭窄皮肤 区域上使用。在用自动化装置进行微针刺之前，通常将润滑剂施加于所述皮肤表面。示例性 的润滑剂包括但不限于包含W下的一种或多种的组合物：1)透明质酸;2)脂肪细胞;3)脂肪 来源的间充质细胞;4)成纤维细胞;5)PRP;W及6)条件培养基。在一个变化中，所述润滑剂 可W包含PRP。在其它变化中，所述润滑剂可W包括脂肪细胞、脂肪来源的间充质细胞或其 组合。在又一些变化中，所述润滑剂可W包括条件培养基W及还有W下的一种或多种：1)透 明质酸；2)成纤维细胞；W及3)干细胞。润滑剂的施用可W帮助在所述皮肤中均匀分布针 孔。
[0016] 自动微针刺装置通常会包括无菌的一次性部分和可重复使用的手柄。多个针典型 地被固定于一次性针部上，其被可拆卸地固定至可重复使用的手柄。针的尺寸可W变化，但 是典型地为32-口径(gauge)。所述装置也可W被配置成包括六至24根针之间。在一个变化 中，所述微针刺装置包含十二根32-口径的针。在其它变化中，所述微针刺装置包括针深度 调整机构，其允许针深度在例如大约0.5mm至2.75mm之间进行调整。可W调整针深度W适合 受影响区域中皮肤的厚度。例如，当对较薄的皮肤(例如更白的皮肤或眼部周围的皮肤)进 行微针刺操作时，针深度可W被设置为0.5mm。当对前额较厚的皮肤进行微针刺操作时，针 深度可W被设置为在2.5mm至2.75mm之间。可W与本文所述的方法和组合物一起采用用于 皮肤表面重建和/或加热皮肤的其它治疗或技术(例如激光、射频微针刺或超声）。
[0017] 富血小板血浆组合物
[0018] 如前所述，本文所述的方法包括在进行微针刺操作之后向受试者施用PRP组合物。 PRP是浓缩血浆中的血小板的自体制剂。PRP含有高浓度的各种生长因子，包括血小板衍生 生长因子（platelet-derived growth facto;r，PDGF)、转化生长因子（transforming growth factor,TGF)、血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)和膜岛素样生长因子（insulin-like growth factor, IGF-1)，运些生长因子从活化 时的血小板的α颗粒分泌。已知运些因子调控许多生物学过程(包括伤口愈合)并促进细胞 迁移、附着、增殖和分化，W及促进细胞外基质形成。
[0019] 能够通过本领域已知的任何合适的技术制备所述PRP组合物。简言之，首先从受试 者抽取全血。将血液离屯、W将血浆与堆积的红细胞分离，然后进一步离屯、W将PRP与贫血小 板血浆(platelet-poor plasma)分离。然后可W收集所述PRP并如本文所述将其施用于所 述受试者。
[0020] 用于制备PRP的示例性的装置包括GPS厳II血小板浓缩物分离试剂盒和 Plasmax? Plus血浆浓缩器配件（Biomet Biologies, Inc. ,Warsaw, Ind.)，W及Vo;rtech? 浓缩系统（Biomet Biologies, Inc. ,Warsaw, Ind. )eSelp.hyl衝系统（Aesthetic i^ictors LLC, Bethlehem, PA)和Eel ipse PRP?系统化cl ipse Aesthetics, Dal las ,TX)可有效用于 PRP的诊所制备。PRP内的血小板浓度可W变化。例如，在一些变化中，PRP中的血小板浓度范 围可W为全血中血小板浓度的大约3倍至10倍。 巧〇引]自体细胞组合物
[0022] 可W制备自体细胞组合物并添加至载体PRP组合物内，或在施用PRP之前或之后被 分开地施加。所述自体细胞组合物可W包含任何合适的细胞类型，包括但不限于脂肪细胞、 脂肪来源的间充质细胞、软骨细胞、成纤维细胞、角质细胞、干细胞及其组合。在所述组合物 中包括干细胞(如脂肪干细胞、源自骨髓抽吸物的细胞或间充质干细胞(例如脂肪来源的间 充质细胞））可能是有益的。在实践中，可W使用能够在培养中被扩增的任何未分化的间充 质细胞。例如，可W通过在培养中扩增自体皮肤成纤维细胞制备所述细胞的组合物，然后将 它们加至PRP组合物用于组合施用，或在培养中扩增并在所述PRP组合物之前或之后进行施 加。
[0023] 为了制备自体皮肤成纤维细胞组合物，从2X5mm全厚度皮肤活检标本开始皮肤成 纤维细胞的培养。在开始培养之前，用抗生素和抗真菌剂重复洗涂所述活检标本。此后，去 除表皮和含脂肪细胞的皮下组织，使得所得到的培养物基本上不含非成纤维细胞，并且用 解剖刀或剪刀细细分割真皮标本。将所述标本的小块用错子单独置于组织培养瓶的干燥表 面上并使其附着5至10分钟，之后缓慢加入少量培养基，小屯、不要移动所附着的组织片。培 养24小时后，向培养瓶加入另外的培养基。当T-25培养瓶被用于开始所述培养时，培养基的 初始量为1.5-2.0ml。从所述活检标本建立细胞系通常需要二至Ξ周之间的时间，此时可W 从初始培养容器取出细胞用于扩增。
[0024] 在培养初期过程中，期望组织片保持附着于培养容器底部。任何脱落的碎片应当 重新移植到新的容器中。根据本领域技术人员众所周知的技术，可W通过将所述组织培养 物短暂暴露于抓TA-膜酶刺激成纤维细胞生长。运种暴露于膜酶因太短暂而不会使成纤维 细胞从它们所附着的培养容器壁脱落。在培养物建立并且接近汇合之后可W立即取出成纤 维细胞样品用于冷冻储存。冷冻储存较早代数而不是较晚代数成纤维细胞是优选的，因为 正常人成纤维细胞的细胞培养物的传代次数是有限的。
[0025] 成纤维细胞可W被冷冻于适于保存成纤维细胞的任何冷冻培养基中。可W使用由 70%生长培养基、20% (v/v)胎牛血清和10% (v/v)二甲亚讽(DMS0)组成的培养基，具有良 好效果。解冻细胞可W被用于开始继代培养W获得用于同一受试者的悬浮液而没有获得第 二标本的不便。
[0026] 适于来自活检标本的皮肤成纤维细胞的增殖的任何组织培养技术可用于扩增所 述细胞。可W在R.I.化eshn巧，Ed.，ANIMAL CE1X CULTURE:A PRACTICAL APPR0ACH(IRL Press，0xford England,1986)和R.I.化eshney,Ed.'CULTURE OF ANIMAL CE化S:A MANUAL OF BASIC TECHNIQ肥S，Alan R丄iss&Co.，New化rk，1987)中发现本领域技术人员众所周 知的技术。
[0027] 培养基可W是适用于原代成纤维细胞培养物的生长的任何培养基。在大多数情况 下，所述培养基补充有〇.5%-20%(v/v)的量的血清W促进成纤维细胞的生长。更高浓度的 血清促进成纤维细胞更快的生长。在一个变化中，血清是胎牛血清，其被添加至终浓度为培 养基的10%。例如，所述培养基可W包括补充有2mM谷氨酷胺、llOmg/L丙酬酸钢、10% (v/v) 的胎牛血清和抗生素的高葡萄糖DMEM("完全培养基"）。
[0028] 可W通过膜酶消化将细胞传代至新的培养瓶。单个培养瓶可Wl:3进行分传用于 扩增。具有450cm2总培养面积的Ξ底T-150培养瓶是适合使用的。Ξ底T-150能够接种大约6 X 1〇6个细胞并具有产生大约1.8 X 107个细胞的容量。当达到培养瓶的容量时(其典型地需 要5-7天的培养），生长培养基被替换成无血清完全培养基;此后细胞在无蛋白质的培养基 中培养，即保持在大约30°C-大约40°C之间至少6小时、优选大于12小时，最优选16-18小时 (优选37Γ)。细胞在无血清培养基中的培养基本上从细胞去除了来源于胎牛血清的蛋白 质，所述蛋白质如果存在的话会对受试者具有免疫原性并引起过敏反应。
[0029] 扩增之后，通过膜酶/邸TA将细胞从组织培养瓶中取出；通过离屯、和重悬进行充分 洗涂;并悬浮于载体材料例如PRP或等渗盐水中。所述细胞不会在纤维蛋白凝块中悬浮或在 纤维蛋白凝块中培养。生长达到容量的六个Ξ底T-150培养瓶产生大约108个细胞，其足W 组成大约1.0ml的悬浮液。
[0030] 在一些变化中，细胞能够在4°C进行运输，只要它们在制成悬浮液的18小时内被使 用即可。细胞可w被悬浮于等体积的完全培养基中，但其中不存在酪红抑指示剂，并且将 胎牛血清替换为受试者的血清，用于运种运输(运输培养基）。细胞可W被吸出并注射于所 述运输培养基中。其中悬浮细胞的盐水或运输培养基的体积并不严格并且可W取决于W下 因素，如医师期望使用的成纤维细胞的数量、要治疗的缺陷的尺寸和数量、W及受试者期望 获得治疗结果的迫切性。
[0031] 备选地，不使用上述基于培养瓶的细胞扩增系统，而可W使用自动的封闭细胞扩 增系统（如Quantum衝细胞扩增系统（Terumo BCT，Inc .，Lakewood，C0))制备自体皮肤 成纤维细胞组合物W及其它自体细胞组合物(例如脂肪来源的间充质细胞组合物）。示例性 的自动的封闭细胞扩增系统可W采用中空纤维细胞生长生物反应器。运些Ξ维生物反应器 可W包含超过10,000个大约200微米长的单个中空纤维，其内表面可W产生超过二平方米 的总生长表面积(典型的大组织培养瓶可W具有在大约150至大约175平方厘米之间的生长 面积）。可W理解的是，可W通过改变所采用的中空纤维生物反应器的数量和/或长度来调 节总生长表面积。自动的封闭细胞扩增系统的大表面积通常被设计为在最小的体积里使得 贴壁细胞(例如骨髓细胞、脂肪细胞、间充质干细胞、羊水细胞、上皮细胞等）的扩增最大化。 此外，中空纤维生物反应器的确定和稳定的几何形状可W优化细胞培养环境的控制和管 理。该生物反应器的封闭环境通常在整个培养过程中保持完整，免去了与传统的、基于培养 瓶的组织培养有关的开放性操作和实地工作。因此，运样的自动的封闭细胞扩增系统通常 降低了操作者误差和污染的风险。
[0032] 在其它变化中，可W采取混合方法(approach)。例如，可W在常规T-培养瓶中在含 有少量胎牛血清（例如2%至3%的胎牛血清）的培养基（如FGM?-2成纤维细胞生长培养基 化onza Group Ltd. ,Basel,Switzerland))中传代一次或两次建立原代成纤维细胞培养 物，然后使用自动的封闭系统(如Quantum?细胞扩增系统)使用无血清培养基(例如无 血清、化学上确定的培养基（如FGM-CD?(X〇nza Group Ltd. ,Basel,Switzerland)))进行扩 增。
[003引细胞外基质材料
[0034] 在本文所述方法的一些变化中，所述PRP组合物和自体细胞组合物可W被补充有 生物相容性细胞外基质化CM)材料。所述ECM材料可W作为支架在施用部位保持或支持自体 细胞。例如，所述ECM材料可W保持或支持如上所述培养并扩增的成纤维细胞。此外，所述 ECM材料可W促进内源性细胞迁移进入施用区域。所述ECM材料可W被注射或局部施加于被 皮肤状况影响的区域，接着施用PRP和自体细胞。备选地，所述PRP组合物或自体细胞组合物 可W与所述ECM材料组合，然后进行施用，例如通过局部施用或通过注射。
[0035] ECM材料可W包含天然的、合成的或半合成的材料，只要其是生物相容性的即可。 示例性的ECM材料包括人羊膜细胞外基质和猪膀脫基质。其它ECM材料可W包括聚合物。合 适的聚合物可W包括但不限于明胶、透明质酸、脱乙酷壳多糖、聚乙醇酸、聚乳酸、聚丙締富 马酸醋、聚乙二醇、W及共聚物及其组合。
[0036] 歷
[0037] 本文所述的方法可W被用于美容上改善皮肤状况，并通常在施用PRP和自体细胞 组合物之前进行微针刺的步骤。但是，有或无自体细胞组合物的PRP也可W被用作微针刺装 置的润滑剂。如前所述，受影响区域的微针刺改善所述组合物进入所述区域的吸收，并增强 组织再生。在一般情况下，用于美容上改善皮肤状况的方法包括W下步骤:1)从受皮肤状况 影响的受试者获得血液样品；2)从所述血液样品制备富血小板血浆组合物;3)制备自体细 胞组合物；W及4)在受所述皮肤状况影响的皮肤区域上进行微针刺操作，接着向受影响的 区域局部施用所述富含血小板组合物和所述自体细胞组合物。在一些变化中，所述自体细 胞组合物包含成纤维细胞。在其它变化中，所述自体细胞组合物包含脂肪细胞。在又一些变 化中，所述自体细胞组合物包含干细胞，例如脂肪来源的间充质细胞。在一些情况下，在所 述自体细胞组合物中包括成纤维细胞和脂肪来源的间充质细胞可能是有用的。
[0038] 微针刺和施用PRP和自体细胞组合物可W每4至6周重复4至6次，但是，其它微针刺 和施用方案可W根据被治疗的皮肤状况和所述状况的严重程度来实施。重复的微针刺和 PRP和自体细胞施用通常可W刺激先前所施用的细胞。在一些情况下，在先前已经施加 PRP 和细胞的组织处经超声、射频或激光装置施加热可能是有益的。例如，可W在稍后的日期施 加热至先前被施用的细胞(在不同口诊中）。可W通过运样的方法改善的皮肤状况包括但不 限于瘦疮瘤痕、创伤性瘤痕、色素过度沉着、细纹、皱纹、拉伸纹和毛发脱落。
[0039] 当PRP组合物被用作载体时，培养的自体细胞可W被悬浮于PRP中，然后被局部施 加于期望区域，例如被皮肤状况影响的区域。在一些变化中，局部施加培养的成纤维细胞已 经被悬浮于其中的PRP组合物可能是有益的。在另一个变化中，局部施加培养的脂肪细胞已 经被悬浮于其中的PRP组合物可能是有益的。备选地，局部施加培养的脂肪来源的间充质细 胞已经被悬浮于其中的PRP组合物可能是有益的。为自体细胞提供支架的细胞外基质材料 还可W被加至所述PRP组合物或自体细胞组合物，或被分开地施加于受影响的区域。
[0040] 当其没有被用作载体时，所述PRP组合物和自体细胞组合物能够被W任何期望的 顺序进行层加。例如，所述富血小板血浆可W被首先施加，接着是所述自体细胞组合物，或 反之亦然。也可W根据需要重复组合物的层加。在一些变化中，在微针刺之前向皮肤施加一 层脂肪细胞或脂肪来源的间充质细胞。在其它变化中，所述脂肪细胞或脂肪来源的间充质 细胞与成纤维细胞组合，然后在微针刺之前层加于所述皮肤上。如上所述，可W通过施用 PRP和一种或多种细胞组合物获得增强的组织再生和改善的皮肤外观。
[0041] 可W在任何层上施用组织封闭剂W帮助将局部施加的PRP和/或自体细胞组合物保持在 所述皮肤内，并因此改善它们的吸收。例如，可W在一层或多层上局部施加 TISSEEL?, 纤维蛋白封闭剂（Baxter International Inc. ,Deerfield,IL)。在其它情况下，将所述 PRP、自体细胞组合物，和/或细胞外基质材料组合并注射进所述皮肤内或所述皮肤下，例如 进入所述表皮、真皮或皮下组织，W改善皮肤状况。
[0042] 所述PRP组合物、自体细胞组合物、组织封闭剂、细胞生长因子和细胞外基质材料 可W被施用至期望美容改善的身体的任何区域。例如，所述组合物和材料可W被施用至面 部、颈部、手等的区域。施用通常会包括通过将所述组合物涂布到所述皮肤上的局部施用， 但也可W包括喷雾施用。
[0043] 在一些情况下，本文所述的组合物被用作填充剂，并被注射进入真皮或皮下组织。 在此组合物的体积可W帮助改善美容外观或治疗皮肤状况。在微针刺和/或PRP的层加和/ 或自体细胞组合物的层加之外还可W进行一种或多种组合物的注射。示例性的用于注射的 组合物可W包括PRP、自体细胞组合物、条件培养基、包含例如人羊膜或猪膀脫的ECM材料、 细胞生长因子或其组合。所述自体细胞组合物可w包含本文所述的任何一种或多种细胞类 型，例如成纤维细胞、脂肪细胞和间充质细胞。在一些变化中，PRP和成纤维细胞、PRP和脂肪 细胞或PRP和脂肪来源的间充质细胞的注射可能是有用的。该方法的其它变化可W包括条 件培养基和成纤维细胞、条件培养基和脂肪细胞或条件培养基和脂肪来源的间充质细胞的 注射。
[0044]当治疗皱纹或深瘦疮瘤痕时，注射可能是有益的。在其中皮肤状况是浅表面部细 纹的一个具体变化中，受影响的区域用醇进行准备并被拉伸得到拉紧的表面。然后用悬浮 于PRP组合物中的成纤维细胞填充注射器并配有用于注射的30-口径的针。将针尽可能浅地 插入皮肤部位;斜角的取向并不严格。通过轻压进行皮内注射直到见到轻微的变白。然后进 行多个系列注射。类似的操作可W用于毛发的复壮。
[004引在又一些变化中，用于改善美容外观或改善皮肤状况的方法设及多方式方法。在 此该方法可W考虑受试者对于组织体积的需要，对深和浅表组织的提升和调色、恢复真皮 和/或恢复表皮的需要。当需要组织体积时，该方法可W包括使用如本文所述的可注射填充 剂、细胞疗法(例如用本文所述的一种或多种自体细胞组合物的层积)和/或施用细胞生长 因子。当需要改善皮肤松弛、肤色和/或面色暗淡时，该方法可W包括W下的任何一种或多 种:用如本文所述的自动装置进行微针刺、细胞疗法(例如用本文所述的一种或多种自体细 胞组合物进行层积）、施用细胞生长因子、射频微针刺、深超声加热和分部分激光 (fractionated laser)。类似地，细纹和法令纹的外观可W通过如本文所述的可注射填充 剂、用如本文所述的自动装置进行微针刺、细胞疗法(例如用本文所述的一种或多种自体细 胞组合物进行层积）、施用细胞生长因子、射频微针刺和/或深超声加热得到改善。用于改善 拉伸纹的方法可W包括细胞疗法（例如用本文所述的一种或多种自体细胞组合物进行层 积）、用如本文所述的自动装置进行微针刺、施用细胞生长因子和/或射频微针刺。在一些变 化中，色素沉着过多能够使用如本文所述的自动微针刺装置和施用细胞生长因子得到改 善。当需要改善瘦疮瘤痕时，该方法可W包括W下的任何一种或多种：用它们的间充质干细 胞进行脂肪移植、皮下切除、细胞疗法(例如用本文所述的一种或多种自体细胞组合物进行 层积）、用如本文所述的自动装置进行微针刺、施用细胞生长因子、射频微针刺和激光表面 重建。当要改善毛发脱落时，该方法可W包括用如本文所述的自动装置进行微针刺、细胞疗 法(例如用本文所述的一种或多种自体细胞组合物进行层积)和施用细胞生长因子。
【主权项】
1. 用于美容上改善皮肤状况的方法，其包括： 从受皮肤状况影响的受试者获得血液样品； 从所述血液样品制备富血小板血浆组合物； 制备自体细胞组合物； 在受所述皮肤状况影响的皮肤区域上进行微针操作，接着向受影响的区域局部施用所 述富含血小板组合物和所述自体细胞组合物。2. 权利要求1所述的方法，其中所述微针操作通过自动微针装置进行，所述自动微针装 置包含被固定于一次性针部上的多个针，以及被可拆卸地固定至所述一次性针部的可重复 使用的手柄。3. 权利要求2所述的方法，其中所述自动微针装置还包含针深度调整机构。4. 权利要求3所述的方法，其中进行所述微针操作包括使用所述深度调整机构调整所 述多个针的深度。 5 ·权利要求4所述的方法，其中所述多个针的深度被调整为在0 · 5mm和2 · 75mm之间。6. 权利要求1所述的方法，其中所述富血小板血浆组合物和自体细胞组合物被混合在 一起并局部施加于受影响的区域。7. 权利要求1所述的方法，其中所述富血小板血浆组合物被施加于受影响的区域，接着 施用所述自体细胞组合物。8. 权利要求7所述的方法，其还包括重复局部施用所述富血小板血浆组合物。9. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物被施加于受影响的区域，接着局部 施用所述富血小板血浆组合物。10. 权利要求1所述的方法，其还包括在所述富血小板血浆组合物或所述自体细胞组合 物上局部施加组织封闭剂。11. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪细胞、脂肪来源的间充 质细胞、软骨细胞、成纤维细胞、角质细胞、干细胞或其组合。12. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含成纤维细胞。13. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪细胞。14. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪来源的间充质细胞。15. 权利要求1所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含成纤维细胞，以及脂肪细胞 或脂肪来源的间充质细胞。16. 权利要求1所述的方法，其还包括向受影响的区域施加生物相容性细胞外基质材 料。17. 权利要求16所述的方法，其中所述生物相容性细胞外基质材料包含人羊膜组织基 质。18. 权利要求16所述的方法，其中所述生物相容性细胞外基质材料包含猪膀胱基质。19. 权利要求1所述的方法，其还包括在所述微针操作之前向所述皮肤区域施加润滑 剂。20. 权利要求19所述的方法，其中所述润滑剂包含富血小板血浆、脂肪细胞、脂肪来源 的间充质细胞或其组合。21. 权利要求1所述的方法，其中所述皮肤状况选自包含痤疮疤痕、创伤性疤痕、色素沉 着过多、细纹、皱纹、拉伸纹和毛发生长的组。22. 权利要求1所述的方法，其还包括注射自体细胞组合物进入所述受影响的区域。23. 权利要求22所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪细胞、脂肪来源的间充 质细胞、软骨细胞、成纤维细胞、角质细胞、干细胞或其组合。24. 权利要求22所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含成纤维细胞。25. 权利要求22所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪细胞。26. 权利要求22所述的方法，其中所述自体细胞组合物包含脂肪来源的间充质细胞。
【文档编号】A61K35/36GK106029102SQ201580000198
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2015年1月15日
【发明人】小威廉·K·博斯
【申请人】小威廉·K·博斯