一种抗心肌纤维化的中药组合物的制作方法

本发明属于中药领域，更具体地涉及一种抗心肌纤维化的中药组合物。

背景技术：

心肌纤维化是指在各种致病因素(炎症、缺血、缺氧等)作用下，心肌的正常组织结构中胶原纤维过量积聚，心脏组织中胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变。心肌纤维化是多种心血管疾病进展中的一个重要病理改变，最终结果是导致心肌重构，心肌发生僵硬、心室舒张功能下降、冠状动脉的储量降低，甚至有可能直接导致猝死的发生。因此防治心肌纤维化具有重要意义。

根据临床特点，心肌纤维化属于中医学“心悸”、“心胀”、“胸痹”等范畴，中医病机总属本虚标实，本虚为阳气亏虚，标实为痰浊、瘀血，即认为瘀血、痰浊与心肌纤维化密切相关。因此，在中药抗心肌纤维化方面，主要以益气活血和活血化痰为主。目前已有一些中药制剂应用于心肌纤维化治疗，如单方中药：丹参、苦参碱；复方中药：通心络、保心降压康、温胆汤、麝香保心丸等。

复方中药是中医药预防疾病的重要形式，能发挥中医辨证优势，病证结合，具有多向调节的作用，然而复方中药往往成分多样复杂，如何寻求有效的精简药方，提高药效，对于抗心肌纤维化中药制剂的制备及治疗成本缩减都非常有益。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种抗心肌纤维化的中药组合物。

本发明所采取的技术方案是：

一种抗心肌纤维化的中药组合物，其活性成分的原料药为桃仁、红花、赤芍、川芎、牛膝。

所述原料药的质量比为：桃仁8～15、红花5～13、赤芍3～10、川芎2～8、牛膝7～13。

优选的，所述原料药的质量比为：桃仁10～14、红花7～11、赤芍4～8、川芎3～6、牛膝8～12。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁11、红花10、赤芍7、川芎5、牛膝9。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁12、红花9、赤芍6、川芎4.5、牛膝10。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁13、红花8、赤芍5、川芎4、牛膝11。

优选的，所述牛膝为川牛膝。

所述活性成分为原料药的醇提物或水提物。

本发明的有益效果是：

与现有技术相比，本发明的抗心肌纤维化的中药组合物具有如下优点和进步：

（1）本发明中药组合物的抗心肌纤维化效果更佳：体内实验结果表明，本发明中药组合物能改善心肌纤维化大鼠的射血分数、短轴缩短率效果最佳，治疗效果优于血府逐瘀汤以及卡托普利；体外实验结果表明，本发明中药组合物能够通过抑制心肌纤维细胞Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA的表达而发挥抗心肌纤维化的作用，其抗心肌纤维化效果优于血府逐瘀汤，与西药卡托普利相当；

(2)本发明中药组合物的组分相对其他复方中药，具有药味少、疗效专一可靠、主要药性成分明确的优点，可以减少中药复方制剂中的非药效因素, 提高制剂疗效水平。

附图说明

图1：各组大鼠左室射血分数【图中，^###表示P < 0.01 vs.Con，^*表示P < 0.05 vs.ISO，^**表示P < 0.01 vs. ISO，^*** 表示P < 0.001 vs. ISO】；

图2：各组大鼠左室短轴缩短率【图中，^###表示P < 0.01 vs.Con，^*表示P < 0.05 vs.ISO，^**表示P < 0.01 vs. ISO，^***表示P < 0.001 vs. ISO】；

图3：RT-QPCR检测心肌成纤维细胞中ColⅠ（图A）、ColⅢ（图B）、α-SMA（图C）的mRNA的表达情况【图中，^###表示P < 0.01 vs.Con，^*表示P < 0.05 vs.TGF-β₁，^**表示P < 0.01 vs.TGF-β₁， ^***表示P < 0.001 vs.TGF-β₁】；

图4：Western blot检测心肌成纤维细胞中ColⅠ（图A）、ColⅢ（图B）、α-SMA（图C）蛋白的表达情况【图中，^###表示P < 0.01 vs.Control，^*表示P < 0.05 vs.TGF-β₁，^**表示P < 0.01 vs.TGF-β₁，^***表示P < 0.001 vs.TGF-β₁】。

具体实施方式

一种抗心肌纤维化的中药组合物，其活性成分的原料药为桃仁、红花、赤芍、川芎、牛膝。

所述原料药的质量比为：桃仁8～15、红花5～13、赤芍3～10、川芎2～8、牛膝7～13。

优选的，所述原料药的质量比为：桃仁10～14、红花7～11、赤芍4～8、川芎3～6、牛膝8～12。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁11、红花10、赤芍7、川芎5、牛膝9。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁12、红花9、赤芍6、川芎4.5、牛膝10。

进一步优选的，所述原料药的质量比为：桃仁13、红花8、赤芍5、川芎4、牛膝11。

发明人立足于中医“久病入络，久病必瘀“”、“菀陈则除之者，去恶血也”等辨证论治理论, 并根据中药配伍七情之“相须”原则，巧妙地将多种性能功效相类似的药物配伍使用。以通为治，把具有活血化瘀功效的桃仁、红花、赤芍搭配活血通经功效的川芎、牛膝，大大增强了药方的作用效力并使治疗功效更为专一，最终制成了治疗心肌纤维化的化瘀中药制剂。

方中，桃仁、红花和赤芍可以活血化瘀，川芎用于活血通经止痛，牛膝能使瘀血范围变小并通过经络引导瘀血下行，五味药共同作用能有效改善心肌纤维化的瘀血状态。

桃仁：苦、甘、平，归心、活血祛瘀，润肠通便，止咳平喘，为蔷薇科植物桃或山桃的干燥成熟种子。

红花：辛、温，活血通经，去瘀止痛，为干燥的管状花，可与川芎、丹参等同用于冠心病，可与桃仁、乳香、没药等同用于跌打损伤瘀血肿痛，瘀血肋痛，痈肿及吐血而有瘀滞者。

川芎：辛、温，昔人谓川芎为血中之气药，殆言其寓辛散、解郁、通达、止痛等功能，为伞形科植物川芎的干燥根茎。

赤芍：苦、微寒，清热凉血，活血祛瘀，可与生地黄、大黄、白茅根等同用于血热吐衄；可与金银花、天花粉、乳香等同用于热毒壅盛，痈肿疮疡；可与当归、川芎、延胡索等同用于血滞经闭、痛经、症瘕腹痛等症；为毛茛科植物赤芍或川赤芍的干燥根。

牛膝：苦、甘、酸，平，逐瘀通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行，为植物的干燥根；方中牛膝优选为川牛膝。

抗心肌纤维化的中药组合物的活性成分为方中原料药的醇提物或水提物。

本发明适用于：抗心肌纤维化。

妇女经期、出血无瘀者禁用，孕妇慎用或禁用。

下面结合实例，进一步说明本发明。

实施例1

一种抗心肌纤维化的中药组合物，其活性成分的原料药的重量比为：桃仁11、红花10、赤芍7、川芎5、川牛膝9，其水煎剂制备方法如下：

1）取桃仁11g、红花10 g、赤芍7 g、川芎5 g、川牛膝9 g，放入500 mL烧杯中，加400 mL蒸馏水浸泡30min；

2）置于加热炉上加热，水煮沸后保持微沸状态，持续40min后将液体倒出，得到药液A；

3）在原药渣中加300mL蒸馏水，后置于加热炉上煮沸并保持微沸状态30min得到药液B；

4）合并药液A和B，过滤去渣，浓缩至50mL，4℃保存备用。

实施例2

一种抗心肌纤维化的中药组合物，有效成分的中药重量比为：桃仁12、红花9、赤芍6、川芎4.5、川牛膝10，其水煎剂的制备方法如下：

1）取桃仁12g、红花9g、赤芍6g、川芎4.5g、川牛膝10g，放入500 mL烧杯中，加400 mL蒸馏水浸泡30min；

2）置于加热炉上加热，水煮沸后保持微沸状态，持续40min后将液体倒出，得到药液A；

3）在原药渣中加300mL蒸馏水，后置于加热炉上煮沸并保持微沸状态30min得到药液B；

4）合并药液A和B，过滤去渣，浓缩至50mL，4℃保存备用。

实施例3

一种抗心肌纤维化的中药组合物，有效成分的中药重量比为：桃仁13、红花8、赤芍5、川芎4、牛膝11，其醇提剂制备方法如下：

1）取桃仁13g、红花8、赤芍5g、川芎4g、川牛膝11g，粉碎；

2）置于圆底烧瓶中，加入甲醇质量浓度为50%的甲醇水溶液200mL，加热回流1h，放冷；

3）再置于超声水浴装置中，超声功率为600W，频率40KHz，温度为50℃，超声处理60min，放冷；

4）取上清液，3000r/min离心15min，过滤得滤液。

实验例1

1、实验动物及分组

正常雄性SD大鼠30只，体重200～250g，清洁级，由南方医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分成5组，每组6只，组别及具体喂药情况如下：

对照组：简称Con，正常雄性SD大鼠，喂0.9%生理盐水；

模型组：简称ISO，心肌纤维化大鼠，喂0.9%生理盐水；

化瘀试验组：简称HY，心肌纤维化大鼠，按8.28g生药/kg/d的剂量喂实施例2水煎剂；

血府逐瘀汤组：简称XFZY，心肌纤维化大鼠，按16.38g生药/kg/d的剂量喂血府逐瘀汤水煎剂，作为中药阳性对照；血府逐瘀汤配方为当归10g、地黄10g、桃仁10g、红花10g、枳壳6g、赤芍10g、柴胡6g、甘草3g、桔梗10g、川芎6g、牛膝10g。

卡托普利组：简称Carp，心肌纤维化大鼠，按13.5mg/kg/d的剂量喂卡托普利，作为西药阳性对照。

以上剂量是按照体表面积换算法换算得到的大鼠用药量，转换比值参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》，以保证上述三种药剂达其最佳药效。

所有药物于实验前按1mL/100g体重配成溶液，等体积灌胃给药，标准饲料，自由饮水，连续5周。

2、ISO诱导心肌纤维化大鼠模型

ISO诱导心肌纤维化大鼠模型的建立方法为：皮下注射盐酸异丙肾上腺素（Isoprenaline，ISO），注射量为5mg/kg/d，连续注射7天。

3、心脏功能检测方法及结果

灌胃给药5周后，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠后，于左胸上至锁骨下至肋骨下缘处备皮。M型超声心动图选取心脏长轴切面，检测大鼠的左室射血分数（ejection fraction，EF）以及左室短轴缩短率（fractional shortening，FS）。心肌纤维化病变会造成心脏左室收缩功能的下降，而EF和FS是临床上判断左室收缩能力的首选指标，因此可以用于评价心肌纤维化的病变程度。

各组大鼠EF和ES分别如图1和图2所示，ISO组EF、FS明显降低，说明心肌纤维化大鼠模型构建成功，化瘀试验组、血府逐瘀汤组以及卡托普利组治疗后能明显改善心肌纤维化大鼠的EF、FS（P<0.001）。其中。化瘀试验组的EF、FS最大，效果最佳，说明本发明的中药组合物具有良好的抗心肌纤维化效果，并且治疗效果优于血府逐瘀汤以及卡托普利。

实验例2

TGF-β1作为细胞外间质的重要调节因子，具有刺激心肌成纤维细胞增殖、诱导其表型的转变、促进细胞外基质沉积、抑制胶原酶降解等效应，是目前最重要的促心肌纤维化的细胞因子之一。TGF-β1能促进心肌成纤维细胞增殖，诱导心肌成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。在心肌纤维化过程中与TGF-β1相关的各型Smads蛋白分子通过相互之间的精密协调作用共同完成生理及病理状态下TGF-β1的生物学效应。α-SMA蛋白分子受到抑制后将降低细胞合成胶原的能力，抑制胶原蛋白，Col Ⅰ、Col Ⅲ分泌减少，心肌纤维化得到逆转。

设计实验5组，组别及具体处理情况如下：

对照组：简称Con，心肌成纤维细胞；

模型组：简称TGF-β1，心肌成纤维细胞，5 ng/mL TGF-β1诱导24h处理；

化瘀试验组：简称HY，心肌成纤维细胞，5 ng/mL TGF-β1诱导24h处理后，加入药物浓度相当于生药25mg/mL的实施例2水煎剂处理24h。

血府逐瘀汤组：简称XFZY，心肌成纤维细胞，5 ng/mL TGF-β1诱导24h处理后，加入药物浓度相当于生药25mg/mL的血府逐瘀汤水煎剂处理24h，作为中药阳性对照；血府逐瘀汤配方为当归10g、地黄10g、桃仁10g、红花10g、枳壳6g、赤芍10g、柴胡6g、甘草3g、桔梗10g、川芎6g、牛膝10g。

卡托普利组：简称Carp，心肌成纤维细胞，5 ng/mL TGF-β1诱导24h处理后，加入20ng/L卡托普利处理24h，作为西药阳性对照。

保证上述三种药剂的有效成分含量相当，所有药物处理24h后，RT-QPCR法检测细胞中Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA mRNA的表达情况，Western blot法检测细胞中Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA的蛋白表达情况。

各组细胞中Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA mRNA的表达结果如图3所示，蛋白表达结果如图4所示，与对照组比较，TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞中，Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA的mRNA和蛋白的表达水平均显著升高，经化瘀试验组干预后，Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平显著下降，说明本发明的中药组合物能够抑制Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA的表达而发挥抗心肌纤维化的作用，其抗心肌纤维化效果优于血府逐瘀汤，与西药卡托普利相当。