囊泡的简便制备方法及其在药物缓/控释中的应用与流程

本发明涉及生物载体领域，尤其涉及一种囊泡的简便制备方法及其在药物缓/控释中的应用。
背景技术：
：囊泡有较强的增溶能力，其双层膜具有较好的牢固性和稳定性，作为药物载体给药途径较广，载药稳定性、药物增溶量以及药物生物利用度较高。近十多年来囊泡作为药物载体已有注射剂、口服悬浮液或乳剂、滴眼液、滴鼻液及外用剂型等许多报道，大多仍处于动物试验阶段，也有一些临床观察报告。非离子表面活性剂囊泡是一种有效的药物输送载体，它能大大提高药物疗效，降低药物毒副作用，又能缓慢缓慢释放药物，改变药物的体内动力学，同时还具有靶向性能。目前，有关磁性囊泡的制备主要基于磁性纳米颗粒的参杂，这种方法制备相对复杂，而且纳米颗粒毒性未知，用于载药存在潜在风险。现在FDA已经通过的作为药物载体的囊泡一般都是由脂质体制备，脂质体制备囊泡一般方法较为复杂，需经过有机溶剂溶解、旋蒸成膜、超声、冻融、挤压等过程。复杂的过程使得囊泡的制备时间长,成本高,因此,提供一种简便的囊泡制备方法同时保证囊泡的优异的药物缓/控释能力至关重要。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种囊泡的简便制备方法及其在药物缓/控释中的应用,制备过程简化，制备成本低，并且能够同时保持较好的药物缓/控释能力。本发明的技术方案是：一种囊泡的简便制备方法，包括如下步骤，将两亲脂肽溶解在PBS缓冲液中，静置，将静置后的溶液通过注射器挤压通过滤膜数次，即制得囊泡。优选的，所述的两亲脂肽含有极性氨基酸作为头基且含有长烷基链作为尾链。其中，所述极性氨基酸为丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸或天冬氨酸；所述长烷基链为油酸的烷基链。优选的，所述的两亲脂肽为油酸(OA)与丝氨酸(S)分子的化合物，分子式如式1所示，优选的，所述的两亲脂肽为如下化合物，分子是如式2、式3、式4所示：OATT式2；OAYY式3；OADD式4。优选的，将两亲脂肽溶解在PBS缓冲液中，两亲脂肽在PBS缓冲液中的浓度为1-4mg/ml。优选的，静置的时间为24-48h。优选的，将溶液通过注射器挤压通过的滤膜孔径为100nm，经过滤膜反复挤压40次，即制得囊泡。本发明另一方面还提供了上述制备方法制备得到的囊泡及其在药物缓/控释中的应用，所述的囊泡通过包封药物进行药物的缓/控释。相比于现有技术，本发明的有益效果在于：1、本发明的简便制备方法与传统方法相比，省去了众多复杂的步骤，不需要有机溶剂的溶解、旋蒸和冻融等过程就可以制备出尺寸较为均一的囊泡，步骤简单，制备效率高；2、本发明的简便制备方法能够快速为药物提供载体，同时囊泡的药物缓/控释能力比脂质体囊泡的缓/控释能力更好，是潜在的替代脂质体囊泡的一类生物材料。附图说明图1为本发明实施例1制备的囊泡电镜照片；图2为本发明实施例1制备的囊泡与脂质体囊泡药物释放曲线。具体实施方式下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明实施例提供了一种囊泡的简便制备方法，包括如下步骤，将两亲脂肽溶解在PBS缓冲液中，静置，将静置后的溶液通过注射器挤压通过滤膜数次，即制得囊泡。在上述步骤中，所述的脂肽含有脂质与氨基酸的化合物或复合体并且脂肽分子具有两亲性，两亲脂肽分子溶解在PBS缓冲液即磷酸缓冲盐溶液中，溶解过程中，难以溶解时可采用超声处理促进溶解，溶解后通过静置使其充分组装成为双分子膜，然后即可挤囊泡，将静置后的溶液通过注射器挤压通过滤膜，经过滤膜反复挤压数次上述静置后的自组装双分子膜即可形成囊泡，通过控制挤压的次数可以控制囊泡的尺寸。在本发明的一优选实施例中，所述的两亲脂肽含有极性氨基酸作为头基且含有长烷基链作为尾链。其中，所述极性氨基酸为丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸或天冬氨酸；所述长烷基链为油酸的烷基链。作为优选的实施例，所述的两亲脂肽为油酸(OA)与丝氨酸(S)分子的化合物，分子式如式1所示，作为优选的实施例，所述的两亲脂肽为如下化合物，分子是如式2、式3、式4所示：两亲脂肽为油酸(OA)与苏氨酸(T)的化合物：OATT式2；两亲脂肽为油酸(OA)与酪氨酸(Y)的化合物：OAYY式3；两亲脂肽为油酸(OA)与天冬氨酸(D)的化合物：OADD式4。在本发明的一优选实施例中，将两亲脂肽溶解在PBS缓冲液中，两亲脂肽在PBS缓冲液中的浓度为1-4mg/ml，具体的，浓度可以为1mg/ml，1.5mg/ml，2mg/ml，2.5mg/ml，3mg/ml，3.5mg/ml，4mg/ml。两亲脂肽PBS缓冲液中浓度低时形成的囊泡较小，作为最优选的实施例，浓度在4mg/ml时形成的囊泡数量多，大小均一。另外可以理解的是溶解过程中，为了促进溶解，可以采取本领域常见的促进溶解的措施，例如机械搅拌、超声溶解等等。在本发明的一优选实施例中，静置的时间为24-48h。静置是为了促使两亲脂肽分子自组装形成双分子膜，静置时间过短，双分子膜形成不完全，静置时间过长不利于双分子膜形成囊泡。在本发明的一优选实施例中，将溶液通过注射器挤压通过的滤膜孔径为100nm，经过滤膜反复挤压40次，即制得囊泡。可以理解的是，溶液也可通过其他孔径的滤膜进行挤压得到囊泡。在挤压的次数上，次数少形成的囊泡数量少囊泡较大，挤压次数多形成的囊泡数量多但是囊泡直径比较小，具体的挤压次数可以根据囊泡数量和囊泡直径的需要进行调整。本发明一实施例还提供了上述简便制备方法制备得到的囊泡及其在药物缓/控释中的应用。上述简便制备方法能够在简化步骤的前提下，高效率低成本的制备囊泡，同时保证囊泡的高缓/控释能力。为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的囊泡的简便制备方法及其在药物缓/控释中的应用方法，以下将结合具体实施例进行说明。实施例1囊泡制备：首先称取4mgOASS粉末溶于1mLPBS缓冲液中，超声20分钟使其充分溶解，将溶液静置24-48h，使其自组装形成双分子膜；；使用注射器将静置后的溶液挤压通过100nm孔径滤膜，溶液通过40次左右，可基本形成大量囊泡。(1)、囊泡低温透射电子显微镜照片：Cryo-TEM测定方法为：采用低温投射电子显微镜对溶液的形貌进行观察，样品的制备是在一个环境控制系统内(CEVS)，温度为25℃。用镊子夹住铜网插入到制样系统内，用移液枪移取约5μL样品溶液滴到铜网上，通过两侧的滤纸拍打几秒吸去多余的溶液制得一层薄膜，随后迅速插入到液氮冷却的液态乙烷中。冷冻后的样品储存在液氮中，通过Gatan626样品杆(通过液氮冷却)传输到透射电镜中(JEOLJEM-1400TEMPlus)观察，操作电压为120kV。整个操作都在液氮环境中进行。图像通过GatanmultiscanCCD进行记录。Cryo-TEM的结果参见图1，图1说明形成的囊泡数量多，且粒径在150～300nm左右。(2)、囊泡药物包封率：药物包封方法：将4mgOASS溶于阿霉素(DOX)的pH4.0的PBS缓冲溶液1mL中制备囊泡，然后将pH调至7.4，制成DOX-囊泡溶液。包封率测定：使用紫外法测定药物包封率，首先绘制药物分子标准曲线，精确配制浓度分别为0.8、1.6、2.4、3.2、4.0微克/毫升的阿霉素(DOX)溶液，在480nm处测定吸收度，以浓度为横坐标吸光度为纵坐标绘制标准曲线；其次将DOX-囊泡溶液4度透析，尽量将囊泡外DOX分子透析完全，紫外检测透析的外液浓度。具体结果参见下表1。表1囊泡包封率药脂比1:4001:501:10DPPC:DOC＝1：400包封率(EE)0.64670.77220.82910.7427通过表1可以看出，本发明的简便制备方法制备得到的囊泡平均包封率与脂质体囊泡具有相近的药物包封能力。(3)、药物缓释作用：药物缓释实验方法：将4mgOASS溶于DOX的pH4.0的PBS缓冲溶液1mL中制备囊泡，然后将pH调至7.4。将溶液装在透析袋中，透析袋放入PBS溶液中，考察不同时间(0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20小时)药物透析出半透膜的量，做出释放曲线，参见图2。通过图2可以看出，本发明的制备方法制备的囊泡具有比脂质体囊泡更好的缓释效果。能够在长达20小时内缓慢释放药物，脂质体囊泡在10小时之内基本释放完全。实施例2：两亲脂肽为油酸(OA)与苏氨酸(T)的化合物，分子式如下：OATT式2囊泡制备：首先称取1mgOATT粉末溶于1mLPBS缓冲液中，超声20分钟使其充分溶解，将溶液静置24-48h，使其自组装形成双分子膜；；使用注射器将静置后的溶液挤压通过100nm孔径滤膜，溶液通过38次左右，可基本形成大量囊泡。实施例3：两亲脂肽为油酸(OA)与酪氨酸(Y)的化合物，分子式如下：OAYY式3囊泡制备：首先称取2mgOAYY粉末溶于1mLPBS缓冲液中，超声20分钟使其充分溶解，将溶液静置24-48h，使其自组装形成双分子膜；；使用注射器将静置后的溶液挤压通过100nm孔径滤膜，溶液通过42次左右，可基本形成大量囊泡。实施例4：两亲脂肽为油酸(OA)与天冬氨酸(D)的化合物，分子式如下：OADD式4囊泡制备：首先称取3mgOADD粉末溶于1mLPBS缓冲液中，超声20分钟使其充分溶解，将溶液静置24-48h，使其自组装形成双分子膜；；使用注射器将静置后的溶液挤压通过100nm孔径滤膜，溶液通过40次左右，可基本形成大量囊泡。当前第1页1 2 3