本发明涉及一种具有防癌抗癌功效的组合物及其制备方法，具体涉及松花粉、虫草组合物及其制备方法。
背景技术：
由于社会、环境、生活等多种因素的综合作用，癌症已成为导致死亡的首位病因，严重威胁人民的健康。中医药在防癌抗癌、减少放化疗质量等方面一直被认为具有肯定的疗效，在攻克癌症方面被寄予很大希望。
中药具有“天然组合化学库”之称，作用机制可能是“多靶作用”，即多种成分以低于它们某一单体治疗剂量进入人体后，有选择地反复作用于某种疾病的多个直接靶点(治标)和间接靶点(治本)，从而达到治疗疾病的目的。中医药与手术、放疗、化疗等局部杀灭方法最大的不同是强调整体调节，充分调动机体的防御及免疫监视机制，发挥多层次、多环节、多靶点的综合调节作用，从整体调节机体脏腑、经络、阴阳、气血功能，做到“正气内守”，通过自身调节，“泻其有余，补其不足”，达到“阴阳平复”。此外，中药的不良反应相对小，无骨髓毒性，在用药上可保持一定的连续性，在抑制肿瘤血管生成，防止和控制肿瘤转移方面有较大优势。
松花粉，为松科植物马尾松Pinus massoniana Lamb.、油松Pinus tabuli formis Carr.或同属数种植物的干燥花粉。松花粉含有多种营养物质，包括22种氨基酸、14种维生素和30多种微量元素以及大量的活性蛋白酶、核、黄酮类化合物及其它活性物质。研究表明松花粉具有一定抗癌功效。国内外学者对花粉的抗癌作用机理归纳为以下几个方面：1.增强免疫功能的作用。肿瘤是人体正常细胞异常突变的结果。癌症发生的根本原因是人体免疫功能失调，癌变的细胞逃脱了免疫监视，在体内迅速分裂增殖，形成恶性肿瘤。而花粉含有增强免疫活性的特殊蛋白质——免疫促进因子，可以使机体中T淋巴细胞和巨噬细胞增加，免疫球蛋白A，免疫球蛋白G，免疫球蛋白M明显升高，提高细胞免疫和体液免疫功能，因而能起到抗癌的作用。2.花粉是天然维生素的浓缩物，种类多，而且含量丰富，其中有很多维生素有抗癌作用。3.目前已知花粉中含有数十种微量元素，而且含量丰富，其中有些微量元素有抗癌作用。4.花粉中多种酶的作用。日本学者中岛忠臣认为，高龄癌症患者多，是因为老年人体内含酶少的原因。研究表明，酶有分解致癌物质亚硝胺的作用，抑制亚硝胺在人体内的合成，并能提高人体内巨噬细胞的活性增强其免疫力和抗癌能力。花粉中含有100多种酶，特别是所含超氧化物歧化酶，是自由基的重要清除剂，因而可以抗衰老和抑制癌症。5.花粉中黄酮类的作用。黄酮类化合物有抗癌作用，其机理是：抗氧化作用；分解和破坏致癌物的毒性，在抗癌过程中起“阻断剂”作用；能使肿瘤细胞分化逆转，从而抑制肿瘤发生；抑制肿瘤组织(瘤体)血流量供应其所需营养。6.花粉中多糖的作用。
虫草，又名冬虫夏草，可以增强机体的免疫力，滋补肺肾，对肺癌、肝癌等有明显的抑制作用。虫草有抗癌和抗肿瘤作用是由虫草中的特殊物质-----虫草素和虫草多糖两种物质交叉配合起作用。虫草素(Cordycepin)，即3-脱氮腺苷，是迄今为止发现的唯一的天然核甘类抗生素，也是自然界相对富集的天然抗癌抗生素，有抗病毒、抗肿瘤作用。虫草多糖是一种结构复杂的高分子化合物，具有明显的抗肿瘤作用，也是理想的免疫增强剂。因其有多种生物活性且无毒副作用，越来越引起人们的关注，虫草多糖是人工虫草的主要有效成分，其特点是生物活性强，适用面广，可用于恶性肿瘤以及减轻肿瘤放疗和化疗后的毒副作用等。
目前已有一些松花粉、虫草制品被用于防癌抗癌的辅助治疗中，但其疗效尚有待进一步提高。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有防癌抗癌功效的组合物及其制备方法。
为实现上述目的，本发明包括如下技术方案：
一种具有防癌抗癌功效的松花粉虫草组合物，其是由松花粉提取物和虫草提取物和铁皮石斛提取物为有效组分以及在药品和食品中允许使用的辅助添加成分组成；其中，松花粉提取物，2～15重量份；虫草提取物，5～25重量份，铁皮石斛提取物3～12重量份。
如上所述的组合物，优选地，所述松花粉提取物，5～15重量份；虫草提取物，5～20重量份，铁皮石斛提取物4～8重量份。
如上所述的组合物，优选地，所述松花粉提取物，5重量份；虫草提取物，15重量份；铁皮石斛提取物5重量份。
如上所述的组合物，优选地，
所述松花粉提取物的制备方法如下：将松花粉和水按料液比1∶(10-500)(g/ml)，在50～100℃下加热提取20～120分钟；重复提取1-3次，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得松花粉提取物；
所述虫草提取物的制备方法如下：将虫草粉和水按料液比1∶(5-500)(g/ml)，在50～100℃下加热提取20～120分钟；重复提取1-3次，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得虫草提取物；
所述铁皮石斛提取物的制备方法如下：铁皮石斛粗碎至0.5cm-1.0cm左右长短，加水15-50倍量，在50℃～95℃下浸提1～5小时；重复提取1～3次，合并滤液，过滤，浓缩干燥，得铁皮石斛提取物。
如上所述的组合物，优选地，
所述松花粉提取物的制备方法如下：将松花粉和水按料液比1∶500(g/ml)，在85℃下加热提取两次，第一次70分钟，第二次提取50分钟，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得松花粉提取物；
所述虫草提取物的制备方法如下：将虫草粉和水按料液比1∶400(g∶ml)，在90℃下加热提取两次，第一次80分钟，第二次提取50分钟，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得虫草提取物；
所述铁皮石斛提取物的制备方法如下：铁皮石斛粗碎至0.8cm左右长短，加45倍量水，提取两次，第一次在85℃下浸提2小时，第二次在70℃下浸提1.5小时，合并滤液，过滤，浓缩干燥，得铁皮石斛提取物。
如上所述的组合物，优选地，所述辅料选自木糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇、异麦芽酮糖、甘露醇、淀粉、糊精、微晶纤维素、乳糖、羟丙甲基纤维素、硬脂酸镁中的一种或几种。
另一方面，本发明提供如上所述组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
取所述有效组分与0.5-4倍有效组分重量的辅料均匀混合；加入75-95％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在35-75℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
另一方面，本发明提供如上所述的组合物在制备具有防癌抗癌功效的保健食品和药品中的应用。
如上所述的应用，优选地，所述防癌抗癌功效为对于人乳腺癌细胞的抑制作用。
如上所述的应用，优选地，所述的组合物以松花粉和虫草总量计，口服剂量为3-20g/天。
本发明的有益效果在于：本发明的具有防癌抗癌功效的组合物选用松花粉、虫草和铁皮石斛经合理配伍而成，各组分协同作用，其防癌抗癌功效显著高于单味药物。应用本发明的组合物对人乳腺癌细胞MCF-7细胞进行了生存抑制作用实验，实验表明，本发明组合物可以明显抑制细胞MCF-7细胞存活，抑制效果远高于单方样品，说明该组合物具有较佳的防癌抗癌功效。
附图说明
图1为松花粉-虫草提取物组合物对MCF-7细胞的抑制作用示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中各提取物的制备方法如下：
所述松花粉提取物：将松花粉和水按料液比1∶500(g/ml)，在85℃下加热提取两次，第一次70分钟，第二次提取50分钟，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得松花粉提取物；
所述虫草提取物：将虫草粉和水按料液比1∶400(g∶ml)，在90℃下加热提取两次，第一次80分钟，第二次提取50分钟，合并提取液，过滤，浓缩干燥，得虫草提取物；
所述铁皮石斛提取物：铁皮石斛粗碎至0.8cm左右长短，加45倍量水，提取两次，第一次在85℃下浸提2小时，第二次在70℃下浸提1.5小时，合并滤液，过滤，浓缩干燥，得铁皮石斛提取物。
实施例1：具有防癌抗癌功效的松花粉虫草组合物(一)
(1)原料组成：松花粉提取物1重量份，虫草提取物3重量份，铁皮石斛提取物1重量份；
辅料：麦芽糊精，2.5重量份。
(2)制备步骤：取原料和辅料均匀混合；加入90％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在50℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
实施例2：具有防癌抗癌功效的松花粉虫草组合物(二)
(1)原料组成：松花粉提取物2重量份，虫草提取物1重量份，铁皮石斛提取物1重量份；
辅料：麦芽糊精2重量份。
(2)制备步骤：取原料和辅料均匀混合；加入90％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在50℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
实施例3：具有防癌抗癌功效的松花粉虫草组合物(三)
(1)原料组成：松花粉提取物3重量份，虫草提取物1重量份，铁皮石斛提取物1重量份；
辅料：麦芽糊精，2.5重量份。
(2)制备步骤：取原料和辅料均匀混合；加入90％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在50℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
实施例4具有防癌抗癌功效的松花粉虫草组合物(四)
(1)原料组成：松花粉提取物1重量份，虫草提取物1重量份，铁皮石斛提取物1重量份；
辅料：麦芽糊精，1.5重量份。
(2)制备步骤：取原料和辅料均匀混合；加入90％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在50℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
比较例1
(1)原料组成：松花粉提取物1重量份，虫草提取物2重量份，铁皮石斛提取物1重量份；
辅料：麦芽糊精，2重量份。
(2)制备步骤：取原料和辅料均匀混合；加入90％的乙醇溶液做润湿剂制软材，过筛制粒；湿颗粒在50℃下通风干燥；过筛整粒，即得。
实验例1松花粉虫草组合物抗癌细胞实验
1、实验目的
本实验通过MTT实验，测定松花粉虫草组合物等3个配方样品对MCF-7细胞存活率的影响，研究样品对人乳腺癌细胞MCF-7细胞生存的抑制作用。
2、材料与试剂
2.1实验材料
MCF-7细胞：购自上海细胞库
松花粉提取物、虫草提取物：由新时代健康产业(集团)有限公司提供
2.2实验试剂
3、仪器与设备
4、提取物溶液的配制
4.1松花粉提取物溶液
称取20mg松花粉提取物，加入培养液溶至10mL，得到松花粉提取物浓度为2mg/mL。超声10min后，4000r/min离心10min，取上清，0.22μm滤膜过滤。取1mL松花粉提取物，加入9mL培养液，得终浓度为200μg/mL。
4.2虫草提取物溶液
称取20mg虫草提取物，加入培养液溶至10mL，得到虫草提取物浓度为2mg/mL。超声10min后，4000r/min离心10min，取上清，0.22μm滤膜过滤。取1mL虫草提取物，加入9mL培养液，得终浓度为200μg/mL。
4.3铁皮石斛提取物溶液
称取20mg虫草提取物，加入培养液溶至10mL，得到虫草提取物浓度为2mg/mL。超声10min后，4000r/min离心10min，取上清，0.22μm滤膜过滤。取1mL虫草提取物，加入9mL培养液，得终浓度为200μg/mL。
将各原料提取物溶液按照实施例1-4和比较例1的复配比例混合，待用。
对照组：细胞只用含胎牛血清的DMEM培养液处理，不用任何提取物处理。
5、方法步骤
选取对数生长期的不同细胞，以1×105个/mL接种于96孔板中，每孔100μL。待细胞培养12h后，加入不同浓度的物质，每孔100μL，每个浓度设置6个平行。对照组加入等体积的培养液，置于37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中孵育12h、24h、48h。培养结束后，小心吸出原培养液，每孔加入20μL 5mg/mL MTT，孵育4h。4h后，小心吸出上清培养液，每孔加入150μLDMSO，震荡10min。使用酶标仪，以490nm为实验波长，630nm为参比波长，测定吸光值。
6、实验结果
松花粉-虫草提取物组合物对MCF-7细胞的抑制作用(48h)如图1所示，MCF-7细胞经不同比例松花粉-虫草提取物复方处理48h后，各剂量组细胞存活率下降，与对照组相比，松花粉、虫草松单方组抑制率分别为7.6％和7.5％；实施例1的作用效果最佳，抑制率为34.78％，实施例2-4的抑制率与单方比较均有显著提高，分别为32.8％、25％和20.8％。