一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及中药领域，具体涉及一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术：

溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)又称溃疡性非特异性溃疡性结肠炎，是一种病因尚未明确，主要侵犯直肠和结肠粘膜层、枯膜下层，范围多自远端结肠开始，逆行向近端发展，甚至累及全结肠和末段回肠，多呈连续性分布的一种炎症性病变。溃疡性结肠炎可发病于任何年龄阶段，多见于20-40岁青壮年，男女患病率没有显著差异。溃疡性结肠炎患者病情多迁延难愈，反复发作，且病程越长癌变的概率越大。龚伟等对558例溃疡性结肠炎患者临床资料回顾性分析后发现溃疡性结肠炎病程大于10年、发病范围波及全结肠、活检发现有不典型增生是发生结肠癌的高危因素。

现代医学治愈溃疡性结肠炎的药物主要是氨基水杨酸类、糖皮质激素类、抗生素、免疫抑制等；服用上述药物的患者容易对上述药物产生较高的依赖性，严重的可能耐药性。另外，还有生物因子等新型制剂，尽管生物因子类药物效果显著，但是价格昂贵，同时长期服用的话存在毒副作用大的缺点，远期疗效不能肯定，且容易复发等缺点。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物，使该中药组合物无毒副作用，并且药液直达病杜，具有高效、安全、临床使用方便的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物，包括以下重量份的原料：白芨6～15份、白蔹7～20份、白芷5～15份、当归6～14份和防风8～21份。

优选的，包括以下重量份的原料：白芨8～12份、白蔹8～17份、白芷7～12份、当归8～11份和防风9～16份。

优选的，包括以下重量份的原料：白芨10份、白蔹10份、白芷10份、当归10份和防风10份。

本发明还提供了所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将白芨、白蔹、白芷、当归和防风用水煎煮，得到的煎煮液为中药组合物。

优选的，将白芨、白蔹、白芷、当归和防风作为提取原料与水的配比为提取原料质量与水体积比为1g:(12～15)ml。

优选的，煎煮的时间为1～1.5h。

优选的，煎煮的温度为80～100℃。

优选的，所述煎煮液经过过滤、浓缩和灭菌。

本发明还提供了所述的中药组合物或所述方法制备的中药组合物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。

优选的，所述溃疡性结肠炎为化学物质引起的溃疡性结肠炎。

优选的，所述化学物质包括三硝基苯磺酸或酒精。

本发明提供了一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物，括以下重量份的原料：白芨6～15份、白蔹7～20份、白芷5～15份、当归6～14份和防风8～21份。在本发明中，所述白芨、白蔹和白芷配合当归、防风发挥协同的作用，使所述中药组合物具有明显的清热解表，消肿排脓、消痈散结的功效；因此，本发明提供的中药组合物能用于治疗溃疡性结肠炎，且适合临床上应用的药物。

本发明提供的所述的中药组合物的制备方法，制备步骤简洁，操作简单，重复性好。

附图说明

图1为本发明实施例中制备中药组合物的流程示意图；

图2为正常组小鼠的肠黏膜切片图片；

图3为模型组小鼠的肠黏膜切片图片；

图4为实施例6中药物组低剂量HE染色图片；

图5为实施例6中药物组中剂量HE染色图片；

图6为实施例6中药物组高剂量HE染色图片。

具体实施方式

本发明提供了本发明提供了一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物，括以下重量份的原料：白芨6～15份、白蔹10～20份、白芷5～15份、当归6～14份、防风10～21份。

本发明中，所述中药组合物的原料包括白芨。以重量份计，所述的白芷优选为8～12份，更优选为10份。所述的白芨具有有收敛止血，消肿生肌的功效，主要用于咳血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂；肺结核咳血，溃疡病出血。

本发明中，所述中药组合物的原料包括白蔹。以重量份计，所述的白蔹优选为12～17份，更优选为15份。所述白蔹清热解毒，消痈散结，用于痈疽发背，疔疮，瘰疠，水火烫伤。

本发明中，所述中药组合物的原料包括白芷。以重量份计，所述的白芷优选为7～12份，更优选为10份。所述白芷具有祛风解表、散寒止痛、除湿通窍、消肿排脓的功效。

本发明中，所述中药组合物的原料包括当归。以重量份计，所述的当归优选为8～11份，更优选为10份。所述当归具有补血功效，能显著促进机体造血功能，升高红细胞、白细胞和血红蛋白含量；调血脂，抑制血小板凝聚，抗血栓，调节血脂；降血压，抗心肌缺血、心律失常，扩张血管，降低血压；增强免疫力，增强免疫、抗炎、保肝、抗辐射、抗氧化和清除自由基等。

本发明中，所述中药组合物的原料包括防风。以重量份计，所述的防风优选为13～16份，更优选为15份。所述防风具有祛风解表，胜湿止痛，止痉定搐的功效。

本发明中，所述中药组合物采用白芨、白蔹、白芷、当归和防风作为原料，其中白芨苦、甘、涩、寒，归肺胃肝经，质黏味涩，为收敛止血之要药，能敛疮生肌，对于疮疡未溃或已溃均可应用，为君药；白敛苦辛微寒，能清热解毒、消痈散结、敛疮生肌，配伍白及可共奏敛疮生肌之功为臣药，白芷归肺胃大肠经，能破宿血，补新血，止痛消肿排脓；当归甘辛温，归肝心脾经，能补血活血，可治疗痈疽疮疡；防风性辛、甘、微温，归膀胱、肝、脾经，其能升脾之清阳，入血分且能止血，三药共为佐药；选用白及、白蔹、白芷、当归、防风五味药，其功效在于清热解毒，消肿止痛，祛腐生肌、敛掩消遗，通过协同作用，使所述中药组合物能够用于溃疡性结肠炎的治疗中。

本发明还提供了所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将白芨、白蔹、白芷、当归和防风用水煎煮，得到的煎煮液为中药组合物。

本发明中，将白芨、白蔹、白芷、当归和防风作为提取原料与水的配比优选为提取原料质量与水体积比为1g:(12～15)ml，更优选为1g:14ml。

本发明中，煎煮的过程优选分三次煎煮。所述三次煎煮的步骤优选如下：将白芨、白蔹、白芷、当归和防风与水进行第一煎煮；所述第一煎煮得到的药渣与水进行第二煎煮；所述第二煎煮得到的药渣与水进行第三煎煮；合并煎煮液，得到中药组合物。在本发明中，所述第二煎煮用水的体积与第二煎煮中药渣的质量比优选为(5～7)mL:1mg；所述第三煎煮中药渣的质量与所述第三煎煮用水的体积比为1mg:(3～5)ml。

本发明中，每次煎煮的时间优选为1～1.5h，更优选为1.2h。总煎煮时间优选为3～4h。

本发明中，煎煮的温度优选为80～100℃，更优选为90℃。

本发明中，所述煎煮后，本发明优选将得到的料液依次过滤、浓缩和灭菌，得到中药组合物。本发明中，所述过滤优选采用尼龙筛网作为过滤介质。所述尼龙筛网的孔径优选为80～100目。所述浓缩的方法没有特殊限制采用本领域技术人员所熟知的浓缩方法即可。本发明实施例中，所述浓缩采用旋蒸的方法进行，所述旋蒸的时间为1～4h，更优选为2～3h；旋蒸的温度为50～60℃，得到相对密度1.05～1.15的药膏。

所述浓缩得到药膏后，本发明优选将药膏与山梨酸钾按照质量比为1000:3～4混合。

得到混合物，将混合物与水按照混合物质量和水体积比为1～10mg：1000ml稀释，得到稀释液。

得到稀释液后，将稀释液经过灭菌后分装成产品。所述灭菌为煮沸灭菌或蒸气灭菌。所述煮沸灭菌的时间为1～1.5h，更优选为1.2h。所述蒸气灭菌的压力优选为110～115℃；蒸气灭菌的时间优选为20～30min，更优选为25min。

鉴于上述技术方案提供了所述中药组合物的性能，因次，本发明还提供了所述中药组合物或所述方法制备的中药组合物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。

本发明中，所述溃疡性结肠炎为化学物质引起的溃疡性结肠炎。

本发明中，所述化学物质包括三硝基苯磺酸(TNBS)或酒精。本发明中所述三硝基苯磺酸(TNBS)或酒精的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的三硝基苯磺酸(TNBS)或酒精的来源即可。

本发明中，所述药物的剂型包括(溶剂型)。所述剂型的每次用药的体积为40～50ml，所述用药的频率为3～5天。

下面结合实施例对本发明提供的一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

称取白芨200g，白蔹200g，白芷200g，当归200g和防风200g。以上五味，分别加入6、4、4倍量水，煎煮三次，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，过滤后得滤液，采用旋转蒸发仪在50℃条件下将滤液浓缩至相对密度1.15的流体50ml，加入质量百分比为0.3％)的山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，将稀释液在100℃条件下煮沸灭菌1小时，分装，即得。

实施例2

称取白芨120g，白蔹400g，白芷100g，当归280g和防风160g。以上五味，分别加入5、5、3倍量水，煎煮三次，每次煎煮1.5小时，合并煎液，滤过，过滤后得滤液，采用旋转蒸发仪在60℃条件下将滤液浓缩至相对密度1.05流体50ml，加入药膏的质量百分比的0.4％)的山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，将稀释液在100℃条件下煮沸灭菌1小时，分装，即得。

实施例3

称取白芨300g，白蔹140g，白芷300g，当归120g和防风240g。以上五味，分别加入7、3、5倍量水，煎煮三次，每次煎煮1.2小时，合并煎液，滤过，过滤后得滤液，采用旋转蒸发仪在55℃条件下将滤液浓缩至相对密度1.10流体50ml，加入药膏的质量百分比的0.35％的山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，将稀释液在100℃条件下煮沸灭菌1.5小时，分装，即得。

实施例4

称取白芨160g，白蔹340g，白芷140g，当归220g和防风180g。以上五味，分别加入7、3、5倍量水，煎煮三次，每次煎煮1.0小时，合并煎液，滤过，过滤后得滤液，采用旋转蒸发仪在50℃条件下将滤液浓缩至相对密度1.10流体50ml，加入药膏的质量百分比的0.4％的山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，将稀释液在100℃条件下煮沸灭菌1.5小时，分装，即得。

实施例5

称取白芨240g，白蔹160g，白芷240g，当归160g和防风320g。以上五味，分别加入6、4、4倍量水，煎煮三次，每次煎煮1.0小时，合并煎液，滤过，过滤后得滤液，采用旋转蒸发仪在60℃条件下将滤液浓缩至相对密度1.10流体50ml，加入药膏的质量百分比的0.4％的山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，将稀释液在100℃条件下煮沸灭菌1.5小时，分装，即得。

实施例6

一、结肠炎动物模型的建立：

1.造模动物：BALB/C雌性小鼠适应性喂养一周，体重达到20g左右时进行分组实验，共分四组，每组15只小鼠。

2.造模药物：sigma公司TNBS(5％的三硝基苯磺酸)，根据预实验结果，配置成含33％无水乙醇的50mg/kg的灌肠液。

3.造模方法：造模前禁食16个小时，自由饮用5％的葡萄糖溶液(防止小鼠低血糖)，用含有33％无水乙醇的TNBS灌肠，让小鼠前爪自由抓住笼面，抓取小鼠尾部，使小鼠倒立，从肛门缓缓注入药液100微升，继续保持倒立姿势，让药液在肠道中停留2分钟。根据小鼠状态共造模7次。

为了验证结肠炎动物模型造模是否成功，采集正常组小鼠和模型组小鼠肠黏膜，制备切片后采用HE染色方法，在显微镜下观察两组肠粘膜切片中细胞的变化情况。

由图2为正常小鼠的肠黏膜切片，从染色图片中可以看出，并未见炎症细胞侵润。图3为模型组小鼠的肠黏膜切片，从染色图片中可观察到大量炎症细胞侵润，黏膜肌层消失，说明溃疡性结肠炎动物模型造模成功，模型组小鼠可用于后续药物试验。

二、中药组合物的用量：高剂量组注射100微升药液，中剂量组注射70微升药液，低剂量组注射40微升药液。对照组注射40微升无菌水。每个高剂量组注射的药液包括实施例1～5制备得到药液，每个实施例制备得到药液做三个平行实验；中剂量组和低剂量组采取相同的方法注射小鼠。

动物的摄入方法：灌肠，让小鼠前爪自由抓住笼面，抓取小鼠尾部，使小鼠倒立，从肛门缓缓注入药液，继续保持倒立姿势，让药液在肠道中停留2分钟。

三、苏木素(Hematoxylin)-伊红(Eosin)染色

1、实验用品

固定液：常用95％乙醇和冰丙酮

苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。

伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。

稀盐酸乙醇溶液：用75％乙醇配制1％盐酸。

系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

2、实验步骤

样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×10⁵/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。

样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。

分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12～15min，伊红5min即可。

四、结果

图片4，5，6是高中低三种不同剂量的中药组合物治疗溃疡性结肠炎动物模型的肠黏膜切片，与图3模型组小鼠的肠黏膜切片比较发现，图片4，5，6中炎症细胞侵润明显减轻，说明三种剂量的中药组合物对溃疡性结肠炎具有疗效。

由以上实施例可知，本发明提供的一种用于溃疡性结肠炎的中药组合物及其制备方法和应用，所述中药组合物高效、安全、临床使用方便的成方，能够有效修复肠道黏膜，提升了溃疡性结肠炎的治愈率。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。