本发明涉及中药领域，具体涉及一种雪胆胃肠丸药物及其制备方法。
背景技术：
雪胆胃肠丸，由木香、雪胆、吴茱萸、重楼等药物制成，其具有温中散寒，理气止痛的功效。用于中焦虚寒所致的胃脘冷痛，嗳气吞酸，便溏及胃、十二指肠溃疡、十二指肠炎、直肠炎表现为上述症状者。
该品种年销售额达3多亿元，按照中央“供给侧结构性改革”的精神要求，专利申请人在现有品种的基础上，对该品种进行了“传统名优中药二次开发”的研究工作。开发重在工艺改造、质量标准的提高和有效物质基础确定以提高有效性等方面。
雪胆胃肠丸现有的制备方法，是采取药材粉碎后直接入药的制备方法，专利申请人在对此药物的制备工艺进行持续多年的研究中发现，现有的制备工艺存在诸多问题，例如对水溶性成分的提取，对挥发性成分的提取，都是不足的，申请人在进行大量的、反复的实验研究后，对现有的制备工艺进行了改进提高，得到了本发明的制备工艺，该制备工艺可以得到了该药物更多的活性成分，更有利于提高药效，尤其是对于胆色素结石的治疗，疗效的提高更加显著。
同时，本发明还提供了新的检测方法，能够更加有力地控制药物的质量。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种雪胆胃肠丸药物。
本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。
本发明还提供了该药物的检测方法。
本发明还提供了该药物的制药用途。
本发明的目的是由以下方式实现的：
一种雪胆胃肠丸药物，该药物是由以下重量份原料制成的：木香66重量份、雪胆50重量份、吴茱萸33重量份、重楼66重量份、白及99重量份、延胡索66重量份、海螵蛸99重量份、白术66重量份、当归99重量份、党参66重量份、黄芪66重量份、甘草66重量份。
所述的雪胆胃肠丸药物，采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入4～11倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取1～4次，每次0.5～2 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入6～12倍量的水，煎煮提取1～4次，每次0.5～2 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入4～11倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取1～4次，每次0.5～2 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入6～12倍量的水，煎煮提取1～4次，每次0.5～2 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积5～8倍量的pH 3～5的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积5～8倍量的60～80%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至9～11，在60～80℃下加热1～2h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用7～9倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在60～80℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
所述的雪胆胃肠丸药物，优选采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
一种雪胆胃肠丸药物的检测方法，该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：木香66重量份、雪胆50重量份、吴茱萸33重量份、重楼66重量份、白及99重量份、延胡索66重量份、海螵蛸99重量份、白术66重量份、当归99重量份、党参66重量份、黄芪66重量份、甘草66重量份；该雪胆胃肠丸药物采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入4～11倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取1～4次，每次0.5～2 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入6～12倍量的水，煎煮提取1～4次，每次0.5～2 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入4～11倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取1～4次，每次0.5～2 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入6～12倍量的水，煎煮提取1～4次，每次0.5～2 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积5～8倍量的pH 3～5的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积5～8倍量的60～80%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至9～11，在60～80℃下加热1～2h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用7～9倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在60～80℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸；
可以采用气相色谱法对单紫杉烯、柠檬苦素进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：DB-1701型毛细管柱；检测器：氢火焰离子化检测器；载气：N2，流量：25mL·mL-1；氢气流量：45mL·mL-1；空气流量：450mL·min-1；分流比：7：2；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，以每分钟5℃的速度线性升至130℃，然后以每分钟10℃的速度线性升至200℃，在200℃下保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释，即得内标溶液，备用；
（3）供试品溶液的制备：精密量取药物样品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用；
（4）对照品溶液的制备：精密称取单紫杉烯对照品、柠檬苦素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释，即得对照品溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液注入气相色谱仪，进行检测。
所述的雪胆胃肠丸药物的检测方法，该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：木香66重量份、雪胆50重量份、吴茱萸33重量份、重楼66重量份、白及99重量份、延胡索66重量份、海螵蛸99重量份、白术66重量份、当归99重量份、党参66重量份、黄芪66重量份、甘草66重量份，该雪胆胃肠丸药物采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸
优选采用气相色谱法对单紫杉烯、柠檬苦素进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：DB-1701型毛细管柱；检测器：氢火焰离子化检测器；载气：N2，流量：25mL·mL-1；氢气流量：45mL·mL-1；空气流量：450mL·min-1；分流比：7：2；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，以每分钟5℃的速度线性升至130℃，然后以每分钟10℃的速度线性升至200℃，在200℃下保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，即得内标溶液，备用；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用；
（4）对照品溶液的制备：精密称取单紫杉烯对照品、柠檬苦素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含单紫杉烯0.301mg·mL-1及柠檬苦素0.901mg·mL-1的溶液，即得对照品溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
一种雪胆胃肠丸药物在制备治疗胆色素结石药物中的应用，该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：木香66重量份、雪胆50重量份、吴茱萸33重量份、重楼66重量份、白及99重量份、延胡索66重量份、海螵蛸99重量份、白术66重量份、当归99重量份、党参66重量份、黄芪66重量份、甘草66重量份，该雪胆胃肠丸药物采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸；
采用气相色谱法对单紫杉烯、柠檬苦素进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：DB-1701型毛细管柱；检测器：氢火焰离子化检测器；载气：N2，流量：25mL·mL-1；氢气流量：45mL·mL-1；空气流量：450mL·min-1；分流比：7：2；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，以每分钟5℃的速度线性升至130℃，然后以每分钟10℃的速度线性升至200℃，在200℃下保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，即得内标溶液，备用；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用；
（4）对照品溶液的制备：精密称取单紫杉烯对照品、柠檬苦素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含单紫杉烯0.301mg·mL-1及柠檬苦素0.901mg·mL-1的溶液，即得对照品溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
一种雪胆胃肠丸药物在制备治疗肝纤维化药物中的应用，该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：该雪胆胃肠丸药物是由以下重量份的原料制成的：木香66重量份、雪胆50重量份、吴茱萸33重量份、重楼66重量份、白及99重量份、延胡索66重量份、海螵蛸99重量份、白术66重量份、当归99重量份、党参66重量份、黄芪66重量份、甘草66重量份，该雪胆胃肠丸药物采用如下方法制备：
（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
实验一：本发明药物治疗豚鼠胆色素结石的实验研究
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物 英国短毛种一级豚鼠25只，雄性，体重250～350g，购自广州中医药大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK(粤)2008-0020。
1.1.2 药品、试剂与仪器
1.1.2.1本发明药物：
处方：木香66g、雪胆50g、吴茱萸33g、重楼66g、白及99g、延胡索66g、海螵蛸99g、白术66g、当归99g、党参66g、黄芪66g、甘草66g；
制备方法：（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸1000g，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
1.1.2.2 对比药物：
处方：木香66g、雪胆50g、吴茱萸33g、重楼66g、白及99g、延胡索66g、海螵蛸99g、白术66g、当归99g、党参66g、黄芪66g、甘草66g；
制备方法：以上十二味药材，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g细粉加炼蜜30～35g与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸1000g，虫白蜡打光，即得。
1.1.2.3 其他：盐酸林可霉素注射液，由江苏苏中药业集团股份有限公司生产，国药准字H32021424，规格按C18H34N2O6S计2mL：0.6g；血清IL-15、TL-1β及胆汁IL-15ELISA试剂盒，由南京森贝伽生物科技有限公司生产。仪器：连续光谱酶标仪，由上海仁科生物科技有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 实验分组
将25只豚鼠随机分为4组：空白组，模型组，本发明药物组、对比药物组。
1.2.2 豚鼠胆色素结石模型的制备
空白组以正常饲料喂养，同时每只豚鼠皮下注射生理盐水0.2mL/d，连续10d。其余4组皮下注射林可霉素60mg/（kg·d），连续10d，同时给予致石饲料（基础料90.86％、酪蛋白2％、蔗糖3％、猪油2％、微晶纤维素2％、胆酸钠0.04％、胆固醇0.1％，由重庆腾鑫生物技术有限公司配置）。造模期间不限饮食、摄水。
1.2.3 给药方法
造模结束后给药。空白组和模型组每只豚鼠给予生理盐水1mL/d灌胃；本发明药物组、对比药物组均为3.0g/（kg·d），连续10d。末次给药第2天，豚鼠禁食，给予氯胺酮、地西泮腹腔麻醉（氯胺酮与地西泮1:1混合，剂量为0.2mL/100g），剖腹、抽取胆汁、观察成石情况，腹主动脉取血。
1.2.4 观察指标
血清IL-15、TL-1β的测定：腹主动脉取血，4℃静置2h后3500r/min离心10min，分离出血清，-80℃保存。胆汁IL-15的测定：豚鼠麻醉后，剖腹、抽取胆汁，-80℃保存。采用双抗夹心ELISA法测定IL-15、TL-1β含量，严格按照说明书操作，最后用酶标仪测450nm的Od值，由标准曲线求出IL-15、TL-1β的值。
1.3 统计学处理
采用SPSS19.0软件进行统计学分析，数据以±s表示，分类变量采用χ2检验，计量资料采用方差分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
本发明药物组成石率较模型组减少，差异有统计学意义（P＜0.01），说明本发明药物可以抑制胆结石形成，见表1。
表1 各组豚鼠成石率比较
与模型组比较，*P＜0.01。
本发明药物组血清、胆汁IL-15含量均较模型组降低，差异有统计学意义（P＜0.01），且本发明药物组与对比药物组之间比较，差异也有统计学意义（P＜0.01）；本发明药物组血清TL-1β含量较模型组降低，差异有统计学意义（P＜0.01），且本发明药物组与对比药物组之间比较差异也有统计学意义（P＜0.01），见表2。
表2 各组豚鼠血清、胆汁IL-15及血清TL-1β含量比较±s，Pg/mL
与模型组比较，*P＜0.01；与本发明药物组比较，#P＜0.01。
3 结论
本发明实验结果显示，形成胆结石豚鼠的血清及胆汁IL-15含量与空白组相比升高，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。
本发明实验研究除了比较胆结石模型组与空白组IL-15、TL-1β含量的水平，还比较了给予本发明药物与对比药物治疗后，其两组间血清、胆汁IL-15及血清TL-1β的含量与模型组、空白组间的差异。本发明实验研究发现，本发明药物可以减少血清、胆汁中的IL-15以及血清中的TL-1β含量，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。
本实验研究还比较了空白组、模型组及本发明药物组、对比药物组之间成石率的不同，发现给予本发明药物后，豚鼠的成石率明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01），说明本发明药物可以有效抑制胆结石形成。对比药物也有一定的抑制胆结石形成的作用，但效果并不显著。
实验二：气相色谱法同步测定本发明药物中单紫杉烯、柠檬苦素的含量
1仪器与试药
气相色谱仪，由上海析默分析仪器有限公司生产；高纯氢气发生器，由上海传昊仪器有限公司生产；石英弹性毛细管色谱柱，由江阴市新辉色谱柱有限公司生产；电子天平，由上海良平仪器仪表有限公司生产；单紫杉烯对照品，含量99.9%，由南京泽朗生物科技有限公司生产；柠檬苦素对照品，含量99.9%，由上海如吉生物科技发展有限公司生产；本发明药物，参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备，试剂：环己酮，无水乙醇均为色谱纯。
2色谱条件
色谱柱：DB-1701型毛细管柱（30m×0.25mm，0.32μm）；检测器：氢火焰离子化检测器（FID），载气：N2，流量：25mL·mL-1；氢气流量：45mL·mL-1；空气流量：450mL·min-1；分流比：7：2；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，以每分钟5℃的速度线性升至130℃，然后以每分钟10℃的速度线性升至200℃，在200℃下保持3.5min；内标法。
3试验方法与结果
3.1内标溶液的制备
取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1g含12.5mg的溶液，摇匀，即得内标溶液，备用。
3.2供试品溶液的制备
精密量取本品1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用。
3.3对照品储备溶液的制备
精密称取单紫杉烯对照品、柠檬苦素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含单紫杉烯0.301mg·mL-1及柠檬苦素0.901mg·mL-1的溶液，即得对照品溶液，备用；
3.4阴性对照溶液的制备
取按处方中未加木香与吴茱萸的空白溶液，按“3.2”项下制备方法，制成阴性对照溶液。
3.5线性关系的考察
分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5mL对照品储备液于10mL容量瓶中，加内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别取1μL进样，记录结果，以单紫杉烯、柠檬苦素与内标的峰面积比值为纵坐标（Y），浓度（C）为横坐标（X），分别绘制标准曲线，得回归方程分别为：Y（单紫杉烯）=1.1148X－0.0016，R2=0.9999，单紫杉烯浓度在0.144～2.552mg·mL-1范围内，线性关系良好；Y（柠檬苦素）=1.1347X+0.0035，R2=0.9999，柠檬苦素浓度在0.195～3.466mg·mL-1范围内，线性关系良好。
3.6精密度试验
取单紫杉烯浓度为0.230mg·mL-1和柠檬苦素浓度为0.290mg·mL-1的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，分别计算2种成分与内标的峰面积比值（A/A内标），单紫杉烯、柠檬苦素的RSD分别为0.22%和1.3%（n=6）。
3.7重复性试验
取同一批样品，按样品测定项下的方法重复测定6次，结果单紫杉烯、柠檬苦素的RSD分别为0.33%、1.6%（n=6）。
3.8稳定性试验
取同一批样品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12h后测定，结果按单紫杉烯、柠檬苦素的RSD分别为0.38%、0.35%，说明样品溶液在12h内测定，结果稳定。
3.9加样回收率试验
取已知含量的样品溶液9份，并加入适当的低、中、高对照品溶液，按样品测定法测定单紫杉烯、柠檬苦素含量，分别计算回收率，结果见表3。
表3 回收率测定结果（n=9，%）
结果表明，本方法的回收率较好，单紫杉烯的回收率分别在99.4%～100.2%，柠檬苦素的回收率在98.1%～100.7%之间，相对标准偏差分别为0.28%与0.86%，本测定方法能满足本发明药物中单紫杉烯与柠檬苦素的含量测定。
3.10定量限与检测限
采用“信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.90μg·mL-1时，取1μL进样，连续进样3次，得到单紫杉烯、内标、柠檬苦素信噪比平均值分别接近10.0，可以以此浓度为定量限；继续稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65μg·mL-1，连续进样3次，得到单紫杉烯、内标、柠檬苦素信噪比平均值接近3.0，可以以此浓度为检测限。
3.11耐用性试验
经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，以及柱温，进样口温度和检测器温度考察，表明本方法耐用性良好，适用于本发明药物中两组分的含量测定。
3.11.1色谱柱的影响
选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD%分别为1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，单紫杉烯、柠檬苦素与内标均可有效分离，说明方法耐用性良好。
3.11.2柱温的影响
柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，温度越高，主峰出峰时间越短，在第一阶段为80℃时，单紫杉烯主峰单紫杉烯与杂质峰能保证基线分离，第二阶段130℃时柠檬苦素主峰与杂质峰能保证基线分离，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.11.3进样口温度的影响
进样口温度高于柱温时，单紫杉烯与杂质峰能够保证基线分离，柠檬苦素与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.11.4检测器温度的影响
检测器温度高于进样口温度时，单紫杉烯与杂质峰能够保证基线分离，柠檬苦素与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。
3.12样品含量测定结果
经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产品质量。因此应用该方法对10批样品，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表4。
表4 样品含量测定结果
4讨论
4.1系统适应性试验
在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各1μL，记录结果。2种组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适应性结果见表5。
表5系统适应性试验
4.2内标物的选择
曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等，因样品挥发性成分多，结果以环己酮的保留时间及分离效果最合适。
4.3柱温的选择
单紫杉烯、环己酮和柠檬苦素的沸点相差比较大，柱温低时，柠檬苦素的保留时间过长，柱温高时，单紫杉烯与杂质不能有效分离，经采用两段程序升温方式能满足两种成分的同时分析。
4.4本品的含量限度
由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每1g含单紫杉烯不得少于0.200mg，含柠檬苦素不得少于0.200mg。
本方法对2种成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能有效地控制药品质量。
实验三：不同药物中单紫杉烯、柠檬苦素的含量测定
1 待测样品
1.1 本发明药物：
处方：木香66g、雪胆50g、吴茱萸33g、重楼66g、白及99g、延胡索66g、海螵蛸99g、白术66g、当归99g、党参66g、黄芪66g、甘草66g；
制备方法：（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸1000g，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
1.2 对比药物：
处方：木香66g、雪胆50g、吴茱萸33g、重楼66g、白及99g、延胡索66g、海螵蛸99g、白术66g、当归99g、党参66g、黄芪66g、甘草66g；
制备方法：以上十二味药材，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g细粉加炼蜜30～35g与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸1000g，虫白蜡打光，即得。
2 测定方法
采用本发明实验二提供的气相色谱法同步测定单紫杉烯、柠檬苦素的含量的方法，进行测定。
3 测定结果
测定结果见表6
表6样品含量测定结果
4 讨论与结论
从表6中可以看出，本发明药物中的单紫杉烯、柠檬苦素的含量明显高于其他药物，这可能也是本发明药物在治疗胆色素结石方面的效果优于对比药物的原因。
具体实施方式：
实施例1：本发明药物
处方：木香66g、雪胆50g、吴茱萸33g、重楼66g、白及99g、延胡索66g、海螵蛸99g、白术66g、当归99g、党参66g、黄芪66g、甘草66g；
制备方法：（1）取干燥的雪胆、重楼加入6倍量浓度为75％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到醇提浸膏；将该醇提浸膏加入水中，混合均匀后，静置4h后，过滤，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏A；
（2）取木香、吴茱萸，将其进行水蒸气蒸馏提取，从中提取挥发油B，备用；
（3）取白及、延胡索、白术、甘草，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏，得到浸膏C；水提取后的药渣保留，备用；
（4）取步骤（3）水提取后的药渣加入6倍量浓度为95％的乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1 h后，提取液合并，浓缩成浸膏，得到浸膏D；
（5）取当归、党参、黄芪，加入8倍量的水，煎煮提取3次，每次1 h，合并提取液，提取液浓缩成浸膏；将上述浸膏经D101B型大孔吸附树脂处理，先用柱体积6倍量的pH 4的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，再用柱体积6倍量的70%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，两次洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液用碱液调节pH至10，在70℃下加热1.5h，然后将其经聚酰胺树脂柱处理，用8倍的丙酮洗脱，收集洗脱液，然后在75℃下蒸馏，除去丙酮，浓缩成浸膏，得浸膏E；
（6）取海螵蛸，粉碎成细粉，得细粉F；
（7）将浸膏A、浸膏C、浸膏D、浸膏E合并，加入细粉F，混匀，再加入挥发油B，加入炼蜜与适量的水泛丸，活性炭包衣，干燥，制成水蜜丸1000g，虫白蜡打光，即得雪胆胃肠丸。
采用气相色谱法对单紫杉烯、柠檬苦素进行含量测定：
（1）色谱条件：色谱柱：DB-1701型毛细管柱；检测器：氢火焰离子化检测器；载气：N2，流量，1.0mL·mL-1；氢气流量：45mL·mL-1；空气流量：450mL·min-1；分流比：7：2；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，以每分钟5℃的速度线性升至130℃，然后以每分钟10℃的速度线性升至200℃，在200℃下保持3.5min；内标法；
（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，即得内标溶液，备用；
（3）供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用；
（4）对照品溶液的制备：精密称取单紫杉烯对照品、柠檬苦素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含单紫杉烯0.301mg·mL-1及柠檬苦素0.901mg·mL-1的溶液，即得对照品溶液，备用；
（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
（6）测定结果：本品每1g含单紫杉烯为0.225mg，含柠檬苦素为0.231mg。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。