一种雪菊提取物在制备治疗肝脏脂肪沉积药物中的应用的制作方法

本发明涉及含有来自藻类、苔藓、真菌或植物或其派生物领域，具体是一种雪菊提取物在制备治疗肝脏脂肪沉积药物中的应用。
背景技术：
：随着现代社会经济的飞速发展，人民生活水平的不断提升，高血脂症的发病率越来越高，并且患者趋向于年轻人群。高血脂症通常是由于人体脂质代谢发生异常所引发的一种普遍的多发性病症，此病对人类的健康构成严重威胁的主要原因是高血脂症通常与糖尿病、高血压、脂肪肝、动脉粥样硬化等高死亡率疾病的形成密切相关，并且是促使这些疾病形成的一个重要因素。因而高血脂的预防及治疗近年来受到特别的关注，成为当今医药科学领域研究的热点。目前，西药治疗高血脂症取得了一定的进展，并且其作用机理在不断被阐明，这为高血脂症药物的研发提供了一定的理论依据。西药主要包括他汀类；贝特类；烟酸类；胆酸隔置剂等。虽然这些药物对高血脂病人有较好的作用，但是这些药物在降低血脂的同时所产生的副作用已成为不容忽视的问题，其中包括胃肠道的副反应，血清氨基酸转移酶浓度过高引发肌酸酐和肌炎等。此外，许多高血脂病是由于多种因素引起的，因此通常作为单靶点作用的西药治疗高血脂症的效果并不理想。同时，西药价格昂贵且停药后血脂容易出现反弹。中医药治疗高血脂已有几千年的历史，目前有大量的中药及经典的中药复方广泛用于临床，显示出良好的降血脂效果。同时，中药治疗高血脂症具有其独特的优势，素以治疗作用广，毒副作用小，安全性高而著称。中药及其复方越来越广泛的用于高血脂症的治疗或预防，因此中药及其复方治疗高血脂的研究也受到了科学界的高度重视。昆仑雪菊为新疆特有植物，学名为两色金鸡菊，属菊科金鸡菊属，一年生草本植物，主要分布于和田地区海拔3000米以上的昆仑山。长期以来，昆仑雪菊被当地居民当花茶引用，新疆维吾尔医院也将其作为一种维药材应用，具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功，用花泡茶饮，可治疗“燥热烦渴”、“高血压”、“心慌”、“胃肠不适”、“食欲不振”、“痢疾”及“疮疖肿毒”等疾病，是具有广阔前景和研究价值的新品种。但是目前国内外仍对昆仑雪菊研究甚少，尤其是主要活性成分的药用价值及疗效方面。技术实现要素：本发明就是为了填补雪菊活性成分药用价值及疗效方面的空白，所提出的一种雪菊提取物在制备治疗肝脏脂肪沉积药物中的应用。本发明是按照以下技术方案实现的。一种雪菊提取物在制备治疗肝脏脂肪沉积药物中的用途。所述雪菊提取物的使用剂量为0.1g/kg-10g/kg。本发明获得了如下的有益效果。本发明填补了雪菊活性成分药用价值及疗效方面的空白，本发明的雪菊提取物能降低肝脏脂肪的沉积，疗效明确且无毒副作用，对临床防治、提高患者生存质量具有十分重要的意义。本发明为降低肝脏脂肪沉积提供了一种安全、有效和经济的新方法，对临床及科研提供了理论技术和技术支撑，具有广阔的应用前景。附图说明图1是本发明db/db鼠饲养12周后肝组织H＆E染色图；图2是本发明不同浓度雪菊提取物处理12周后db/db小鼠肝组织H＆E染色图(×200)；图3是本发明不同浓度雪菊提取物对小鼠体重的影响图。具体实施方式下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。实施例1：雪菊提取物的制备1.浸泡:称取一定量的雪菊粉末，按1：8-20的比例浸泡在50-80%的乙醇溶液中，浸泡过夜。2.超声及抽滤:将已经浸泡过夜后的雪菊乙醇溶液进行超声，温度为50-70℃，时间为10-30min，然后进行第一次抽滤。第一次抽滤后的雪菊固体以1:8-20的比例加50-80%乙醇溶液浸泡并再次超声，温度为50-70℃，时间为10-30min，然后进行第二次抽滤。两次抽滤后的液体均倒入烧瓶中进行旋转蒸发以制成浸膏。旋转蒸发仪（RE-3000型，郑州市亚荣仪器有限公司），温度30-50℃转速100r/min（转数/分钟）。提取物的最终pH值为7.2-7.4。实施例2：高效液相色谱分析法测定雪菊中黄酮的含量精密称取雪菊提取液样品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤后进行高效液相色谱检测。色谱仪采用LC-20AB岛津高效液相色谱仪（日本岛津）。色谱柱InertsilODS-SP色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱温25℃，检测波长330nm，进样量10μL，外标法。实施例3：高效液相色谱分析法测定雪菊中绿原酸的含量精密称取雪菊提取液样品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤后进行高效液相色谱检测。色谱仪采用LC-20AB岛津高效液相色谱仪（日本岛津）。色谱柱InertsilODS-SP色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱温25℃，检测波长330nm，进样量10μL，外标法。实施例4：高效液相色谱分析法测定雪菊中总皂苷的含量精密称取雪菊提取液样品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤后进行高效液相色谱检测。色谱仪采用LC-20AB岛津高效液相色谱仪（日本岛津）。色谱柱InertsilODS-SP色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱温25℃，检测波长330nm，进样量10μL，外标法。高效液相色谱分析法测定雪菊提取物中有效成分：总黄酮的含量为13.09-16.72%（质量百分比）；绿原酸的平均含量为0.56-0.62%（质量百分比）；总皂苷含量为7.91-8.28%(质量百分比)。实施例5：雪菊提取物(seneciocineraria,SC)对自发性2型糖尿病及肥胖C57BLKS/Jdb/db小鼠（简称db/db小鼠）血脂水平的影响选取8周龄db/db小鼠（购自美国JACSON实验室）为实验模型动物，同遗传背景C57BLKS/Jdb/+不发病小鼠（简称db/m小鼠）为对照鼠，每组5只。用实施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低剂量组）、1g/kg（中剂量组）、10g/kg（高剂量组），每日一次灌胃，连续给药12周后空腹12小时后目内眦取血，离心分离血清，酶法检测空腹血清TC和TG水平。血清生化指标测定用试剂盒：TC测定试剂盒及TG测定试剂盒（由南京建成生物工程研究所生产）。Allegra64R离心机（德国BECKMANCOULTER）；JA5002电子天平（上海精天电子仪器有限公司）；RT-9600生化分析仪（深圳雷杜生命科学有限公司生产）。饲养12周后，模型组小鼠(第20周)空腹血清TG浓度为1.19±0.21、TC浓度为4.43±0.52，显著高于正常对照组TG浓度（0.73±0.12）、TC浓度（2.56±0.44）（P＜0.05，P＜0.01）；雪菊中剂量组TG浓度为0.8±0.11、雪菊高、中剂量组TC浓度分别为2.76±0.48、3.35±0.41，显著低于模型组TG、TC浓度（P＜0.05，P＜0.01）。试验结果表明长期的雪菊提取物灌胃可以明显改善db/db小鼠的高血脂症（见表1）。表1.1正常对照组、模型组与雪菊高、中、低剂量组小鼠血脂的比较TGTCdb/m0.73±0.122.56±0.44db/db1.19±0.21*4.43±0.52**SC（10g/kg）0.88±0.252.76±0.48#SC（1g/kg）0.8±0.11#3.35±0.41#SC（0.1g/kg）1.1±0.423.97±0.49注：与正常对照组比较，“*”表示P值小于0.05，“**”表示P值小于0.01；与模型组比较，“#”P值小于0.05，“##”表示P值小于0.01。实施例6：雪菊提取物对肝脏脂肪沉积的影响选取8周龄db/db小鼠（购自美国JACSON实验室）为实验模型动物，同遗传背景C57BLKS/Jdb/+不发病小鼠（简称db/m小鼠）为对照鼠，每组5只。用实施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低剂量组）、1g/kg（中剂量组）、10g/kg（高剂量组），每日一次灌胃，连续给药12周后处死小鼠，切取肝脏，中性甲醛固定，石蜡包埋，切片（3μm），常规H＆E染色。切片常规用二甲苯脱蜡3次，每次15min；无水乙醇、90%、80%、70%各级乙醇依次脱水至蒸馏水，毎次2min；苏木素染色5min，蒸馏水缓慢冲洗；盐酸乙醇分色10s（提插数下）。蒸馏水冲洗15min，伊红溶液染色2min；蒸馏水冲洗，乙醇梯度（70%至80%至90%至无水乙醇）脱水，二甲苯透明，轻轻擦拭组织周边二甲苯，中性树脂封片，注意不要产生气泡。苏木素和伊红溶液均购自武汉博士德生物有限公司。试验结果表明本发明雪菊提取物对肝脏脂肪沉积有明显的抑制作用。（参见图1、2，图1中a:×100；b:×200；c:×400；图2中a:0.1g/kg；b:1g/kg；c:10g/kg）实施例7：不同浓度雪菊提取物对小鼠体重的影响实验期间动物每周称重一次，密切观察实验动物精神状态、毛发变化及饮水情况。在整个实验周期中，db/m小鼠体重较稳定，一直处于稳定增长；而db/db小鼠体重则增加至第12周（药物处理第4周）开始下降，至实验结束时体重明显低于db/m小鼠；给予不同浓度的雪菊提取物后明显延缓了db/db小鼠的体重下降，至实验第16周（药物处理第8周）db/db小鼠体重出现明显下降（P＜0.05，P＜0.01）；实验结束（第20周）时，雪菊提取物处理组db/db小鼠体重仍然高于模型组db/db小鼠（参见图3）。实施例8：不同浓度雪菊提取物对小鼠肝、肾功能的影响选取8周龄db/db小鼠（购自美国JACSON实验室）为实验模型动物，同遗传背景C57BLKS/Jdb/+不发病小鼠（简称db/m小鼠）为对照鼠，每组5只。用实施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低剂量组）、1g/kg（中剂量组）、10g/kg（高剂量组），每日一次灌胃，连续给药12周空腹12小时后目内眦取血，离心分离血清，酶法检测肝功（ALT、AST）和肾功（SCr、BUN）水平。血清生化指标测定用试剂盒（由南京建成生物工程研究所生产）；Allegra64R离心机（德国BECKMANCOULTER）；JA5002电子天平（上海精天电子仪器有限公司）；RT-9600生化分析仪（深圳雷杜生命科学有限公司生产）。饲养12周后，模型组小鼠(第20周)肝功ALT为208±10.15、AST为220±14.5、肾功SCr为47.67±2.52、BUN为15.15±1.4，显著高于正常对照组ALT（44.67±2.52）、AST（150±2.65）、肾功SCr（13.8±0.95）、BUN（6.14±0.51）（P＜0.01）；不同浓度雪菊提取物处理后ALT、AST、SCr和BUN水平均显著低于模型组（P＜0.05，P＜0.01）。试验结果表明长期雪菊提取物灌胃对db/db小鼠无明显肝肾毒性（参见表2）。表2正常对照组、模型组与雪菊高、中、低剂量组小鼠肝功、肾功水平比较ALTASTSCrBUNdb/m44.67±2.52150±2.6513.8±0.956.14±0.51db/db208±10.15**220±14.5**47.67±2.52**15.15±1.4**SC（10g/kg）73.67±9.45##103.33±13.1##19.99±8.7##10.77±1.44#SC（1g/kg）128±13.89##143±12.12##11.87±1.76##7.25±1.17##SC（0.1g/kg）154.33±19.6#167±8.54##10.71±1.4##7.18±2.2##注：与正常对照组比较，“*”表示P值小于0.05，“**”表示P值小于0.01；与模型组比较，“#”P值小于0.05，“##”表示P值小于0.01。当前第1页1 2 3