缓解化疗致肠粘膜损伤的砂仁挥发油软胶囊剂的制作方法

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及缓解化疗致肠粘膜损伤的砂仁挥发油软胶囊剂。

背景技术：

化疗在恶性肿瘤治疗中具有重要作用，但是，化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有毒性作用。调查表明，肿瘤患者在接受反复化疗后，其肠屏障功能严重破坏，一方面肠粘膜有效吸收面积减少，引起营养物质吸收障碍和不同程度的出血、腹泻、疼痛等；另一方面肠通透性增加，肠腔内菌群位移，患者免疫力降低，增加感染率和死亡率。因此，改善化疗引起的肠粘膜损伤及相关胃肠道不良反应成为迫切的社会需要。

砂仁(amomifructus)作为我国“四大南药”之一，有着1300多年的药用及食用历史。砂仁为姜科豆蔻属多年生草本植物，性温，味辛，具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎等功效是中医治疗肠胃疾病的常用药。现代药理研究表明，砂仁中的主要有效成分包括乙酸龙脑酯、樟脑、柠檬烯、龙脑等挥发性物质，具有改善胃肠机能、止痛、止泻、促进消化液的分泌、调节肠道菌群等作用。砂仁作为常用的药用及食用药材经过长年临床实践与现代研究表明该药材具有毒副作用小，药效显著的优点。

目前治疗由化疗导致肠粘膜损伤的药物其治疗作用十分有限，效果也各有差异。因此，迫切希望获得一种效果优良的治疗化疗后肠粘膜损伤的药物。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种效果优良的治疗化疗后肠粘膜损伤的药物。本发明人通过研究发现，砂仁挥发油具有优异的缓解化疗致肠粘膜损伤的作用，因而本发明为解决该技术问题提供了以下技术方案：

砂仁挥发油在制备缓解化疗致肠粘膜损伤的药物中的用途，砂仁挥发油在制备调节肠道菌群、维持肠道菌群平衡的药物中的用途，所述药物为本领域常见的口服制剂，优选为软胶囊剂。

本发明同时提供了一种缓解化疗致肠粘膜损伤的软胶囊剂及其制备方法，所述软胶囊剂由有效成分、基质和软胶囊壳组成，所述有效成分为砂仁挥发油，所述软胶囊壳由明胶：甘油：水按(1-1.5):(0.2-0.8):(1-1.5)的比例制成。所述基质包括大豆油、蜂蜡、明胶、卵磷脂中的一种或多种。

所述缓解化疗致肠粘膜损伤的软胶囊剂的制备方法为：将砂仁挥发油加入基质中，搅拌使其分散均匀，过胶体磨，压制成软胶囊，即得。

本发明所使用的砂仁挥发油可以采用本领域常规使用的砂仁挥发油，也可以通过以下方法制备：选取云南引种阳春砂仁(amomunvillosumlour)，粉碎后精密称取100g置于圆底烧瓶中，加蒸馏水600ml，浸泡半小时，采用水蒸气蒸馏法提取8h，收集挥发油，无水硫酸钠干燥后保存于-4℃冰箱，即得。

本发明的有益效果：

本发明的砂仁挥发油可改善化疗药5-fu导致的体重、食量的下降，腹泻的发生，可抑制5-fu导致炎症因子的升高，减少细胞凋亡蛋白酶的表达，抑制lps入血，增加肠紧密连接蛋白的表达，进而改善由5-fu导致的大鼠肠粘膜屏障的损伤。此外，本发明的砂仁挥发油亦可通过增加肠道益生菌，减少条件致病菌的相对丰度改善5-fu导致的肠道菌群的失调，维持肠道微生态的相对稳定。

附图说明

图1显示砂仁挥发油对各组大鼠体重、食量的影响。

图2显示各组大鼠直肠照片。

图3显示各组大鼠小肠病理切片(×10倍)。

图4显示大鼠小肠绒毛高度/隐窝深度(注：与正常组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001)。

图5显示砂仁挥发油对大鼠血液il-6、ros的影响(注：与正常组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001)。

图6显示砂仁挥发油对大鼠小肠ros、tnf-α、mpo、nf-κb的影响(注：与正常组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001)。

图7显示砂仁挥发油对大鼠p38mapk、caspase-3的影响(注：与正常组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001)。

图8显示砂仁挥发油对大鼠肠内毒素lps、紧密连接蛋白zo-1、occludin的影响(注：与正常组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001)。

图9显示肠道微生物在科水平及属水平上的相对丰度。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1砂仁挥发油的制备

选取云南引种阳春砂仁(amomunvillosumlour)，粉碎后精密称取100g置于圆底烧瓶中，加蒸馏水600ml，浸泡半小时，采用水蒸气蒸馏法提取8h，收集挥发油，无水硫酸钠干燥后保存于-4℃冰箱。

实施例2砂仁挥发油对5-fu所致大鼠肠粘膜损伤的保护作用

(一)肠粘膜损伤模型的制备及给药方式

实验用sd大鼠48只，分设正常组(con)、模型组(mod)、阳性药金双歧组(cbl,450mg/kg)、砂仁挥发油低剂量组(voa.l，8mg/kg)、砂仁挥发油中剂量组(voa.m，16mg/kg)、砂仁挥发油高剂量组(voa.h，32mg/kg)。除正常组外，其余各组大鼠化疗时间共5天，每天按剂量35mg/kg腹腔注射5氟尿嘧啶(5-fu)。在化疗前4h，各组给予治疗药物空腹灌胃，正常组和模型组灌胃等体积生理盐水时间共12天。实验期间记录大鼠体重、食量，观察大鼠腹泻情况实验动物于第12天处死。

实验结束时，眼内眦静脉采血，10000r.min-1，4℃离心15min，取血清，检测il-6、ros含量。

实验结束后，以水合氯醛溶液麻醉大鼠后，使用一次性真空静脉采血管，采取肝门静脉血，2000r.min-1离心10min，取上层血浆，采用鲎试剂检测肠源性内毒素(lps)含量。取距幽门10cm处附近小肠1cm于10％福尔马林溶液中固定24h后，做病理切片检测。剪取直肠部分，拍照，用于观察大鼠腹泻情况。取部分小肠，pbs洗去肠内溶物，剪碎并称取2g破碎小肠，置玻璃匀浆管中加2mlpbs手动匀浆。匀浆液4℃，4000r.min-1条件下离心10min，取上清液，经两次反复冻融裂解后，检测小肠细胞中炎症因子(ros、nf-κb、tnf-α)、相关蛋白酶(mpo、p38mapk、capase-3)及紧密连接蛋白(zo-1、occludin)的表达。

(二)砂仁挥发油对大鼠体重、食量、腹泻的影响

由图1可知，砂仁挥发油可有效逆转5-fu导致的大鼠体重、食量的降低，且以挥发油高剂量组果最为显著。同时，由图2直肠照片显示，在给予5-fu后，模型组大鼠出现严重腹泻，而正常组及各治疗组可观察到明显成型粪便，提示砂仁挥发油可预防5-fu导致的大鼠腹泻的发生。

(三)砂仁挥发油对大鼠肠粘膜组织病理学变化的影响

如图3所示，与正常组相比，给予5-fu后模型组大鼠小肠粘膜明显萎缩，部分绒毛脱落、变短，上皮细胞变性、坏死，隐窝增加，而各治疗组在给药后可明显逆转小肠出现的病变。同样，通过隐窝比可以显示，各治疗组可以明显抵抗5-fu诱导的大鼠小肠绒毛减少的现象(图4)，且砂仁挥发油组呈现一定的剂量关系。

(四)砂仁挥发油对大鼠血液炎症因子的影响

由图5所示，砂仁挥发油可显著降低血液中促炎因子il-6、ros的浓度，且以高剂量效果较为显著。

(五)砂仁挥发油对大鼠小肠炎症因子的影响

由图6所示，砂仁挥发油可显著降低小肠nf-κb的浓度及促炎因子ros、tnf-α的浓度(p<0.001)，此外我们检测了小肠组织中mpo含量，voa可显著抑制有5-fu导致的大鼠mpo含量的升高，且以中剂量效果最为明显。由此可见，砂仁挥发油可显著抑制5-fu导致的小肠炎症因子的升高。

(六)砂仁挥发油对p38mapk和caspase-3表达的影响

由图7所示，砂仁挥发油可显著抑制小肠中p38mapk及caspase-3的表达，且以挥发油高剂量效果最为显著。由此可见，砂仁挥发油可抑制5-fu诱导的肠粘膜损伤大鼠细胞凋亡的发生。

(七)砂仁挥发油对肠粘膜屏障功能的影响

给予5-fu后，模型组lps含量显著升高，而砂仁挥发油一定程度上抑制了lps的升高，与此同时，在给予5-fu后，模型组大鼠肠道紧密连接蛋白zo-1、occludin的表达明显下降，而砂仁挥发油可显著逆转这一变化，且以挥发油高剂量效果较为明显。由此，砂仁挥发油可抑制5-fu导致的lps入血，增加紧密连接蛋白的表达，进而改善5-fu导致的肠粘膜屏障受损(图8)。

(八)砂仁挥发油对肠道菌群的调节

砂仁挥发油可增加益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌等相对丰度，而降低大肠杆菌、幽门螺杆菌等条件致病菌的相对丰度。由此可见砂仁挥发油可改善由5-fu导致的大鼠肠道菌群的失调，增加肠道微生物多样性并维持其稳态。

综上所述，砂仁挥发油可改善化疗药5-fu导致的体重、食量的下降，腹泻的发生，可抑制5-fu导致炎症因子的升高，减少细胞凋亡蛋白酶的表达，抑制lps入血，增加肠紧密连接蛋白的表达，进而改善由5-fu导致的大鼠肠粘膜屏障的损伤。此外，砂仁挥发油亦可通过增加肠道益生菌减，少条件致病菌的相对丰度改善5-fu导致的肠道菌群的失调，维持肠道微生态的相对稳定。

实施例3软胶囊剂的制备

取砂仁挥发油，加入1.5倍量的大豆油基质中，搅拌使其分散均匀，过胶体磨，压制成软胶囊，即得，软胶囊壳采用明胶：甘油：水按1:0.5:1的比例制备而成。

实施例4软胶囊剂的制备

取砂仁挥发油，加入由1.2倍量的大豆油和0.3倍量的卵磷脂组成的基质中，搅拌使其分散均匀，过胶体磨，压制成软胶囊，即得，软胶囊壳采用明胶：甘油：水按1:0.3:1.2的比例制备而成。

实施例5软胶囊剂的制备

取砂仁挥发油，加入1.5倍量的明胶基质中，搅拌使其分散均匀，过胶体磨，压制成软胶囊，即得，软胶囊壳采用明胶：甘油：水按1.5:0.5:1的比例制备而成。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。