本发明属于医药领域，具体涉及樟柳碱在制备预防或治疗肾纤维化的药物中的应用。
背景技术：
肾纤维化是各种慢性肾脏疾病(ckd)发展至终末期肾衰竭的最终共同通路和病理基础，是严重危害人类生命健康的重要疾病之一。肾间质纤维化的特征是大量的细胞外基质(ecm)成分进行性地沉积于肾小管及小管周围毛细血管间隙内，破坏了正常的肾小管和肾间质结构，最终导致肾脏完全丧失脏器功能。肾间质纤维化的发病机制十分复杂，涉及细胞表型转换、氧化应激、炎症反应、多种细胞因子与细胞间相互作用等过程，阻止甚至于逆转肾间质纤维化的进展对于ckd的治疗具有十分重要意义。
目前临床上尚缺少能有效治疗肾间质纤维化的药物，现有的治疗措施主要在于控制原发疾病及其恶化因素，如：降血糖、降血压、控制感染、调脂以及改善肾脏局部的微循环等。但这些方式仅能非常有限地减缓疾病的发展，当进展至肾纤维化不可逆阶段或出现严重的肾功能损伤时，患者只能通过血液透析、腹膜透析、肾移植来维持生命，这给患者及其家庭和社会都带来了沉重的负担。临床上现有的抗纤维化药物存在毒性大、安全性低等问题，在实际应用中存在很大的局限，因此，从天然产物中寻找高效低毒的的潜在抗纤维化药物具有重要意义。
樟柳碱(anisodine)，化学式为c17h21no5，相对分子量为319.35，化学结构如下：
是由我国科学家首次从唐古特山莨菪根中分离得到的一种新型抗胆碱能药物，临床上主要使用的是它的氢溴酸盐。氢溴酸樟柳碱是白色结晶，易溶于水，不溶于氯仿、乙醚，无臭，味苦，具有解除平滑肌痉挛、抑制唾液分泌、散瞳等抗胆碱能作用。目前在临床中樟柳碱可用于治疗血管性头痛、视网膜血管痉挛、中心性视网膜病变、缺血性视神经病变、急性瘫痪、震颤麻痹、支气管哮喘、晕动病、有机磷中毒等。
目前已经有关于氢溴酸樟柳碱的成品药物或复方制剂的应用，例如中国专利97120175公开了一种复方樟柳碱注射液，通过樟柳碱与普鲁卡因、维生素b12、透明质酸等联用，克服了单用对眼缺血疗效不好、不良反应多的弊端，对眼缺血的有效率达到了90％以上。中国专利200410098938中公开了一种复方樟柳碱口服液，使用起来较注射液更为方便，减轻了患者的痛苦，随时随地可自行服用，大大提高了患者的依从性。中国专利200510132127中公开了一种樟柳碱和普鲁卡因的复方制剂，能够有效治疗间质性肺炎和肺纤维化、脑梗塞、缺血性心脑血管疾病、缺血性眼病等疾病。中国专利200810006924中公开了氢溴酸樟柳碱用于制备治疗弱视的药物中的用途，所制得的药物可以是注射剂、滴眼剂，也可以是片剂、胶囊剂、口服液、滴丸等口服制剂。中国专利201210274372中公开了氢溴酸樟柳碱用于治疗抑郁症药物中的用途，其对于兴奋缺乏、快感消失、兴奋程度降低、体重增加量降低等抑郁症状具有很好的治疗效果。但现有技术中，没有记载樟柳碱可以用于治疗肾纤维化的文献报道。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题是提供樟柳碱的新用途，具体的是樟柳碱在制备预防或治疗肾纤维化的药物中的应用。
本发明活性成分樟柳碱优选采用氢溴酸樟柳碱。其功效体现在氢溴酸樟柳碱可以降低血清中scr、bun的水平，抑制肾组织中α-sma，tgf-β蛋白的表达，证实了氢溴酸樟柳碱具有抗肾纤维化的作用。
应用时预防或治疗肾纤维化的药物中可以含有0.1-99.9wt％的樟柳碱作为活性成分，也可以与其他药物进行复配制成复方药物；按照药学常规方法，加入药学上可接受的载体制备成适宜的药物剂型，具体的可以制成口服制剂或者注射剂，通过口服、肌肉注射、静脉输入或腹腔注射等方式给药。例如软胶囊剂、片剂、冻干粉剂或注射剂。
通过实验证明，氢溴酸樟柳碱具有预防或治疗肾纤维化的作用，可通过抑制肾组织中肌成纤维细胞的增殖活化从而改善肾纤维化，为临床预防、治疗肾纤维化提供了一种新的选择。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，说明但不限制本发明。
实施例：氢溴酸樟柳碱对肾纤维化模型大鼠的治疗作用
一、实验方案
1、材料和方法
1.1实验动物：6～8周龄清洁级健康雄性sd大鼠40只，购买自北京华阜康科技有限公司。实验动物饲养于四川大学生物治疗国家重点实验室动物中心恒温、恒湿与空气全循环过滤环境中。
1.2材料：氢溴酸樟柳碱(99％纯)，购于中国药品生物制品检定所，兔抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白抗体、兔抗大鼠转化生长因子-β抗体购自杭州华安生物。
1.3方法：
1.31动物模型的建立：大鼠以2％戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉后取右侧卧位固定，手术区域备皮，消毒。于左侧肋腰点下方，脊柱旁左侧作一纵行切口，分离输尿管，5-0号丝线结扎输尿管两端，在两结扎点中间剪断输尿管，逐层缝合制作uuo模型。假手术组仅开腹后左侧游离输尿管，不接扎和剪断。
1.32实验分组：将大鼠随机分为假手术组(10只)、uuo模型组(10只)、uuo模型+氢溴酸樟柳碱2.5mg/kg治疗组(樟柳碱低剂量组，10只)、uuo模型+氢溴酸樟柳碱5mg/kg治疗组(樟柳碱高剂量组，10只)。于术后当日开始给药，每天给药一次。
1.33检测项目：于术后第14天收集血标本，分离血清进行血肌酐(scr)和尿素氮(bun)检测，处死动物，取手术侧肾脏，1/3保存于4％多聚甲醛固定液中以备后续he、masson及免疫组织化学染色使用，其余2/3平均分为10块，在液氮中迅速冷冻后转入-80℃低温冰箱中保存，用于后续进行α-sma，tgf-β的免疫组化及westernblot检测。
1.4数据处理：计量资料以
2、结果
2.1大鼠scr和bun的变化情况，见表1。
表1各组大鼠bun、scr水平(mmol/l、umol/l
注：与假手术组比较：#p＜0.05；与模型组比较*p＜0.05
表1结果显示：与假手术组相比，其余各组大鼠血清中scr、bun水平均明显升高(p＜0.05)；与模型组相比较，经氢溴酸樟柳碱治疗后血清中scr、bun水平均出现不同程度降低，以樟柳碱高剂量组效果更为明显(p＜0.05)。
2.2大鼠肾组织病理学观察
①肉眼观察：假手术组肾脏呈暗红色，表面光滑，两侧肾脏对比无明显差异，其余各组肾脏体积明显增大，颜色苍白，皮质变薄。②光镜检测：假手术肾脏组织结构正常，间质内无炎细胞浸润，masson染色仅肾小球和肾小管基底膜处可见少量的胶原蓝染区。模型组肾小管上皮细胞萎缩，空泡样变，管腔扩张明显，部分管腔内可见蛋白管型，部分肾小管坏死，坏死区域可见纤维组织增生，肾间质大量炎细胞浸润，masson染色可见大面积的胶原蓝染区，肾间质内纤维组织增生较假手术组明显增多。两治疗组病变较模型组有不同程度的改善，尤其以樟柳碱高剂量组更为明显，与模型组相比差异有统计学意义，见表2。
表2各组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原相对面积评分(
注：与假手术组比较：#p＜0.05、；与模型组比较*p＜0.05
2.3α-sma，tgf-β蛋白的表达
假手术组大鼠肾间质内几乎不表达α-sma，其余各组在肾间质及部分肾小管上皮细胞内可见不同程度的阳性表达；与模型组相比较，樟柳碱高、低剂量组表达量明显降低(p＜0.05)；樟柳碱高剂量组与低剂量组相比差异无统计学意义(p＞0.05)，见表3。
在假手术组中tgf-β仅少量表达在肾小管、肾间质细胞的胞浆内；模型组肾组织中tgf-β的表达量明显增加(p＜0.05)，主要以肾小管上皮细胞、肾间质区域为主。经樟柳碱治疗后tgf-β的表达量较模型组明显降低(p＜0.05)，樟柳碱高剂量与低剂量组相比差异无统计学意义(p＞0.05)，见表3。
表3各组大鼠肾组织α-sma，tgf-β蛋白的表达
注：与假手术组比较：#p＜0.05、；与模型组比较*p＜0.05
3结论
与模型组相比，经氢溴酸樟柳碱治疗后大鼠的scr、bun水平明显将降低(p＜0.05)，肾间质纤维化程度明显减轻(p＜0.05)，肾组织中α-sma、tgf-β的表达量明显降低，提示氢溴酸樟柳碱对uuo所致大鼠肾间质纤维化具有保护作用，其机制可能是通过抑制肾内tgf-β的表达，减少肾间质中固有成纤维细胞的增殖活化，从而改善肾间质纤维化。