本发明涉及药物制剂，具体地说，涉及一种ttx鱼肝油乳剂。
背景技术：
ttx(tetrodotoxin,河鲀毒素)是从河鲀鱼内脏中提取出的一种毒性极强的活性物质，是迄今为止自然界中发现的毒性最强的非蛋白物质之一。这种令人生畏的毒素，虽然能置人于死地，但是它化学结构新颖，药理作用独特，能专一地阻断神经细胞膜na+通道，成为神经生物学和生理学研究无可替代的工具药。在临床上具有镇痛和戒除药物依赖性等功效。
1909年日本学者田原良纯提取得到粗品毒素以后，ttx的临床运用应运而生，有关药用开发方面的研究论文层出不穷。上世纪30年代到40年代，很多旨在医药开发上的研究报道相应发表。在临床上涉及到内科、外科、皮肤科和眼科等广泛领域。到50年代，ttx在临床应用进一步扩大，除治疗关节炎、风湿病、瘙痒、阳痿、遗尿、破伤风、百日咳、气喘、头痛等外。而且也作镇痛药，代替吗啡、度冷丁、阿托品和南美简箭毒等，用于治疗神经痛。ttx对神经、肌肉创伤、火伤、跌打损伤、挫伤等疼痛能发挥显著镇痛作用(潘心富，黄致强，药学通报，1984，2)。但是，国内外对ttx戒毒、镇痛临床治疗中(每安瓿针剂含纯品ttx30～35μg)，有很好的镇痛、戒除药物依赖性功效，但是，有少部分戒毒患者用药后，产生口、舌知觉异常，头部充血，头痛等中毒症状(潘心富,邱芳龙.欧洲专利ep750909；幸保文治.注射药便览.南山堂1976年版)，存在一定安全隐患。1970年以后国际上再未见有ttx临床试验的报道。
1979～1981年河北省水产研究所与解放军药物化学研究所合作，开展ttx提取、纯化研究获得成功，其产品经美国纽约州立大学测定，评价是：中国河北省水产研究所ttx的有效性和可逆性比日本产品高10％，(美biolbull167：528，1984；英toxicon.vol.23，no.5.pp.723，1985)。产品除供应国内需求外，还出口美、日、欧等国，并列入北美最大营销有毒化学试剂的美国calbiochem公司的产品目录中(产品号554412，化学登记号cas4368-28-9)。由于国产ttx产品质高价廉，推动了我国ttx应用、开发的热朝。
上世纪八十年代初，河北省水产所与医科院合作，用小鼠、大鼠作热板法、扭体法、甩尾法、尾根电刺激法、机械刺激法的镇痛实验。每种方法分五组，每组用动物各15只，分别腹腔注射ttx0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg及生理盐水(0.4ml/只)对照组和杜冷丁组16mg/kg。结果ttx实验组与对照组或自身给药前的反应值比较，经统计学处理，均无明显差异(p>0.05)。而腹腔注射杜冷丁组与对照组比痛阈值明显提高(p<0.01)。这一结果与北京医科大学作的药理实验，ttx无镇痛作用相一致(蔡志基，李密，黄致强，等.河北水产科技.1983，1.)。
基于此，人们对ttx的药用研究转到与其他药物配伍研究，如ttx与抗心律失常药物或局麻药物配伍，能提高疗效和治疗指数，而对抗心律失常药物或局麻药毒性无明显影响(李蕴山等，海洋药物，1984，1：7～9；1986，2：10～12；张永健等，河北医学院学报，1989，1)；ttx与镇痛药配伍提高镇痛药疗效、抑制其依赖性与镇痛耐受性作用(徐开俊，等.中国药物依赖杂志，2011，20(5)，355-358)；以采用新技术研制ttx呼吸道给药制剂、ttx油相制剂等新剂型，在戒毒或镇痛中应用(cn1459286a、cn1754539a)；ttx为原料制成注射剂、胶囊，用于戒除药物依赖性和镇痛的应用。有的企业或单位的ttx药用项目，还被批准进入1～2临床试验(w095/24903、zl981020720、cn1145225a、cn1353990a、cn1356104a、cn1051706c)。
1994年王万梅、李同申请的“鱼肝油乳及其制备方法”专利(cn1116925a)中，特别强调该乳制剂含有ttx，但却没有介绍ttx在乳制剂中的作用和功能。该专利最大缺憾是，没有明确剧毒ttx的有效剂量，存在安全风险。
有报道，通过建立吗啡依赖大鼠及小鼠模型，观察ttx对纳洛酮(4mg·kg-1)催促戒断症状的治疗及预防作用，并以大鼠及小鼠体重下降百分比作为评价治疗效果的主要指标。结果在对ttx戒除药物依赖性的治疗与预防实验中，我们在国内外首次发现ttx在常用剂量范围内无治疗、预防作用，而在特定的剂量范围内(0.003～0.1μg·kg-1，im)，疗效与剂量呈特殊量效关系，即剂量低，疗效显著，与生理盐水组(ns)比较差异非常显著(p<0.01)，而且，疗效优于戒毒药可乐定(陈素青，任雷鸣，黄致强.中国药理学与毒理学杂志，2001.6.)。但作用机理尚有待进一步研究。
技术实现要素：
本发明的目的是提供了一种以ttx和鱼肝油为主药配伍，制成的ttx鱼肝油乳剂，其具有显著镇痛、戒毒作用。本发明的鱼肝油原料药富含高度不饱和脂肪酸，具有抗癌和增强肌体免疫功能，达到综合治疗效果。本发明还提供了一种安全、高效，非成瘾性、无毒副作用的乳剂；该发明工艺简单，原料来源方便，生产成本低，容易实施。
为了实现上述目的，本发明技术方案如下：
一种ttx鱼肝油乳剂，以活性成分ttx和鱼肝油为主要成分制成，其中ttx有效含量为0.01-15μg/ml，优选为0.5-8μg/ml，更优选为1-5μg/ml。
所述ttx的结晶纯度达98％以上，可溶解于酸性水或酸的缓冲液中，如购买枸橼酸盐ttx商品1mg/瓶，可直接溶于水中，使用方便。
进一步地，所述ttx鱼肝油乳剂中，鱼肝油的重量含量为20-80％，优选为40-50％。
所述鱼肝油为本领域公知物质，主要是从海洋鱼类肝脏中提取制备的，也可从商业途径得到。优选地，所述鱼肝油包括鲨鱼肝油、鳕鱼肝油、鳐鱼肝油、比目鱼类肝油、黄花鱼肝油、养殖无毒河鲀鱼肝油等中的一种或几种。
可选地，所述鱼肝油可由以下方法制备：从新鲜或冷冻海产鱼类中把鱼肝取出，先摘除胆囊，再用刀切成大块，放入清水中，挤压肝块，排出肝中的污血，然后捞出，用刀切成3厘米左右的方块，于空气炸锅中吹蒸或红外灯烤(60～80℃)后，收集的肝油静止沉淀后，除去下层血水及上层浮沫，经油水分离，离心过滤，得到粗品鱼肝油；将粗品鱼肝油经4℃左右预冷7天，再经‐2～2℃继续冷却3天以上，使粗品油的中心温度降至0～1℃。在0～1℃的温度条件下抽真空过滤，去除硬脂后制成清油即鱼肝油。
进一步地，所述ttx鱼肝油乳剂中还含有药学上可用的乳化剂。优选地，所述乳化剂包括阿拉伯树胶、司盘-80、吐温-80、月桂醇硫酸钠、十二烷基硫酸钠等中的一种或几种。作为优选，所述ttx鱼肝油乳剂中，乳化剂的重量含量为0.5-15％。
在一种效果较佳的具体实施方式中，所述ttx鱼肝油乳剂中，ttx的有效含量为1-5μg/ml，鱼肝油的重量含量为40-50％，乳化剂的重量含量为0.5-15％。
进一步地，所述ttx鱼肝油乳剂中还含有药学上可用的增稠剂、稠味剂、防腐剂、甜味剂。所述增稠剂包括西黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠等中的一种或几种。所述ttx鱼肝油乳剂中还含有药学上可用的稠味剂。优选地，所述稠味剂包括香精、杏仁油、香蕉油等中的一种或几种。所述ttx鱼肝油乳剂中还含有药学上可用的防腐剂。优选地，所述防腐剂包括尼泊金乙酯、氯仿、山梨酸或丙酸钙等中的一种或几种。所述ttx鱼肝油乳剂中还含有药学上可用的甜味剂。优选地，所述甜味剂包括糖精钠、甘油等中的一种或几种。
例如，一种ttx鱼肝油乳剂，原料包括ttx和如下重量份的组分，鱼肝油20-80份，乳化剂0.5-15份，增稠剂0.5-2份、稠味剂0.5-2份、防腐剂0.5-2份、甜味剂0.5-2份；所述ttx的有效含量为0.01-15μg/ml。
本发明还提供了上述ttx鱼肝油乳剂的制备方法，制备方法主要分为两大步骤，第一步骤是完成初乳，第二步骤是加入辅料。实施例中制备方法与本文提供的制备方法中的大步骤是相同的。具体不同在于第一步骤制初乳时次序可略有不同。初乳化制作次序一般是：乳化剂+鱼肝油+加蒸馏水(水中含ttx)，如实施例1、2。如果鱼肝油量大超过乳剂比例50％以上，为有利于调制，也可以在后半步加鱼肝油。如实施例3、4。目前全国大概有十多家企业生产鱼肝油乳，每家制备方法也会因品种不同而差别，如果鱼肝油占比例大时一般都是后加，这样效果更好。
可选地，一种具体的制备方法，包括以下步骤：将ttx溶解于酸性水/醇/酸的缓冲液中，搅拌均匀，制成ph值为4-7的ttx溶液；按配比将ttx溶液与鱼肝油及乳化剂混合均匀，研磨(用研磨机)制成初乳；再加入稠味剂、防腐剂高速搅拌，即得。
本发明还包括上述ttx鱼肝油乳剂在制备具有镇痛、戒毒作用的药物上的应用。
所述的ttx鱼肝油乳剂，是以ttx和鱼肝油为主药，加入乳化剂配制而成，具有镇痛、戒毒作用。
所述的ttx鱼肝油乳剂，其镇痛、戒除药物依赖性的有效成分为ttx。
所述的ttx鱼肝油乳剂，还具有抗癌和增强肌体免疫作用。
所述的ttx鱼肝油乳剂，可以按照常规的药物制备工艺，制成口服剂、软胶囊、微囊胶丸、栓剂、营养补剂。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明将药理实验无镇痛作用的ttx和鱼肝油为主药，与乳化剂、辅料等配制成ttx鱼肝油乳剂，经动物实验和临床观察，具有显著的镇痛作用(p<0.01)，为ttx药用研究的重大突破。
(2)国内、国外在ttx临床镇痛、戒毒应用中，有部分患者出现中毒反应，存在安全隐患；而本发明乳剂中，ttx能以鱼肝油为载体，易穿越血脑屏障，选择性高，靶向性强，可减少ttx剂量，降低毒性，使ttx的吸收缓慢而药效持久，确保用药安全、高效。
(3)本发明的鱼肝油原料药，富含高度不饱和脂肪酸，有抗癌及提高肌体免疫功能，达到综合治疗效果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为10μg/ml的溶液。
取阿拉伯胶125g与鱼肝油500ml研匀，加250mlttx溶液(含ttx10μg/ml)，研磨制成初乳，加含糖精钠0.1g的水溶液1ml、杏仁油1ml、搅匀，再缓缓加入西黄蓍胶7g，经高速搅拌机搅拌，加蒸馏水使成1000ml，搅匀，即得ttx含量为0.01μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例2
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为0.5mg/ml的溶液。
取阿拉伯胶125g与鱼肝油500ml研匀，加250mlttx溶液(含ttx0.5mg/ml)，研磨制成初乳，加含糖精钠0.1g的水溶液1ml、杏仁油1ml、搅匀，再缓缓加入西黄蓍胶7g，经高速搅拌机搅拌，加蒸馏水使成1000ml，搅匀，即得ttx含量为0.5μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例3
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为0.8mg/ml的ttx溶液。
取阿拉伯胶50g与鱼肝油200ml研匀，一次加蒸馏水100ml，研磨，加25mlttx溶液(含ttxo,8mg)，研磨制成初乳，加含糖精钠0.04g的水溶液1ml、杏仁油0.4ml，搅匀，再缓缓加入西黄蓍胶浆3.og，经高速搅拌机搅拌，加蒸馏水至400ml，搅匀，即得ttx含量为2μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例4
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为1mg/ml的ttx溶液。
取羧甲基纤维素钠1g，用40ml蒸馏水充分溶胀，待初乳形成后缓慢滴加ttx溶液8ml(含ttx1mg)混匀，滴加吐温-802ml，缓缓滴加鱼肝油，边加边搅拌至200ml，搅匀，即得ttx含量为5μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例5
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为8mg/ml的ttx溶液。
取吐温-8030ml和吐温-2030ml，加蒸馏水10ml，研磨成糊状，加8mlttx溶液(含ttx8mg)，经高速搅拌机搅拌，再依次滴加入鱼肝油720ml，经高速搅拌机搅拌，加尼泊金乙酯10ml及剩余蒸馏水至1000ml，搅匀，即得ttx含量为8μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例6
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量5mg/ml的ttx溶液。
取阿拉伯胶63g与鱼肝油250ml研匀，一次加蒸馏水100ml，研磨，加25mlttx溶液(含ttx5mg)，研磨制成初乳，加含糖精钠0.05g的水溶液1ml、杏仁油0.5ml、搅匀，再缓缓加入西黄蓍胶浆3.5g，经高速搅拌机搅拌，加蒸馏水至500ml，搅匀，即得ttx含量为10μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实施例7
ttx溶液的制备：将ttx枸橼酸盐溶于蒸馏水中，制备ph值为4-7的ttx含量为15mg/ml的ttx溶液。
选取鱼肝油400g，阿拉伯胶100g研匀，一次加入蒸馏水ttx250ml，ttx溶液10ml(含15mg)西黄著胶10g，甘油20g，吐温-8012g，杏仁油2.5g，香焦油1g，苯甲酸1.5g，柠檬酸0.3g，糖精钠0.25g，蒸馏水加至1000ml，搅匀，即得ttx含量为15μg/ml的ttx鱼肝油乳剂。
实验例1ttx鱼肝油乳剂与鱼肝油乳剂对照组的镇痛药理比较实验
热板法：热板恒温55±0.1℃，雌小鼠18‐22g，以舐后足为反应指标。正常实痛阈在30秒以内为合格鼠，取两次均数为药前痛阈值。药后不同时间同法测定痛阈值，计算痛阈提高百分率并进行显著性测验(t检验)。
ttx鱼肝油乳剂实验组(简称：乳剂a、b、c)和鱼肝油乳对照组(简称，对照组)。实验组与对照组制备方法相同，只是对照组未加ttx。分别给小鼠腹腔注射0.2ml/10g。实验结果见表1：
表1小鼠热板法观察ttx鱼肝油乳剂的镇痛作用
注*p＜0.05，**p＜0.01与药前对照；
▽p＜0.05，▽▽p＜0.01与对照乳剂组比。
实验例2ttx鱼肝油乳剂与鱼肝油乳剂对照组的镇痛药理比较实验
小鼠醋酸扭体法：小鼠体重18-22g，雄雌兼用。ttx鱼肝油乳剂实验组(简称：乳剂a、b、c)和不加ttx的鱼肝油乳对照组(简称，对照组)。给药后5小时，腹腔注射0.7％醋酸0.2ml/只，记录20分钟内小鼠扭体数。扭体指标：小鼠腹部内凹，后腿伸长，臀部抬起。结果见表2。
表2小鼠扭体法测定ttx鱼肝油乳剂腹腔注射后镇痛作用
本发明临床镇痛效果
收住院癌症患者29例，男性19例，女性10例，年龄，男49至68岁，女32至79岁。共观察病种有：胃癌5例，肺癌4例，肝癌3例，鼻烟癌3例，直肠癌3例，结肠癌、甲状腺癌、宫颈癌、食道癌各2例，膀胱癌、淋巴癌、卵巢癌各1例。癌症患者都有其它脏器及淋巴结转移，这些病人大都拌有持续性(多数)或阵发性(少数)疼痛。经使用本发明方法制成ttx鱼肝油乳的软胶囊(每粒胶囊含油乳剂0.5ml),口服软胶囊每日三次，每次饭后服用2～4粒或口服1ml-2ml油乳制剂。结果：服药1天起效4例，占13.8％；2天起效14例，占48.3％；3天起效8例，占27.6％；4天不起效2例，占10.3％.。从止痛效果看:无止痛作用2例，占6.9％；轻度缓解1例，占3.5％；中度止痛15例，占51.7；明显止痛8例，占有27，6％；完全止痛3例，占10.3％，总有效率89.6％。止痛特点：起效缓慢，但止痛持续时间长；对使用麻醉性镇痛药耐受成瘾患者仍有镇痛作用。其临床镇痛特点与动物实验基本一致。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。