本发明涉及一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，属于功能性产品制备技术领域。
背景技术：
乌贼属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科。乌贼墨由墨囊中的分泌腺合成，在墨囊中储存，遇到天敌时喷出染黑周围水域来保护自己，墨的量因乌贼种类不同而有所差异。我国对乌贼墨的应用已有悠久的历史，很早就作为止血药材而被载入各种医学典籍。《本草拾遗》有述“腹中墨,主治血刺心痛”，《本经》记载“可收敛止血，固精止带，制酸定痛，除湿敛疮”。乌贼墨为传统中药，如今仍作为止血剂在临床上继续使用,可治疗功能性子宫出血、胃出血等出血性疾病。现代对乌贼墨的研究是从乌贼墨中黑色素的结构及其生物合成开始的。20世纪90年代，日本学者takaya等从乌贼的墨汁中分离出一组肽聚糖，发现其具有抗肿瘤作用，能够有效抑制肉瘤细胞的生长，开启了近代乌贼墨药用研究的大门。随着对乌贼墨研究和开发的日益深入，目前已发现其具有多种药理作用，特别是从乌贼墨中分离出的乌贼墨多糖，在抗氧化、抗肿瘤、抗化疗、增强免疫等功能活性方面均表现出了良好的作用效果。同时，日本国内也将乌贼墨作为一种重要的保健食品原料添加到食物中，目前市场上已经有乌贼墨面包、乌贼墨拉面、乌贼墨意大利面条沙司等产品，深受人民的喜欢。
近年来，随着水产养殖业和捕捞业技术的提高，乌贼产量不断增加，乌贼加工产业也得到迅猛发展，然而乌贼墨作为加工过程中的废弃物，每年都会有大量积累，丢弃后会造成环境污染和严重的资源浪费，所以提高对水产加工废弃物乌贼墨的综合利用，既有利于促进海洋药物的研发，提升海洋资源的高值化利用，还能有效保护从事乌贼加工滨海城市的环境，维护沿海陆地与近海生态系统的良性发展。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，方法简单，成本低，制备的产品含有多种活性成分，具有较高的药用价值。
为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于1-3倍体积冰冷pbs溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡48~72小时，同样在4℃条件下，8000-10000rpm离心40-60min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，在50-55℃水浴孵育50-60min；
（5）离心：乌贼墨汁酶解后，进行沸水浴处理20-30min，冷却，再于4℃条件下，8000-10000rpm离心40-60min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液，4℃条件下静置20-30min后，8000-10000rpm离心40-60min，取上层黄色清液；重复2-3次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置40-60min后，5000-8000rpm离心10-15min，取沉淀物；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：将制备的乌贼墨黏多糖加入其它配方混合均匀后压片得到成品。
步骤（1）所述的pbs溶液为ph值为7.2，浓度为0.01m。
步骤（2）所述的超声波次数15-20次，每次间隔5-10s，每次处理时间3-5s。
步骤（4）所述的木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.10-0.20%。
步骤（6）所述的氯仿与正丁醇混合液指二者体积比1:1。
步骤（10）所述的片剂配方为：乌贼墨黏多糖28-32份、枸橼酸0.4-0.5份、淀粉43-48份、滑石粉3.0-3.2份、干淀粉16-20份、淀粉浆0.1-0.3份。
步骤（10）所述的制片步骤为：制软材、制粒、干燥（60℃鼓风干燥1小时）、整粒、压片。
本发明的有益效果是：
（1）本发明方法制备的产品含有多种活性成分，具有较高的药用价值。
（2）本发明方法简单，成本低，适合工业化生产。
说明书附图
图1乌贼墨制剂产品。
具体实施方式
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于1倍体积冰冷pbs（ph7.2，0.01m）溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；超声波次数15次，每次间隔5s，每次处理5s；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡48小时，同样在4℃条件下，8000rpm离心60min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.10%，在50℃水浴孵育60min；
（5）离心：酶解后，进行沸水浴处理20min，冷却，再于4℃条件下，8000rpm离心60min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液（v/v=1/1），4℃条件下静置20min后，8000rpm离心60min，取上层黄色清液；重复2次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置40min后，5000rpm离心15min，取沉淀；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：按照配方乌贼墨黏多糖28份，枸橼酸0.4份，淀粉43份，滑石粉3.0份，干淀粉16份，淀粉浆0.1份混合均匀后，经制软材、制粒、干燥、整粒、压片得到成品。
实施例2
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于3倍体积冰冷pbs（ph7.2，0.01m）溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；超声波次数20次，每次间隔10s，每次处理3s；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡72小时，同样在4℃条件下，10000rpm离心40min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.20%，
在55℃水浴孵育50min；
（5）离心：酶解后，进行沸水浴处理20-30min，冷却，再于4℃条件下，10000rpm离心40min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液（v/v=1/1），4℃条件下静置30min后，10000rpm离心40min，取上层黄色清液；重复3次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置60min后，8000rpm离心10min，取沉淀；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：按照配方乌贼墨黏多糖32份，枸橼酸0.5份，淀粉48份，滑石粉3.2份，干淀粉20份，淀粉浆0.3份混合均匀后，经制软材、制粒、干燥、整粒、压片得到成品。
实施例3
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于2倍体积冰冷pbs（ph7.2，0.01m）溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；超声波次数18次，每次间隔8s，每次处理4s；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡60小时，同样在4℃条件下，9000rpm离心50min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.15%，在50℃水浴孵育55min；
（5）离心：酶解后，进行沸水浴处理25min，冷却，再于4℃条件下，9000rpm离心50min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液（v/v=1/1），4℃条件下静置25min后，9000rpm离心50min，取上层黄色清液；重复3次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置50min后，6000rpm离心10-15min，取沉淀；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：按照配方乌贼墨黏多糖30份，枸橼酸0.5份，淀粉45份，滑石粉3.1份，干淀粉18份，淀粉浆0.2份混合均匀后，经制软材、制粒、干燥、整粒、压片得到成品。
实施例4
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于3倍体积冰冷pbs（ph7.2，0.01m）溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；超声波次数17次，每次间隔6s，每次处理5s；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡50小时，同样在4℃条件下，8500rpm离心55min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.10%，
在50℃水浴孵育60min；
（5）离心：酶解后，进行沸水浴处理22min，冷却，再于4℃条件下，9000rpm离心45min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液（v/v=1/1），4℃条件下静置22min后，10000rpm离心50min，取上层黄色清液；重复3次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置45min后，7000rpm离心14min，取沉淀；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：按照配方乌贼墨黏多糖29份，枸橼酸0.5份，淀粉47份，滑石粉3.0份，干淀粉17份，淀粉浆0.2份混合均匀后，经制软材、制粒、干燥、整粒、压片得到成品。
实施例5
一种具有化学预防活性的乌贼墨制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）研磨：取新鲜乌贼墨汁，于4℃冻融后，悬于1倍体积冰冷pbs（ph7.2，0.01m）溶液中，进行研磨；
（2）超声处理：研磨后的乌贼墨汁反复进行超声波处理；超声波次数18次，每次间隔5s，每次处理4s；
（3）浸泡离心：超声处理后的乌贼墨汁在4℃条件下搅拌浸泡66小时，同样在4℃条件下，9500rpm离心45min，取上清；
（4）酶解：加入木瓜蛋白酶进行酶解，木瓜蛋白酶添加量为乌贼墨汁的0.20%，在55℃水浴孵育60min；
（5）离心：酶解后，进行沸水浴处理24min，冷却，再于4℃条件下，9500rpm离心50min，取上清液；
（6）提取：步骤（5）得到的上清液加入1/4倍体积氯仿与正丁醇混合液（v/v=1/1），4℃条件下静置28min后，10000rpm离心50min，取上层黄色清液；重复2次，合并黄色清液；
（7）浓缩：将合并的黄色清液旋转蒸发浓缩至1/4体积；
（8）沉淀：浓缩后的溶液加入4倍体积的无水乙醇，4℃环境中静置4min后，5000rpm离心10min，取沉淀；
（9）喷雾干燥：将步骤（8）得到的沉淀物于120℃喷雾干燥，得到粗粉，粉碎过筛，制成细末，即为乌贼墨黏多糖；
（10）压片：按照配方乌贼墨黏多糖28份，枸橼酸0.4份，淀粉44份，滑石粉3.2份，干淀粉18份，淀粉浆0.3份混合均匀后，经制软材、制粒、干燥、整粒、压片得到成品。
实施例6
根据以上步骤制备的乌贼墨片剂，分别测定技术指标为：
（1）外观形状：结构完整光洁，色泽均匀，见图1。
（2）片重差异：平均片重0.0775g，平均偏差0.0025g，方差为0.000002，偏差度<7.5%，具体见表1。
（3）硬度：横向压片承受力度为2.357kg，纵向压片承受力度为2.438kg，具体见表2。
（4）崩解度：取12片，测定崩解度，崩解时间均低于10min，具体见表3。
（5）含水量：取20片测含水量，含水量为8.92%，具体见表4。
表1乌贼墨制剂的片重差异
表2乌贼墨制剂的硬度
表3乌贼墨片剂崩解时间
表4乌贼墨片剂干燥所需时间