喷滴或饮水免疫用鸡球虫疫苗稳定剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种喷滴或饮水用鸡球虫疫苗稳定剂及其制备方法和应用。

背景技术：

鸡球虫病对10日龄以上的雏鸡对该病最易感，其发病率可高达50％～70％，病死率通常为20％～30％，严重者可高达80％，给养鸡业造成严重的经济损失。目前主要是基于在饲料中使用抗球虫药物进行预防，或者是球虫感染出现临床症状后使用抗球虫药进行治疗，就目前现状来看，使用抗球虫药无法完全控制鸡球虫病的发生。后发展为使用鸡球虫活疫苗进行口服免疫以预防鸡球虫病，鸡球虫疫苗主要是通过饲料或饮水进行免疫，并取得了较好的效果。但是，在鸡球虫疫苗推广应用过程中，均碰到影响免疫效果的系列问题，一是鸡球虫卵囊在干燥环境中活性会减弱或死亡而导致免疫效果不佳，在运输、使用、保存过程中方法不当容易造成免疫失败；二是鸡球虫卵囊比重较大，在水中容易发生沉淀，鸡只无法均匀免疫或部分鸡只摄入过量球虫卵囊而爆发鸡球虫病，目前也有把鸡球虫卵囊加入助悬剂中，使球虫卵囊在短时间内悬浮在水体系中，但操作较为费时费力，且不能长时间饮用，推广上受到一定的限制，因而大部分情况仍然是将鸡球虫卵囊喷洒在饲料表面进行拌料免疫。

本发明主要针对上述存在的关键问题，拟研制出一种可以使鸡球虫疫苗中卵囊能均匀分散在饮水中，并在免疫过程中保护鸡球虫卵囊的活性不受温度、湿度和有害气体的影响，从而达到均匀免疫的稳定剂，为鸡球虫病综合防控提供条件。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是一种喷滴或饮水用鸡球虫疫苗稳定剂及其制备方法和应用。

一种用于鸡球虫疫苗的稳定剂，按照重量百分比计，包括以下组分：食用胶10-35％、海藻酸钠2-5％、水稳定化合物聚丙烯酸钠3-12％、食用色素0.1-0.5％、甜味剂0.1-0.5％，人参叶提取物2-8％，糊精39-82.8％。

优选的，按照重量百分比计，包括以下组分：食用胶10-30％、海藻酸钠2-4％、水稳定化合物聚丙烯酸钠3-10％、食用色素0.2-0.5％、甜味剂0.2-0.5％，人参叶提取物2-6％，糊精49-82.6％。

优选的，所述食用胶采用琼脂粉、阿拉伯胶、角叉莱胶、角豆胶、卡拉胶、明胶、瓜尔胶、虫胶、黄原胶、果胶、刺槐豆胶、桃胶、果胶、魔芋胶中的至少一种；所述食用色素采用胭脂红、日落黄、靛蓝、酒石黄、柠檬黄、亮蓝、青草绿、苋菜红中的至少一种；所述甜味剂采用甜菊糖苷、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、乳糖、低聚糖、安赛蜜、甘草甜素中的至少一种；所述糊精采用玉米淀粉、可溶性淀粉、麦芽糊精、环糊精中的至少一种。

本发明同时还提供所述的鸡球虫疫苗稳定剂的制备方法和应用。

其制备方法为：将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至4.5-7.0,即得稳定剂。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明的稳定剂可与鸡球虫疫苗配合使用，可使球虫卵囊在水体系中稳定分散而不发生沉降，可达到均匀免疫的效果；

2、本发明鸡球虫疫苗稳定剂，可用于鸡球虫疫苗饮水免疫，也可以通过喷洒在小鸡羽毛免疫，使用方便，在水中可迅速分散、溶解成透明胶体；

3、本发明鸡球虫疫苗稳定剂可使鸡球虫卵囊在水体系中保持至少8个小时不沉降，满足临床饮水免疫或喷滴免疫的要求，加入的人参叶提取物可以保持免疫过程中球虫卵囊的活力。

4、本发明的鸡球虫疫苗稳定剂为非药物，所有组分均为食品级原料，安全性好，与鸡球虫疫苗配合使用，减少鸡球虫病的发生，同时减少抗球虫药物的使用，减少药物残留。

5、本发明的鸡球虫疫苗稀释剂加入色素，起到颜色指示的作用，可查看是否体系是否均匀分散，以及查看鸡只口腔颜色指示是否通过饮水或喷滴方式成功免疫，较少漏免的现象。

附图说明

图1是本发明自来水中不同时间球虫卵囊分布情况。

图2是本发明稳定剂中不同时间球虫卵囊分布情况。

图3是本发明稳定剂中不同时间球虫卵囊分布情况。

图4是本发明稳定剂中不同时间球虫卵囊分布情况。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明：

实施例1

按照重量百分比计，包括以下组分：黄原胶15％、海藻酸钠2％、水稳定化合物聚丙烯酸钠3％、柠檬黄0.2％、纽甜0.2％，人参叶提取物2％，可溶性淀粉77.6％。

将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至5.0,即得稳定剂。

实施例2

按照重量百分比计，包括以下组分：琼脂粉20％、海藻酸钠3％、水稳定化合物聚丙烯酸钠5％、酒石黄0.2％、甜菊糖苷0.2％，人参叶提取物3％，玉米淀粉68.6％。

将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至5.5,即得稳定剂。

实施例3

按照重量百分比计，包括以下组分：角叉莱胶25％、海藻酸钠3％、水稳定化合物聚丙烯酸钠4％、日落黄0.3％、低聚糖0.2％，人参叶提取物3％，麦芽糊精64.5％。

将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至6.0,即得稳定剂。

实施例4

按照重量百分比计，包括以下组分：卡拉胶22％、海藻酸钠3％、水稳定化合物聚丙烯酸钠5％、柠檬黄0.3％、纽甜0.2％，人参叶提取物3％，可溶性淀粉66.5％。

将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至5.0,即得稳定剂。

实施例5

按照重量百分比，包括以下组分：黄原胶16％、海藻酸钠3％、水稳定化合物聚丙烯酸钠4％、靛蓝0.2％、纽甜0.2％，人参叶提取物2％，麦芽糊精74.6％。

将所述稳定剂成分按比例混合均匀后，缓慢加入自来水中，搅拌均匀，至液体呈均一颜色，调整ph值至7.0,即得稳定剂。

实施例6效果对比试验

将实施例1、实施例2、实施例3制得的鸡球虫疫苗稀释剂(以下分别相应地简称试验组1、2、3)和自来水(以下简称对照组)进行对比，比较其对球虫卵囊在饮水中的悬浮效果。

操作方法：将5×10⁶个球虫卵囊加入1000ml稀释剂中，置2000ml烧杯中，静置。分别于配置好的球虫疫苗混合液后的0、1、2、3、4、5、6、7、8小时，用移液枪在烧杯的900ml、600ml、300ml刻度处(亦即球虫疫苗混合液的上、中、下三层)分别吸取10μl球虫疫苗混合液，在10×10倍显微镜下计算卵囊数，每处取3个样，卵囊数取平均值，以0小时3个位置的卵囊平均值为基数，1、2、3、4、5、6、7、8小时从900ml、600ml、300ml刻度处分别吸取的球虫疫苗的卵囊平均数与基数相差均小于10％，表明卵囊既不上浮也不沉降。

评价指标：

(1)以0小时3个位置的卵囊平均值为基数，1、2、3、4、5、6、7、8小时从900ml、600ml、300ml刻度处分别吸取的球虫疫苗的卵囊平均数与基数相差均小于10％，表明卵囊既不上浮也不沉降。

试验结果如表1-4和图1-4所示：

表1

表2

表3

表4

结果显示，在自来水中，鸡球虫卵囊在1小时内全部沉降至下层，无悬浮作用。在稀释剂中，鸡球虫卵囊在8h内保持较为平稳的趋势，1、2、3、4、5、6、7、8小时从900ml、600ml、300ml刻度处分别吸取的球虫疫苗的卵囊平均数与基数相差均小于10％，表明卵囊既不上浮也不沉降。这说明，使用本发明稀释剂可较好地使鸡球虫卵囊长时间均匀分散在体系中，可用于饮水免疫或喷滴免疫。

实施例7不同免疫方法效果对比试验

1.1供试卵囊

柔嫩艾美耳球虫(eimeriatenella)卵囊强毒株山东株，由广州华农大实验兽药有限公司保存。

1.2试验分组及处理

将1日龄供试鸡随机分成5组，每组200只。具体分组如表1所示。

表1实验分组与处理

1.3疗效判定标准

连续观察，记录下列项目。

1.3.1增重情况

于14、21日龄随机测称50只鸡的体重，并由此算出平均增重和相对增重率。

相对增重率：(用药组或感染不给药组的平均增重÷不感染不给药组的平均增重)×100

1.3.2症状观察及血便记分

包括精神、毛色、食欲和粪便等。感染后第5天，观察各组鸡24小时内排出的粪便，按5级记分制进行血便记分。0分：粪便不带血液；1分：25％的粪便带血；2分：50％的粪便带血；3分：75％的粪便带血；4分：100％的粪便带血。

1.3.3死亡情况

记录各组死亡鸡数，剖检确定死因，并由此算出死亡率和成活率。

1.3.4剖检病变及盲肠卵囊计数

于感染后第6天，每组扑杀5只，剖检观察盲肠病变，按5分制进行病变记分。0分：不见病变；1分：盲肠粘膜有少量出血点；2分：肠壁增厚，粘膜有多量出血点；3分：盲肠肿胀，内容物含多量血液，或形成硬固肠芯；4分：盲肠极度肿胀，外观呈紫红色，内容物含血凝块，或死于球虫病者。并由病变记分×10换算成病变值。以及计算每对盲肠所含卵囊数，再根据表2换算成卵囊值。

表2卵囊数与卵囊值的转换

1.3.5饲料报酬

记录各组耗料量和总增重，由此算出料肉比。

通过上述前4项指标，按如下公式计算抗球虫指数(aci)。

抗球虫指数＝(相对增重率+存活率)×100－(病变值+卵囊值)抗球虫指数>180者为高效抗球虫药；抗球虫指数160～180者为中效抗球虫药；抗球虫指数120～160者为低效抗球虫药；抗球虫指数<120者为无效抗球虫药。

2试验结果

表3各组试验结果统计表

3结果

试验结果表明，使用本发明成果稳定剂配制疫苗进行饮水免疫和喷滴免疫，对鸡只具有较好免疫效果，与拌料免疫组相比，鸡只肠道病变明显减轻，体现出明显的保护作用，这说明，采用本发明成果稀释后喷滴或饮水，免疫效率明显提高。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。