本发明涉及医药，特别是一种败酱草总黄酮在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用。
背景技术：
：局灶性脑缺血是指短暂性脑缺血发作(tia)，颈动脉或椎-基底动脉系统发生短暂性血液供应不足，引起局灶性脑缺血导致突发的、短暂性、可逆性神经功能障碍。发作持续数分钟，通常在30分钟内完全恢复，超过2小时常遗留轻微神经功能缺损表现，或ct及mri显示脑组织缺血征象。tia好发于34～65岁，65岁以上占25.3％，男性多于女性。发病突然，多在体位改变、活动过度、颈部突然转动或屈伸等情况下发病。发病无先兆，有一过性的神经系统定位体征，一般无意识障碍，历时5～20分钟，可反复发作，但一般在24小时内完全恢复，无后遗症。败酱草(拉丁学名：thlaspiarvenselinn.)，又叫菥蓂、遏蓝菜，是罂粟目菥蓂属下的植物，为草本植物，味辛、苦，用于中药熬煮时有浓烈的脚臭味，有清热解毒，祛瘀排脓等功效，用于阑尾炎、痢疾、肠炎、肝炎、眼结膜炎、产后瘀血腹痛、痈肿疔疮。但至今未见有从败酱草中提取的总黄酮在缺血治疗治疗局灶性脑缺血药物中的应用。技术实现要素：针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种败酱草总黄酮在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用，可有效解决从败酱草中提取败酱草总黄酮，实现败酱草总黄酮作为唯一活性成分在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用问题。本发明解决的技术方案是，一种败酱草总黄酮在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用，所述的败酱草总黄酮是，将败酱草粉碎成粗粉，乙醚回流提取脱脂，弃去乙醚；败酱草药渣挥干乙醚，加质量浓度80％乙醇浸泡，回流提取，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml的分散液，分散液上ab-8型大孔吸附树脂，先用蒸馏水洗脱，弃去水液；继用质量浓度10％乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用质量浓度80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，冷冻干燥，粉碎，得败酱草总黄酮。本发明可有效解决从败酱草中提取败酱草总黄酮，并有效用于治疗局灶性脑缺血，开拓了败酱草的新用途和药用价值，是药物上的一大创新，有显著的经济和社会效益。具体实施方式以下结合具体情况为本发明的具体实施方式作详细说明。本发明在具体实施中，一种败酱草总黄酮在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用，所述的败酱草总黄酮是，将败酱草粉碎成过20-30目筛的粗粉，先加10倍重量的乙醚回流提取1h，脱脂，弃去乙醚；败酱草药渣挥干乙醚，加败酱草10倍重量的、质量浓度80％乙醇浸泡0.5h，回流提取1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加败酱草10倍重量的、质量浓度80％乙醇，回流提取1h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml的分散液，分散液上ab-8型大孔吸附树脂，先用2倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；继用4倍柱体积的、质量浓度10％乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用6倍柱体积的、质量浓度80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，冷冻干燥，粉碎，得败酱草总黄酮，败酱草总黄酮质量含量51％以上。本发明所制备的败酱草总黄酮经实验具有抗局灶性脑缺血之功效，有效用于制备治疗局灶性脑缺血的药物，是治疗局灶性脑缺血药物上的创新，并经败酱总黄酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的影响实验取得了非常好的有益技术效果，有关实验资料如下：1材料1.1动物wistar大鼠，spf级，雄性，由山东鲁抗医药股份有限公司提供。合格证号：37005400000023，动物实验中心许可证号：syxk(豫)2015-0005，伦理批号：dwll15010017，上岗证号：201302001。1.2药品与试剂本发明败酱总黄酮；尼莫地平片，亚宝药业集团股份有限公司，批号：140861；脑络通胶囊，吉林金宝药业股份有限公司，批号：150401；生理盐水，河南双鹤华利药业有限公司，批号c115052005-2；青霉素，华北制药股份有限公司，批号：f4013504；甲醛溶液，分析纯，烟台市双双化工有限公司，批号：20150701；水合氯醛，天津市光复精细化工研究所，批号20141025；医用乙醇(酒精)，新乡市三伟消毒制剂有限公司，批号：20150520；红四氮唑(ttc)，中国华东师范大学化工厂(上海)，批号：04102711；磷酸氢二钠，天津市致远化学试剂有限公司，批号：20141110；磷酸二氢钠，天津市化学试剂三厂，批号：20110108；细胞间粘附分子1(icam-1)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150901a；白细胞介素-1β(il-1β)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150901a；白细胞介素-6(il-6)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150901a；肿瘤坏死因子α(tnf-α)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150901a；bcl-2相关x蛋白(bax)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150801a；b细胞淋巴瘤因子2(bcl-2)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150801a；半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)elisa检测试剂盒，r&d公司，批号：20150901a；考马斯亮蓝试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150821；超氧化物歧化酶(sod)检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150821；丙二醛(mda)检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150901；atp酶试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150826；1.3仪器线栓，北京西浓生物技术有限公司，产品号：2838-a4；电子天平：上海精密科学仪器有限公司，型号：fa2204b；电子称：上海精密科学仪器有限公司，型号：yp1201n；台式低速自动平衡离心机：长沙湘智离心机仪器有限公司，型号：tdl-40b；恒温水浴，上海一恒科学仪器有限公司，型号：hws12；酶标仪，美国bio-rad公司，型号：biorad-680；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。2方法2.1造模与给药取健康大鼠98只，雄性，正常饲养3天，称重并随机分为7组，每组14只，分别为假手术组﹑模型组、尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组。尼莫地平组(阳性对照药，给药剂量为20mg/kg，相当于临床剂量的10倍)，脑络通组(阳性对照药，脑络通，给药剂量为500mg/kg，临床用量的10倍)；大、中、小剂量败酱总黄酮组(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)。假手术组及模型组分别灌胃同体积生理盐水(各组灌胃体积均为2ml/100g)。每天给药1次，连续给药7d。于第6天晚上8点禁食不禁水，第7天上午8点分批称重，给药1h后，用10％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉，用眼科剪在颈部正中偏左剪口，逐层分离左侧颈总动脉(cca)并穿两根线备用，分离颈外动脉(eca)穿一根线备用，结扎颈外动脉，结扎颈总动脉近心端，远心端轻打一个小结以线栓能穿过为准，于颈总动脉距离分叉约5mm处剪开约0.2mm宽的小口，将线栓插入，经颈总动脉分叉部进入颈内动脉，向上深入至分叉以上18-20mm，直至有阻力，即阻断大脑中动脉入口处，结扎颈总动脉近心端，2h后轻轻抽出栓线至略有阻力，实现再灌注，建立大脑中动脉阻塞-再灌注(mcao)动物模型。假手术组仅暴露左侧血管，不做插线处理，手术过程中保持室温23～25℃。2.2检测指标和检测方法2.2.1神经症状评分所有大鼠再灌注22h后，进行神经行为学评分(longa评分法)，评分标准：无神经功能缺失症状，活动正常：0分；不能完全伸展对侧前爪：1分；爬行时出现向偏瘫侧转圈：2分；行走时，身体向偏瘫侧倾倒：3分；不能自发行走，意识丧失：4分；死亡：5分。评分为0分和5分者剔除；2.2.2脑组织取材及处理大鼠断头后，迅速剥取脑组织，放入-20℃低温冰箱中冷却15min，取出脑组织，去掉嗅球、小脑、低位脑干后的剩余部分，沿冠状面切成3部分(第一部分为脑前极至视交叉冠状面前1mm处，第二部分为视交叉冠状面前后1mm处，约为2mm的薄片，第三部分为视交叉冠状面后1mm处至尾端的脑组织)。2.2.3脑组织匀浆制备取第一部分脑组织，矢状切取左侧脑组织(插线栓侧)，生理盐水清洗后，分析天平准确称量其重量，以生理盐水(ml)：脑组织(g)＝9∶1的比例加入的冰冷的生理盐水，在盛有冰块的大烧杯中用玻璃匀浆器制成10％的脑匀浆，4℃、3000r/min离心10min，取上清液分装，-20℃冰箱低温保存，测定脑匀浆中il-6、il-1β、tnf-α、bcl-2、bax、casp-3、icam-1、atp酶、sod、mda水平。2.2.4脑梗死面积测定取第二部分脑切片迅速放入以ph＝7.2磷酸缓冲液配置的1％ttc溶液中，37℃避光孵育15min，其间翻动一次，以利于脑切片双面充分染色。染色后取出脑片，放置于10％福尔马林溶液中避光保存并拍照，染色后未梗死的脑组织为玫瑰红色，梗死的脑组织为白色。经图像分析系统分析并计算梗死区面积，求其占总面积的百分比。2.2.5he染色及免疫组织化学染色第三部分脑组织，常规石蜡包埋，进行he染色，免疫组织化学染色法进行ngf及nfκbp65染色。2.2.6脑组织中il-6、il-1β、tnf-α、bcl-2、bax、casp-3、icam-1的测定方法检测原理、操作步骤：同实验一中神经元烯醇化酶(nse)。2.2.7考马斯亮蓝蛋白定量侧定方法样品前处理：10％脑组织匀浆，用生理盐水按1:4稀释成2％的组织匀浆，待测。空白管标准管测定管双蒸水(ml)0.050.563/l蛋白标准液(ml)0.05样品(ml)0.05考马斯亮蓝显色液(ml)3.03.03.0加入各管相对应试剂后混匀，静置10min，蒸馏水调零，1cm光径，于595nm处，测各管od值。计算公式2.2.8脑组织中atp酶的测定方法脑匀浆中atp酶测定操作顺序表测试前a、b、c混合剂的配制管号a管液体量b管液体量c管液体量试剂一(μl)130×(n+2)130×(n+2)90×(n+2)试剂二(μl)40×(n+2)40×(n+2)40×(n+2)试剂三(μl)试剂四(μl)40×(n+2)40×(n+2)40×(n+2)试剂五(μl)40×(n+2)试剂六(μl)40×(n+2)40×(n+2)40×(n+2)混合试剂总量(μl)250×(n+2)250×(n+2)250×(n+2)每管应吸液量(μl)250250250酶促反应混匀，3000-4000r/min离心10min，取上清200μl定磷。混匀，37℃水浴30分钟，冷却至室温，在660nm处，1cm光径，蒸馏水调零比色。注：a管为对照管；b管为na+k+-atp酶管；c管为mg++-atp酶管；标准管浓度为0.5μmol/ml计算公式：组织中atp活力(μmolpi/mgprot/hour)＝(测定管od值－对照管od值)/标准管od值*标准管浓度×反应体系中样品稀释倍数*6/匀浆蛋白浓度(mgprot/ml)2.2.9脑组织中sod的测定方法测定原理：黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶互相反应后可产生超氧阴离子自由基，经氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下可呈现出紫红色，用紫外分光光度计测其吸光度。sod对超氧阴离子自由基有专一的抑制作用，形成的亚硝酸盐减少，用比色法，测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过标准管测定值建立公式，计算出被测样品sod活力。总sod(t-sod)活力的测定：混匀，室温放置10分钟，于波长50nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色。组织匀浆中sod活力＝(对照管吸光度－测定管吸光度)/对照管吸光度/50％*反应液总体积/取样量(ml)/组织中蛋白浓度(mgprot/ml)mgprot为毫克蛋白数。2.2.10脑组织中mda的测定方法测定原理：过氧化脂质降解产生中含有丙二酫(mda)，mda与硫代巴比妥酸(tba)缩合后可形成红色产物，该产物在532nm处具有最大吸收峰。操作顺序混匀后用保鲜薄膜扎紧试管口，95℃水浴40min后取出，流动水冷却，3500-4000r/min离心10min。用移液枪取上清液，1cm光径532nm处，蒸馏水调零，调各管od值。组织中mda含量(nmol/mgprot)＝(测定管吸光度－测定空白管吸光度)*标准品浓度/(标准管吸光度－标准空白管吸光度)/蛋白含量(mgprot/ml)3统计学处理方法数据分析用spss19.0统计软件包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用最小显著差数(lsd)法，方差不齐者用games-howell法检验，等级资料用radit检验。4结果4.1对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型死亡率和神经功能缺失评分的影响(结果见表6)表6对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型死亡率和神经功能缺失评分的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由表6可以看出，模型组的死亡率最高，尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠的死亡率均有所降低，说明给药各组均能不同程度降低局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的死亡率，减少脑组织损伤，保护脑组织。与假手术组相比较，模型组大鼠神经功能缺失评分显著升高(p<0.01)，提示造模成功；与模型组比，脑络通组、尼莫地平组、大剂量败酱总黄酮组大鼠神经功能缺失评分显著降低(p<0.01)，中、小剂量败酱总黄酮组大鼠神经功能缺失评分明显降低(p<0.05)，说明给药各组具有不同程度的改善局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经状况的作用。4.2对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆il-6、il-1β、tnf-α含量的影响(结果见表7)表7对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆il-6、il-1β、tnf-α含量的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由表7可以看出，与假手术组比，局灶性缺血再灌注大鼠模型脑组织il-6、il-1β、tnf-α水平均显著上升(p<0.01)，说明造模成功；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织il-6水平显著降低(p<0.01)，中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织il-6水平明显降低(p<0.05)；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织il-1β水平显著降低(p<0.01)；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织tnf-α水平显著降低(p<0.01)，中剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织tnf-α水平明显降低(p<0.05)，小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织tnf-α水平有降低趋势(p＞0.05)。说明给药各组具有降低局灶性缺血再灌注大鼠模型脑组织il-6、il-1β、tnf-α水平，减轻炎症反应对脑组织损伤的作用。4.3对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆bax、bcl-2、casp-3含量的影响(结果见表8)表8对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆bax、bcl-2、casp-3含量的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由表8可以看出，与假手术组比，模型组大鼠脑组织bax、caspase-3水平显著升高(p<0.01)，bcl-2水平明显升高(p<0.05)，说明造模成功；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织bax水平显著降低(p<0.01)；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织bcl-2水平显著升高(p<0.01)；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大、中剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织caspase-3水平显著降低(p<0.01)，小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织caspase-3水平明显降低(p<0.05)，说明给药各组能不同程度增加局灶性脑缺血大鼠模型脑组织中抑制细胞凋亡基因表达，降低促细胞凋亡基因表达，抑制细胞凋亡，从而保护脑组织，缓解脑缺血症状。4.4对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑梗死面积百分比、脑匀浆icam-1水平的影响(结果见表9)表9对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑梗死面积百分比、脑匀浆icam-1水平的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由表9可以看出，与假手术组比，模型组大鼠脑组织icam-1水平、脑梗死面积百分比均显著升高(p<0.01)，说明造模成功；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织icam-1水平均显著降低(p<0.01)，中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织icam-1水平均明显降低(p<0.05)；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑梗死面积百分比显著降低(p<0.01)，中剂量败酱总黄酮组大鼠脑梗死面积百分比明显降低(p<0.05)，小剂量败酱总黄酮组大鼠脑梗死面积百分比有降低趋势(p＞0.05)，说明给药各组具有不同程度的降低局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织icam-1水平，减少脑梗死面积的作用。4.5对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆na+-k+-atp酶活力和mg++-atp酶活力的影响(结果见表10)表10对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆na+-k+-atp酶活力和mg++-atp酶活力的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由表10可以看出，与假手术组比，模型组大鼠脑组织na+-k+-atp酶和mg++-atp酶活力均显著降低(p<0.01)，说明造模成功；与模型组比，尼莫地平组、脑络通组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织na+-k+-atp酶活力均显著升高(p<0.01)，中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织na+-k+-atp酶活力明显升高(p<0.05)；尼莫地平组、脑络通组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织mg++-atp酶活力均显著升高(p<0.01)，说明给药各组均能不同程度升高局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织atp酶活力。4.6对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆mda和sod水平的影响(结果见表11)表11对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑匀浆mda和sod水平的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由以上表11可以看出，与假手术组相比较，模型组大鼠脑组织匀浆中mda含量显著升高、sod含量显著降低(p<0.01)，说明造模成功；与模型组相比，脑络通组、尼莫地平组、大剂量败酱总黄酮组脑组织中mda水平显著降低(p<0.01)，中、小剂量败酱总黄酮组脑组织中mda水平明显降低(p<0.05)；脑络通组、尼莫地平组、大、中剂量败酱总黄酮组脑组织中sod水平显著升高(p<0.01)，小剂量败酱总黄酮组脑组织中sod水平明显升高(p<0.05)，提示败酱总黄酮可减轻局灶脑缺血模型大鼠脑组织过氧化反应，保护脑组织。4.7对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织ngf、nf-kbp65免疫阳性表达水平的影响(结果见表12)表12对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织ngf、nf-kbp65免疫阳性表达水平的影响注：与模型组比，**p<0.01，*p<0.05由以上表12可以看出，与假手术组比，模型组大鼠脑组织ngf、nf-kbp65免疫阳性表达水平显著升高(p<0.01)，说明造模成功；与模型组比，脑络通组、尼莫地平组、大、中、小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织ngf免疫阳性表达水平均显著升高(p<0.01)；与模型组比，脑络通组、尼莫地平组、大剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织nf-kbp65免疫阳性表达水平均显著降低(p<0.01)，中剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织nf-kbp65免疫阳性表达水平均明显降低(p<0.05)，小剂量败酱总黄酮组大鼠脑组织nf-kbp65免疫阳性表达水平均有降低趋势(p＞0.05)，说明各给药组能够促进脑神经细胞ngf表达，抑制nf-kbp65表达，预防大鼠脑神经细胞变性或死亡，从而维持脑神经正常功能，减轻脑缺血再灌注所造成的损伤。4.8对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织皮质区的病理变化影响(结果见表14)对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织皮质区组织病理观察(见附录1)：假手术组大脑皮质无水肿，神经细胞正常；模型组大脑皮质神经细胞水肿，大片神经元坏死，梗死面积占皮质的2/3以上；脑络通组大脑皮质部分神经细胞水肿，少数神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3以内；尼莫地平组大脑皮质部分神经细胞水肿，少数神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3以内；大剂量败酱总黄酮组大脑皮质神经细胞水肿，少数神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3以内；中剂量败酱总黄酮组大脑皮质神经细胞水肿，少数神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3～2/3以内；小剂量败酱总黄酮组大脑皮质神经细胞水肿，大片神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3～2/3以内。表13对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织皮质区病理变化的影响“—”大脑皮质无水肿，神经细胞正常；“+”大脑皮质神经细胞水肿，少数神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3以内；“++”大脑皮质神经细胞水肿，成片神经元坏死，梗死面积占皮质的1/3～2/3以内；“+++”大脑皮质神经细胞水肿，大片神经元坏死，梗死面积占皮质的2/3以上。经ridit检验，与假手术组比，模型组有显著的统计学意义(p<0.01)，说明模型组大鼠脑组织皮质区出现显著的病理变化，造模成功；与模型组比，脑络通组、尼莫地平组有显著的统计学意义(p<0.01)；大、中、小剂量败酱总黄酮组有明显的统计学意义(p<0.05)，说明各给药组能不同程度的改善局造性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织皮质区的病理损伤程度，保护脑组织。4.9对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织海马区病理变化的影响(结果见表15)对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织海马区组织病理观察如下：假手术组大脑海马组织无水肿，神经细胞正常；模型组大脑海马组织水肿，大片神经元坏死，梗死面积占海马组织的2/3以上；脑络通组大脑海马组织水肿，少数神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3以内；尼莫地平组大脑海马组织水肿，少数神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3以内；大剂量败酱总黄酮组大脑海马组织水肿，少数神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3以内；中剂量败酱总黄酮组大脑海马组织水肿，少数神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3～2/3以内；小剂量败酱总黄酮组大脑海马组织水肿，成片神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3～2/3以内。表14对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织海马区病理变化的影响“—”大脑海马组织无水肿，神经细胞正常；“+”大脑海马组织水肿，少数神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3以内；“++”大脑海马组织水肿，成片神经元坏死，梗死面积占海马组织的1/3～2/3以内；“+++”大脑海马组织水肿，大片神经元坏死，梗死面积占海马组织的2/3以上。经ridit检验，与假手术组比，模型组有显著的统计学意义(p<0.01)，说明模型组大鼠脑组织海马区出现显著的病理变化，造模成功；与模型组比，脑络通组、尼莫地平组剂量具有显著统计学意义(p<0.01)；大、中、小剂量败酱总黄酮组有明显的统计学意义(p<0.05)，说明各给药组能不同程度的改善局造性脑缺血再灌注模型大鼠脑组织海马区的病理损伤程度，保护脑组织。5结论通过观察败酱总黄酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的神经功能缺失评分、死亡率、脑梗死面积百分比、脑组织中il-6、il-1β、tnf-α、bcl-2、bax、casp-3、icam-1、atp酶、sod、mda水平、ngf及nf-kbp65表达以及脑组织病理损伤变化的影响，提示败酱总黄酮可以降低动物神经功能缺失评分、死亡率、脑梗死面积百分比，对脑组织和神经元具有保护作用，降低脑组织中il-6、il-1β、icam-1、tnf-α水平，抑制缺血再灌注后炎症反应，减少炎症引起的一系列级联反应释放的炎症介质和细胞因子；减轻脂质过氧化反应，降低脑部mda含量，升高脑部sod含量，保护脑组织；升高脑组织中atp酶水平，改善因能量代谢障碍对缺血脑组织的损伤；降低脑组织中bax、caspase-3水平，显著升高脑组织bcl-2水平，抑制细胞凋亡，保护神经元细胞；促进脑组织ngf阳性表达，抑制脑组织nf-kbp65阳性表达，保护神经元，脑细胞自我保护机制被激活，减轻脑缺血再灌注损伤，以大剂量败酱总黄酮组为最佳。在动物试验确保安全的基础上，在临床上进行了对比试验，对比组采用氯吡格雷，试验组采用败酱草总黄酮加氯吡格雷，有关试验情况如下：败酱草总黄酮加氯吡格雷治疗短暂脑缺血60例选择符合全国第四次脑血管病学术会议制订的短暂脑缺血诊断标准:即为短暂的、可逆的、局部的脑血液循环障碍，可反复发作，少者1～2次，多至数十次，每次发作持续时间通常在数分钟至1h左右，症状和体征应该在24h内完全消失。abcd2评分标准:年龄＞60岁(1分)；血压为收缩压＞140mmhg或舒张压＞90mmhg(1分)；临床症状为单侧无力(2分)，不伴无力的言语障碍(1分)；症状持续时间＞60min(2分)，10～59min(1分)；患有糖尿病(1分)。危险分层:0～3分为低危组；4～5分为中危组；6～7分为高危组。选择abcd2评分标准在低危层的患者60人，随机分为2组，每组30人，对照组口服氯吡格雷(商品名为波立维，75mg/片，法国赛诺菲公司)，每次75mg，1d1次，首剂300mg。治疗组除按对照组方法服用氯吡格雷外，加用败酱草总黄酮(败酱草总黄酮制成胶囊，每粒0.3g，每次2粒，每天2次。以上两组均治疗30d，治疗期间常规调控血压及血糖，停用其他能够影响凝血功能的药物。氯吡格雷组与氯吡格雷加败酱草总黄酮组7d内短暂脑缺血发作终止的例数分别为24例、27例，7d内短暂脑缺血发作终止时的时间分别为(9.66±1.21)d、(0.50±1.06)d，7d后仍有发作的例数分别为6例、3例，30d内短暂脑缺血加重的例数均为0例。败酱草总黄酮加氯吡格雷对短暂脑缺血患者的总体疗效优于常规氯吡格雷治疗组。从上述实验中可以清楚的看出，本发明从败酱草中提取的败酱草总黄酮具有抗脑缺血之功效，有效用于制备治疗反复局灶性脑缺血的药物，实现败酱草总黄酮在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用，其制备方法简单，易操作，开拓了败酱草新的药用价值和商业价值，是治疗局灶性脑缺血药物上的创新，经济和社会效益显著。当前第1页12