本发明涉及一种阿莫西林菠萝蛋白酶组合物，还涉及该组合物的制备方法和用途。
背景技术：
呼吸道感染是常见的多发性疾病，分为上呼吸道感染与下呼吸道感染，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。上呼吸道感染90％左右由病毒引起，细菌感染常继发于病毒感染之后。下呼吸道感染临床上供选择的抗生素日益增多，耐药菌株亦明显增多。
阿莫西林是一种应用广泛的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，其抗菌谱与氨苄青霉素相同，对呼吸道感染的多种细菌具有杀菌作用。然而，随着抗生素的广泛应用，细菌对阿莫西林的耐药作用日益突出，成为临床治疗的一大威胁。
菠萝蛋白酶简称菠萝酶，亦称凤梨酶或凤梨酵素，主要是从菠萝果、茎、叶、皮提取出来的，并经过纯化等步骤而得到的一种天然植物蛋白酶。菠萝蛋白酶是一种蛋白质消化酶的复杂混合体，由多种不同分子量和分子结构的酶组成的酶系，主要由半胱氨酸蛋白酶组成，此外还含有磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其他糖苷酶等。菠萝蛋白酶具有重要的药用价值，据报道，其具有免疫刺激作用；能够在各种组织中治疗水肿；治疗腹泻；还可用于烧伤脱痂，选择性地去除死皮；抑制肿瘤细胞生长，降低毒素结合活性等。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种阿莫西林菠萝蛋白酶组合物，该组合物的呼吸道致病菌耐药性得到有效改善。根据本发明优选的实施方式，该阿莫西林菠萝蛋白酶组合物治疗呼吸道感染的效果优于阿莫西林。
本发明的另一目的在于提供所述阿莫西林菠萝蛋白酶的制备方法。
本发明的再一目的在于提供一种阿莫西林菠萝蛋白酶制剂。
本发明的又一目的在于提供所述阿莫西林菠萝蛋白酶用于制备治疗呼吸道感染的药物的用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明提供一种阿莫西林菠萝蛋白酶组合物，该组合物由阿莫西林和菠萝蛋白酶组成，且阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:2～9万活性单位。
根据本发明的组合物，优选地，阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4～8万活性单位。
根据本发明的组合物，优选地，阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4万活性单位；阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:6万活性单位；或者阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:8万活性单位。
本发明还提供上述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物的制备方法，包括：
(a)将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶肠溶微丸或菠萝蛋白酶肠溶微片；
(b)将阿莫西林制成阿莫西林颗粒；
(c)将所述菠萝蛋白酶肠溶微丸或菠萝蛋白酶肠溶微片与所述阿莫西林颗粒混合均匀，得到所述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
根据本发明的制备方法，优选地，步骤(a)中，将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶微丸，所述菠萝蛋白酶微丸的制备方法包括：
(1)在空白丸芯表面包覆菠萝蛋白酶层，得到载药微丸；
(2)在所述载药微丸表面包覆肠溶衣层，得到肠溶微丸。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(1)中，菠萝蛋白酶层的包覆方法为：将菠萝蛋白酶与稀释剂混合均匀，得到含药粉料；在粘合剂的作用下，将所述含药粉料包覆于空白丸芯表面，干燥，得到载药微丸；其中，所述稀释剂选自二氧化硅、乳糖或微晶纤维素；所述稀释剂占所述含药粉料质量的8～20wt％；所述粘合剂选自浓度为4～6wt％的淀粉浆或浓度为1～2wt％的羟丙甲纤维素溶液。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(2)中，肠溶衣层的包覆方法是：将肠溶包衣材料溶于乙醇水溶液中，配制成肠溶包衣液；将所述肠溶包衣液包覆于所述载药微丸表面，得到肠溶微丸；其中，所述肠溶包衣材料为甲基丙烯酸共聚物，所述乙醇水溶液的浓度为80～95vol％，所述肠溶包衣液中肠溶包衣材料的含量为5～8wt％，且所述肠溶微丸比所述载药微丸增重4～14wt％。
本发明中，优选地，步骤(a)中，将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶微片，所述菠萝蛋白酶微片的制备方法包括：
(1’)将菠萝蛋白酶与压片辅料混合均匀，压制成含药微片；
(2’)将所述含药微片的表面包覆肠溶衣，得到肠溶微片。
本发明中，优选地，步骤(1’)中，所述压片辅料为微晶纤维素和乳糖的混合物，且微晶纤维素与乳糖的重量比为1～3:1；所述菠萝蛋白酶与所述压片辅料的重量比为1:1～3。
本发明还提供一种阿莫西林菠萝蛋白酶制剂，该制剂包含上述的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
本发明还提供所述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物用于制备治疗呼吸道感染的药物的用途。
主要的呼吸道致病菌对本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物的耐药性低于阿莫西林。此外，本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物治疗呼吸道感染的作用优于阿莫西林。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
＜组合物＞
本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物由阿莫西林和菠萝蛋白酶组成，且阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:2～9万活性单位。优选地，阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4～8万活性单位。根据本发明的具体实施方式，阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4万活性单位；或者阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:6万活性单位；或者阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:8万活性单位。
本发明中，所述阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比是指二者的比例关系，举例来说，阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4万活性单位与0.50g:8万活性单位是等价的。
当阿莫西林与菠萝蛋白酶按照本发明的配比形成组合物时，其治疗呼吸道感染的效果优于单独使用阿莫西林，且呼吸道致病菌的耐药性得到有效改善，明显低于单独的阿莫西林。
＜组合物的制备方法＞
本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物的制备方法包括：
(a)将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶肠溶微丸或菠萝蛋白酶肠溶微片；
(b)将阿莫西林制成阿莫西林颗粒；
(c)将所述菠萝蛋白酶肠溶微丸或菠萝蛋白酶肠溶微片与所述阿莫西林颗粒混合均匀，得到所述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
根据本发明的一个实施方式，步骤(a)为将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶肠溶微丸。具体地，所述菠萝蛋白酶肠溶微丸的制备方法包括：
(1)在空白丸芯表面包覆菠萝蛋白酶层，得到载药微丸；
(2)在所述载药微丸表面包覆肠溶衣层，得到肠溶微丸。
本发明的步骤(1)中，菠萝蛋白酶层的包覆方法可以为：将菠萝蛋白酶与稀释剂混合均匀，得到含药粉料；在粘合剂的作用下，将所述含药粉料包覆于空白丸芯表面，干燥，得到载药微丸。所述稀释剂可以选自二氧化硅、乳糖或微晶纤维素。所述稀释剂占所述含药粉料质量的8～20wt％。采用这样的比例，有利于实现菠萝蛋白酶与稀释剂混合均匀。所述粘合剂可以选自浓度为4～6wt％的淀粉浆或浓度为1～2wt％的羟丙甲纤维素(hpmc)水溶液。本发明的菠萝蛋白酶层的包覆方法，包覆效率更高，且能够有效避免菠萝蛋白酶受热而失活。
本发明的步骤(1)中，所述空白丸芯可以提前加热至25～35℃，更优选为28～33℃，更优选为30℃。然后再将所述含药粉料包覆于空白丸芯表面。采用这样的操作，能够提高包覆效率，同时有效保持菠萝蛋白酶的酶活。作为优选，所述载药丸芯比空白丸芯增重25～60wt％，更优选为30～50wt％。
本发明的步骤(2)中，肠溶衣层的包覆方法可以为：将肠溶包衣材料溶于乙醇水溶液中，配制成肠溶包衣液；将所述肠溶包衣液包覆于所述载药微丸表面，得到肠溶微丸。
本发明的所述肠溶包衣材料可以为甲基丙烯酸共聚物，优选为甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯(1:1)。根据本发明的一个实施方式，所述肠溶包衣材料为卡乐康公司的
本发明的乙醇水溶液的浓度可以为80～95vol％。所述肠溶包衣液中肠溶包衣材料的含量为5～8wt％。根据本发明的一个实施方式，所述肠溶微丸比所述载药微丸增重4～14wt％，优选为5～10wt％。
根据本发明的另一个实施方式，步骤(a)为将菠萝蛋白酶制成菠萝蛋白酶肠溶微片。具体地，所述菠萝蛋白酶肠溶微片的制备方法包括：
(1’)将菠萝蛋白酶与压片辅料混合均匀，压制成含药微片；
(2’)将所述含药微片的表面包覆肠溶衣，得到肠溶微片。
根据本发明一种实施方式，步骤(1’)中，所述压片辅料为微晶纤维素和乳糖的混合物，且微晶纤维素与乳糖的重量比为1～3:1，更优选为1～2:1。本发明的菠萝蛋白酶与压片辅料的重量比可以为1:1～3，优选为1:1～2。采用上述压片辅料及配比，压制成的含药微片的硬度更适宜进一步包衣，不易碎裂，且溶出度良好。本发明的含药微片的直径可以为1～4mm，更优选为1～3mm，再优选为1.5～2mm；长度为1～4mm，更优选为1～3mm，再优选为1.5～2mm。
本发明的步骤(2’)中，所述肠溶衣的包覆方法为：将肠溶包衣材料溶于乙醇水溶液中，配制成肠溶包衣液；将所述肠溶包衣液包覆于所述含药微片表面，得到肠溶微片。
本发明的肠溶包衣材料可以为甲基丙烯酸共聚物，优选为甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯(1:1)。根据本发明的一个实施方式，所述肠溶包衣材料为欧巴代肠溶(opadryenteric)-94。
本发明的乙醇水溶液的浓度可以为80～95vol％，优选为90～95vol％。所述肠溶包衣液中肠溶包衣材料的含量为6～12wt％，优选为7～10wt％，更优选为8～10wt％。作为优选，所述肠溶微片比所述含药微片增重4～12wt％，更优选为5～10wt％。
本发明的步骤(b)中，所述阿莫西林颗粒采用湿法制粒法或干法制粒法制备得到，这些方法是本领域熟知的，这里不再赘述。
采用本发明的制备方法，能够保证阿莫西林与菠萝蛋白酶之间不发生相互作用，并有效保护菠萝蛋白酶的酶活，同时溶出度良好。
＜制剂及用途＞
本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶制剂含有上述的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶制剂可以为片剂或胶囊剂，可以通过将上述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物压片或装入胶囊而制得。
本发明还提供所述阿莫西林菠萝蛋白酶组合物用于制备治疗呼吸道感染的药物的用途。所述呼吸道感染包括上呼吸道感染和下呼吸道感染，例如急性鼻炎、咽炎、喉炎、急性气管炎、支气管炎和肺炎等。
制备例1-菠萝蛋白酶肠溶微丸的制备
(1)将菠萝蛋白酶与二氧化硅混合均匀，得到含药粉料，其中二氧化硅占所述含药粉料质量的12wt％，置于饲粉器内；将空白丸芯置于包衣造粒机内，预热至空白丸芯温度约30℃；开启喷枪及蠕动泵，润湿空白丸芯，打开饲粉器，边加入混合粉边喷入1.5wt％的hpmc水溶液，至比空白丸芯增重30wt％，取出，置于流化床中干燥，得到载药微丸；
(2)将欧巴代肠溶-94溶于90vol％的乙醇水溶液中，搅拌使其分散均匀，配制成欧巴代肠溶-94含量为5.26wt％的肠溶包衣液；将所述肠溶包衣液包覆于所述载药微丸表面，至比载药微丸增重8wt％，得到菠萝蛋白酶肠溶微丸。
制备例2-菠萝蛋白酶肠溶微丸的制备
(1)将菠萝蛋白酶与乳糖混合均匀，得到含药粉料，其中乳糖占所述含药粉料质量的20wt％，置于饲粉器内；将空白丸芯置于包衣造粒机内，预热至空白丸芯温度约30℃；开启喷枪及蠕动泵，润湿空白丸芯，打开饲粉器，边加入混合粉边喷入5wt％的淀粉浆，至比空白丸芯增重50wt％，取出，置于流化床中干燥，得到载药微丸；
(2)将欧巴代肠溶-94溶于95vol％的乙醇水溶液中，搅拌使其分散均匀，配制成欧巴代肠溶-94含量为8.45wt％的肠溶包衣液；将所述肠溶包衣液包覆于所述载药微丸表面，至比载药微丸增重10wt％，得到菠萝蛋白酶肠溶微丸。
制备例3-菠萝蛋白酶肠溶微片的制备
(1)将菠萝蛋白酶与微晶纤维素、乳糖按照重量比为1.5:2:1混合均匀，压制成直径约2mm、且长度约2mm的含药微片；
(2)将欧巴代肠溶-94溶于95vol％的乙醇水溶液中，配制成欧巴代肠溶-94的含量为8wt％的肠溶包衣液，将所述肠溶包衣液包覆于所述含药微片的表面，至比含药微片增重10wt％，得到所述菠萝蛋白酶肠溶微片。
制备例4-阿莫西林颗粒的制备
将阿莫西林12.5g，加入糊精，采用80vol％乙醇水溶液湿法制粒，得到阿莫西林颗粒。
实施例1
将制备例1得到的菠萝蛋白酶微丸与制备例4得到的阿莫西林颗粒混合均匀，得到阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:4万活性单位的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
实施例2
将制备例2得到的菠萝蛋白酶微丸与制备例4得到的阿莫西林颗粒混合均匀，得到阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:6万活性单位的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
实施例3
将制备例3得到的菠萝蛋白酶微片与制备例4得到的阿莫西林颗粒混合均匀，得到阿莫西林与菠萝蛋白酶的配比为0.25g:8万活性单位的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物。
实施例4
将实施例1得到的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物装入胶囊，每个胶囊含阿莫西林0.25g和菠萝蛋白酶4万活性单位，得到阿莫西林菠萝蛋白酶胶囊。
实施例5
将实施例1得到的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物装入胶囊，每个胶囊含阿莫西林0.125g和菠萝蛋白酶2万活性单位。
实施例6
将实施例1得到的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物装入胶囊，每个胶囊含阿莫西林0.5g和菠萝蛋白酶8万活性单位。
实验例1
通过临床试验验证了本发明阿莫西林菠萝蛋白酶组合物具有治疗呼吸道感染的效果，且效果优于阿莫西林单独用药。
1.病例选择
1.1纳入标准
年龄在18～65周岁，经临床和实验室确诊的呼吸系统急性细菌感染或慢性细菌感染的急性发作，细菌培养阳性率高于80％，且试验前48小时内未使用过其他抗生素或用后确证无效者(病原学检查仍阳性)。
1.2排除标准
对β-内酰胺类抗生素有过敏史者，或为高敏体质者；有严重心、肝、肾疾病或糖尿病病人；妊娠、哺乳期妇女；精神、神经系统疾病病人；需联合其他抗菌药物治疗者。
2.一般资料
符合诊断标准的呼吸道感染患者76例，随机分为试验组39例和对照组37例；其中试验组男性22例，女性17例，年龄36±8岁，病程7.22±2.85天，其中发热18例，白细胞升高32例；对照组男性20例，女性17例，年龄38±9岁，病程8.38±2.35天，其中发热16例，白细胞升高32例。两组的性别、年龄、病程、发热及白细胞升高等均无统计学差异，具有可比性。
3.治疗方法
对照组采用阿莫西林胶囊(每粒含阿莫西林0.25g，广州白云山制药股份有限公司广州白云山制药总厂生产)，口服，每次2粒，每日3次，疗程7～14天。
试验组采用实施例4的阿莫西林菠萝蛋白酶胶囊(每粒含阿莫西林0.25g，菠萝蛋白酶4万活性单位)，口服，每次2粒，每日3次，疗程7～14天。
4.评价标准
评价指标为：临床症状，体征分析，血常规，尿常规，肝、肾功能，心电图，胸片；痰培养分离致病菌株对试验组和对照组药物的耐药性。
4.1临床疗效评价
按照“抗菌药物临床研究指导原则”分为如下4级：(1)痊愈：症状、体征实验室检查和病原学检查四项均恢复正常；(2)显效：病情明显好转，但上述四项有一项未完全恢复正常；(3)进步：病情有所好转，但不够明显；(4)无效：用药72小时后病情无明显好转或加重者。
4.2致病菌耐药性评价
对临床75份痰标本进行培养，共分离出肺炎链球菌44株、流感嗜血杆菌51株和卡他莫拉菌18株，已剔除同一患者相同部位的重复菌株。所有标本按照《全国检验标准操作规程》第3版进行分离培养，采用生物梅里埃公司细菌鉴定板条和药敏板条进行菌株鉴定、药敏试验。肺炎链球菌、流感嗜血杆菌药敏结果判定以clsi2010年的标准判断，卡他莫拉菌的药敏结果判定以clsi2010年m45-a2版的标准判断。质控菌株采用肺炎链球菌atcc49619和流感嗜血杆菌atcc49247。
5.治疗结果
5.1两组临床疗效结果见表1。
表1试验组与对照组临床疗效比较
由表1可知，试验组的痊愈率和有效率均优于对照组。试验组的痊愈率为64.10％，有效率为92.31％；对照组的痊愈率为54.05％，有效率为89.19％。
5.2两组的致病菌耐药性结果见表2。
表2试验组与对照组菌株耐药率比较(％)
由表2可知，本发明的阿莫西林菠萝蛋白酶组合物能够有效降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌的耐药性，提高敏感性；其中，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对于阿莫西林菠萝蛋白酶组合物具有很好的敏感性，均超过90％，临床应用前景广阔。卡他莫拉菌对阿莫西林的耐药性较高，但对于阿莫西林菠萝蛋白酶组合物的耐药性大幅降低。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。