本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂及其制备方法。
背景技术：
肺纤维化是一类临床上现通常称为间质性肺病共有的一种最终的严重病理特征。间质性肺病可包括原发于肺的、伴随系统性风湿病发生的、药物或放射等治疗引起的、伴随环境或职业发生的、伴随肺血管发生的、肺泡淤积性疾病和遗传性疾病等七大类。不同病因引起肺纤维化的具体机理尚不清楚，其具有共同的特性是最初由各种原因所致的炎症损伤正常的肺泡结构，即产生肺泡炎；代之以胶原疤痕组织累积修复该损伤，即产生纤维化而使肺组织逐渐丧失正常呼吸功能，产生呼吸困难、缺氧等临床症状，最终至呼吸衰竭，即肺纤维化是肺脏受到伤害后，人体过度修复产生的结果。肺纤维化多发病于40-50岁的女性，其主要的症状为呼吸困难、咳嗽、气短。呼吸困难是肺纤维化最常见症状。轻度肺纤维化时，呼吸困难只在剧烈活动时出现，因此常常被忽视或误诊为其他疾病。当肺纤维化进展时，在静息时也发生呼吸困难，而且整个病程呈进行性加重的过程，平均生存期为5-6年，另有少数急性型病例进展急剧，多在6个月内死亡。
尼达尼布是由德国勃林格殷格翰公司针对特发性肺纤维化(ipf)开发的小分子酪氨酸激酶抑制剂(tki)。该药针对已被证实在肺纤维化病理机制中具有潜在影响的生长因子受体发挥作用，其中最为重要的就是血小板源性生长因子受体(pdgfr)、成纤维细胞生长因子受体(fgfr)和血管内皮生长因子受体(vegfr)。通过阻断这些参与纤维化进程的信号转导通路，尼达尼布被认为有望能够通过减少肺功能下降速度、从而减缓ipf疾病进展。已有的两项全球性iii期临床试验(inpulsistm-1研究和inpulsistm-2研究)针对尼达尼布治疗ipf的疗效和安全性进行了评估，上述研究所获得的结果已于2014年5月份在全球性学术大会美国胸科学会(ats)年会上公布、并在nejm杂志上发表。尼达尼布是获得临床证据一致证实的、可通过显著减少肺功能年下降率(减少幅度达50％)从而延缓ipf疾病进展的首个ipf靶向治疗药物。
专利cn105902507a公开了一种治疗肺纤维化的尼达尼布乙磺酸盐的口服制剂，但该制剂所加辅料较多，经胃肠道吸收降解后，到达有效部位的有效药量较少，且会引发一系列的副作用，诸如恶心、皮症、腹痛、上呼吸道感染、腹泻、乏力、头疼、消化不良、头晕、呕吐、食欲下降、胃食管返流、鼻窦炎、失眠、体重下降和关节痛等，并会出现较为严重的肝肾损伤，长期口服用药将会导致不可逆的器官损伤。
技术实现要素：
鉴于现有技术的不足，本发明提供了一种用于治疗肺纤维化的雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂，该制剂使用前用合适溶剂如注射用水溶解后，联合雾化器使用，由口鼻直接吸入，可在肺部聚集成较高浓度，从而进入呼吸和血液循环系统，进而可达到全身治疗的目的，避免了肝脏的首过效应及胃肠道的破坏与降解，并且大大减少了由肝肾对药物的代谢过程，极大降低了对患者的器官损伤。本发明将该药开发成冻干脂质体制剂解决了其水中溶解度低的问题，冻干后为脂质体也增加了药品的稳定性，并弥补了目前国内市场上的空白，提供了一种尼达尼布新型安全有效的给药制剂及给药方式。
本发明的第一目的在于提供一种雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂，采用以下技术方案：
一种用于治疗肺纤维化的雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂，主要包括以下成分：尼达尼布或其盐、脂质、磷脂和等渗剂，优选单剂量制剂。本品在临用前用适量溶剂(如5ml注射用水)进行复溶，摇匀后使用。所述溶剂优选纯化水，更优选注射用水。
本发明提供的雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂采用单剂量药物包装，所述的单剂量是指单次吸入所使用的药用活性成分的剂量。
所述制剂还可包括一种或多种适用于肺部给药的药用辅料。
所述冻干脂质体制剂单剂量中含有：10-80mg尼达尼布或其盐(以游离尼达尼布的量计算)、25-250mg脂质、100-1000mg磷脂、20-150mg等渗剂。
所述冻干脂质体制剂单剂量中含有：20-60mg尼达尼布或其盐(以游离尼达尼布的量计算)、50-200mg脂质、250-500mg磷脂、40-100mg等渗剂。
所述冻干脂质体制剂单剂量中含有：40mg尼达尼布或其盐(以游离尼达尼布的量计算)、75mg脂质、300mg磷脂、60mg等渗剂。
所述磷脂与脂质的质量比为6:1-1:1之间，优选4:1-5:2之间。
所述尼达尼布的盐为其药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括无机酸和有机酸的盐，包括盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、乙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯基乙酸和扁桃酸。另外，药学上可接受的盐包括无机碱的盐，诸如含有碱阳离子(例如li+、na+或k+)、碱土阳离子(例如mg2+、ca2+或ba2+)、铵阳离子的盐；以及有机碱的酸式盐，包括脂肪族和芳香族被取代铵和季铵阳离子，诸如来自三乙胺、n,n-二乙胺、n,n-二环己胺、赖氨酸、吡啶、n,n-二甲基氨基吡啶(dmap)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(dabco)、1,5-二氮杂双环[4,3,0]壬-5-烯(dbn)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(dbu)的质子化或全烷基化的盐。
所述磷脂包括天然磷脂和合成磷脂，其中天然磷脂包括蛋黄卵磷脂、大豆磷脂；合成磷脂包括二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，其中优选磷脂中的大豆磷脂。
所述脂质可以选择单硬脂酸甘油酯、甘油三酯、橄榄油、大豆油、中链甘油三酸酯、油酸中的一种或多种任意比例混合，优选单硬脂酸甘油酯和\或甘油三酯。
本发明将尼达尼布制成脂质体以方便给药，同时解决了其溶解度问题。组成脂质体的磷脂和脂质类成分生物相容性好，安全无毒，且磷脂类化合物对肺部器官有一定的保护和修复作用。通过高压匀质将脂质体的粒径控制在一定范围内，有利于药物在肺部沉积，提高生物利用度。
所述等渗剂为氯化钠、葡萄糖中的一种或两种混合，其中优选氯化钠。
进一步地，所述制剂还可以包括ph调节剂，所述ph调节剂为氢氧化钠、枸橼酸钠、枸橼酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸、醋酸钠、醋酸中的一种或多种。ph调节剂的用量，为将所述制剂ph值调节为5-8的用量，优选ph值调节为6-7的用量。
为了提高用药的安全性，本发明的溶剂选用纯化水或注射用水。本品在临用前用合适溶剂如5ml注射用水进行复溶，摇匀后使用。
本发明的另一目的在于提供一种所述雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的脂类和磷脂加入适量的乙酸乙酯\乙醇中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙酸乙酯\乙醇，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入35℃-60℃全量60％-80％的注射用水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph并定容；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
本发明采用高压乳匀技术制备尼达尼布脂质体，使得粒径小于200nm。
本发明提供的雾化吸入用冻干脂质体制剂为单剂量包装，使用过程便捷；可大大降低使用过程中的微生物污染和浪费，采用单次用药的剂量而避免了多剂量大包装所导致的反复量取、反复稀释配制易滋生微生物的弊端。本发明提供了一种现有技术所缺乏的药用剂量准确，药品质量优质、稳定，临床应用安全、简捷的新制剂及其制备方法。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)与其他剂型相比，药物直接到达靶器官肺，避免了肝脏的首过效应及胃肠道的破坏与降解，降低了全身器官尤其是肝肾损伤，用药更安全；
(2)本发明由于是吸入式的，针对肺部器官病变、阻塞性通气障碍的患者相比较口服见效快，避免了制剂需先经胃肠道吸收，然后再随血液循环发挥全身作用，起效慢的缺陷；
(3)本发明将脂质体制成冻干粉，并在配制及冻干全程中充氮气保护，避免脂质体长期放置或环境温度等改变而导致的氧化变色、水解、药物泄露等问题，稳定性提高；
(4)复溶后脂质体快速分散均匀，且粒径及包封率较冻干前无显著变化，生物利用度高，疗效好。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。凡依照本发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和单硬脂酸甘油酯加入适量的乙酸乙酯中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙酸乙酯，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入50℃全量80％的注射用水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用注射用水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
实施例2：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和单硬脂酸甘油酯加入适量的乙酸乙酯中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙酸乙酯，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入60℃全量70％的纯化水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用纯化水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
实施例3：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和单硬脂酸甘油酯加入适量的乙酸乙酯中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙酸乙酯，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入35℃全量60％的注射用水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用注射用水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
实施例4：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和单硬脂酸甘油酯加入适量的乙酸乙酯中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙酸乙酯，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入50℃全量80％的纯化水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用纯化水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
实施例5：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和甘油三酯加入适量的乙醇中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙醇，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入40℃全量70％的注射用水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用注射用水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
实施例6：制备雾化吸入用尼达尼布冻干脂质体制剂200支
制备方法：
(1)在通入氮气条件下，将处方量的大豆磷脂和甘油三酯加入适量的乙醇中搅拌溶解，然后加入处方量的尼达尼布搅拌溶解后，在30-35℃下减压干燥约2h除去乙醇，得到薄膜状固体；
(2)向步骤(1)得到的薄膜状固体中加入50℃全量60％的注射用水，超声使其水化，再向其中加入处方量的等渗剂搅拌溶解，之后用ph调节剂调节体系的ph值并用注射用水定容至1l；
(3)将所得样品使用微射流匀质机在匀质压力8000bar下循环两次后，用0.22μm的聚碳酸酯膜过滤，无菌分装，5ml/瓶，并冷冻干燥，在冷冻干燥结束后，于氮气保护下压塞即得。
为了进一步说明本发明的技术效果，提供了以下具体实验例。
试验例1稳定性试验
为验证本发明制备的尼达尼布冻干脂质体制剂的质量和稳定性，分别对本发明制备的低剂量、中剂量、高剂量冻干脂质体制剂进行了稳定性考察。
对本发明实施例3制备方法制备的中剂量尼达尼布冻干制剂，进行加速和长期稳定性试验。
置于温度40℃±2℃，湿度75％条件下进行加速稳定性考察，分别于0、1、2、3、6个月取样检测相关项目，检验结果见表1：
表1.加速稳定性试验结果
置于温度25℃±2℃，湿度60％条件下进行长期稳定性考察，分别于0、6、12、18、24个月取样检测相关项目，检验结果见表2。
表2.长期稳定性试验结果
对由本发明实施例1低剂量,实施例5高剂量制备的尼达尼布冻干脂质体制剂同时进行了相同的稳定性试验，各指标均无明显变化，说明该制剂不论剂量的高低，化学稳定性良好，适合工业生产及长期储存。
实验例2
给药方式不同对肝损伤的影响
选小鼠50只(20±2g)，雌雄各半，随机分为正常对照组、口服给药组和雾化给药低、中、高剂量5个组，每组10只。尼达尼布低、中、高剂量组分别由实施例1、实施例3、实施例5制备的雾化吸入冻干脂质体制剂，用5ml注射用水复溶后雾化给药，口服给药组灌胃由实施例3制备的等量的尼达尼布，正常对照组腹腔注射等量的生理盐水,持续给药2周14d，每天上午10.00、下午4.00各1次，每次0.1ml。给药两周后，对各给药组小鼠模型肝细胞上清液中的alt、ast、alp的数值进行检测，统计分析研究尼达尼布对致肝损伤的影响。实验发现口服给药组小鼠alt、ast和alp数值显著升高(p<0.01)，雾化吸入各组alt、ast、alp活性与之相比明显较低(p<0.01)，结果见表3。
表3.各给药组小鼠模型肝细胞上清液中的alt、ast、alp数值检测结果
从表3看出，本发明尼达尼布雾化吸入制剂较口服给药制剂对肝损伤的程度更小，随着雾化给药剂量的增加，肝损伤指标相应略有上升，说明本发明制剂在治疗肺纤维化疾病时所造成的器官毒性更小，更安全。