本发明涉及磷脂酰肌醇3-激酶家族的活性或功能的抑制剂(下文称为pi3k抑制剂)和/或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物用于治疗原发性舍格伦综合征的用途，其中所述抑制剂对pi3k同工型δ具有抑制作用。更具体地，本发明涉及1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐用于治疗原发性舍格伦综合征的用途。
发明背景
舍格伦综合征被分类为“原发性”或“继发性”。原发性舍格伦综合征(pss)在没有其它潜在风湿障碍的情况下发生，而继发性舍格伦综合征与其它潜在风湿病相关，所述风湿病例如系统性红斑狼疮(sle)、类风湿性关节炎(ra)或硬皮病。原发性舍格伦综合征是慢性自身免疫疾病，其中身体的免疫系统攻击分泌流体的腺体，例如唾液腺和泪腺。免疫介导的对唾液腺和泪腺的攻击导致口干燥和眼干燥的发生。pss的其它症状或病症包括皮肤干燥、疲倦(tiredness)和疲劳(fatigue)，有时达到完全筋疲力尽(totalexhuastion)、肌肉疼痛、关节疼痛、关节僵硬和肿胀、脉管炎、难以专心。目前，已知对原发性舍格伦综合征尚无治疗方法，但是治疗可以帮助控制症状。非甾体抗炎药可以用于治疗肌肉骨骼症状，而且也开具皮质类固醇、免疫抑制药物和缓解疾病的抗风湿药物(dmard)处方，其中大多数具有不良副作用。因此，需要治疗原发性舍格伦综合征的其它治疗进展(holdgaten.f1000research2016,5(f1000facultyrev):1412)。
发明概述
已经发现pi3kδ抑制剂1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐适合于治疗原发性舍格伦综合征。
附图描述
图1显示对健康人个体单一口服施用后化合物a的pk/pd关系。
发明详述
已经发现1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐适合于治疗原发性舍格伦综合征。
1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮
和其药学上可接受的盐的实例描述在wo2012/004299的实施例67中。
磷酸化akt(pakt)是pi3kδ活化的下游效应子。1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐是pi3k抑制剂，其对pi3kδ同种型具有选择性(wo2012/004299)。我们推定在pss患者中akt途径被活化，并且发现1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐可用于治疗pss。
1)慢性b细胞过度活跃是pss中一致且显著性的免疫调节异常(hansena等人,arthritisresearch&therapy2007；9；218)。
1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐在体外和体内直接抑制多种b-细胞功能，例如pakt、cd69、cd86、apc功能、细胞因子产生和抗体产生；
2)已发现pss患者表达粘附分子、细胞因子和趋化因子的独特特征，包括吸引趋化因子cxcl13(bca-1，blc)的b细胞的显著过表达，以及在pss的发病机理中起作用的cxcl10(ip-10)和ccl4(mip-1β)的过表达(hansena等人,arthritisresearch&therapy2007；9；218,lee,y.j.等人,rheumatology2010；49(9)；1747-1752,kramerjm等人,jleukocbiol.2013；94(5)；1079-1089,nishikawaa等人arthritisresearch&therapy2016；18；106)。
1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐抑制cxcl13(bca-1，blc)，而且还抑制来源于用cpg或抗-igm刺激的人健康志愿者的bpmc上清液中的cxcl10(ip-10)和ccl4(mip-1β)。
3)pss的特征性特征包括形成具有生发中心(gc)-样结构的异位淋巴组织。在健康个体中，在t细胞依赖性免疫应答期间，从次级淋巴器官的原代b细胞滤泡产生gc(hansena等人,arthritisresearch&therapy2007；9；218)。
在组织学上，正如通过facs分析测定的，gc形成的抑制伴随着边缘区b细胞(mzb细胞)和滤泡t辅助细胞(tfh)的整体减少。那些细胞被认为有助于pss的病理生理学。
1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐减少gc-样结构、mzb-细胞和tfh。
在一个实施方案中，本发明提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐，其用于治疗原发性舍格伦综合征。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗原发性舍格伦综合征的方法，该方法包括给需要此类治疗的个体例如人个体施用治疗有效量的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐在制备用于治疗原发性舍格伦综合征的药物中的用途。
在另一个实施方案中，本发明提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐用于治疗原发性舍格伦综合征的用途。
优选任何上述实施方案，其中1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮是磷酸盐形式。
在优选的实施方案中，本发明涉及1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐。
如本文所用的术语“个体”是指动物。典型地，动物是哺乳动物。个体还指例如灵长类动物(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，个体是灵长类动物。在优选的实施方案中，个体是人。
如本文所用的术语“抑制”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍或疾病，或生物活性或过程的基线活性的显著降低。
如本文所用的术语“治疗”任何疾病或障碍在一个实施方案中是指改善疾病或障碍(即，减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括患者可能无法辨别的身体参数。在另一个实施方案中，“治疗”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定)，生理上(例如，身体参数的稳定)或两方面来调节疾病或障碍。在另一个实施方案中，“治疗”是指预防或延迟疾病或障碍的发作或发展或进展。
如本文所用，如果个体在生物学、医学上或生活质量方面从此类治疗中获益，则个体“需要”该治疗。
如本文所用的术语“施用”主题化合物是指给需要治疗的个体提供本发明化合物及其前药。与一种或多种其它治疗剂“组合”施用包括以任何顺序和任何施用途径同时(伴随)和连续施用。
作为组合伴侣的其它治疗剂包括例如与cd40结合的抗体，例如wo2012/065950中公开的；诱导性t细胞共刺激因子，例如amg557；靶向b细胞活化因子受体(baff-r)的抗体，例如wo2010/007082中所公开的；低剂量il-2，抗cd20抗体，例如利妥昔单抗；抑制b细胞活化因子(baff)的抗体，例如贝利木单抗；对抗白细胞介素-6(il-6r)受体的抗体，例如托珠单抗；阿巴西普；或贝拉西普；而且还有环孢素滴眼液；改变疾病的抗风湿药物(dmard)，例如甲氨蝶呤，柳氮磺胺吡啶，来氟米特，羟氯喹和金盐；肿瘤坏死因子(tnf)-a抑制剂，例如英夫利昔单抗和依那西普；非甾体抗炎药，例如布洛芬；全身性皮质类固醇，例如泼尼龙；或其它免疫抑制剂，例如硫唑嘌呤，麦考酚酸吗乙酯和环磷酰胺。
作为组合伴侣的其它活性剂包括例如促分泌素；毒蕈碱受体激动剂，例如西维美林和毛果芸香碱；加巴喷丁或普瑞巴林；人工泪液；人工唾液；或阴道雌激素乳膏剂。
药物组合物包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。wo2012/004299中描述了适合的药学上可接受的载体。优选的施用途径为口服。
在一个实施方案中，本发明提供了组合产品，特别是药物组合产品，其包含治疗有效量的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐和一种或多种治疗活性剂。
在一个实施方案中，本发明提供了组合产品，特别是药物组合产品，其包含治疗有效量的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐和一种或多种治疗活性剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了产品，其包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐和至少一种其它治疗剂，该产品作为组合制剂用于同时、分别或依次用于治疗pss。
在另一个实施方案中，本发明提供了产品，其包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐和至少一种其它治疗剂，该产品作为组合制剂用于同时、分别或依次用于治疗pss。
作为用于治疗pss的组合制剂提供的产品包括组合物，所述组合物包含共同在同一药物组合物中的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐和其它治疗剂，或者式(i)化合物和其它治疗剂为单独形式，例如药盒形式。
作为用于治疗pss的组合制剂提供的产品包括组合物，所述组合物包含共同在同一药物组合物中的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐和其它治疗剂，或者式(i)化合物和其它治疗剂为单独形式，例如药盒形式。
因此，本发明提供了用于治疗pss的1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐，其中制备药物用于与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了其它治疗剂在治疗pss中的用途，其中药物与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐，其用于治疗pss的方法中，其中制备1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐用于与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了另外的治疗剂，其用于治疗pss的方法中，其中制备其它治疗剂用于与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐，其用于治疗pss的方法中，其中1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了其它治疗剂，其用于治疗pss的方法中，其中其它治疗剂与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐用于治疗pss的用途，其中患者在先(例如24小时内)已经用其它治疗剂治疗。
本发明还提供了其它治疗剂用于治疗pss的用途，其中患者在先(例如24小时内)已经用1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐治疗。
本发明提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐，其用于治疗pss，其中制备药物用于与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了其它治疗剂用于治疗pss的用途，其中药物与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐，其用于治疗pss的方法中，其中制备1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐用于与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了其它治疗剂，其用于治疗pss的方法中，其中制备其它治疗剂用于与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐，其用于治疗pss的方法中，其中1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐与其它治疗剂一起施用。
本发明还提供了其它治疗剂，其用于治疗pss的方法中，其中其它治疗剂与1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐一起施用。
本发明还提供了1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐用于治疗pss的用途，其中患者在先(例如24小时内)已经用其它治疗剂治疗。
本发明还提供了其它治疗剂用于治疗pss的用途，其中患者在先(例如24小时内)已经用1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐治疗。
在一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约50-70kg的人个体约10-100mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约40-200kg的人个体约10-100mg活性成分的单位剂量。
在一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约50-70kg的人个体约10-100mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约40-200kg的人个体约10-100mg活性成分的单位剂量。
化合物、其药物组合物或组合产品的治疗有效剂量取决于体重、年龄和个体状况，或所治疗的障碍或疾病的严重程度。普通医师或临床医生可以容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病进程所必需的每种活性成分的有效量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约50-70kg的人个体约70mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约40-200kg的人个体约70mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约50-70kg的人个体约70mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品可以为对于约40-200kg的人个体约70mg活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，将包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品对于约50-70kg的人个体以约70mg活性成分施用，每日两次。
在另一个实施方案中，包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮或其药学上可接受的盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品以对于约40-200kg的人个体以约70mg活性成分施用，每日两次。
在另一个实施方案中，将包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品对于约50-70kg的人个体以约70mg活性成分施用，每日两次。
在另一个实施方案中，将包含1-{(s)-3-[6-(6-甲氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氢-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基氨基]-吡咯烷-1-基}-丙烷-1-酮的磷酸盐的用于治疗pss的药物组合物或组合产品以对于约40-200kg的人个体以约70mg活性成分施用，每日两次。
试验详述
在没有具体描述原料的制备的情况下，化合物是已知的或者可以类似于本领域已知的方法或如下所述的方法制备。
下列实施例用于示例本发明，但无任何限定作用。
缩略语：
稀释的全血中的人b细胞活化
方法.为了评估表面b细胞受体刺激对b细胞活化的影响，通过与单独的抗igm抗体(aigm)一起温育或者与抗igm抗体(aigm)和il-4的组合(aigm/il-4)一起温育，在滴定量的化合物的存在下，刺激90％人全血中的b淋巴细胞。全血中的刺激密切反映了生理状况并且考虑了与血浆蛋白质的潜在结合。通过靶pi3k附近的途径的早期活化被显现为akt磷酸化的抑制。
为了评估在刺激后化合物a对b细胞表面活化标志物的体外作用，在96孔u底微量滴定板(nunc)中，在180.5μl肝素化全血中加入9.5μl预先稀释的化合物a，得到2倍系列稀释，浓度范围为50至0.008μm。用dmso预处理对照孔以获得0.5％dmso的终浓度。将培养物设置为一式两份，通过在平板振荡器上搅拌(30秒，速度900)充分混合，上下抽吸并且再次在平板振荡器上搅拌。将培养物在37℃，5％co2下温育1小时。然后是如上所述的10μl刺激物溶液并且如上混合，并且将培养物在37℃，5％co2下再温育24小时。
流式细胞术分析
温育后，通过向培养物中加入15μl/孔的25mmedta溶液(ph7.4)破碎细胞聚集物。通过在平板振荡器(速度900)上搅拌15分钟彻底混合样品。通过加入25μl荧光标记的抗体的混合物，在平板振荡器上混合(30秒，速度900)并且在室温在黑暗中温育30分钟来染色细胞。在facs分析中，用抗-hucd3-apc-cy7(bectondickinson[bd]#557832)对样品进行染色以允许在t细胞上进行门控，并且用抗-hucd19-apc(bd#555415)对样品进行染色以允许在b细胞上进行门控。另外，如结果部分中所述，用以下抗体的组合对样品染色：抗-hucd69-pe-cy7(bd#557745)和抗-hucd86-pe-cy5(bd#555659)。
染色后，将样品转移到含有2ml/孔的1×bd裂解溶液(bd#349202)的96-深孔v底微量滴定板(corning#396096)中。通过上下抽吸混合平板，并且在室温在黑暗中温育10分钟。将平板以450×g离心5分钟，并且除去上清液后，向每个孔中加入2mlcellwash(bd#349524)。将平板再次以450×g离心5分钟，除去上清液，并且将细胞沉淀重悬于0.5mlcellwash中。
使用bdfacsdiva软件(版本4.1.2)在bdlsrii流式细胞仪上获得数据。根据大小和粒度在fsc/ssc点图中门控淋巴细胞，并且进一步分析cd19、cd3和活化标志物的表达。从斑点印迹计算数据，为cd19+或cd3+群体内活化标志物阳性染色的细胞的百分数。
统计学评价
通过将来自活化的血液样品的标志物-阳性b或t细胞的百分数除以来自未活化的样品的标志物阳性b或t细胞的百分数来计算信噪比(s/n)。
通过下式计算暴露于药物后b或t细胞活化的抑制百分数：
origin7软件(originlabcorporation，northampton，ma)用于非线性回归曲线拟合。通过将hill方程拟合至抑制数据获得导致50％抑制的药物浓度(ic50)。
为了评估在刺激后化合物a对细胞内途径活化标志物pakt的体外作用，在5mlu底管(bd，目录号352063)中，在180μl肝素化的血液中加入10μl预先稀释的化合物a，产生稀释液，浓度范围为16666nm至0.8nm。用dmso预处理对照样品，得到0.17％dmso的终浓度。将样品设置为一式两份，通过在涡旋器上搅拌(3次5秒，速度1800)充分混合。将样品在37℃在水浴中温育1.5小时(盖子关闭)。然后，加入10μl体积的刺激物，混合(3次5秒，速度1800)并且在37℃在水浴中温育20分钟。
裂解、固定和渗透
温育后，每管加入2ml预温热(37℃水浴)的bdphosflow裂解/固定缓冲液(bd，目录号558049)并且在涡旋器上振荡3秒并且在37℃在水浴中温育20分钟。将样品以400g离心5分钟。离心后，每管加入2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液i(bd，目录号557885)并且在室温(rt)在黑暗中温育10分钟。以400g离心5分钟后，用2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液i洗涤沉淀，并且以400g再次离心5分钟。弃去上清液，并且如下所述染色样品。
流式细胞术分析
为了分析pakt，将处理过的人血液样品用抗-hucd20(alexa488-标记的抗-hucd20，bd目录号558056)染色，以允许在细胞计数分析中在b细胞上进行门控。另外，样品用alexa647缀合的抗-人磷酸-akt(ser473；bd，目录号560343)染色。
染色程序在bdphosflowperm/洗涤缓冲液i中在室温在黑暗中进行30分钟。温育后，用2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液i洗涤样品，并且以400g离心5分钟，并且将沉淀重悬于300μlbd染色缓冲液(bd，目录号554656)中。将样品保持在冰上直至使用diva(版本6.1.2)软件在lsrii流式细胞仪(bdbiosciences)上获得数据。根据大小和粒度在fsc/ssc斑点印迹中对淋巴细胞进行门控，并且进一步分析cd20的表达和akt的磷酸化。从斑点印迹或直方图计算数据，为cd20+群体内akt-磷酸化阳性染色的细胞的百分数。如上所述对表面活化标志物进行统计学评估。
结果(表1)
表1全血中人b细胞功能的抑制
bcr刺激后的小鼠b细胞增殖
方法.如(julius等人1984)所述，在滴定量的化合物存在下通过抗-igm抗体通过bcr刺激鼠b细胞，并且通过掺入放射性3h-胸苷来评估增殖。
结果(表2)
lps-诱导的来自体外小鼠b细胞的抗体产生
方法.根据改编自moon(moon等1989)的方案研究lps-诱导的b细胞功能，稍作修改：将来自balb/cnu/nu小鼠的脾b细胞与mil-4、mil-5和lps在滴定量的化合物的存在下一起培养。最终浓度为0.5×105个脾细胞/孔，500u/mlmil-4，500u/mlmil-5和50μg/mllps。在温育6天后通过elisa分析上清液的抗体产生。
结果(表2)
小鼠bcr转基因b细胞的抗原呈递和细胞因子产生
方法.从md4helbcrtg小鼠中纯化cd19+脾b细胞
md4helbcr转基因b10.br(md4b10.br)小鼠是josemoreno教授(researchunitonautoimmunediseases,centromediconacionalsigloxxi,mexico)的赠品。
通过暴露于过量的异氟烷处死后，从md4b10.br和非转基因动物幼崽对照b10.br小鼠中分离脾。将分离的脾悬浮于rpmi1640(invitrogen，#31870)中，并且通过gentlemacsdissociator(miltenyibiotec)解离，并且用cellstrainer(bdfalcon，70μm目，#352350)过滤。用裂解缓冲液(sigma，#r7757)进一步处理单个脾细胞悬浮液以除去红细胞，用pbs-洗涤两次，并且重悬于由补充有10％fbs、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和50μm2-巯基乙醇(2-me)的rpmi-1640组成的完全培养基中。根据提供的制造商的说明，通过磁性细胞分选，automacs(miltenyibiotec)除尽非b细胞进行进一步的脾b细胞纯化。简言之，将悬浮在40μlmacs缓冲液中的1×107个脾细胞、补充0.5％牛血清白蛋白(bsa)的pbs和2mmedta与10μl由针对cd43(ly48，大鼠igg2a)、cd4(l3t4，大鼠igg2b和ter-119(大鼠igg2b)的单克隆抗体组成的生物素-抗体混合物在冰上温育15分钟。用生物素-抗体混合物处理后，将脾细胞与30μl抗生物素抗体在冰上进一步温育15分钟，重悬于1mlmacs缓冲液中并且通过automacs应用以纯化b细胞。在automacs纯化中，选择“除尽”程序，并且收集来自出口端口neg1的阴性级分作为富含b细胞的级分。通过facs分析中分离的级分中cd19+细胞的比例确定纯度，并且大于95％。
细胞染色和facs分析
将纯化的b细胞重悬于50μl冰冷的facs缓冲液(补充有0.1％叠氮化物和0.1％bsa的pbs)中。将facs缓冲液中的细胞悬浮液用1μlfc阻断物(大鼠抗-小鼠cd16/cd32抗体，bdpharmingen，#553142)在冰上处理10分钟。用fc阻断物处理后，将细胞在冰上用抗cd19percp染色30分钟以鉴定b细胞群，并且进一步用抗-hel48-61肽/mhcii类i-ak(aw3.18.14)抗体染色，然后用抗-小鼠igg1pe抗体染色，用于测量细胞活化以及抗原呈递活性。将染色的细胞样品用5ml冰冷的facs缓冲液洗涤两次，并且通过facscalibur(bdbioscience)分析。
用amicon离心机30kd过滤器(milliore，#lsk2aba20)从杂交瘤培养物(atcc，#crl2826)中纯化aw3.18.14抗体(dadagliog等人，1997)。所有其它抗体购自bdbioscience。
分析facs数据，并且使用flowjo软件(treestarinc)计算其平均荧光强度(mfi)。使用graphpadprismver6.0软件(graphpadsoftwareinc)计算ic50值。
通过mhcii测定抗原载量
将来自md4b10.br小鼠的100万个脾细胞或纯化的b细胞悬浮于500μl完全培养基中，并且接种于24孔板中。将细胞用化合物a预处理30分钟，并且在37℃、5％co2下进一步与一定浓度的hel蛋白质一起培养过夜。培养过夜后，收获细胞，并且应用于facs分析以测量如上所述的cd19+细胞上hel肽/mhcii复合物的表达水平。将dmso保持在低于0.1％的浓度。
促炎细胞因子释放的测定
将从2.1节中记录的md4b10.br纯化的100万个b细胞悬浮于200μl完全培养基中，并且用含有可溶性cd40配体的100μmhel蛋白质在37℃、5％co2下刺激48小时。在刺激前30分钟，在培养物中加入化合物a。在用hel蛋白质刺激后，收获培养物上清液，并且根据提供的制造说明(r&d系统)通过elisa应用于测量il-6和tnfα。数据表示为一式三份样品的浓度平均值(pg/ml)，并且如上所述计算ic50值。dmso的浓度保持在小于0.1％的浓度。
结果(表2)
表2鼠b细胞功能的抑制
a显示的数据为至少2次独立试验的平均值；b显示的数据为至少4次独立试验的平均值。
人外周血单核细胞(pbmc)的趋化因子的产生
方法
pbmc的分离
为了评估化合物a对与生发中心形成相关的趋化因子的产生的影响，在leucosep管(greinerbio-one#227289)中，通过使用ficoll-paqueplus(ge医疗保健#17-1440-03)的标准ficoll梯度离心从血沉棕黄层(通过inter-regionaleblutspendeoftheswissredcross收集)中分离pbmc。用pbs洗涤细胞两次，然后以2.2×106个/ml重悬于补充有10％fbs、庆大霉素(50μg/ml)、胰岛素-转铁蛋白-硒和β-巯基乙醇(50μm)的rpmi1640培养基中。
pbmc的刺激
将pbmc分配至48孔板(costar#3548)并且与预稀释的化合物a一起温育，得到终浓度为0.3、1或3μm的稀释液。对照样品用dmso预处理，得到0.03％dmso的终浓度。将样品充分混合并且在湿润的温育箱中于37℃温育1小时。然后通过加入终浓度为30μg/ml的tlr9激动剂odnm362(invivogen，#tlrl-m362)或终浓度为2μg/ml的抗-igm-葡聚糖(finabiosolution#0004)以刺激细胞。对照样品未经刺激。将样品充分混合并且在湿润的温育箱中于37℃温育24小时。
细胞因子/趋化因子测定
刺激后，收获培养物上清液，并且通过bio-plexmultiplex免疫测定(cxcl13；biorad#171bk12mr2)或msdv-plex测定(ip-10；mesoscalediagnostics)或根据制造商的说明书定量趋化因子。
结果(表3和4)
表3tlr9配体诱导的cxcl13产生的抑制
a培养物上清液中测定的cxcl13的量显示为pg/ml
表4抗-igm-葡聚糖配体诱导的ip-10产生的抑制
a培养物上清液中测定的ip-10的量显示为pg/ml
cxcl13-诱导的b细胞迁移
方法.
b细胞从血沉棕黄层中的分离
如上所述从血沉棕黄层分离pbmc。用pbs洗涤细胞两次，然后以5×107个/ml重悬于含有2％fbs和1mmedta的pbs中。根据制造商的说明，通过使用easyseptm人b细胞富集试剂盒(stemcelltechnologies#19054)除尽非b细胞进行进一步的b细胞纯化。简言之，将在8ml分离缓冲液中的4×108个pbmc与400μl富集混合物在14ml圆底管中在室温温育10分钟。将pbmc与600μl磁性颗粒在室温进一步温育5分钟。对于b细胞分离，将管置于磁体中5分钟，并且将富集的b细胞收集在新鲜的14ml管中。然后洗涤细胞并且以5×106个/ml重悬于补充有10％fbs、庆大霉素(50μg/ml)、胰岛素-转铁蛋白-硒和β-巯基乙醇(50μm)的rpmi1640培养基中。
96-孔transwell板中的迁移测定
将分离的b细胞分配到5ml圆底管(costar#352054)中，并且与预先稀释的化合物a一起温育，得到终浓度为10、1、0.1或0.01μm的稀释液。用dmso预处理对照样品，得到0.1％dmso的终浓度。将样品充分混合并且在37℃的水浴中温育30分钟。将在稀释液中的终浓度为100nm的一些235μlcxcl13(r&dsystems#801-cx)加入到96孔transwell接收板(costar#3387)的孔中。对照孔用235μl培养基填充。将5μm可渗透支持插入物添加到接收器板中并且填充80μl预温育的b细胞。将transwell板在湿润的培养箱中于37℃温育3小时。去除可渗透的支持插入物并且通过流式细胞术评估接收器板中的细胞数。
结果(表5)
表5cxcl13-诱导的b细胞迁移的抑制
a4个孔的平均值
大鼠中通过单口服剂量的试验化合物的离体akt-磷酸化的时间-依赖性抑制
方法.
动物
所有试验使用称重为220-280g的成年雄性lewis大鼠(lew/han/hsd,charlesriver,germany和lew/orl@rj,janvier,france)进行。
维持条件
在常规卫生条件下饲养动物并且随意喂食标准饮食和饮用水。在试验前和试验期间，允许它们不受限制地获取食物和水。
试剂
高分子量肝素钠(b.braun,melsungen,germany；5000i.u./ml)用作抗凝剂。山羊抗-大鼠igm抗体得自serotec,düsseldorfgermany(目录号302001)。bdphosflow裂解/固定缓冲液i得自bdbiosciences(目录号558049)。重组大鼠il-4(bd，目录号555107)以等份储存在-80℃。
药物和体内药物应用
新鲜制备用于施用的悬浮液并且在室温在黑暗中保存。将14.8mg化合物a悬浮于含有0.5％tween80的5.92mlcmc0.5％中。然后将乳状均匀的悬浮液施用于动物。试验物质通过口服施用，体积为4ml/kg体重，导致口服剂量为10mg/kg。
血液收集
使用fluvac气流系统用异氟烷麻醉动物。在给药前和给药后1、2、4、6、8、10、12和24小时舌下收集全血。对于药效学分析，在具有30iu肝素钠(b.braun，melsungen，germany；5000iu/ml)的eppendorf管中每个时间点收集100μl大鼠血液。对于药代动力学分析，在edta包被的eppendorf(milian目录号tom-14)管中每个时间点收集150μl大鼠血液。
药代动力学分析
对于药代动力学分析，在分析之前，将150μl每种全血样品储存在-80℃。在向每个全血样品的80μl等份中加入20μl内标(浓度＝400ng/ml)后，在用400μl乙腈沉淀后通过离心除去细胞和蛋白质。然后将有机上层蒸发至干。将残留物溶于含有0.2％甲酸的50％乙腈中，用0.2％甲酸稀释，离心，然后在分析前储存在10℃。为了校准，向8个空白全血样品中加入1至5000ng/ml量的化合物。将质量和回收对照样品设定为100ng/ml。
为了分析，将10μl等份的每种样品提取物注入lc-ms-ms系统。在reprosil-purc18反相柱上拆分化合物，在5分钟内应用含有0.2％甲酸的5mm甲酸铵至含有5％甲醇的乙腈的线性梯度。为了检测，使用质量变化为451.2m/z→247.0m/z，mrm模式的质谱。在ap电喷雾源中电离柱流出物后，检测到化合物a和内标物作为它们的[mh]+产物离子。
基于从ms/ms信号的相对强度获得的提取的峰面积比，通过
体外全血刺激
对于来自药物处理的动物的血液的离体分析，在血液收集后立即在5mlu底管(bd，目录号352063)中，将90ml肝素化血液与100mlrpmi培养基(gibco，目录号31870)混合，并且用10μl抗大鼠igm/ril-4活化，终浓度为50mg/ml的抗大鼠igm和10ng/ml的ril-4。对照样品未经刺激。将样品充分混合并且在37℃水浴中温育10分钟。
裂解、固定和渗透
温育后，每管加入2ml预温热(37℃水浴)的bdphosflow裂解/固定缓冲液。将样品充分混合并且在37℃水浴中温育20分钟。然后将样品以400g离心5分钟。离心后，每管加入2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液。将样品充分混合并且在室温(rt)在黑暗中温育10分钟。此后，将样品在干冰上快速冷冻，然后在-80℃储存直至facs染色。
流式细胞术分析
为了解冻，将所有样品在25℃水浴中温育10分钟。在400g离心5分钟后，用2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液洗涤沉淀，并且再次以400g离心5分钟。去除上清液。为了分析pakt，将样品用pe-标记的抗-大鼠igm(bd，目录号553888)染色，以允许在facs分析中在b细胞上进行门控。另外，样品用alexa647缀合的抗-磷酸-akt(ser473；bd，目录号560343)染色。在室温，在100μlbdphosflowperm/洗涤缓冲液的总体积中在黑暗中进行染色程序30分钟。温育后，用2mlbdphosflowperm/洗涤缓冲液洗涤样品，并且以400g离心5分钟，并且将沉淀重悬于300μlbd染色缓冲液(bd，目录号554656)中。将样品保持在冰上直至使用diva软件(版本6.1.2)在lsrii流式细胞仪(bdbiosciences)上获得数据。根据大小和粒度在fsc/ssc斑点印迹中对淋巴细胞进行门控，并且进一步分析igm的表达和akt的磷酸化。从斑点印迹或直方图计算数据，为igm+群体内akt-磷酸化阳性染色的细胞的百分数。
统计学评价
将离体药物的作用表示为通过流式细胞术测定的akt-磷酸化的抑制。通过下式计算akt-磷酸化的抑制百分数：
结果(表6)
表6大鼠中的akt-磷酸化的时间-依赖性抑制
将一组4只lewis大鼠用单次口服剂量的10mg/kg化合物a治疗。在指定的时间点，用抗-大鼠igm/ril-4刺激50％大鼠全血，并且如方法部分中所述测定akt-磷酸化。数据显示sd的4只动物的个体和平均值。
化合物a在人血浆中的药代动力学分析
方法.通过直接静脉穿刺或插入前臂静脉的留置套管获得全血样品。将血液样品收集到含有乙二胺-四乙酸三钾(k3edta)的管中，并且在3-5℃在3-5分钟内离心以分离血浆。将获得的血浆冷冻并且储存在-20℃直至药物浓度测量。
使用经验证的电喷雾电离液相色谱-串联质谱法(hplc-ms/ms)以正离子模式定量化合物a的血浆浓度。简言之，将40μl血浆样品转移到置于96孔板上的impact蛋白质沉淀板上。将150微升稀释至4ng/ml的内标[13cd3]化合物a在75％乙腈水溶液中制备，加入96孔板中，然后涡旋混合。对于对照空白样品，加入150微升体积的不含内标的75％乙腈水溶液代替。将用薄膜密封的板振荡10分钟，离心(10分钟，2250g，4℃)。将体积为4μl的样品提取物注入lc/ms/ms系统(api4000，appliedbiosystems)。
使用ascentis2.7μmc18,50×2.1mm(sigma-aldrich)在40℃和1.00ml/分钟的流速下进行化合物a的色谱分离。流动相由a：0.1％甲酸水溶液和b：0.1％甲酸的乙腈溶液组成。10％流动相b的初始条件保持最初0.3分钟，流动相b的组成在接下来的0.3分钟内线性增加至50％，在1.0分钟内跃升至95％，然后回到10％。化合物a及其内标的保留时间约为1.4分钟。化合物a和[13cd3]化合物a的选择质量变化分别为451.2→247.1、174.1和455.3→251.2、174.2、124.2。
通过应用加权(1/浓度平方)二次最小二乘回归算法，使用校准标准的峰面积比(化合物a对比[13cd3]化合物a)构建校准曲线。
临床样品中的化合物a浓度从它们的峰面积比与校准曲线(analyst软件)反算。该方法在3ng/ml至1000ng/ml的范围内成功验证，lloq为3ng/ml。动态范围由7个校准标准涵盖。该方法满足给定的线性接受标准(校准标准偏差≤15％(≤20％lloq)，来自校准曲线)，日间和日内准确度和精密度(标称值的平均偏差≤15％(≤20％lloq)；精密度≤15％(≤20％lloq))以及残留(carry-over)响应。
结果(图1)
刺激/未刺激的全血临床样品中b细胞中的pakt的测定
方法
血液收集和细胞刺激
为了评估化合物a对人b细胞活化的体内作用(测定为akt磷酸化)，使用na-肝素单核细胞(monovette)系统从全血制备临床样品。
然后将全血与抗igm/il-4(7.5μg/ml抗-igm[southernbiotech]和7.5ng/mlil-4[r&d])或与pbs(未刺激样品)一起温育。在血液收集后1小时内在平板格内使用95μl血液(一式两份)进行温育。通过适度地上下抽吸将培养物充分混合并且在37℃温育(在温育箱中，5％co2)。30分钟后，将全血裂解并且用预温热(37℃)的bdphosflow-裂解/固定缓冲液(1600μl)在黑暗中于37℃(水浴)固定20分钟。将裂解和固定的血液样品立即冷冻并且储存在-80℃直至进一步处理。
b细胞活化标志物的染色
在血液收集后一周内处理临床样品。解冻完成后(在37℃水浴中)，将样品在室温以502g(1580rpm)离心5分钟。然后将沉淀的细胞用500μl冰冷的bdphosflowpermii缓冲液洗涤，充分混合并且在冰上保持30-35分钟。温育后，加入1200μlfacs缓冲液，并且将细胞在室温以650g(1800rpm)离心10分钟。弃去上清液并且如上所述再次洗涤样品。染色方法由直接染色(用抗-人cd20per-cp-cy5.5标记的[bd目录号558021]和抗-人总aktalexa
数据获得和分析
在同一天分析样品。使用diva软件以高流速在facscantoii上进行数据采集。门控如下：首先使用fsc-a与fsc-h点图排除双峰。然后将单细胞展示在fsc-a与ssc-a点图上以产生针对白细胞的门控。创建cd20与ssc-a点图并且显示白细胞。基于cd20-阳性b细胞，创建了pakt的直方图。未刺激的样品用于设置阳性和阴性pakt群体的间隔门。将数据计算为pakt相对于基线值的抑制百分数。
结果(图1)
化合物a显示pi3k/akt途径的剂量、浓度和时间-依赖性抑制。在单一施用80mg化合物a后，历经12小时实现大于80％的途径抑制。化合物a的剂量-响应关系的模型提示通过bid给药方案将确保历经24小时的持续途径抑制。