本发明涉及cpap-微管蛋白抑制剂及其作为癌症治疗剂的用途。
背景技术：
中心体扩增是可引发癌细胞侵袭的人类癌症的标志。中心体是哺乳动物细胞中的主要微管组织中心，其数值异常有助于增加细胞侵袭力。与具有一对中心体的正常成纤维细胞相比，通常癌细胞显示多余的中心体。具体而言，在表皮生长因子受体(egfr)基因中携带体细胞(somatic)激活和抗性突变的非小细胞肺癌细胞表现出中心体数量的极度增加。癌细胞在分裂间期(interphase)和有丝分裂期(mitosis)均将它们的多余的中心体聚集在一起以产生假双极纺锤体，从而避免由有丝分裂障碍引起的中心体扩增的有害作用。
尽管癌细胞聚集其多余的中心体的机制在很大程度上是未知的，但已知在细胞周期的分裂间期的中心体聚集期间和之后，多余的中心体保持无活性，没有或有较小的微管成核活性。此外，已知中心体的微管成核活性受时空(spatiotemporally)调节，使得它们在分裂间期成核较少，而在有丝分裂期成核较多。更进一步，已知为了对抗癌症，可以去除中心体。然而，癌细胞可在中心体移除后增殖，这提高了癌细胞使用多余的中心体以利于细胞侵袭的可能性。在中心体的情况下，可以参考例如blachonandgopalakrishnanetal.,genetics(遗传学)2008；gopalakrishnanetal.,jbc2010；gopalakrishnanetal.,naturecommun(自然通讯)2011；gopalakrishnanetal.,naturecellbiology(自然细胞生物学)2012；gopalakrishnanetal.,currentopinionincellbiol(细胞生物学中的普遍观点)2013；zhengetal.,pnas2014；和pannuetal.,celldeathanddis(细胞死亡与疾病)2014。
与癌症作斗争的不同方法是已知的，并且特别包括通过阻止微管功能阻断细胞分裂的抗微管剂。两组主要的抗微管剂为长春花生物碱和紫杉烷类。长春花生物碱阻止微管的形成，而紫杉烷类阻止微管分解。通过这样做，它们可以阻止癌细胞完成有丝分裂。之后，发生细胞周期停滞，其诱导程序性细胞死亡(细胞凋亡)。此外，拓扑异构酶抑制剂用于癌症治疗。这些抑制剂在复制或转录期间影响解链dna的拓扑异构酶的活性。另一组用于癌症治疗的化合物为酪氨酸激酶抑制剂，例如以伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、舒尼替尼(sunitinib)和卡博替尼(cabozantinib)命名的化合物。
最常见的药物主要影响身体的快速分裂的细胞，如血细胞和内衬在口腔、胃和肠中的细胞。不幸的是，用于化疗的常见药物不能准确地区分健康细胞和癌细胞。除了发现有效引起癌细胞凋亡的化合物之外，癌症研究的另一个关注点是对癌症药物具有抗性的细胞和/或成为对癌症药物有抗性的细胞。
us2009/0118135公开了用于确定抑制bcl-2蛋白活性或者影响bcl-2从抗凋亡转化为促凋亡形式的化合物的测定法。此外，us2009/0118135涉及bcl的促凋亡调节剂，其可通过gx连接至特异性结合乳腺癌细胞的环状二硫环肽。
lack,n.a.,etal.,“targetingthebindingfunction3siteofthehumanandrogenreceptorthroughvirtualscreening(通过虚拟筛选靶向人雄激素受体的结合功能3位点)”,j.medicinalchemistry,2011,vol.54,p.8563-8573涉及靶向雄激素受体上的位点的抑制剂，其与受体的转录活性有关。
deady,l.w.,etal.,“synthesisandcytotoxicactivityofcarboxamidederivativesofbenzo[b][1,6]naphtyridines(苯并[b][1,6]萘啶的甲酰胺衍生物的合成和细胞毒性活性)”,j.med.chem.,2003,vol.46,p.1049.1054公开了4-n-[2-(二甲基氨基)乙基]甲酰胺，测试了其对小鼠p388白血病、lewis肺癌和人jurkat白血病细胞系的生长抑制特性。
rivalle,c.,etal.,“nouvellesynthèsedespyrido[4,3-b]quinoléinessubstituéessurleursommet1”,j.heterocyclicchem.,1980,vol.17,p.245-248涉及被不同基团取代的吡啶并[4,3-b]喹啉，其能嵌入dna并具有针对白血病的抗肿瘤特性。
jingping,c.,etal.,“electron-deficientdna-intercalatingagentsasantitumordrugs:azaanaloguesoftheexperimentalclinicalagentn-[2-(dimethylamino)ethyl]acridine-4-carboxamide(作为抗肿瘤药物的贫电子dna插入剂：实验临床试剂n-[2-(二甲基氨基)乙基]吖啶-4-甲酰胺的氮杂类似物)”,j.med.chem.1994,vo.37,p.593-597公开了合成n-[2-(二甲基氨基)乙基]吖啶-4-甲酰胺(daca)的类似物，并且这些化合物显示出dna结合亲和力，但通常为比daca效力小的细胞毒素。唯一显示体内抗白血病活性的氮杂吖啶为苯并[b][1,5]萘啶-6-甲酰胺。
deady,l.w.,etal.,“novelderivativesofthebenzo[b][1,6]naphtyridinesystem(苯并[b][1,6]萘啶体系的新衍生物)”,j.heterocyclicchem.,2006,vol.43,p.405-416涉及新的一系列潜在的抗肿瘤甲酰胺的前体。
pradeep,b.,etal.,“comparisonofahomologousseriesofbenzonaphthyridineanti-canceragentsinmice:divergencebetweentumorandplasmapharmacokinetics(小鼠中苯并萘啶抗癌药的同系系列比较：肿瘤与血浆药代动力学之间的分歧)”,cancerchemother.pharmacol.,2012,vol,70,p.151-160公开了一种结合dna的苯并萘啶，其在单剂量n小鼠后显示出对结肠-38腺癌的治疗活性。
deady,l.w.,etal.,“synthesisandcytotoxicactivityofcarboxamidederivativesofbenzo[b][1,6]naphtiyridin-5h)ones(苯并[b][1,6]萘啶-5h)酮的甲酰胺衍生物的合成和细胞毒性活性)”,bioorganic&medicinalchemistry,2005,vol.13,p.1341-1355公开了具有显著不同范围的2-取代基的化合物保留了对鼠p388白血病和lewis肺癌的有效细胞毒性。
wo03/097642涉及具有细胞毒性的多环甲酰胺化合物、其制备方法、含有它们的药物组合物以及它们在治疗中的用途，特别是在治疗和/或预防细胞增殖性疾病(如癌症)中的用途。
tugusheva,n.z.,etal.,“synthesisandbiologicalactivityofmono-andtricyclicderivativesof2-amino-3-cyanopyridine(2-氨基-3-氰基吡啶的单环和三环衍生物的合成和生物活性)”,pharmaceuticalchemistryjournal,1.jan.1986,p.483-488公开了2-氨基-3-氰基吡啶衍生物的合成及其作为缓激肽拮抗剂的分析。
bernardino,a.m.r.,etal.,“sarofaseriesofanti-hsv-1acridonederivatives,andarationalacridone-baseddesignofanewanti-hsv-13h-benzol[b]pyrazolo[3,4-h]-1,6-naphthyridineseries(一系列抗hsv-1吖啶酮衍生物的sar，以及基于吖啶酮合理设计的新型抗hsv-13h-苯并[b]吡唑并[3,4-h]-1,6-萘啶系列)”,bioorganic&medicinalchemistry,2008,vol.16,p.313-321对一系列1-h吖啶酮衍生物的结构特征和电子性质进行了评估，该系列1-h吖啶酮衍生物被描述为一类新的单纯疱疹病毒-1(hsv-1)的非核苷抑制剂。
us6,864,238涉及具有微管失稳活性的包含中心体p4.1相关蛋白(cpap)的100个氨基酸残基区域的多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含多肽和多核苷酸的组合物及其使用方法。本发明可用于使真核细胞(包括但不限于癌细胞)中的微管失稳。
需要能够提供抗癌症的癌症选择性药物并基本上避免影响身体健康细胞的功能(特别是中心体的功能)的化合物。
此外，需要可用于癌症治疗的化合物，所述癌症对抗癌药物具有抗药性。
技术实现要素：
本发明的目的是提供能够减少细胞侵袭的化合物。本发明的另一个目的是提供可用于治疗与细胞侵袭相关的疾病和病症(即癌症)的化合物。
这些目的已经通过专利权利要求的主题来实现。
除了去除多余的中心体外，令人惊讶地发现通过改变它们的行为，实现了多余的中心体的过早激活和微管的成核。这种修饰通过本发明的cpap-微管蛋白抑制剂实现，即通过阻止微管蛋白(中心体活性的负调节物)与中心体蛋白cpap相互作用实现。通过本发明的cpap-微管蛋白抑制剂或cpap-微管蛋白相互作用的遗传破坏过早激活多余的中心体特异性地导致癌细胞发生有丝分裂障碍和细胞死亡。由本发明的cpap-微管蛋白抑制剂介导的中心体激活对包括酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr和kras突变癌在内的广谱癌症具有广泛的抗侵袭活性。此外，通过本发明的cpap-微管蛋白抑制剂进行的中心体激活有效地协同这些细胞以抑制egfr。
因此，已经鉴定了癌细胞对多余的中心体激活的普遍脆弱性，其也可以与其他微扰相结合作为总体构思以针对包括抗药性癌症的各种癌症类型。本发明的方法提供了癌症选择性化学治疗，因为其特异性靶向具有多余的中心体的癌细胞但保留正常细胞。
第一方面，本发明涉及通式(1)的化合物，
或其生理上可接受的盐；
其中，
r1和r2彼此独立地表示-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
或
r1和r2共同形成五元环或六元环，所述环的环原子分别彼此独立地为c、n、s或o，其中所述环为未取代的或者被取代基单取代或多取代的芳族环或非芳族环，所述取代基彼此独立地选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r3表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r4表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r5表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r6表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r7表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
r8表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
其中在每种情况下，rz分别独立地表示-c1-8-脂族基、-c3-12-脂环族基、-芳基、杂芳基、-c1-8-脂族基-c3-12-脂环族基、-c1-8-脂族基-芳基、-c1-8-脂族基-杂芳基、-c3-8-脂环族基-c1-8-脂族基、-c3-8-脂环族基-芳基或-c3-8-脂环族基-杂芳基；
其中在每种情况下，“脂族基”分别独立地表示支链或非支链、饱和或单不饱和或多不饱和的、未取代或单取代或多取代的脂族烃残基；
其中在每种情况下，“脂环族基”分别独立地表示饱和或单不饱和或多不饱和的、未取代的或单取代或多取代的脂环族单环或多环烃残基；
其中在每种情况下，就“脂族基”和“脂环族基”而言，“单取代或多取代的”分别独立地表示一个或多个氢原子被选自以下的取代基单取代或多取代：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
其中在每种情况下，“芳基”分别独立地表示具有至少一个芳香环但在该环中没有杂原子的碳环体系，其中如果需要，芳基残基可以与其他饱和、(部分)不饱和或芳族环体系缩合，并且每个芳基残基可以以未取代或单取代或多取代的形式存在，其中芳基取代基可以相同或不同，并且在芳基的任何所需和可能的位置；
其中在每种情况下，“杂芳基”分别独立地是指含有1、2、3、4或5个杂原子的5-、6-或7-元环状芳族残基，其中杂原子相同或不同，为氮、氧或硫，并且所述杂环可以为未取代的或单取代或多取代的；其中在所述杂环上有取代的情况下，取代基可以相同或不同，并且可以在杂芳基的任何所需和可能的位置；并且其中所述杂环还可以为双环体系或多环体系的一部分；
其中在每种情况下，就“芳基”和“杂芳基”而言，“单取代或多取代的”分别独立地表示环体系的一个或多个氢原子被取代基单取代或多取代，所述取代基选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)-n(rz)2、-oh、-o(ch2)1-2o-、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nh-c(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3和-po(orz)2；其中如果需要，可以分别氧化存在的n环原子；
该化合物用于治疗癌症，优选为酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr癌症或kras突变型癌症或抗药性癌症。
优选地，通式(1)的化合物用于治疗选自如下的癌症：肺癌、脑癌、眼癌、口腔癌、咽喉癌、舌癌、气管癌、胃癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、结肠直肠癌、尿道癌、膀胱癌、睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、胰腺癌、皮肤癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌。
更优选地，通式(1)的化合物用于治疗肺癌，最优选用于治疗非小细胞肺癌(nsclc)。
优选地，r1表示-cn。
在通式(1)的化合物的优选实施方案中，r2表示-orz或-srz。
在通式(1)的化合物的另一个优选的实施方案中，r2表示-nhrz或-nrarb，其中ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成环并且表示-(ch2)2-6。优选地，ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成环并且表示-(ch2)2-6，其中所述环为未取代的或单取代或多取代的芳族环或非芳族环。
在又一个优选实施方案中，r2表示-f、-cl、-br或-i。
在通式(1)的化合物的优选实施方案中，
r1和r2彼此独立地表示-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-o-c1-8-脂族基、-s-芳基、-s-c1-8-脂族基-c(＝o)nh-芳基、-nh-c1-8-脂族基、-nh-c1-8-脂族基-芳基或-c3-12-脂环族基；
或
r1和r2共同形成五元环或六元环，其环原子分别彼此独立地为c、n、s或o，其中所述环为未取代或被取代基单取代或多取代的芳族环或非芳族环，所述取代基彼此独立地选自：-c(＝o)o-c1-8-脂族基、-c(＝o)-c1-8-脂族基-nh-芳基、-nh2、-nh-c1-8-脂族基或-n(-c1-8-脂族基)2。
在通式(1)的化合物的另一个优选实施方案中，
r1表示-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2或-cho；
r2表示-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-o-c1-8-脂族基、-s-芳基、-s-c1-8-脂族基-c(＝o)nh-芳基、-nh-c1-8-脂族基、-nh-c1-8-脂族基-芳基或-c3-12-脂环族基；
或
r1和r2共同形成五元环或六元环，其环原子分别彼此独立地为c、n、s或o，其中所述环为未取代或被取代基单取代或多取代的芳族环或非芳族环，所述取代基彼此独立地选自：-c(＝o)o-c1-8-脂族基、-c(＝o)-c1-8-脂族基-nh-芳基、-nh2、-nh-c1-8-脂族基或-n(-c1-8-脂族基)2。
在通式(1)的另一个优选实施方案中，
r1表示-cn；
r2表示-f、-cl、-br、-i、-o-c1-8-烷基、-s-苯基、-s-c1-8-烷基-c(＝o)nh-苯基、-nh-c1-8烷基、-nh-c1-8-烷基-苯基、-nh-c1-8-烷基-co2h或-c3-12-环烷基；
或
r1和r2共同形成五元环，其环原子分别彼此独立地为c、n或s，其中所述环为被取代基单取代或多取代的芳族环，所述取代基彼此独立地选自：-c(＝o)o-c1-8-烷基、-c(＝o)-c1-8-脂族基-nh-苯基或-nh2。
在通式(1)的另一个优选实施方案中，
r3、r4、r5、r6、r7和r8彼此独立地表示-h、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、-o-c1-8-脂族基、-s-芳基、-s-c1-8-脂族基-c(＝o)nh-芳基、-nh-c1-8-脂族基、-nh-c1-8-脂族基-芳基或-c3-12-脂环族基。
在通式(1)的另一个优选实施方案中，
r3、r4、r5、r6、r7和r8表示-h。
通式(1)的化合物的特别优选的实施方案，其具有通式(2)
其中，
r2表示-f、-cl、-br、-i、-o-c1-8-烷基、-s-苯基、-s-c1-8-烷基-c(＝o)nh-苯基、-nh-c1-8烷基、-nh-c1-8-烷基-苯基或-c3-12-环烷基；
或具有通式(3)
其中，
x表示-n(h)-、-n(c1-8-烷基)-或-s-；
y表示n或-c-r10；
r9和r10彼此独立地表示-c(＝o)o-c1-8-烷基、-c(＝o)-ch2-nh-苯基或-nh2。
通式(1)的化合物的进一步特别优选的实施方案，其具有通式(2)
其中，
r2表示-f、-cl、-br、-i、-o-c1-8-烷基、-s-苯基、-s-c1-8-烷基-c(＝o)nh-苯基、-nh-c1-8烷基、-nh-c1-8-烷基-co2h、-nh-c1-8-烷基-苯基或-c3-12-环烷基；
或具有通式(4)
其中，
x表示-n(h)-或-s-；
y表示n或-c-r10；
r10表示-c(＝o)o-c1-8-烷基、-c(＝o)-ch2-nh-苯基或-nh2。
通式(1)的化合物的其他特别优选的实施方案，其具有通式(2)
其中，
r2表示-cl、-o-c1-8-烷基、-s-苯基、-s-c1-8-烷基-c(＝o)nh-苯基、-nh-c1-8-烷基、-nh-c1-8-烷基-co2h、-nh-c1-8-烷基-苯基或-c3-12-环烷基；
或具有通式(4)
其中，
x表示-n(h)-或-s-；
y表示n或-c-r10；
r10表示-c(＝o)o-c1-8-烷基或-c(＝o)-ch2-nh-苯基。
通式(1)的化合物的非常特别优选的实施方案，其具有通式(2)
其中，
r2表示-nh-c1-8-烷基或-nh-c1-8-烷基-co2h，其中-c1-8-烷基未被取代。
通式(1)的化合物的其他非常特别优选的实施方案，其具有通式(2)
其中，
r2表示-o-c1-8-烷基或-nh-c1-8-烷基-co2h，其中-c1-8-烷基未被取代。
通式(1)的化合物的其他优选实施方案具有通式(3a)
其中，
r9表示-nh2，
r10表示-c(＝o)o-c1-8-烷基或-c(＝o)-ch2-nh-苯基。选自下组的通式(1)的化合物为最特别优选的：
或其生理上可接受的盐。
为了说明的目的，在通式(1)的化合物的定义中，
在每种情况下，rz分别独立地表示-c1-8-脂族基、-c3-12-脂环族基、-芳基、杂芳基、-c1-8-脂族基-c3-12-脂环族基、-c1-8-脂族基-芳基、-c1-8-脂族基-杂芳基、-c3-8-脂环族基-c1-8-脂族基、-c3-8-脂环族基-芳基或-c3-8-脂环族基-杂芳基；
在每种情况下，“脂族基”分别独立地表示支链或非支链、饱和或单不饱和或多不饱和的、未取代或单取代或多取代的脂族烃残基；
在每种情况下，“脂环族基”分别独立地表示饱和或单不饱和或多不饱和的、未取代的或单取代或多取代的脂环族单环或多环烃残基；
在每种情况下，就“脂族基”和“脂环族基”而言，“单取代或多取代的”分别独立地表示一个或多个氢原子被选自以下的取代基的单取代或多取代：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2；
在每种情况下，“芳基”分别独立地表示具有至少一个芳香环但在该环中没有杂原子的碳环体系，其中如果需要，芳基残基可以与其他饱和、(部分)不饱和或芳族环体系缩合，并且每个芳基残基可以以未取代或单取代或多取代的形式存在，其中芳基取代基可以相同或不同，并且在芳基的任何所需和可能的位置；
在每种情况下，“杂芳基”分别独立地是指含有1、2、3、4或5个杂原子的5-、6-或7-元环状芳族残基，其中杂原子相同或不同，为氮、氧或硫，并且所述杂环可以为未取代的或单取代或多取代的；其中在所述杂环上有取代的情况下，取代基可以相同或不同，并且可以在杂芳基的任何所需和可能的位置；并且其中所述杂环还可以为双环体系或多环体系的一部分；
其中在每种情况下，就“芳基”和“杂芳基”而言，“单取代或多取代的”分别独立地表示环体系的一个或多个氢原子被取代基单取代或多取代，所述取代基选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)-n(rz)2、-oh、-o(ch2)1-2o-、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nh-c(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3和-po(orz)2；其中如果需要，可以分别氧化存在的n环原子。
在不同残基的组合中(例如r1、r2和r3)以及其取代基上的残基组合(例如，-orz、-srz、-s(＝o)1-2-rz或-c(＝o)orz)中，取代基(例如rz)在一种物质中针对两个或更多个残基(例如，r1、r2和r3)具有不同的含义。
为了说明的目的，将烃残基分成脂族烃残基和芳族烃残基。
脂族烃残基本身分为非环脂族烃残基(＝“脂族基”)和环脂族烃残基，即脂环族烃残基(＝“脂环族基”)。脂环族基化合物可以为单环或多环的。脂环族烃残基(“脂环族基”)既包含纯脂族基碳环也包含脂族基杂环，即-除非明确说明-“脂环族基”包括纯脂族碳环(例如环己基)、纯脂族基杂环(例如哌啶基或哌嗪基)以及非芳族、多环、可能混合的体系(例如十氢萘基、十氢喹啉基)。
芳烃本身分为碳环芳烃(＝“芳基”)和杂环芳烃(＝“杂芳基”)。
至少部分芳香性的多环体系的分类优选取决于多环体系的至少一个芳环是否在环中具有至少一个杂原子(通常为n、o或s)。如果在该环中存在至少一个这种杂原子，则这优选为“杂芳基”(即使可能存在其他具有或不具有杂原子的碳环芳族环或非芳族环作为多环体系的另外存在的环)。如果这样的杂原子不存在于多环体系的任何可能的几个芳环中，那么优选为“芳基”(即使在多环体系的非芳环中可能还存在环杂原子)。
因此，分类中的适用于环状取代基的以下优先级为：杂芳基>芳基>脂环族基。
为了说明的目的，单价和多价(即二价)烃残基在概念上(即根据上下文)没有区别，“c1-8-脂族基”涵盖例如-c1-8-烷基、-c1-8-烯基和-c1-8-炔基、以及例如-c1-8-亚烷基-、-c1-8-亚烯基-和c1-8-亚炔基。
脂族基是指优选分别为支链或非支链、饱和或单不饱和或多不饱和的未取代或单取代或多取代的脂族烃残基。当脂肪族单取代或多取代时，取代基彼此独立地选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2.
因此，“脂族基”涵盖可为支链或直链的无环的饱和或不饱和烃残基，即链烷基、链烯基和链炔基。在这种情况下，链烯基具有至少一个c＝c双键并且链炔基具有至少一个c≡c三键。优选的未取代的单价脂族基团包括-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch2ch2ch3、-ch(ch3)ch2ch3、-ch2ch(ch3)2、-c(ch3)3、-ch2ch2ch2-ch2ch3和-ch2ch2ch2ch2ch2ch3；还有-ch＝ch2、-c≡ch、-ch2ch＝ch2、-ch＝chch3、-ch2c≡ch、-c≡cch3和-ch＝chch＝ch2。优选的未取代的二价脂族基团包括-ch2-、-ch2ch2-、-ch2ch(ch3)-、-ch(ch3)-ch2-、-ch2ch2ch2-、-ch(ch3)ch2ch2-、-ch2ch(ch3)-ch2-、-ch2ch2ch(ch3)-、-ch-(ch2ch3)ch2-和-ch2ch2-ch2ch2-；还有-ch＝ch-、-c≡c-、-ch2ch＝ch-、-ch＝chch2-、-ch2c≡c-和-c≡cch2-。优选的取代的一价脂族基团包括-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-cf2cf3、-ch2oh、-ch2ch2oh、-ch2chohch3、-ch2och3、-ch2ch2och3和-ch2n(ch3)2。优选的取代的二价脂族基团包括-cf2-、-cf2cf2-、-ch2choh-、-chohch2-和-ch2chohch2-。-甲基-、-乙基-、-正丙基-和-正丁基-是特别优选的。
脂环族基优选分别表示饱和或单不饱和或多不饱和的未取代的或单取代或多取代的脂族基(即非芳族)的单环或多环烃残基。环碳原子的数目优选在特定的范围内(即“c3-12-脂环族基”优选具有3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个环碳原子)。出于说明的目的，“c3-12-脂环族基”优选为具有3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个环碳原子的饱和或不饱和但不是芳族的环状烃，其中可能有一个或两个碳原子彼此独立地被杂原子s、n或o替换。当环烷基单取代或多取代时，取代基彼此独立地选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-oh、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)-orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nhc(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3或-po(orz)2。
优选地，c3-12脂环族基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、环壬烯基、环癸烯基、环十一烯基、环十二碳烯基，还有四氢吡喃基、二噁烷基、二氧戊环基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡唑啉基和吡咯烷基。
与“脂族基”或“脂环族基”有关的“单取代或多取代的”优选被理解为是指一个或多个氢原子被取代基单取代或多取代，例如单取代、二取代、三取代或4取代，取代基选自：-f、-cl、-br、-i、-oh、-oc1-8-烷基、-oc(＝o)c1-8-烷基、-sh、-nh2、-nhc1-8-烷基、-n(c1-8-烷基)2、-c(＝o)oc1-8-烷基或-c(＝o)oh。特别优选的取代基为-f、-cl、-oh、-sh、-nh2和-c(＝o)oh。
多取代的残基被理解为那些在不同的或相同的原子上被多取代(例如两次或三次取代)的残基，例如，在相同的c原子处三次取代，如-cf3或-ch2cf3的情况，或在不同的位置三次取代，如-ch(oh)-ch＝ch-chcl2的情况。多取代可以用相同或不同的取代基进行。取代基本身也可以被取代。因此，-o-脂族基除此之外还包括-och2ch2o-ch2ch2oh等。如果脂族基或脂环族基被-f、-cl、-br、-i、-cn、-ch3、-c2h5、-nh2、-no2、-sh、-cf3、-oh、-och3、-oc2h5或-n(ch3)2取代，其是优选的。如果脂族基或脂环族基团被-oh、-och3或-oc2h5取代，则是最特别优选的。
芳基优选分别独立地表示具有至少一个芳香环但在该环中没有杂原子的碳环系统，其中芳基残基可以与其他饱和的、(部分)不饱和或芳香环系统缩合，并且每个芳基残基可以以未取代的或单取代或多取代的形式存在，其中芳基取代基相同或不同，并且可以在芳基的任何所需和可能的位置。优选的芳基是苯基、萘基、蒽基、菲基、氟代蒽基(fluoroanthenyl)、芴基(fluoroenyl)、茚满基和四氢化萘基(tetralinyl)。苯基和萘基是特别优选的。当芳基被单取代或多取代时，芳基取代基可以相同或不同，并且处于芳基的任何所需和可能的位置，并且取代基彼此独立地选自-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)-n(rz)2、-oh、-o(ch2)1-2o-、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz,-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nh-c(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3和-po(orz)2。其中如果需要，可以分别氧化存在的n环原子。优选的取代芳基为2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2,3-二氟苯基、2,4-二氟苯基、3,4-二氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2,3-二氯苯基、2,4-二氯苯基、3,4-二氯苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2,3-二甲氧基苯基、2,4-二甲氧基苯基、3,4-二甲氧基苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2,3-二甲基苯基、2,4-二甲基苯基和3,4-二甲基苯基。
杂芳基优选表示含有1、2、3、4或5个杂原子的5-、6-或7-元环芳族残基，其中杂原子相同或不同，为氮、氧或硫，并且该杂环可以是未取代的或单取代或多取代的；其中在杂环上有取代的情况下，取代基可以相同或不同，并且可以在杂芳基的任何所需和可能的位置；并且其中杂环还可以为双环或多环系统的一部分。“杂芳基”优选选自吡咯基、吲哚基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基(benzothiadiazolyl)、苯并噁二唑基(benzooxadiazolyl)、苯并噻唑基、苯并噁唑基(benzooxazolyl)、苯并三唑基、苯并二氧戊环基(benzodioxolanyl)、苯并二噁烷基(benzodioxanyl)、酞嗪基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡喃基、吲唑基、嘌呤基、吲嗪基(indolizinyl)、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、喹唑啉基、咔唑基、吩嗪基、吩噻嗪基或噁二唑基(oxadiazolyl)，其中该键合可以经由杂芳基残基的任何期望和可能的环成员发生。在杂芳基被单取代或多取代的情况下，杂芳基取代基可以相同或不同，并且可以在杂芳基的任何期望和可能的位置上，并且取代基彼此独立地选自-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-cho、＝o、-rz、-c(＝o)rz、-c(＝o)h、-c(＝o)oh、-c(＝o)orz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)-n(rz)2、-oh、-o(ch2)1-2o-、-orz、-oc(＝o)h、-oc(＝o)rz、-oc(＝o)orz、-oc(＝o)nhrz、-oc(＝o)n(rz)2、-sh、-srz、-so3h、-s(＝o)1-2-rz、-s(＝o)1-2nh2、-nh2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-nhc(＝o)rz、-nhc(＝o)orz、-nh-c(＝o)nh2、-nhc(＝o)nhrz、-nhc(＝o)-n(rz)2、-si(rz)3和-po(orz)2；其中如果需要，可以分别氧化存在的n环原子。
关于“芳基”或“杂芳基”，“单取代或多取代的”应理解为是指环体系的一个或多个氢原子被单取代或多取代，例如二取代、三取代、4取代或5取代。
特别优选的是(杂)芳基取代基彼此独立地选自：-f、-cl、-br、-i、-cn、-cho、-co2h、-nh2、-no2、-nhrz、-n(rz)2、-n+(rz)3、-n+(rz)2o-、-sh、-srz、-oh、-orz、-c(＝o)rz、-co2rz、-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhrz、-c(＝o)n(rz)2、-s(＝o)1-2rz、-s(＝o)2nh2、-so3h、＝o或-rz。优选的取代基为-f、-cl、-br、-i、-oh、-oc1-8-烷基、-oc(＝o)-c1-8-烷基、-sh、-nh2、-nhc1-8-烷基、-n(c1-8-烷基)2、-c(＝o)oc1-8-烷基或-c(＝o)oh。特别优选的取代基为-f、-cl、-oh、-sh、-nh2和-c(＝o)oh。
除非另有明确说明，否则具有多于一个结合配偶体(partner)的残基可以以任何方向连接。例如，连接于结合配偶体b1和b2的残基“-s-(ch2)-c(＝o)-”可以以任一方向存在，即b1-s-(ch2)-c(＝o)-b2或b1-c(＝o)-(ch2)-s-b2。
本发明化合物可以以单一立体异构体或其混合物、游离化合物和/或其生理学上可接受的盐和/或溶剂化物的形式存在。
取决于取代模式，本发明的化合物可以是手性的或非手性的。
如果本发明的化合物是手性的，那么它们优选以外消旋体形式或以立体异构体或非对映异构体的混合物的形式或以对映异构体富集的形式存在。在一个优选的实施方案中，s-对映异构体的对映异构体过量(ee)为至少50％ee，更优选为至少75％ee，更优选为至少90％ee，最优选为至少95％ee，特别是至少99％ee。在另一个优选的实施方案中，r-对映异构体的对映异构体过量(ee)为至少50％ee，更优选为至少75％ee，更优选为至少90％ee，最优选为至少95％ee，特别是至少99％ee。
用于分离对映异构体的合适方法是本领域技术人员已知的。例如在手性固定相上进行制备型hplc并转化为非对映异构中间体。例如当用手性的、对映异构体-纯的酸形成盐时，可能发生向非对映体中间体的转化。分离由此形成的非对映异构体后，可以将盐再次转化成游离碱或另一种盐。
除非明确说明，否则每次提及本发明的化合物，其涵盖纯形式的所有异构体以及异构体以任何期望的混合比例彼此混合而得的混合物(例如立体异构体、非对映异构体、对映异构体)。
除非明确说明，否则每次提及本发明的化合物，其涵盖游离化合物(即不以盐形式存在的形式)和所有生理学上可接受的盐。
为了说明的目的，本发明化合物的生理学上可接受的盐以与无机酸或有机酸形成的具有相应化合物的阴离子或酸的盐的形式存在，所述无机酸或有机酸在生理学上是可接受的——特别是在应用于人和/或哺乳动物时。
特定酸的生理学上可接受的盐的实例为：盐酸、氢溴酸、硫酸、甲磺酸、甲酸、乙酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、扁桃酸、富马酸酸、乳酸、柠檬酸、谷氨酸、糖精酸、单甲基癸二酸、5-氧代-脯氨酸、己烷-1-磺酸、烟酸、2-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、2,4,6-三甲基苯甲酸、α-脂酮酸、乙酰甘氨酸、乙酰水杨酸、马尿酸和/或天冬氨酸的盐。盐酸盐、柠檬酸盐和半柠檬酸盐是特别优选的。
具有阳离子或碱的生理上可接受的盐为相应化合物-作为阴离子与至少一种、优选无机的生理上可接受的阳离子的盐，特别是在应用于人类和/或哺乳动物时。特别优选的是碱金属和碱土金属的盐，还有铵盐，特别是(一)钠盐或(二)钠盐、(一)钾盐或(二)钾盐、镁盐或钙盐。
本发明的化合物由取代基定义，例如，通过r1、r2和r3(第一代取代基)，该取代基本身可能被取代(第二代取代基)。取决于定义，取代基的这些取代基本身可以再次被取代(第三代取代基)。如果例如r1＝-rz，其中-rz＝-c1-8-脂族基(第一代取代基)，然后-c1-8-脂族基本身可以被取代，例如，用-orz取代，其中rz＝-芳基(第二代取代基)。这给出了官能团-c1-8-脂族基-o-芳基。然后，芳基可以再次被取代，例如，用-cl(第三代取代基)取代。这随后给出了整体官能团-c1-8-脂族基-o-芳基-cl。
本发明的另一个方面涉及如上所述的本发明的化合物作为药物。
本发明的另一个方面涉及包含如上所述的本发明的化合物的药物组合物或药物剂型。
优选地，药物组合物包含如上所述的本发明的化合物和药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指任何类型的无毒的、惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或制剂助剂。
可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例为糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格(ringer's)溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液、根据制剂领域的技术人员的判断、其它无毒相容的润滑剂(例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)，以及释放剂、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
药物组合物可以口服、直肠、肠胃外、阴道内、脑池内、腹膜内、局部(如通过粉末、软膏或滴剂)、口腔、体外(例如通过透析、或作为口腔或鼻腔喷雾)施用至个体(例如人和其他哺乳动物)。如本文所用，术语“肠胃外”是指包括静脉内、肌内、腹膜内、胸骨内、皮下、关节内注射和输注在内的施用方式。
用于肠胃外注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、混悬液或乳液以及用于重构为无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例包括水、乙醇、多元醇(聚乙二醇、丙二醇、甘油等及其合适的混合物)、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯、或它们的合适的混合物。例如通过使用诸如卵磷脂的包衣、通过在分散体的情况下维持所需的粒径以及通过使用表面活性剂，可以维持组合物的合适的流动性。
这些组合物还可以含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、苯酚、氯丁醇、山梨酸等)来确保防止微生物的活动。还可能需要包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。通过使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)可实现可注射药物形式的延长的吸收。
在某些情况下，为了延长药物的作用，通常需要减缓皮下或肌内注射药物的吸收。这可以通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体悬浮液来完成。药物的吸收速率可取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和结晶形式。或者，肠胃外施用的药物形式可以通过将药物溶解或悬浮于油溶媒中来施用。
除了活性化合物之外，悬浮液还可以含有悬浮剂，例如聚氧乙烯山梨糖醇、乙氧基化异硬脂醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminiummetahydroxide)、膨润土、琼脂、黄蓍胶及它们的混合物。
如果需要，并且为了更有效的分布，可以将化合物掺入到缓释或靶向递送系统如聚合物基质、脂质体和微球体中。它们可以通过例如细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，该无菌固体组合物可以在使用前立即溶解在无菌水或一些其他无菌可注射介质中。
通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物的微胶囊基质来制备可注射储库形式。取决于药物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质，可以控制药物释放速率。贮库可注射制剂也可以通过将药物包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
可注射制剂可以例如通过经过细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，该无菌固体组合物可以在使用前立即溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。
可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂、悬浮剂等配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以为在无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂如1,3-丁二醇溶液中的无菌注射溶液、悬浮液或乳液。其中可以使用的可接受的载体和溶剂为水、林格溶液、u.s.p.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何温和的固定油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸用于制备注射剂。
用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，一种或多种化合物与至少一种惰性药学上可接受的载体如柠檬酸钠或磷酸二钙混合，和/或与a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和水杨酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸收剂，例如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及它们的混合物进行混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。
类似类型的固体组合物也可用作使用乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)以及高分子量聚乙二醇的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳制备，例如肠溶衣和药物配制领域公知的其他包衣。它们任选地可以含有乳浊剂，并且也可以为这样的组合物，即它们仅释放活性成分，或优选地以延迟的方式在肠道的某个部分释放活性成分。可用于延迟释放活性剂的材料的实例可以包括聚合物质和蜡。
用于直肠或阴道施用的组合物优选为栓剂，其可通过将化合物与合适的非刺激性载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，该非刺激性载体在环境温度下为固体但在体温下为液体，并因此在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。
用于口服施用的液体剂型可以包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂(elixir)。除了活性化合物以外，液体剂型还可以含有本领域常用的惰性稀释剂(例如水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂(如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺)、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。
除惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
除活性化合物之外，悬浮液可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄蓍胶及它们的混合物。
如果需要，并且为了更有效的分布，可将化合物掺入缓释或靶向递送系统如聚合物基质、脂质体和微球体中。它们可以通过例如通过细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，该无菌固体组合物可以在使用前立即溶解在无菌水或一些其他无菌可注射介质中。
用于局部或经皮施用化合物的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。期望的化合物在无菌条件下与可能需要的药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或缓冲剂混合。眼科制剂、滴耳剂、眼膏剂、粉剂和溶液也被认为是在本发明的范围内。
除了活性化合物之外，软膏、糊剂、乳膏剂和凝胶可以含有动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或它们的混合物。
除了化合物之外，粉末和喷雾剂还可含有乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂还可含有常用推进剂如氯氟烃。
化合物也可以以脂质体的形式施用。如本领域所知，脂质体通常衍生自磷脂或其他脂质物质。脂质体由分散在水性介质中的单层或多层水合液晶形成。可以使用任何能够形成脂质体的无毒的、生理上可接受的和可代谢的脂质。除了化合物之外，脂质体形式的本发明组合物还可以含有稳定剂、防腐剂等。优选的脂质为单独或一起使用的天然和合成磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法是本领域已知的。
用于如上所述的本发明的化合物的局部施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼科制剂、眼药膏、粉剂和溶液也是可能的。含水液体组合物也可能是有用的。
本发明的化合物优选每天一次、每天两次、每天三次或更多次施用至有需要的个体。
本发明的化合物优选口服、直肠、静脉内、肌内、腹膜内、胸骨内、皮下、关节内注射、输注、阴道内、脑池内、腹膜内、局部、口腔或体外施用。
在一些情况下，用癌症药物组合治疗患者以达到期望的癌症细胞缓解是有利的。当癌细胞对常规癌症药物(例如酪氨酸激酶抑制剂)具有抗性或对其产生抗性时，特别需要这种癌症药物组合，即联合治疗。例如在患者用酪氨酸激酶抑制剂治疗一段时间后，在可能表现出对酪氨酸激酶抑制剂的抗性的肺癌细胞中观察到对常规癌症药物的这种抗性。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其包含以下组合：
-通式(1)的化合物和
-第二药理活性化合物。
优选地，第二药理活性化合物为酪氨酸激酶抑制剂，更优选第二药理活性化合物选自伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、舒尼替尼和卡博替尼。
优选地，通式(1)的化合物与第二药理活性化合物的组合用于治疗癌症，更优选用于治疗抗药性癌症，甚至更优选用于治疗选自酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr和kras突变型癌症的癌症。
特别优选的是将通式(1)的化合物和第二药理活性化合物组合用于治疗癌症，该癌症选自肺癌、脑癌、眼癌、口腔癌、咽喉癌、舌癌、气管癌、胃癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、结肠直肠癌、尿道癌、膀胱癌、睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、胰腺癌、皮肤癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌。
最优选的是使用通式(1)的化合物和第二药理活性化合物治疗肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)中的用途。
包含如上所述的本发明的化合物的药物组合物的所有方面也适用于包含通式(1)的化合物和第二药理活性化合物的组合的药物组合物。
本发明的另一方面涉及一种试剂盒，其包含：
-第一药物组合物，其包含通式(1)的化合物和
-第二药理活性化合物，其包含第二药物组合物；
其中第一药物组合物和第二药物组合物彼此分开。
优选地，所述试剂盒的第一药物组合物和第二药物组合物用于通过相同途径施用。在本发明的另一个实施方案中，第一药物组合物用于通过与第二药物组合物不同的途径进行施用。
用于所述试剂盒的第一药物组合物和第二药物组合物的优选施用途径是口服、直肠、肠胃外、阴道内、脑池内、腹膜内、局部或口服施用至患者。
优选地，将所述试剂盒的第一药物组合物和第二药物组合物彼此相继施用至患者，其中
-首先施用第一药物组合物，然后施用第二药物组合物，或者
-首先施用第二药物组合物，然后施用第一药物组合物。
优选第一药物组合物和第二药物组合物施用之间的时间间隔为至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时或至少5个小时，或反之亦然。
更优选地，第一药物组合物和第二药物组合物施用之间的时间间隔为至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、在至少5天、至少6天、至少7天或至少8天，或反之亦然。
更优选地，第一药物组合物和第二药物组合物施用之间的时间间隔为至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、在至少6周或至少7周或至少8周，或反之亦然。
优选地，所述试剂盒的第二药理活性化合物为酪氨酸激酶抑制剂，更优选所述试剂盒的第二药理活性化合物选自伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、舒尼替尼和卡博替尼。
优选地，该试剂盒用于治疗癌症，更优选用于治疗抗药性癌症，甚至更优选用于治疗选自酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr和kras突变癌症的癌症。
特别优选的是该试剂盒在治疗选自肺癌、脑癌、眼癌、口腔癌、咽喉癌、舌癌、气管癌、胃癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、结肠直肠癌、尿道癌、膀胱癌、睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、胰腺癌、皮肤癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌的癌症中的用途。
最优选的是该试剂盒在治疗肺癌，特别是非小细胞肺癌(nsclc)中的用途。
包含如上所述的本发明的化合物的药物组合物的所有方面也适用于所述试剂盒的第一药物组合物和第二药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，癌症优选选自酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr和kras突变型癌症、抗药性癌症、乳腺癌和肺癌。
在又一个实施方案中，本发明涉及治疗癌症的方法，癌症优选选自酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfr和kras突变癌症、抗药性癌症、乳腺癌和肺癌，其包括将有效量的至少一种本发明的化合物施用至有需要的个体。
本发明的又一方面涉及以下化合物本身
或其生理上可接受的盐。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及用作药物的化合物(a)、(b)、(d)、(e)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)和(m)或其生理上可接受的盐。
附图说明
图1-4、19和20显示常规微管蛋白粘合剂长春花碱(vinblastin)(图1)、紫杉醇(paclitaxel)(图2)、多西他赛(图3)、秋水仙素(图4)、bactalliniii(图19)和紫杉酚(taxol)(图20)的归一化alphascreen信号。
图5-16显示本发明化合物(b)-(l)的归一化alphascreen信号。
图17显示化合物(b)的合成方案。
图18显示了在分裂间期的中心体中的蛋白质。
图21显示用化合物(b)处理的h1975t790m类器官中激活的半胱天冬酶阳性细胞的生长。
图22和23显示化合物(b)与对照相比在10天(对于pc3)和31天(对于mda-mb-231)后的抗肿瘤活性。
图24和25显示与仅使用一种常规癌症药物的治疗相比，用常规癌症药物和化合物(b)的联合治疗的剂量响应曲线。
图26显示与仅使用一种常规癌症药物的治疗相比，用联合疗法治疗的tki抗性(nsclc)肺癌细胞系的ic50值。
具体实施方式
以下实施例进一步对本发明进行说明，但不应被解释为限制其范围。
实施例1
果蝇(drosophila)研究表明，游离微管蛋白二聚体通过与保守的中心体蛋白sas-4/cpap直接相互作用负向调节中心体的微管成核活性。具体而言，携带突变的sas-4的果蝇(其不能与微管蛋白相互作用)过早激活分裂间期中间体以强力的(robust)使微管成核，表明微管蛋白可以作为调节中心体活性的分子开关。随后的cpap-微管蛋白晶体结构鉴定出cpap通过其微管蛋白结合结构域的保守苯丙氨酸(f375)形成高亲和力的cpap-微管蛋白复合物。
实施例2
基于实施例1，建立了原理验证实验，其中将不能与微管蛋白相互作用的组成型或多西环素诱导型(doxycycline-inducible)cpapf375a(此后称为cpapδt)的慢病毒介导的转导引入未转化的人乳腺上皮mcf10a细胞。这些mcf10a细胞被设计成通过多西环素诱导的polo-like-kinase(plk4)的过表达来调节中心体扩增。在分裂间期引入cpapδt过早激活的plk4诱导的多余的中心体以使微管成核并阻止它们聚集。
结果，当细胞发展成有丝分裂期时，过早成核的多余的中心体引起多极纺锤体。引人注目的是，cpapδt细胞存在于有丝分裂期的时间比对照细胞长10倍，并且最终经历以形成凋亡小泡为特征的凋亡。
这些结果表明，多余的中心体的过早激活可能会导致多极有丝分裂和有丝分裂障碍。重要的是，在不携带多余的中心体的细胞中表达cpapδt不会显示任何这些效应。
实施例3
在乳腺癌(mda-mb-231)和egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)抗性egfrt790m突变nsclc细胞(h1975t790m)中引入cpapδt，并且发现这些细胞完全经历过早中心体激活，中心体在分裂间期去簇(declustering)，然后是多极有丝分裂。
此外，为了测试预防cpap-微管蛋白相互作用是否会损害癌细胞侵袭性，改造了用于癌细胞的三维(3d)器官培养模型，其重现了人类上皮癌组织结构的许多方面。诱导h1975类器官中的cpapδt阻止了侵入周围基质的肌动蛋白阳性侵入性突起物的形成。
最后，为了探索cpapδt对体内mda-mb-231细胞生长的影响，将携带mda-mb-231细胞的cpapδt皮下注射到裸鼠中，并监测肿瘤生长速率。
与对照细胞相比，cpapδt细胞使乳腺癌异种移植物的体内生长显著降低，并伴随细胞增殖减少。
总的来说，这些结果表明cpap-微管蛋白相互作用是癌症靶标，并且预防cpap-微管蛋白相互作用可引起多余的中心体过早激活以特异性诱导癌细胞发生有丝分裂障碍和细胞死亡。
实施例4
基于实施例1-3并通过应用alphascreen技术，使用其他基于细胞的测定来评估中心体去簇活性，尤其鉴定了化合物(a)：阻止cpap-微管蛋白相互作用的化合物，其ic50值为0.453μm，在0.5-1μm满足去簇中心体筛选标准。
为了改善化合物(a)的生物化学和细胞效力(potency)，进行结构活性关系辅助药物化学，并且通过用-o-ch3基团代替-nh-ch2-ch2-ch2-ch3基团来修饰化合物(a)。所得化合物(b)抑制cpap-微管蛋白相互作用，具有0.689μm的ic50值，并且在癌细胞中表现出增强的稳定性和溶解性并具有有效的中心体去簇活性。
实施例5
为了评估化合物(a)在癌细胞中的作用，将一系列乳腺癌-(bt549，mda-mb-231)、肺癌-(tki敏感性pc9，tki抗性h1975t790m或具有c-met扩增的hcc827)和肝细胞癌(pop10)细胞用化合物(a)处理24小时。
令人惊讶的是，在bt549细胞中低至500nm的化合物(a)引起在分裂间期的多余的中心体的去簇，与每个成核大量微管星状体(asters)共同表明化合物(a)过早激活分裂间期中心体。结果，癌细胞未能聚集它们的多余的中心体，而是在分裂间期和有丝分裂期中表现出多极纺锤体。用表达微管蛋白-gfp的mda-mb-231细胞进行的活细胞实验进一步揭示类似于cpapδt转染的细胞，化合物(a)处理也导致延长的有丝分裂期并最终发生细胞凋亡。因此，化合物(a)有效地阻止了癌细胞增殖，其ic50值为0.86μm-2.9μm。使用乙炔基-脱氧尿苷(edu)的24小时脉冲标记实验进一步支持了这一发现，揭示了具有edu掺入的、化合物-(a)处理的癌细胞的数量减少，表明更少的细胞已进入s期。总之，这些数据显示化合物(a)介导的多余的中心体的过早激活引起多极有丝分裂、有丝分裂障碍以有效地减少癌细胞的增殖。
实施例6
虽然已显示微管蛋白结合物具有优异的抗癌活性，但由于其在正常细胞中的非选择性活性，其使用受到限制。由于化合物(a)为微管蛋白结合物，因此评估其与plk-4诱导型mcf10a中的紫杉酚相比的耐受性和细胞毒性。紫杉酚本身在100nm的浓度非选择性地阻止mcf10a细胞增殖，而无论该细胞是否携带多余的中心体。此外，紫杉酚处理不影响中心体聚集，而是通过稳定微管而破坏纺锤体。
相比之下，化合物(a)处理特异性地抑制mcf10a细胞的增殖，所述mcf10a细胞通过其中心体去簇活性具有多余的中心体。
重要的是，具有两个中心体的mcf10a细胞可耐受高达10μm的化合物(a)，而在其双极有丝分裂纺锤体中没有显示任何缺陷，表明化合物(a)不影响正常细胞中的微管动力学。
实施例7
使用埃罗替尼(一种已知的egfrtki抑制剂)的细胞增殖实验揭示了h827和a549细胞对较高浓度的埃罗替尼进行响应，ic50值分别为6.9μm和5μm。这些结果表明h827和a549细胞在一定程度上如前所述对埃罗替尼有抗性。对中心体的分析揭示埃罗替尼处理不影响h827中的中心体聚集。
然而，当与750nm(其原始ic50的一半)的化合物(a)组合时，egfr抑制剂埃罗替尼更有效地阻止h827的增殖。用化合物(a)的组合处理将埃罗替尼的ic50值从6.9μm降低至30nm，表明化合物(a)可以与埃罗替尼对h827细胞产生协同作用。类似地，向a549细胞中加入1.5μm化合物(a)使埃罗替尼的ic50值从5.07μm降低至0.5μm。
最后，组合(化合物(a)加埃罗替尼)但不是单一药剂(埃罗替尼)有效地防止了h1975和a549的三维(3d)器官型培养物中侵入性突起物的形成。
实施例8
为了评价化合物(a)的抗肿瘤活性，将化合物(a)递送至携带皮下人前列腺肿瘤细胞(pc3)异种移植物的裸鼠。每天一次通过口服填喂施用(10mg/kg)化合物(a)，并监测肿瘤生长速率。与溶媒处理的对照相比，注意到化合物(a)处理的小鼠的肿瘤生长速率降低。重要的是，可以观察到化合物(a)的抗肿瘤活性，该活性通过在第10天肿瘤体积相对于对照减少来确定。
实施例9
根据图17提供的方案合成化合物(b)。离析物3-氯苯并[b][1,6]萘啶-4-腈按照以下文献所述进行合成：russ.chem.bull.,int.ed.2002,51,2121-2128,chem.heterocycl.compd.(化学杂环化合物)1986,22,909-914,russ.chem.bull.,int.ed.2004,873-881。
根据以下步骤由氯苯并[b][1,6]萘啶-4-腈制备化合物(b)(3-甲氧基苯并[b][1,6]萘啶-4-腈)：在回流下搅拌3-氯苯并[b][1,6]萘啶-4-腈(400mg，1.67mmol)于无水甲醇(30ml)和干燥四氢呋喃(20ml)混合物中的悬浮液，在1小时内逐滴加入在甲醇(4.00ml，2.00mmol，1.2当量)中的0.5m的甲醇钠溶液。将得到的棕色溶液继续回流30分钟，冷却，用氯化铵的饱和水溶液(2ml)淬灭并真空浓缩。将残余物在水(10ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。分层，水相用二氯甲烷(2×15ml)萃取。将合并的有机萃取物用饱和氯化铵水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物进行反相快速柱层析(梯度：0-45％(v/v)的乙腈水溶液)以提供呈黄色固体的标题化合物(210mg，0.89mmol，54％)。
在brukeravanceiiihd400(400mhz)光谱仪上在303k记录nmr光谱。相对于残留的d5-dmso(δh＝2.50ppm)和d6-dmso(δc＝39.52ppm)以百万分率(ppm)报告化学位移。裂分图形被指定为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、td(三二重峰)、ddd(双二重双峰)、m(多重峰)或bs(宽信号)。偶合常数(j)以赫兹(hz)记录。
tlc(戊烷:乙酸乙酯，2:1v/v):rf＝0.33；1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ9.71(s,1h,h-1),9.48(s,1h,h-10),8.26(d,j＝8.4hz,1h,h-9),8.15(d,j＝8.8hz,1h,h-6),8.04(ddd,j＝8.6,6.6,1.5hz,1h,h-7),7.70(td,j＝6.8,3.3hz,1h,h-8),4.23(s,3h,och3)；13cnmr(101mhz,d6-dmso)δ166.6(c-3),160.4(c-1),152.6(c-9a),150.0(c-10a),141.5(c-10),135.2(c-7),130.5(c-9),128.8(c-6),126.8(c-8),126.3(c-4a),118.3(c-5a),115.2(cn),86.5(c-4),56.1(och3)。
ir(atr)ν最大(cm-1)3044,3019,2958,2894,2847,2224,1605,1557,1512,1466,1411,1331,1285,1181,1140,1107,1041,969,800,741,613。
esi-hrms(m/z):[m+h]+c14h10n3o,计算值236.08184；实验值236.08194；lcms(m/z):[m+h]+236,保留时间3.23分钟。
实施例10
通过用化合物(b)处理72小时来测试化合物(b)对乳腺癌(bt549、mda-mb-231)、nsclc-(pc9、tki-抗性h1975t790m、hcc827-gr)和肝细胞癌-(pop10)细胞的效果。
化合物(b)阻止癌细胞增殖，具有0.86-2.9μm的ic50值。分析中心体揭示化合物(b)阻止在分裂间期的多余的中心体的聚集，与每个成核增强的微管星状体共同表明化合物(b)过早激活分裂间期中的多余的中心体，导致在分裂间期和有丝分裂期形成多极纺锤体。
化合物(b)处理的mcf10a(+dox，多余的中心体)和hcc827-gr细胞的实时成像显示类似于cpapδt表达，化合物(b)处理使多余的中心体本身在分裂间期成核为增强的微管星状体。化合物(b)诱导的微管星状体在细胞中持续存在，防止多余的中心体聚集，引起多极纺锤体并延长有丝分裂，伴随明显的细胞凋亡。
这些结果一起表明化合物(b)-处理可以减少含多余的中心体的细胞的增殖。
实施例11
确定化合物(b)激活多余的中心体以使增强的微管成核的机制。微管成核需要向中心体募集中心粒周围物质(pcm)。化合物(b)处理的分裂间期中心体使微管过早成核表明这些中心体募集了提高水平的pcm。
为了测试这一点，我们估计了向化合物(b)处理的mcf10a细胞的分裂间期中心体募集的cep152、pcnt和cdk5rap2的量。值得注意的是，人类和果蝇cpap与这些蛋白质相互作用形成s-cap复合物。高分辨率成像和热图强度分析显示，与溶媒处理的细胞相比，分裂间期中心体募集的这些蛋白质的量增加(图18)。结果，化合物(b)处理的分裂间期中心体显示增强的微管成核，表明化合物(b)可激活中心体。
这一发现与活体成像(liveimaging)实验一致，其中化合物(b)处理的细胞显示中心体具有强力的微管成核作用。
此外，生物化学分级的中心体的蛋白质印迹分析(westernblotanalysis)显示，处理的细胞含有与cpap相互作用的蛋白水平升高的中心体。
最后，测试化合物(b)是否可以阻止细胞中的cpap-微管蛋白相互作用并同时增强cpap结合其相互作用蛋白的能力。免疫纯化来自化合物(b)处理的mcf10a细胞的细胞质提取物的cpap复合物。已经确定化合物(b)特异性干扰cpap-微管蛋白相互作用，从而使cpap能够结合提高量的与其相互作用的蛋白。
总之，这些结果表明cpap-微管蛋白相互作用的化学抑制可以增强cpap相互作用蛋白向中心体的募集。
实施例12
大多数微管蛋白结合物作用于纺锤体微管并因此非特异性地防止有丝分裂。为了评估化合物(b)的作用对cpap-微管蛋白相互作用是否是特异性的，而不是由于对微管动力学的一般影响，将化合物(b)与已知的微管蛋白结合物如紫杉酚、bactalliniii，多西他赛和长春花碱进行比较(图1、3、19和20)。
除化合物(b)外，所有测试的微管蛋白结合物都不能干扰cpap-微管蛋白相互作用，增强向分裂间期中心体的pcm募集并防止多余的中心体聚集。值得注意的是，在用微管蛋白结合物处理的细胞中观察到破坏的有丝分裂纺锤体，这可能是由于它们对微管的一般毒性。此外，为了排除化合物(b)的可能的微管毒性作用，进行活体成像实验。发现高达5μm的化合物(b)不影响含两个中心体的细胞的微管动力学、细胞周期进程或有丝分裂纺锤体装配。此外，与在30nm时其本身破坏含有两个中心体的细胞的纺锤体的紫杉酚相比，高达8μm的化合物(b)不阻止双极有丝分裂纺锤体的形成。
这些结果表明化合物(b)的抗增殖作用不是由于改变微管动力学。
实施例13
中心体扩增引起3d培养物8中的细胞侵袭。为了测试化合物(b)介导的作用是否可以削弱癌细胞的侵袭行为，使用对egfr-tki显示出抗性的h1975t790m、hcc827-gr和a549(krasg12s)的3d-器官型培养物。
与5μm埃罗替尼(一种已知tki)处理相比，5μm的化合物(b)足以防止从3d球体出现肌动蛋白阳性(actin-positive)侵入性突起物。相反，如h1975t790m类器官中激活的半胱天冬酶阳性细胞所揭示的，化合物(b)-处理导致细胞变圆(cell-rounding)，这是有丝分裂阻滞延长并伴随细胞死亡的特征。结果，化合物(b)处理的类器官没有从其原始尺寸进一步生长(图21)。
总之，这些数据显示化合物(b)可以在体外削弱nsclc细胞侵袭行为。
实施例14
为了评估化合物(b)在体内是否具有抗肿瘤活性，使用了具有皮下人前列腺(pc3)和乳腺(mda-mb-231)肿瘤异种移植物的裸鼠。
在每种情况下，使用两组具有>100mm3肿瘤体积的小鼠。通过口服填喂施用化合物(b)(10或20mg，kg-1/天)。在处理结束时，测量了化合物(b)处理组的总肿瘤体积，并与溶媒处理的对照组比较。注意到化合物(b)处理的小鼠的肿瘤生长速度显著降低。
重要的是，处理动物的体重没有变化。这一发现表明化合物(b)具有抗肿瘤活性，其副作用较少或没有副作用。
在10天(对于pc3)和31天(对于mda-mb-231)后，相对于对照，化合物(b)的抗肿瘤活性导致肿瘤体积减小(图22和23)。
实施例15
用埃罗替尼和化合物(b)处理tki(酪氨酸激酶抑制剂)抗性肺癌细胞系(a549、hcc827-gr和h1975)。
剂量反应曲线显示hcc827-gr细胞中存在或不存在化合物(b)时单一药剂tki的效果(图24)。对于a549g12s细胞，在存在和不存在化合物(b)的情况下的单一药剂tki的效果(图25)。使用1μm化合物(b)持续72-96小时。误差条，平均值±sem。
图26给出了tki抗性(nsclc)肺癌细胞系的ic50值的总结。误差条，平均值±sem。数值来自三个独立实验。未配对t检验*p<0.01，**p<0.001。
实施例16
根据图27提供的方案合成化合物(m)。
根据以下步骤合成化合物(m)：在氩气氛下，向在4mld6-dmso中的300mg3-氯苯并[b][1,6]萘啶-4-腈(1.25mmol，1当量)溶液中加入231mg甘氨酸叔丁酯盐酸盐(1.38mmol，1.1当量)、79.5mg(0.75mmol，0.6当量)na2co3和72.6mg(1.25mmol，1当量)kf。然后将反应混合物微波(125℃，300w，9巴)加热1小时。然后向黑色溶液中加入2ml水并将水相用ch2cl2(4×50ml)萃取。将合并的有机相用mgso4干燥，过滤后，减压去除溶剂。通过硅胶快速柱层析法(ch2cl2:etoac＝3:1)纯化残余物，以得到106mg(0.31mmol，25％)暗橙色固体。在0℃下向在2mlch2cl2中的71mg(0.21mmol，1当量)叔丁基酯衍生物溶液中加入2ml(0.03mmol，0.2当量)tfa。然后将反应混合物在室温下搅拌1小时。真空去除溶剂，所得固体用少量ch2cl2洗涤，以得到57mg(0.21mmol，98％)橙色固体状的所需产物。
图1-16、19和20中的误差条表示来自三重测定的数据。truhit试剂盒捕获对alphascreen检测技术可能产生的影响。图1-4、19和20的实验数据显示，本发明的化合物表现出cpap-微管蛋白相互作用的剂量依赖性降低，而常规的微管蛋白结合物没有表现出信号的任何降低。这表明cpap-微管蛋白相互作用对于本发明的化合物是特异性的。