磷酸二酰胺吗啉代寡聚物药物组合物的制作方法

本申请要求2016年5月24日提交的美国临时专利申请no.62/340,947和2016年12月2日提交的美国临时专利申请no.62/429,160的权益，其每个的全部内容通过引用并入本文。
背景技术：
：反义技术提供了调节一种或多种特定基因产物(包括选择性剪接产物)表达的手段，并且在许多治疗、诊断和研究应用中是独特有用的。反义技术背后的原理是与靶核酸杂交的反义化合物，例如寡核苷酸，通过许多反义机制中的任何一种调节基因表达活性，例如转录、剪接或翻译。反义化合物的序列特异性使它们作为靶标验证和基因功能化的工具以及选择性调节参与疾病的基因表达的治疗剂具有吸引力。杜氏肌营养不良症(dmd)由蛋白质肌营养不良蛋白表达缺陷引起。编码该蛋白质的基因含有79个外显子，分布在超过200万个dna核苷酸上。任何外显子突变，其改变外显子的阅读框架，或引入终止密码子，或以删除整个框外一个或数个外显子、或一个或多个外显子的重复为特征，有可能破坏功能性肌营养不良蛋白的产生，导致dmd。测试用于治疗dmd的剪接转换寡核苷酸(ssos)的安全性和有效性的最近的临床试验基于sso技术，通过剪接体的空间阻断诱导前mrna的可变剪接(cirak等,2011；goemans等,2011；kinali等,2009；vandeutekom等,2007)。然而，尽管取得了这些成功，但可用于治疗dmd的药理学选择是有限的。eteplirsen是一种磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)，设计用于跳过dmd患者中人肌营养不良蛋白基因的外显子51，该患者可修正至外显子51跳跃以恢复阅读框架并产生功能性较短形式的肌营养不良蛋白。sareptatherapeutics,inc.向美国食品和药物管理局(fda)提交了新药申请(nda)，寻求批准在可修正外显子51跳跃的患者中治疗dmd。sarepta的nda目前正由fda审核。尽管在反义
技术领域：
已经取得了重大进展，但本领域仍需要包含寡核苷酸的药物制剂。技术实现要素：本文提供了包含eteplirsen的药物组合物，其中eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。本文还提供了治疗有此需要的受试者中的肌肉疾病的方法，包括向该受试者施用本公开的药物组合物。因此，在一个方面，本文提供了药物组合物，包含：a)eteplirsen；b)氯化钠；c)氯化钾；d)磷酸二氢钾；e)磷酸氢二钠；和f)水，其中该eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。还构思了本领域技术人员通常已知的其他制剂物质。在另一方面，本文提供了药物组合物，包含：a)40-60mg的eteplirsen；b)6.4-9.6mg的氯化钠；c)0.16-0.24mg的氯化钾；d)0.16-0.24mg的磷酸二氢钾；e)0.91-1.37mg的磷酸氢二钠；和f)水。在另一方面，本文提供了药物组合物，包含：a)80-120mg的eteplirsen；b)12.8-19.2mg的氯化钠；c)0.32-0.48mg的氯化钾；d)0.32-0.48mg的磷酸二氢钾；e)1.02-1.54mg的磷酸氢二钠；和f)水。在又另一方面，本文提供了药物组合物，包含：a)400-600mg的eteplirsen；b)64-96mg的氯化钠；c)1.6-2.4mg的氯化钾；d)1.6-2.4mg的磷酸二氢钾；e)9.0-14.0mg的磷酸氢二钠；和f)水。本公开的药物组合物包含eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。另一方面，本文提供了治疗有此需要的受试者中的肌肉疾病的方法，包括向受试者施用本文提供的药物组合物。附图说明图1显示了合成和去保护的eteplirsen(avi-4658)原料药物物质代表性分析型高效液相色谱(hplc)色谱图(参见实施例1)。图2显示了纯化的eteplirsen药物溶液的代表性分析型hplc色谱图(参见实施例2)。图3显示脱盐和冻干的eteplirsen药物的代表性分析型hplc色谱图(参见实施例2)。具体实施方式本文提供了包含eteplirsen的药物组合物。本文还提供了治疗有此需要的受试者中的肌肉疾病的方法，包括向该受试者施用本公开的药物组合物。本文描述的吗啉代寡聚核苷酸(eteplirsen)对dna和rna显示出更强的亲和力而不损害序列选择性。在一些实施方案中，本公开的寡聚核苷酸最小化或防止rna酶h的切割。在一些实施方案中，本公开的反义寡聚核苷酸不激活rna酶h。定义下面列出的是用于描述本公开的各种术语的定义。这些定义适用于整个说明书和权利要求书中使用的术语，除非在特定情况下单独地或作为较大组的一部分另外限定。术语“载体结合”是指与载体介质共价连接的化学部分。术语“载体介质”是指寡聚物可以在其上附着或合成，或者可以被修饰以用于连接或合成寡聚物的任何材料，包括例如任何颗粒、珠子或表面。代表性基材包括但不限于无机载体和有机载体，例如玻璃和改性或官能化玻璃、塑料(包括丙烯酸类、聚苯乙烯和苯乙烯与其他材料的共聚物、聚丙烯、聚乙烯、聚丁烯、聚氨酯、特氟龙等)、多糖、尼龙或硝化纤维、陶瓷、树脂、二氧化硅或二氧化硅基材料(包括硅和改性硅)、碳、金属、无机玻璃、塑料、光纤束和各种其他聚合物。对于一些实施方案，特别有用的固体载体和固体表面位于流动池装置内。在本文所描述方法的一些实施方案中，载体介质包含具有1％交联二乙烯基苯的聚苯乙烯。在一些实施方案中，代表性的载体介质包含至少一个用于连接或合成寡聚物的反应性位点。例如，在一些实施方案中，本公开的载体介质包含一个或多个末端氨基或羟基，其能够与进入的核苷或其他活化基团形成化学键，用于连接或合成寡聚物。适用于本文所述方法的一些代表性载体介质包括但不限于以下：可控多孔玻璃(cpg)；草酰控制多孔玻璃(参见，例如，alul等,nucleicacidsresearch1991,19,1527)；含二氧化硅的颗粒(例如多孔玻璃珠)和硅胶，例如通过三氯-[3-(4-氯甲基)苯基]丙基硅烷和多孔玻璃珠的反应形成的颗粒(参见parr和grohmann,angew.chem.internal.ed.1972,11,314；由watersassociates以“porasile”商标出售，framingham,mass.,usa)；1,4-二羟基甲基苯和二氧化硅的单酯(参见bayer和jung,tetrahedronlett.,1970,51,4503；由watersassociates以“biopak”商标出售)；tentagel(参见，例如，wright等，tetrahedronlett1993,34,3373)；交联的苯乙烯/二乙烯基苯共聚物珠状基质，或聚苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物poros(可从perseptivebiosystems获得)；可溶性载体介质如聚乙二醇peg(参见bonora等，organicprocessresearch&development2000,4,225-231)；peps载体，其为具有悬垂长链聚苯乙烯(ps)接枝的聚乙烯(pe)膜(参见berg等，j.am.chem.soc1989,111,8024和国际专利申请wo1990/02749)；二甲基丙烯酰胺与n,n'-双丙烯酰基乙二胺交联的共聚物，包括已知量的n-叔丁氧基羰基-β-丙氨酰-n'-丙烯酰基六亚甲基二胺(参见atherton等,j.am.chem.soc1975,97,6584；atherton等,bioorg.chem.1979,8,351，和atherton等,j.chem.soc.perkini1981,538)；涂有疏水性交联苯乙烯聚合物的玻璃颗粒(参见scott等，j.chrom.sci.1971,9,577)；已经接枝聚苯乙烯的氟化乙烯聚合物(参见kent和merrifield，israelchem.1978,17,243和vanrietschoten在peptides1974，y.wolman,ed.,wileyandsons,newyork,1975,pp.113-116)；羟丙基丙烯酸酯涂覆的聚丙烯膜(daniels等，tetrahedronlett.1989,30,4345)；丙烯酸接枝的聚乙烯杆(geysen等,proc.natl.acad.sci.usa1984,81,3998)；含有传统使用的聚合物珠的“茶包”(houghten,proc.natl.acad.sci.usa1985,82,5131)；及其组合。术语“流动池装置”是指包括表面(例如，固体表面)的腔室，一种或多种流体试剂(例如液体或气体)可以流经该表面。本文所用的术语“治疗”包括缓解、减轻或减缓受试者中的至少一种症状或实现疾病进展的延迟的治疗。例如，治疗可以是疾病的一种或几种症状的减轻或疾病的完全根除，例如肌营养不良症，例如杜氏肌营养不良症。在本公开的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即疾病的临床表现之前的时期)或降低发展或恶化疾病的风险。术语“保护”在本文中用于表示在受试者(例如哺乳动物或人)中对疾病的发展、持续或恶化的适当的预防、延迟或治疗或全部，视情况而定。本文所用的术语“预防”、“妨碍”或“防止”包括对与预防的状态、疾病或病症相关或由其引起的至少一种症状的预防。本文所用的术语“受试者”或“患者”旨在包括能患有或遭受肌肉疾病或直接或间接涉及肌肉疾病的任何疾病的动物。受试者的实例包括哺乳动物，例如人、猿、猴、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。在一个实施方案中，受试者是人，例如患有、或处于患有风险或可能患有肌肉疾病的人。本文关于受试者或患者所使用的“对外显子51跳跃可修饰的”旨在包括在肌营养不良蛋白基因中具有各种突变的受试者和患者，其适合于外显子51跳跃。肌营养不良蛋白基因的下列外显子中突变的非限制性实例适用于外显子51跳跃，包括例如：45-50、47-50、48-50、49-50、50、52、52-63(leidenduchenne肌营养不良症突变数据库，莱顿大学医学中心，荷兰)。确定患者是否具有适合外显子跳跃的肌营养不良蛋白基因突变完全在本领域技术人员的知识范围内(参见，例如aartsma-rus等，hummut2009,30,293-299)。除非另有说明，否则术语“包含”和“包括”在本文中以其开放式和非限制性意义使用。除非本文另有说明，或明显与背景相矛盾，否则在描述本发明的内容中(尤其是在权利要求的内容中)术语“一种”和“一个”和“所述”以及类似的参考应被解释为涵盖单数和复数两者。当复数形式用于化合物，盐等时，这也意指单一化合物，盐等。术语“约”或“近似”通常由相关主题领域中的技术人员理解，但在某些情况下可表示给定值或范围的±10％或±5％以内。“usp”是指美国药典，其全部内容通过引用并入本文，并且表明所鉴定的材料符合usp规范。“nf”是指国家处方集(nationalformulary)，其全部内容通过引用并入本文，并且表明所鉴定的材料符合nf规范。寡聚物基于吗啉代的寡聚物(包括反义寡聚物)详细描述于例如美国专利号5,698,685、5,217,866、5,142,047、5,034,506、5,166,315、5,185,444、5,521,063、5,506,337、8,299,206和8,076,476，国际专利申请公开号wo/2009/064471和wo/2012/043730中，以及summerton等，antisensenucleicaciddrugdev.1997,7,187-195，其各自通过引用整体并入本文。eteplirsen(参见例如国际专利申请公开号wo2006/000057,通过引用整体并入本文)已经成为临床研究的主题以测试其安全性和有效性，并且正在进行临床开发。eteplirsen是一种磷酸二酰胺吗啉(pmo)反义寡聚核苷酸。肌营养不良蛋白治疗剂“eteplirsen”，也称为“avi-4658”，是具有碱基序列5'-ctccaacatcaaggaagatggcatttctag-3'(seqidno:1)的pmo。eteplirsen的cas登记号为1173755-55-9。化学名称包括：rna，[p-脱氧-p-(二甲基氨基)](2',3'-二脱氧-2',3'-亚氨基-2',3'-seco)(2'a→5')(c-m5u-c-c-a-a-c-a-m5u-c-a-a-g-g-a-a-g-a-m5u-g-g-c-a-m5u-m5u-m5u-c-m5u-a-g)(seqidno:2)，5’-[p-[4-[[2-[2-(2-羟乙氧基)乙氧基]乙氧基]羰基]-1-哌嗪基]-n,n-二甲基亚膦酰胺酯]和p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-5'-o-{p-[4-(10-羟基-2,5,8-三氧杂癸酰基)哌嗪-1-基]-n,n-二甲基亚膦酰胺基}-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胞苷酰-(2'a→5')-p,3'-二脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断胸苷酰基-(2'a→5')-p,2',3'-三脱氧-p-(二甲氨基)-2',3'-亚氨基-2',3'-断腺苷酰基-(2'a→5')-2',3'-二脱氧-2',3'-亚氨基-2',3'-断鸟苷。eteplirsen具有以下结构：eteplirsen也可以通过以下结构来描述：为清楚起见，eteplirsen的结构式是5'至3'的连续结构式，并且为了在上述结构式中方便以紧凑形式描述整个结构式，申请人已经将各种示意性裂解标记为“breaka”，“breakb”，“breakc”和“breakd”。如本领域技术人员所理解的，例如，每个示意性的“breaka”表示在这些点处结构式继续的示意。本领域技术人员理解，对于在包括eteplirsen的上述结构式中的“breakb”、“breakc”和“breakd”的每个实例，情况也是如此。无论如何，没有一个示意性裂解旨在表明同时技术人员也不会认为其意味着上述包括eteplirsen的结构式的现实裂解。本公开的寡聚化合物可具有不对称中心、手性轴和手性面(例如，描述于：e.l.eliel和s.h.wilen,stereochemistryofcarboncompounds,johnwiley&sons,newyork,1994,第1119-1190页,以及march,j.,advancedorganicchemistry,3d.ed.,第4章,johnwiley&sons,newyork(1985))，可以以外消旋体、外消旋混合物和单独的非对映体形式存在，具有所有可能的异构体及其混合物，包括光学异构体。本文具体提及的本发明的寡聚化合物，没有任何其立体化学的指示，旨在代表所有可能的异构体及其混合物。具体地，不希望受任何特定理论的束缚，如本文所讨论的，本发明的寡聚化合物由活化的吗啉代亚单元制备，包括化合物c、化合物d、化合物e和化合物f：化合物c、化合物d、化合物e和化合物f中的每一种可以例如由相应的β-d-呋喃核糖基制备，如下所示：参见summerton等，antisensenucleicaciddrugdev.1997,7:187-195。不受任何特定理论的束缚，两种手性碳的立体化学在合成条件下保留。不受任何特定理论的束缚，使得可以基于例如α-l-呋喃核糖基、α-d-呋喃核糖基、β-l-呋喃核糖基或β-d-呋喃核糖基原料的选择，产生每个吗啉代亚基的许多可能的其他立体异构体。不受任何特定理论的束缚，例如，将10至40种独立地选自化合物c、化合物d、化合物e和化合物f，以及每个吗啉代亚基的其他立体异构体，例如掺入寡聚化合物中可产生许多可能的立体异构体。不希望受任何特定理论的束缚，本发明的寡聚化合物包含一个或多个含磷的亚基间连接，其在每个磷处产生手性中心，其中每个被指定为如本领域所理解的“sp”或“rp”结构。不希望受任何特定理论的束缚，这种手性产生立体异构体，其具有相同的化学组成但其原子的三维排列不同。不希望受任何特定理论的束缚，每个磷亚基间连接的构型在合成例如本公开的寡聚化合物期间随机发生。不希望受任何特定理论的束缚，合成方法以指数方式产生大量的本公开的寡聚化合物的立体异构体，因为本公开的寡聚化合物由许多含磷的亚基间连接组成，每个含磷的亚基间连接具有随机手性构型。具体地，不希望受任何特定理论的束缚，另外的吗啉代亚基的每个亚基间连接使产物的立体异构体的数量加倍，使得本公开的寡聚化合物的常规制备实际上是2n个立体异构体的高度异质混合物，其中n代表含磷的亚基间连接的数目。药物组合物本文提供了包含eteplirsen或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。在某些实施方案中，该组合物适用于治疗肌肉疾病。因此，在一个方面，本文提供了药物组合物，包含：a)eteplirsen；b)氯化钠；c)氯化钾；d)磷酸二氢钾；e)磷酸氢二钠；和f)水，其中eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。在另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)40-60mg的eteplirsen；b)6.4-9.6毫克氯化钠；c)0.16-0.24mg氯化钾；d)0.16-0.24mg磷酸二氢钾；e)0.91-1.37mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在该方面的另一个实施方案中，所述药物组合物的总体积约为1ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约50mg的eteplirsen；b)约8mg氯化钠；c)约0.2mg氯化钾；d)约0.2mg磷酸二氢钾；e)约1.14mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约1ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)50mg的eteplirsen；b)8mg氯化钠；c)0.2mg氯化钾；d)0.2mg磷酸二氢钾；e)1.14mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为1ml。另一方面，本文提供药物组合物，其包含：a)80-120mg的eteplirsen；b)12.8-19.2mg氯化钠；c)0.32-0.48mg氯化钾；d)0.32-0.48mg磷酸二氢钾；e)1.02-1.54mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在该方面的另一个实施方案中，所述药物组合物的总体积为约2ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约100mg的eteplirsen；b)约16mg氯化钠；c)约0.4mg氯化钾；d)约0.4mg磷酸二氢钾；e)约2.28mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约2ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)100mg的eteplirsen；b)16mg氯化钠；c)0.4mg氯化钾；d)0.4mg磷酸二氢钾；e)2.28mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为2ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)400-600mg的eteplirsen；b)64-96mg氯化钠；c)1.6-2.4mg氯化钾；d)1.6-2.4mg磷酸二氢钾；e)9.0-14.0mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物的总体积为约10ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约500mg的eteplirsen；b)约80mg氯化钠；c)约2mg氯化钾；d)约2mg磷酸二氢钾；e)约11.4mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约10ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)500mg的eteplirsen；b)80mg氯化钠；c)2mg氯化钾；d)2mg磷酸二氢钾；e)11.4mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，药物组合物的总体积为10ml。在包括例如上述药物组合物的一些实施方案中，eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为约45mg/ml至约55mg/ml。在一些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为45mg/ml至55mg/ml。在某些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为约47.5mg/ml至约52.5mg/ml。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度范围为47.5mg/ml至52.5mg/ml。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约50mg/ml±10％。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为50mg/ml±10％。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度在50mg/ml的±10％内。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约50mg/ml±5％。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为50mg/ml±5％。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度在50mg/ml的±％内。在一些实施方案中，eteplirsen的浓度范围为约45.5mg/ml至55mg/ml，约46mg/ml至约54.5mg/ml，约46.5mg/ml至约54mg/ml，约47mg/ml至约53.5mg/ml，约47.5mg/ml至约53mg/ml，约45.5mg/ml至约52.5mg/ml，约45.5mg/ml至约52mg/ml，约48mg/ml至约51.5mg/ml，约48.5mg/ml至约51mg/ml，约49mg/ml至约50.5mg/ml，或约49.5mg/ml至约50mg/ml药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约45mg/ml，45.5mg/ml，46mg/ml，46.5mg/ml，47mg/ml，47.5mg/ml，48mg/ml，48.5mg/ml，49mg/ml，49.5mg/ml，50mg/ml，50.5mg/ml，51mg/ml，51.5mg/ml，52mg/ml，52.5mg/ml，53mg/ml，53.5mg/ml，54mg/ml，54.5mg/ml或55mg/ml药物组合物。在某些实施方案中，eteplirsen的浓度为45mg/ml，45.5mg/ml，46mg/ml，46.5mg/ml，47mg/ml，47.5mg/ml，48mg/ml，48.5mg/ml，49mg/ml，49.5mg/ml，50mg/ml，50.5mg/ml，51mg/ml，51.5mg/ml，52mg/ml，52.5mg/ml，53mg/ml，53.5mg/ml，54mg/ml，54.5mg/ml，或55mg/ml药物组合物。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约5w/v％的eteplirsen；b)约0.8w/v％氯化钠；c)约0.02w/v％氯化钾；d)约0.02w/v％磷酸二氢钾；e)约0.114w/v％磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在该方面的另一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，该药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在一些实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)5w/v％的eteplirsen；b)0.8w/v％氯化钠；c)0.02w/v％氯化钾；d)0.02w/v％磷酸二氢钾；e)0.114w/v％磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在该方面的另一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，该药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约50mg/ml的eteplirsen；b)约8mg/ml氯化钠；c)约0.2mg/ml氯化钾；d)约0.2mg/ml磷酸二氢钾；e)约1.14mg/ml磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定了某些mg/ml比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在另一个实施方案中，药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)50mg/mleteplirsen；b)8mg/ml氯化钠；c)0.2mg/ml氯化钾；d)0.2mg/ml磷酸二氢钾；e)1.14mg/ml磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定了某些mg/ml比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在另一个实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。另一方面，本文提供药物组合物，其包含：a)约50mg的eteplirsen；b)约8mg氯化钠；c)约0.2mg氯化钾；d)约0.2mg磷酸二氢钾；e)约1.14mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为约1ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)50mg的eteplirsen；b)8mg氯化钠；c)0.2mg氯化钾；d)0.2mg磷酸二氢钾；e)1.14mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为1ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约100mg的eteplirsen；b)约16mg氯化钠；c)约0.4mg氯化钾；d)约0.4mg磷酸二氢钾；e)约2.28mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为约2ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)100mg的eteplirsen；b)16mg氯化钠；c)0.4mg氯化钾；d)0.4mg磷酸二氢钾；e)2.28mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为2ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)约500mg的eteplirsen；b)约80mg氯化钠；c)约2mg氯化钾；d)约2mg磷酸二氢钾；e)约11.4mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为约10ml。另一方面，本文提供药物组合物，其包含：a)500mg的eteplirsen；b)80mg氯化钠；c)2mg氯化钾；d)2mg磷酸二氢钾；e)11.4mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为10ml。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)50mg的eteplirsen；b)8mg氯化钠，usp；c)0.2mg氯化钾，usp；d)0.2mg磷酸二氢钾，nf；e)1.14mg无水磷酸氢二钠，usp；和f)注射用水，usp，其中药物组合物的总体积为1ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)100mg的eteplirsen；b)16mg氯化钠，usp；c)0.4mg氯化钾，usp；d)0.4mg磷酸二氢钾，nf；e)2.28mg无水磷酸氢二钠，usp；和f)注射用水，usp，其中药物组合物的总体积为2ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)500mg的eteplirsen；b)80mg氯化钠，usp；c)2mg氯化钾，usp；d)2mg磷酸二氢钾，nf；e)11.4mg无水磷酸氢二钠，usp；和f)注射用水，usp，其中药物组合物的总体积为10ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。另一方面，本文提供药物组合物，其包含：a)50mg的eteplirsen；b)8mg氯化钠；c)0.2mg氯化钾；d)0.2mg磷酸二氢钾；e)1.14mg无水磷酸氢二钠；和f)注射用水，其中药物组合物的总体积为1ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。另一方面，本文提供药物组合物，包含：a)100mg的eteplirsen；b)16mg氯化钠；c)0.4mg氯化钾；d)0.4mg磷酸二氢钾；e)2.28mg无水磷酸氢二钠；和f)注射用水，其中药物组合物的总体积为2ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。另一方面，本文提供药物组合物，其包含：a)500mg的eteplirsen；b)80mg氯化钠；c)2mg氯化钾；d)2mg磷酸二氢钾；e)11.4mg无水磷酸氢二钠；和f)注射用水，其中药物组合物的总体积为10ml，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度为约260mosm至约320mosm。在一些实施方案中，包括例如上面讨论的一些实施方案，药物组合物的ph为约7.5或7.5。在一些实施方案中，用naoh，nf，hcl，nf或其组合将药物组合物的ph调节至约ph7.5。在某些实施方案中，包括例如上面讨论的一些实施方案，药物组合物的重量摩尔渗透压浓度范围为约260mosm至约320mosm。在一些实施方案中，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的范围为约260mosm至约320mosm。在进一步的实施方案中，本公开的药物组合物可另外包含碳水化合物其如han等，nat.comms.2016,7,10981提供的，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，本公开的药物组合物可包含5％的己糖碳水化合物。例如，本公开的药物组合物可包含5％葡萄糖，5％果糖或5％甘露糖。在某些实施方案中，本公开的药物组合物可包含2.5％葡萄糖和2.5％果糖。在一些实施方案中，本公开的药物组合物可包含选自以下的碳水化合物：以5体积％的量存在的阿拉伯糖，以5体积％的量存在的葡萄糖，以5体积％的量存在的山梨糖醇，以5体积％的量存在的半乳糖，以5体积％的量存在的果糖，以5体积％的量存在的木糖醇，以5体积％的量存在的甘露糖，各自以2.5体积％的量存在的葡萄糖和果糖的组合，以5.7体积％的量存在的葡萄糖，以2.86体积％的量存在的果糖，以1.4体积％的量存在的木糖醇。方法本文提供了治疗有此需要的受试者的肌肉疾病的方法，包括向受试者施用本公开的药物组合物。因此，在一个方面，本文提供了治疗有此需要的受试者的肌肉疾病的方法，包括向受试者施用本文公开的药物组合物。在一个实施方案中，肌肉疾病是杜氏肌营养不良症。另一方面，本文提供了预防有此需要的受试者的肌肉疾病的方法，包括向受试者施用本文公开的药物组合物在一个实施方案中，肌肉疾病是杜氏肌营养不良症。另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的杜氏肌营养不良症的方法，其中所述受试者具有适合于外显子51跳跃的肌营养不良蛋白基因的突变，包括向该受试者施用本公开的药物组合物。本文考虑的受试者通常是人。然而，受试者可以是任何需要治疗的哺乳动物。因此，本文描述的方法可以应用于人类和兽医应用。应理解，本文提供的药物组合物可通过本领域已知的任何方式施用。本文提供的药物组合物更优选通过静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内或皮下施用途径递送。因此，在一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)40-60mg的eteplirsen；b)6.4-9.6mg氯化钠；c)0.16-0.24mg氯化钾；d)0.16-0.24mg磷酸二氢钾；e)0.91-1.37mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在该方法的另一个实施方案中，药物组合物的总体积为约1ml。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)约50mg的eteplirsen；b)约8mg氯化钠；c)约0.2mg氯化钾；d)约0.2mg磷酸二氢钾；e)约1.14mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约1ml。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)80-120mg的eteplirsen；b)12.8-19.2mg氯化钠；c)0.32-0.48mg氯化钾；d)0.32-0.48mg磷酸二氢钾；e)1.02-1.54mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在该方法的另一个实施方案中，药物组合物的总体积为约2ml。在该方法的另一个实施方案中，药物组合物的总体积为2ml。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)约100mg的eteplirsen；b)约16mg氯化钠；c)约0.4mg氯化钾；d)约0.4mg磷酸二氢钾；e)约2.28mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约2ml。在该方法的一个实施方案中，药物组合物的总体积为2ml。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)400-600mg的eteplirsen；b)64-96mg氯化钠；c)1.6-2.4mg氯化钾；d)1.6-2.4mg磷酸二氢钾；e)9.0-14.0mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物的总体积为约10ml。在该方法的一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物的总体积为10ml。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)约500mg的eteplirsen；b)约80mg氯化钠；c)约2mg氯化钾；d)约2mg磷酸二氢钾；e)约11.4mg磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，药物组合物的总体积为约10ml。在该方法的一个实施方案中，药物组合物的总体积为10ml。在包括例如上述药物组合物的一些实施方案的实施方案中，eteplirsen的浓度为约50mg/ml药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为约45mg/ml至约55mg/ml。在一些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为45mg/ml至55mg/ml。在某些实施方案中，药物组合物中eteplirsen的浓度范围为约47.5mg/ml至约52.5mg/ml。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度范围为47.5mg/ml至52.5mg/ml。例如，药物组合物中的eteplirsen的浓度范围。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约50mg/ml±10％。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为50mg/ml±10％。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度在50mg/ml的±10％内。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约50mg/ml±5％。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为50mg/ml±5％。在某些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度在50mg/ml的±5％内。在一些实施方案中，eteplirsen的浓度范围为约45.5mg/ml至55mg/ml，约46mg/ml至约54.5mg/ml，约46.5mg/ml至约54mg/ml，约47mg/ml至约53.5mg/ml，约47.5mg/ml至约53mg/ml，约45.5mg/ml至约52.5mg/ml，约45.5mg/ml至约52mg/ml，约48mg/ml至约51.5mg/ml，约48.5mg/ml至约51mg/ml，约49mg/ml至约50.5mg/ml，或约49.5mg/ml至约50mg/ml药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物中的eteplirsen浓度为约45.5mg/ml，46mg/ml，46.5mg/ml，47mg/ml，47.5mg/ml，48mg/ml，48.5mg/ml，49mg/ml，49.5mg/ml，50mg/ml，50.5mg/ml，51mg/ml，51.5mg/ml，52mg/ml，52.5mg/ml，53mg/ml，53.5mg/ml，54mg/ml，54.5mg/ml，或55mg/ml药物组合物。在某些实施方案中，eteplirsen的浓度为45mg/ml，45.5mg/ml，46mg/ml，46.5mg/ml，47mg/ml，47.5mg/ml，48mg/ml，48.5mg/ml，49mg/ml，49.5mg/ml，50mg/ml，50.5mg/ml，51mg/ml，51.5mg/ml，52mg/ml，52.5mg/ml，53mg/ml，53.5mg/ml，54mg/ml，54.5mg/ml，或55mg/ml药物组合物。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)约5w/v％eteplirsen；b)约0.8w/v％氯化钠；c)约0.02w/v％氯化钾；d)约0.02w/v％磷酸二氢钾；e)约0.114w/v％磷酸氢二钠；和f)水。在该方法的一个实施方案中，指定某些w/v百分比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在该方法的另一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，该药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。在另一个方面，本公开的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)5w/v％eteplirsen；b)0.8w/v％氯化钠；c)0.02w/v％氯化钾；d)0.02w/v％磷酸二氢钾；e)0.114w/v％磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在该方面的另一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，该药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。在该方法的另一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，该药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。在另一个方面，本公开内容的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)约50mg/mleteplirsen；b)约8mg/ml氯化钠；c)约0.2mg/ml氯化钾；d)约0.2mg/ml磷酸二氢钾；e)约1.14mg/ml磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定某些w/v百分比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为约10ml。在另一个实施方案中，药物组合物包含约50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含约500mg的eteplirsen。在另一个方面，本公开内容的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)50mg/mleteplirsen；b)8mg/ml氯化钠；c)0.2mg/ml氯化钾；d)0.2mg/ml磷酸二氢钾；e)1.14mg/ml磷酸氢二钠；和f)水。在该方面的一个实施方案中，其指定某些mg/ml比，组合物的总体积为1-10ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为1ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为2ml。在另一个实施方案中，组合物的总体积为10ml。在另一个实施方案中，药物组合物包含50mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含100mg的eteplirsen。在另一个实施方案中，药物组合物包含500mg的eteplirsen。在另一个方面，本公开内容的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)50mgeteplirsen；b)8mg氯化钠；c)0.2mg氯化钾；d)0.2mg磷酸二氢钾；e)1.14mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为1ml。在另一个方面，本公开内容的方法包括向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含：a)100mgeteplirsen；b)16mg氯化钠；c)0.4mg氯化钾；d)0.4mg磷酸二氢钾；e)2.28mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为2ml。在另一个方面，本公开内容的方法包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含：a)500mgeteplirsen；b)80mg氯化钠；c)2mg氯化钾；d)2mg磷酸二氢钾；e)11.4mg磷酸氢二钠；和f)水，其中药物组合物的总体积为10ml。在一些实施方案中，包括例如上面讨论的一些实施方案，药物组合物的ph为约7.5或7.5。在一些实施方案中，用naoh，nf，hcl，nf或其组合将药物组合物的ph调节至约ph7.5。在某些实施方案中，包括例如上面讨论的一些实施方案，药物组合物的重量摩尔渗透压浓度范围为约260mosm至约320mosm。在一些实施方案中，药物组合物的ph为约7.5，并且药物组合物的重量摩尔渗透压浓度范围为约260mosm至约320mosm。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物可以与本公开内容的方法中的碳水化合物在相同的制剂中或者是单独的制剂共同施用，如nat.comms.2016,7,10981所提供的，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，本公开的药物组合物可与5％的己糖碳水化合物共同施用。例如，本公开的药物组合物可以与5％葡萄糖、5％果糖或5％甘露糖共同施用。在某些实施方案中，本公开的药物组合物可与2.5％葡萄糖和2.5％果糖共同施用。在一些实施方案中，本发明的药物组合物可与选自以下的碳水化合物共同施用：以5体积％的量存在的阿拉伯糖，以5体积％的量存在的葡萄糖，以5体积％的量存在的山梨糖醇，以5体积％的量存在的半乳糖，以5体积％的量存在的果糖，以5体积％的量存在的木糖醇，以5体积％的量存在的甘露糖，各自以2.5体积％的量存在的葡萄糖和果糖的组合，以5.7体积％的量存在的葡萄糖，以2.86体积％的量存在的果糖，以1.4体积％的量存在的木糖醇。试剂盒在其他实施方案中，提供了试剂盒。根据本公开的试剂盒包括包含eteplirsen的包装或本公开的药物组合物。在一些实施方案中，试剂盒包含eteplirsen或其药学上可接受的盐。短语“包装”是指含有本文提供的寡聚核苷酸或组合物的任何容器。在一些实施方案中，包装可以是盒子或包裹。用于包装药物产品的包装材料是本领域技术人员所熟知的。药物包装材料的实例包括但不限于瓶子、管子、吸入器、泵、袋子、小瓶、容器、注射器、瓶子、以及适用于所选制剂和预期给药和治疗方式的任何包装材料。该试剂盒还可以包含未包含在包装内的物品，但是附接到包装的外部，例如移液管。试剂盒可以进一步包含向患者施用本发明的eteplirsen或药物组合物的说明书。试剂盒还可以包括管理机构(例如美国食品和药品管理局)批准使用eteplirsen的说明。试剂盒还可以包含eteplirsen的标签或产品插页。包装或任何产品插件或两者本身可由监管机构批准。试剂盒可以包括包装的固相或液相(例如提供的缓冲液)的eteplirsen。试剂盒还可以包括用于制备用于进行该方法的溶液的缓冲液，以及用于将液体从一个容器转移到另一个容器的移液管。实施例为了说明和描述本公开的某些具体实施方案，下面列出了实施例。然而，权利要求的范围不以任何方式受本文阐述的实施例的限制。对所公开的实施方案的各种改变和修改对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且可以在不脱离本公开的化学结构、取代基、衍生物、制剂或方法的情况下进行这些改变和修饰，包括但不限于涉及本公开的化学结构、取代本公开的精神和所附权利要求的范围。本文方案中结构中变量的定义与本文提供的化学式中相应位置的定义相当。实施例1：eteplirsen[寡聚化合物(xii)]原料药物的50l固相合成1.原料表1：起始原料术语“eg3”是指与低聚物缀合的三甘醇部分，例如在其3'或5'末端：原料的化学结构：a.活化的eg3尾b.活化的c亚基(用于制备，参见us8,067,571)c.活化的a亚基(用于制备，参见us8,067,571)d.活化的dpg亚基(用于制备，参见wo2009/064471)e.活化的t亚基(用于制备，参见wo2013/082551)f.锚固树脂其中r1是载体介质。表2：用于eteplirsen原料药物的固相寡聚物合成的溶液的描述溶液名称溶液组成ncp2锚溶液37.5lnmp和1292gncp2锚dedc封端溶液4.16l焦碳酸二乙酯(dedc)，3.64lnem，和33.8ldcmcytfa溶液2.02kg4-氰基吡啶，158ldcm，1.42ltfa，39ltfe，和2l纯水中和溶液35.3lipa，7.5ldipea，和106.5ldcm裂解溶液1,530.04gdtt，6.96lnmp，和2.98ldbu2.eteplirsen原料药的合成a.树脂膨胀将750g加载锚定树脂和10.5lnmp加入50l硅烷化反应器中并搅拌3小时。排出nmp并将树脂用每次5.5l的dcm洗涤两次，并用每次5.5l30％的tfe/dcm洗涤两次。b.循环0：eg3尾耦合将树脂用每次5.5l30％的tfe/dcm洗涤三次并排干，用5.5lcyfta溶液洗涤15分钟并排干，并重复用5.5lcytfa溶液洗涤15分钟而不排干，向其中加入122ml1:1的nem/dcm并将悬浮液搅拌2分钟并排干。将树脂用5.5l中和溶液洗涤两次5分钟并排干，然后用每次5.5l的dcm洗涤两次并排干。将含706.2g活化eg3尾(mw765.85)和234mlnem的3ldmi溶液加入到树脂中并在室温下搅拌3小时并排干。每次洗涤将树脂用每次5.5l的中和溶液洗涤两次，每次洗涤5分钟，并用5.5ldcm洗涤一次并排干。搅拌374.8g苯甲酸酐195mlnem在2680mlnmp中的溶液15分钟并排干。将树脂与5.5l中和溶液一起搅拌5分钟，然后用5.5ldcm洗涤一次并用每次5.5l的30％tfe/dcm洗涤两次。将树脂悬浮在5.5l的30％tfe/dcm中并保持14小时。c.亚基耦合循环1-30i.预耦合处理在如表3所描述，每个耦合循环之前，将树脂：1)用30％tfe/dcm洗涤；2)a)用cytfa溶液处理15分钟并排干，和b)用cytfa溶液处理15分钟，向其中加入1:1nem/dcm，搅拌并排干；3)用中和溶液搅拌三次；4)用dcm洗涤两次。参见表3。ii.后耦合处理在如表3中所描述，排出每个亚基溶液后，将树脂：1)用dcm洗涤；2)用30％tfe/dcm洗涤两次。如果在下一个耦合循环之前将树脂保持一段时间，则不排出第二tfe/dcm洗涤液并将树脂保留在所述tfe/dcm洗涤溶液中。见表3。iii.活化亚基耦合循环如表3中所描述进行耦合循环。iv.最终的ipa洗涤用每次19.5l的ipa洗涤树脂8次，并在室温下真空干燥约63.5小时，干重为5,579.8g。d.裂解将上述树脂结合的eteplirsen原料药物分成两批，每批如下处理：将2,789.9g树脂：1)与10lnmp一起搅拌2小时，然后排出nmp；2)用每次10l的30％tfe/dcm洗涤三次；3)用10lcytfa溶液处理15分钟；4)10lcytfa溶液15分钟，然后加入130ml1:1nem/dcm搅拌2分钟并排干。将树脂每次用10l中和溶液处理三次，用10ldcm洗涤六次，并每次用10lnmp洗涤八次。将树脂用1530.4gdtt和2980dbu在6.96lnmp中的裂解溶液处理2小时，以从树脂上分离出eteplisen原料药物。将裂解溶液排出并保留在单独的容器中。用4.97lnmp洗涤反应器和树脂，将其与裂解溶液合并。表3：表3(续)表4(续)表3(续)表3(续)e.脱保护将合并的裂解溶液和nmp洗涤液转移至压力容器中，向其中加入39.8lnh4oh，其已在冷冻机中冷却至-10℃至-25℃。将压力容器密封并加热至45℃保持16小时，然后冷却至25℃。含有eteplirsen原料药物的该脱保护溶液用纯净水3:1稀释，并用2m磷酸将ph调节至3.0，然后用nh4oh调节至ph8.03。hplc(c18)73-74％(图1)。表4.图1的数据实施例2：eteplirsen原料药物的纯化将来源于实施例1的含有eteplirsen原料药物物质的脱保护溶液上样到toyopearlsuper-q650s阴离子交换树脂柱(tosohbioscience)上，用17柱体积的0-35％b梯度洗脱(缓冲液a：10mm氢氧化钠；缓冲液b：在10mm氢氧化钠中的1m氯化钠)和可接受纯度的级分(c18和scxhplc)合并到纯化的药物产品溶液中。hplc：97.74％(c18)94.58％(scx，图2)。将纯化的药物溶液脱盐并冻干至1959g纯化的eteplirsen药物。收率61.4％；hplc：97.7％(c18)94.6％(scx，图3)。表5.图2的数据表6.图3的数据表7.缩略语缩写名称dbu1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯dcm二氯甲烷dipean，n-二异丙基乙胺dmi1,3-二甲基-2-咪唑啉酮dtt二硫苏糖醇ipa异丙醇mw分子量nemn-乙基吗啉nmpn-甲基-2-吡咯烷酮rt室温tfa2,2,2-三氟乙酸tfe2,2,2-三氟乙醇实施例3示例性的eteplirsen药物组合物表8通过引用并入本申请中引用的所有参考文献(包括期刊文献，授权专利，公开的专利申请和共同未决的专利申请)的内容在此明确地以其整体并入本文。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均符合本领域普通技术人员通常已知的含义。等同物本领域技术人员将认识到或者能够使用不超过常规的实验确定本文所述的本公开的具体实施方案的许多等同物。这些等同物旨在由所述权利要求涵盖。当前第1页12