本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法且涉及可用于这种治疗的组合。特别是，本发明涉及i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂，如抗pd-1和抗ox40抗体的组合。
背景技术：
：：有效治疗过度增生性疾病，包括癌症，是肿瘤学领域的持续目标。通常，癌症由控制细胞分裂、分化和凋亡细胞死亡的正常过程的失调引起，并且其特征在于恶性细胞的增殖，其具有无限生长、局部扩张和全身转移的潜力。正常过程的失调包括信号转导途径的异常和对与正常细胞中发现的因子不同的因子的响应。精氨酸甲基化是对参与多种细胞过程的蛋白质的重要翻译后修饰，例如基因调控、rna加工、dna损伤应答和信号转导。含有甲基化精氨酸的蛋白质存在于细胞核和胞质组分中，这表明催化甲基转移到精氨酸上的酶也存在于这些亚细胞腔隙中(综述于yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；lee,y.h.&stallcup,m.r.minireview:proteinargininemethylationofnonhistoneproteinsintranscriptionalregulation.molendocrinol23,425-433,doi:10.1210/me.2008-0380(2009))。在哺乳动物细胞中，甲基化精氨酸以三种主要形式存在：ω-ng-单甲基-精氨酸(mma)、ω-ng,ng-不对称二甲基精氨酸(adma)或ω-ng,n’g-对称的二甲基精氨酸(sdma)。每种甲基化状态都可以以不同方式影响蛋白质-蛋白质相互作用，因此有可能为底物的生物活性赋予不同的功能性后果(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。精氨酸甲基化主要在富含甘氨酸、精氨酸(gar)基序的情况下通过蛋白质精氨酸甲基转移酶(prmt)家族的活性发生，所述蛋白质精氨酸甲基转移酶将甲基从s-腺苷-l-甲硫氨酸(sam)转移至底物精氨酸侧链，产生s-腺苷-高半胱氨酸(sah)和甲基化精氨酸。该蛋白质家族由10个成员组成，其中9个已被证明具有酶活性(bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。根据酶促反应的产物，prmt家族分为四种亚型(i-iv型)。iv型酶甲基化内部胍基氮并且仅在酵母中描述(fisk,j.c.&read,l.k.proteinargininemethylationinparasiticprotozoa.eukaryotcell10,1013-1022,doi:10.1128/ec.05103-11(2011))；i-iii型酶通过单一甲基化事件产生单甲基-精氨酸(mma，rme1)。mma中间体被认为是相对低丰度的中间体，然而，prmt7的主要iii型活性的选择底物可以保持单甲基化，而i型和ii型酶分别催化从mma向不对称二甲基精氨酸(adma，rme2a)或对称的二甲基精氨酸(sdma，rme2s)的进展。ii型prmt包括prmt5和prmt9，然而，prmt5是负责形成对称二甲基化的主要酶。i型酶包括prmt1、prmt3、prmt4、prmt6和prmt8。prmt1、prmt3、prmt4和prmt6普遍表达，而prmt8主要限于脑(综述于bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。prmt1的错误调节和过表达与许多实体和造血系统癌症有关(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；yoshimatsu,m.等人，dysregulationofprmt1andprmt6,typeiargininemethyltransferases,isinvolvedinvarioustypesofhumancancers.intjcancer128,562-573,doi:10.1002/ijc.25366(2011))。prmt1与癌症生物学之间的联系主要是通过调节相关底物上发现的精氨酸残基的甲基化。在几种肿瘤类型中，prmt1可以通过组蛋白h4的甲基化驱动异常致癌程序的表达(takai,h.等人，5-hydroxymethylcytosineplaysacriticalroleinglioblastomagenesisbyrecruitingthechtop-methylosomecomplex.cellrep9,48-60,doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071(2014)；shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012)；zhao,x.等人，methylationofrunx1byprmt1abrogatessin3abindingandpotentiatesitstranscriptionalactivity.genesdev22,640-653,doi:10.1101/gad.1632608(2008),以及通过其对非组蛋白底物的活性驱动异常致癌程序的表达(wei,h.,mundade,r.,lange,k.c.&lu,t.proteinargininemethylationofnon-histoneproteinsanditsroleindiseases.cellcycle13,32-41,doi:10.4161/cc.27353(2014))。在许多这些实验系统中，其底物的prmt1依赖性adma修饰的破坏降低了癌细胞的增殖能力(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。因此，已经认识到prmt1的抑制剂应该具有作为用于治疗过度增殖性疾病的抗增殖剂的价值。免疫疗法是另一种治疗过度增生性疾病的方法。增强抗肿瘤t细胞功能和诱导t细胞增殖是癌症治疗的有力和新方法。目前市场上有三种免疫-肿瘤学抗体(例如，免疫调节剂)。抗ctla-4(/易普利姆玛)被认为在t细胞引发时增强免疫反应，并且抗pd-1抗体(/纳武单抗和/派姆单抗)被认为在局部肿瘤微环境中发挥作用，其通过减轻已经引发和激活的肿瘤特异性t细胞中的抑制性检查点。尽管在癌症治疗方面已有许多最新进展，但仍需要对受到癌症影响的个体进行更有效和/或增强的治疗。附图简述图1：精氨酸残基的甲基化类型。来自yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)。图2：癌症相关prmt1底物的功能类别。已知的prmt1底物及其与癌症相关生物学的关联(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012)；wei,h.,mundade,r.,lange,k.c.&lu,t.proteinargininemethylationofnon-histoneproteinsanditsroleindiseases.cellcycle13,32-41,doi:10.4161/cc.27353(2014)；boisvert,f.m.,rhie,a.,richard,s.&doherty,a.j.thegarmotifof53bp1isargininemethylatedbyprmt1andisnecessaryfor53bp1dnabindingactivity.cellcycle4,1834-1841,doi:10.4161/cc.4.12.2250(2005)；boisvert,f.m.,dery,u.,masson,j.y.&richard,s.argininemethylationofmre11byprmt1isrequiredfordnadamagecheckpointcontrol.genesdev19,671-676,doi:10.1101/gad.1279805(2005)；zhang,l.等人，cross-talkbetweenprmt1-mediatedmethylationandubiquitylationonrbm15controlsrnasplicing.elife4,doi:10.7554/elife.07938(2015)；snijders,a.p.等人，argininemethylationandcitrullinationofsplicingfactorproline-andglutamine-rich(sfpq/psf)regulatesitsassociationwithmrna.rna21,347-359,doi:10.1261/rna.045138.114(2015)；liao,h.w.等人，prmt1-mediatedmethylationoftheegfreceptorregulatessignalingandcetuximabresponse.jclininvest125,4529-4543,doi:10.1172/jci82826(2015)；ng,r.k.等人，epigeneticdysregulationofleukaemichoxcodeinmll-rearrangedleukaemiamousemodel.jpathol232,65-74,doi:10.1002/path.4279(2014)；bressan,g.c.等人，argininemethylationanalysisofthesplicing-associatedsrproteinsfrs9/srp30c.cellmolbiollett14,657-669,doi:10.2478/s11658-009-0024-2(2009))。图3：用化合物d处理的细胞系的methylscan评估。具有甲基化变化的蛋白质的百分比(与变化的方向性无关)按照所示的官能团分类。图4：化合物a对prmt1的抑制模式。在18分钟prmt1反应后测定ic50值，并将数据拟合至3参数剂量响应等式。(a)代表性实验，显示作为[sam]/kmapp的函数绘制的化合物aic50值与非竞争性抑制的等式ic50＝ki/(1+(km/[s]))拟合。(b)代表性实验，显示作为[肽]/kmapp的函数绘制的ic50值。插图显示与混合抑制的等式的数据拟合，以评估相对肽h41-21底物，化合物a对prmt1的抑制(v＝vmax*[s]/(km*(1+[i]/ki)+[s]*(1+[i]/k’)))。α值(α＝ki’/ki)>0.1但<10指示混合抑制剂。图5：化合物a对prmt1的效力。使用在平衡条件下(底物浓度等于kmapp)运行的放射性测定法监测prmt1活性，该放射性测定法测量3h从sam到h41-21肽的转移。通过将数据拟合至3参数剂量-响应等式来确定ic50值。(a)作为prmt1:sam:化合物a-三-hcl预孵育时间的函数绘制的ic50值。空心圆和实心圆表示两个独立的实验(0.5nmprmt1)。插图显示60分钟prmt1:sam:化合物a-三-hcl预孵育后化合物a-三-hcl抑制prmt1活性的代表性ic50曲线。(b)通过盐形式分类的prmt1的化合物a抑制。在60分钟prmt1:sam:化合物a预孵育和20分钟反应后测定ic50值。图6：与化合物a(橙色)和sah(紫色)复合的prmt1在处分辨的晶体结构。插图显示该化合物结合在肽结合口袋中并与prmt1侧链发生关键相互作用。图7：化合物a对prmt1直系同源物的抑制。使用在平衡条件下(底物浓度等于kmapp)的放射性测定法监测prmt1活性，该放射性测定法测量3h从sam到h41-21肽的转移。通过将数据拟合至3参数剂量-响应等式来确定ic50值。(a)对于大鼠(○)和狗(●)直系同源物，作为prmt1:sam:化合物a预孵育时间的函数绘制的ic50值。(b)作为大鼠(○)、狗(●)或人(□)prmt1浓度的函数绘制的ic50值。(c)在60分钟prmt1:sam:化合物a预孵育和20分钟反应后测定的ic50值。数据是测试化合物a的多种盐形式的平均值。基于对于非竞争性抑制剂的等式ki＝ic50/(1+(km/[s]))以及ic50测定代表esi*构象的假设，计算ki*app值。图8：化合物a对prmt家族成员的效力。在60分钟prmt:sam:化合物a预孵育后，使用在平衡条件下(kmapp的底物浓度)运行的放射性测试监测prmt活性。通过将数据拟合至3-参数剂量-响应等式来确定化合物a的ic50值。(a)数据是测试化合物a的多种盐形式的平均值。ki*app值基于对于非竞争性抑制剂的等式ki＝ic50/(1+(km/[s]))以及ic50测定代表esi*构象的假设计算。(b)作为prmt3(●)、prmt4(○)、prmt6(■)或prmt8(□):sam:化合物a预孵育时间的函数绘制ic50值。图9：mma细胞中-western。用化合物a-三-hcl(“化合物a-a”)、化合物a-单-hcl(“化合物a-b”)、化合物a-游离碱(“化合物a-c”)和化合物a-二-hcl(“化合物a-d”)处理rko细胞72小时。固定细胞，用抗rme1gg染色以检测mma和抗微管蛋白以使信号归一化，并使用odyssey成像系统成像。相对于微管蛋白的mma相对于化合物浓度作图，以使用双相曲线拟合等式在graphpad中产生曲线拟合(a)。ec50(第一个拐点)、标准偏差和n的总结显示在(b)中。图10：prmt1在肿瘤中的表达。mrna表达水平获自cancergenomics的cbioportal。显示actb水平和tyr分别指示对应于普遍表达的基因的水平表达相对于具有受限表达的基因的表达。图11：化合物a在细胞培养物中的抗增殖活性。在6天的生长测试中评估196种人癌细胞系对化合物a的敏感性。每个细胞系的gic50值显示为具有预测的人类暴露的条形图，如(a)中所示。在(b)中，ymin-t0(细胞毒性的量度)绘制为条形图，其中每个细胞系的gic100值显示为红点。从大鼠14天mtd(150mg/kg，cave＝2.1μm)计算的cave用红色虚线表示。图12：化合物a的时间过程对培养细胞中的精氨酸甲基化标记的影响。(a)用化合物a处理的toledodlbcl细胞中adma、sdma和mma的变化。显示甲基化的变化相对于微管蛋白±sem(n＝3)归一化。(b)精氨酸甲基化标记的代表性蛋白质印迹。定量的区域由凝胶右侧的黑条表示。图13：化合物a对精氨酸甲基化的剂量响应。(a)来自u2932细胞系中化合物a剂量响应的mma和adma的代表性蛋白质印迹图像。对于(b)定量的区域由凝胶左侧的黑条表示。(b)暴露72小时后5种淋巴瘤细胞系中50％最大诱导mma或50％最大减少adma所需的最小有效化合物a浓度+标准偏差(n＝2)。6天生长死亡测定中的相应gic50值表示为红色。图14：响应于淋巴瘤细胞中的化合物a的精氨酸甲基化标记的耐久性。(a)用化合物a培养的toledodlbcl细胞系中adma、sdma和mma的变化的稳定性。显示甲基化的变化相对于微管蛋白±sem(n＝3)归一化。(b)精氨酸甲基化标记的代表性蛋白质印迹。对(a)定量的区域在凝胶侧用黑条表示。图15：淋巴瘤细胞系的增殖时间过程。在toledo(a)和daudi(b)细胞系(每个细胞系n＝2)的10天时间过程中评估细胞生长。显示了单个生物学重复的代表性数据。图16：化合物a在第6天和第10天在淋巴瘤细胞系中的抗增殖作用。(a)淋巴瘤细胞系中第6天(浅蓝色)和第10天(深蓝色)增殖测定的平均gic50值。(b)在第6天(浅蓝色)和第10天(深蓝色)的ymin-t0与相应的gic100(红点)。图17：按亚型分类的化合物a在淋巴瘤细胞系中的抗增殖作用。(a)每个细胞系的gic50值显示为条形图。在(b)中，ymin-t0(细胞毒性的量度)绘制为条形图，其中每个细胞系的gic100值显示为红点。从atcc或dsmz细胞系储存库收集亚型信息。图18：人淋巴瘤细胞系中细胞周期的碘化丙啶facs分析。将3种淋巴瘤细胞系toledo(a)、u2932(b)和oci-ly1(c)用0、1、10、100、1000和10,000nm化合物a处理10天，在处理后第3、5、7、10天取样。数据代表生物重复的平均值±sem，n＝2。图19：用化合物a处理的淋巴瘤细胞系中的胱天蛋白酶-3/7活化。在toledo(a)和daudi(b)细胞系中，在10天的时间过程中评估细胞凋亡。胱天蛋白酶3/7活化显示为相对于dmso处理的细胞的倍数诱导。对每种细胞系进行两次独立的重复。显示了每种的代表性数据。图20：化合物a在携带toledo异种移植物的小鼠中的功效。在28(a)或24(b)天的期间内，用化合物a口服qd(37.5、75、150、300、450、或600mg/kg)或用75mg/kg(b)bid治疗小鼠，且每周两次测量肿瘤体积。图21：化合物a在6天和10天时在aml细胞系中的作用。(a)aml细胞系中6天(浅蓝色)和10天(深蓝色)增殖测定的平均gic50值。(b)在第6天(浅蓝色)和第10天(深蓝色)的ymin-t0与相应的gic100(红点)。图22：使用化合物a的ccrcc细胞系体外增殖时间过程。(a)2种ccrcc细胞系相对于对照(dmso)的生长。显示了来自单个重复的代表性曲线。(b)在时间过程中对ccrcc细胞系的gic50和％生长抑制的总结(平均值±sd；每种细胞系n＝2)。图23：化合物a在achn异种移植物中的功效。每天用化合物a口服治疗小鼠28天，每周两次测量肿瘤体积。图24：化合物a在乳腺癌细胞系中的抗增殖作用。在6天增殖测定中用化合物a处理的乳腺癌细胞系的gic50和生长抑制(％)(红色圆圈)的条形图。代表三阴性乳腺癌(tnbc)的细胞系以橙色显示；其他亚型是蓝色的。图25：化合物a在第7天和第12天在乳腺癌细胞系中的作用。在具有相应gic50(红点)的乳腺癌细胞系中，7天(浅蓝色)和10天(深蓝色)增殖测试的平均生长抑制(％)值。在用乳腺癌而非淋巴瘤或aml细胞系的长期增殖测定中观察到的效力和抑制百分比的增加表明某些肿瘤类型需要更长时间暴露于化合物a以充分显示抗增殖活性。图26：与免疫疗法组合。同源cloudmans91肿瘤模型中单一药物和组合的平均肿瘤体积(a)和存活率(b)。(c)功效研究的每个组中动物的个体肿瘤生长。图27：培养物中cloudmans91细胞的化合物a处理。在96孔形式的6天增殖测定中处理细胞，确定为gic50＝9515±231.8nm。图28：106-222、人源化106-222(hu106)和人受体x61012(genbank登录号)vh序列的氨基酸序列比对。图29：106-222、人源化106-222(hu106)和人受体aj388641(genbank登录号)vl序列的氨基酸序列比对。图30：hu106vh基因的核苷酸序列，其侧翼为spei和hindiii位点，具有推导的氨基酸序列。图31：hu106-222vl基因的核苷酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点，具有推导的氨基酸序列。图32：119-122、人源化119-122(hu119)和人受体z14189(genbank登录号)vh序列的氨基酸序列比对。图33：119-122、人源化119-122(hu119)和人受体m29469(genbank登录号)vl序列的氨基酸序列比对。图34：hu119vh基因的核苷酸序列，其侧翼为spei和hindiii位点，具有推导的氨基酸序列。图35：hu119vl基因的核苷酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点，具有推导的氨基酸序列。图36：具有推导的氨基酸序列的小鼠119-43-1vhcdna的核苷酸序列。图37：小鼠119-43-1vlcdna的核苷酸序列和推导的氨基酸序列。图38：设计的119-43-1vh基因的核苷酸序列，其侧翼为spel和hindlll位点，具有推导的氨基酸序列。图39：设计的119-43-1vl基因的核苷酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点，具有推导的氨基酸序列。图40：与免疫疗法组合。a20肿瘤模型中单一药物和组合的平均存活率。图41：与免疫疗法组合。ct26肿瘤模型中单一药物和组合的平均存活率。技术实现要素：在一个实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，以及以下至少一种：药学上可接受的载体和药学上可接受的稀释剂，从而治疗所述人的癌症。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的选自以下的免疫调节剂：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂的药物组合物和包含选自以下的免疫调节剂的药物组合物：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，从而治疗所述人的癌症。在一个实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合的用途：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其用于制备药物。在一个实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合的用途：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其用于治疗癌症。发明详述定义如本文所用，“i型蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂”或“i型prmt抑制剂”是指抑制以下任意一种或多种的试剂：蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)和蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)。在一些实施方案中，所述i型prmt抑制剂为小分子化合物。在一些实施方案中，所述i型prmt抑制剂选择性抑制以下任意一种或多种：蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)和蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)。在一些实施方案中，所述i型prmt抑制剂为prmt1、prmt3、prmt4、prmt6和prmt8的选择性抑制剂。鉴于它们在调节多种生物过程中的作用，精氨酸甲基转移酶是调节的有吸引力的靶标。现已发现，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐和组合物作为精氨酸甲基转移酶的抑制剂是有效的。以下更具体地描述具体官能团和化学术语的定义。化学元素是根据handbookofchemistryandphysics,75版内页的cas版本元素周期表所定义，且总体来说具体官能团也根据其中所述而定义。此外，在thomassorrell，organicchemistry，universitysciencebooks，sausalito，1999；smith和march，march’sadvancedorganicchemistry，第5版，johnwiley&sons，inc.，newyork，2001；larock，comprehensiveorganictransformations，vchpublishers，inc.，newyork，1989；和carruthers，somemodernmethodsoforganicsynthesis，第3版，cambridgeuniversitypress，cambridge，1987中描述了有机化学的一般原则以及具体官能团和反应性。本文所述的化合物可包含一个或多个不对称中心，并因此可以不同异构体形式存在，如对映异构体和/或非对映异构体。例如，本文所述的化合物可为单一对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或可为立体异构体混合物的形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。可通过本领域技术人员已知的方法将异构体从混合物中分离，包括手性高效液相色谱(hplc)以及手性盐的形成和结晶；或者可通过不对称合成制备优选的异构体。例如参见：jacques等人，enantiomers，racemates和resolutions(wileyinterscience，newyork，1981)；wilen等人，tetrahedron33:2725(1977)；eliel，stereochemistryofcarboncompounds(mcgraw–hill，ny，1962)；以及wilen，tablesofresolvingagentsandopticalresolutionsp.268(e.l.eliel，ed.，univ.ofnotredamepress，notredame，in1972)。本发明还包括本文所述的作为单个异构体的化合物，其基本不含其它异构体，或者包括作为不同异构体混合物的化合物。应理解，本发明的化合物可描绘为不同的互变异构体。还应当理解，当化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式都包括在本发明的范围内，并且本文所述任何化合物的命名不排除任何互变异构形式。除非另有说明，否则本文描述的结构也意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，不同的是用氘或氚替代氢，用18f替代19f，或用富含13c-或14c-的碳替代碳，都在本发明的范围内。这些化合物可用作例如生物测定中的分析工具或探针。列出一系列值时，它旨在包含该范围内的每个值和子范围。例如"c1-6烷基"预期包括，c1；c2、c3、c4、c5、c6、c1-6、c1-5、c1-4、c1-3、c1-2、c2-6、c2-5、c2-4、c2-3、c3-6、c3-5、c3-4、c4-6、c4-5和c5-6烷基。"基(radical)"是指特定基团上的连接点。基包括特定基团上的二价自由基。“烷基”是指具有1至20个碳原子的直链或支链饱和烃基基团(“c1–20烷基”)。在一些实施方案中，烷基具有1至10个碳原子("c1-10烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至9个碳原子("c1-9烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至8个碳原子("c1-8烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至7个碳原子("c1-7烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至6个碳原子("c1-6烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至5个碳原子("c1-5烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至4个碳原子("c1-4烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至3个碳原子("c1-3烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至2个碳原子("c1-2烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1个碳原子("c1烷基")。在一些实施方案中，烷基具有2至6个碳原子("c2-6烷基")。c1-6烷基基团的实例包括甲基(c1)、乙基(c2)、正丙基(c3)、异丙基(c3)、正丁基(c4)、叔丁基(c4)、仲丁基(c4)、异丁基(c4)、正戊基(c5)、3-戊基(c5)、戊基(c5)、新戊基(c5)、3-甲基-2-丁基(c5)、叔戊基(c5)、和正己基(c6)。烷基的其它实例包括正庚基(c7)、正辛基(c8)等。在某些实施方案中，烷基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的烷基")或取代有一个或多个取代基(“取代的烷基")。在某些实施方案中，烷基为未取代的c1-10烷基(例如，-ch3)。在某些实施方案中，烷基为取代的c1-10烷基。在一些实施方案中，烷基取代有一个或多个卤素。"全卤代烷基"为其中所有氢原子独立地被卤素，例如，氟、溴、氯或碘代替的本文定义的取代的烷基。在一些实施方案中，烷基部分具有1至8个碳原子("c1-8全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至6个碳原子("c1-6全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至4个碳原子("c1-4全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至3个碳原子("c1-3全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至2个碳原子("c1-2全卤代烷基")。在一些实施方案中，所有氢原子都被氟代替。在一些实施方案中，所有氢原子都被氯代替。全卤代烷基基团的实例包括-cf3、-cf2cf3、-cf2cf2cf3、-ccl3、-cfcl2、-cf2cl等。"烯基"是指具有2至20个碳原子和一个或多个碳-碳双键(例如，1、2、3或4个双键)，和任选一个或多个三键(例如，1、2、3或4个三键)的直链或支链的烃基基团("c2-20烯基")。在某些实施方案中，烯基不包含三键。在一些实施方案中，烯基具有2至10个碳原子("c2-10烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至9个碳原子("c2-9烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至8个碳原子("c2-8烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至7个碳原子("c2-7烯基")在一些实施方案中，烯基具有2至6个碳原子("c2-6烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至5个碳原子("c2-5烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至4个碳原子("c2-4烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至3个碳原子("c2-3烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2个碳原子("c2烯基")。一个或多个碳-碳双键可为内部的(如在2-丁烯基中)或末端的(如在1-丁烯基中)。c2-4烯基基团的实例包括乙烯基(c2)、1-丙烯基(c3)、2-丙烯基(c3)、1-丁烯基(c4)、2-丁烯基(c4)、丁二烯基(c4)等。c2-6烯基基团的实例包括上述c2-4烯基以及戊烯基(c5)、戊二烯基(c5)、己烯基(c6)，等。烯基的其它实例包括庚烯基(c7)、辛烯基(c8)、辛三烯基(c8)，等。在某些实施方案中，烯基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的烯基")或取代有一个或多个取代基(“取代的烯基")。在某些实施方案中，烯基为未取代的c2-10烯基。在某些实施方案中，烯基为取代的c2-10烯基。"炔基"是指具有2至20个碳原子和一个或多个碳-碳三键(例如，1、2、3或4个三键)，和任选一个或多个双键(例如，1、2、3或4个双键)的直链或支链的烃基基团("c2-20炔基")。在某些实施方案中，炔基不包含双键。在一些实施方案中，炔基具有2至10个碳原子("c2-10炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至9个碳原子("c2-9炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至8个碳原子("c2-8炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至7个碳原子("c2-7炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至6个碳原子("c2-6炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至5个碳原子("c2-5炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至4个碳原子("c2-4炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至3个碳原子("c2-3炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2个碳原子("c2炔基")。一个或多个碳碳三键可为内部的(如在2-丁炔基中)或末端的(如在1-丁炔基中)。c2-4炔基基团的实例包括，但不限于，乙炔基(c2)、1-丙炔基(c3)、2-丙炔基(c3)、1-丁炔基(c4)、2-丁炔基(c4)，等。c2-6烯基基团的实例包括上述c2-4炔基以及戊炔基(c5)、己炔基(c6)，等。炔基的其他实例包括庚炔基(c7)、辛炔基(c8)，等。在某些实施方案中，炔基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的炔基")或取代有一个或多个取代基(“取代的炔基")。在某些实施方案中，炔基为未取代的c2-10炔基。在某些实施方案中，炔基为取代的c2-10炔基。“稠合”或“邻位稠合”在本文中可互换使用，并且是指具有共同的两个原子和一个键的两个环，例如，“桥接”是指以下环系统，其包含(1)桥头原子或原子团，所述桥头原子或原子团连接同一环的两个或更多个非相邻位置；或(2)桥头原子或原子团，所述桥头原子或原子团连接环系统的不同环的两个或多个位置，并且因此不形成邻位稠合的环，例如，“螺”或“螺稠合”是指连接到碳环或杂环系统的相同原子的一组原子(偕位连接)，从而形成环，例如，还考虑了桥头原子处的螺环融合。"碳环基"或"碳环的"是指在非芳环体系中具有3至14个环碳原子("c3-14碳环基")和0个杂原子的非芳族环状烃基基团。在某些实施方案中，碳环基是指在非芳环体系中具有3至10个环碳原子(c3-10碳环基")和0个杂原子的非芳族环状烃基基团。在一些实施方案中，碳环基具有3至8个环碳原子("c3-8碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有3至6个环碳原子("c3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有3至6个环碳原子("c3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有5至10个环碳原子("c5-10碳环基")。示例性c3-6碳环基包括，但不限于，环丙基(c3)、环丙烯基(c3)、环丁基(c4)、环丁烯基(c4)、环戊基(c5)、环戊烯基(c5)、环己基(c6)、环己烯基(c6)、环己二烯基(c6)，等。示例性c3-8碳环基包括，但不限于，上述c3-6碳环基以及环庚基(c7)、环庚烯基(c7)、环庚二烯基(c7)、环庚三烯基(c7)、环辛基(c8)、环辛烯基(c8)、双环[2.2.1]庚基(c7)、双环[2.2.2]辛基(c8)，等。示例性c3-10碳环基包括，但不限于，上述c3_8碳环基以及环壬基(c9)、环壬烯基(c9)、环癸基(c10)、环癸烯基(c10)、八氢-lh-茚基(c9)、十氢萘基(c10)、螺[4.5]癸基(c10)，等。如此前实例所述，在一些实施方案中，碳环基基团为单环(“单环碳环基”)或为稠合、桥接或螺环稠合的系统(如二环系统(“二环碳环基”))，并且可为饱和的或可为部分不饱和的。“碳环基”也包括环系统，其中如上所述的碳环基环与一个或多个芳基或杂芳基基团稠合，其中连接点位于碳环基环上，且在该情况下，碳的数目继续被指定为碳环环系统中的碳数目。在某些实施方案中，碳环基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的碳环基")或取代有一个或多个取代基(“取代的碳环基")。在某些实施方案中，所述碳环基为未取代的c3-10碳环基。在某些实施方案中，所述碳环基为取代的c3-10碳环基。在一些实施方案中，"碳环基"为具有3至14个环碳原子的单环、饱和碳环基("c3-14环烷基")。在一些实施方案中，"碳环基"为具有3至10个环碳原子的单环、饱和碳环基("c3-10环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有3至8个环碳原子("c3-8环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有3至6个环碳原子("c3-6环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有5至6个环碳原子("c5-6环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有5至10个环碳原子("c5-10环烷基")。c5-6环烷基基团的实例包括环戊基(c5)和环己基(c5)。c3-6环烷基基团的实例包括上述c5-6环烷基以及环丙基(c3)和环丁基(c4)。c3-8环烷基基团的实例包括上述c3-6环烷基以及环庚基(c7)和环辛基(c8)。在某些实施方案中，环烷基的每种情况独立地为未取代的(“未取代的环烷基")或取代有一个或多个取代基(“取代的环烷基")。在某些实施方案中，环烷基为未取代的c3-10环烷基。在某些实施方案中，环烷基为取代的c3-10环烷基。"杂环基"或"杂环的"是指具有环碳原子和1至4个环杂原子的3-至14-元非芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("3-14元杂环基")。在某些实施方案中，杂环基或杂环的是指具有环碳原子和1-4个环杂原子的3-10元非芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("3-10元杂环基")。在包含一个或多个氮原子的杂环基中，连接点可为碳或氮原子，只要化合价允许。杂环基可为单环("单环杂环基")或稠合、桥接或螺环稠合的的环体系，如双环体系("双环杂环基")，且可为饱和或可为部分不饱和的。杂环基二环环系统可在一个或两个环中包含一个或多个杂原子。“杂环基”还包括环系统，其中如上所定义的杂环基环，与一个或多个碳环基基团稠合，其中连接点位于碳环基上或杂环基环上，或者包括环系统，其中如上所定义的杂环基环与一个或多个芳基或杂芳基基团稠合，其中连接点位于杂环基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为杂环基环系统中的环成员数目。在某些实施方案中，杂环基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的杂环基")或取代有一个或多个取代基(“取代的杂环基")。在某些实施方案中，杂环基为未取代的3-10元杂环基。在某些实施方案中，杂环基为取代的3-10元杂环基。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-10元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂环基")。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-8元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-8元杂环基")。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-6元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-6元杂环基")。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-3个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-2个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有一个选自氮、氧和硫的环杂原子。示例性的包含一个杂原子的3元杂环基基团包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基。示例性的包含一个杂原子的4元杂环基基团包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基。包含一个杂原子的示例性的5元杂环基基团包括但不限于四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、吡咯烷基、二氢吡咯基和吡咯基-2,5–二酮。示例性的包含两个杂原子的5元杂环基基团包括但不限于二氧杂环戊烷基、氧杂硫杂环戊烷基(oxasulfuranyl)、二硫杂环戊烷基(disulfuranyl)和噁唑烷-2-酮。示例性的包含三个杂原子的5元杂环基基团包括但不限于三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基。示例性的包含一个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基和硫杂环己基。示例性的包含两个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于哌嗪基、吗啉基、二硫杂环己基、二氧杂环己烷基。示例性的包含三个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于三氮杂环己烷基(triazinanyl)。示例性的包含一个杂原子的7元杂环基基团包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。示例性的包含一个杂原子的8元杂环基基团包括但不限于氮杂环辛烷基、氧杂环辛烷基和硫杂环辛烷基。示例性的与c6芳基环稠合的5元杂环基基团(本文也称为5,6-二环杂环)包括但不限于二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、苯并噁唑啉酮基(benzoxazolinonyl)等。示例性的与芳基环稠合的6元杂环基基团(本文也称为6,6-二环杂环)包括但不限于四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。“芳基”是指单环或多环(如二环或三环)的4n+2芳香环系统(如具有6、10或14个在环形排列中共享的π电子)并在该芳香环系统中具有6-14个环碳原子和0个杂原子的基团(“c6–14芳基”)。在一些实施方案中，芳基基团具有六个环碳原子(“c6芳基”；如苯基)。在一些实施方案中，芳基基团具有十个环碳原子(“c10芳基”；如萘基如1–萘基和2–萘基)。在一些实施方案中，芳基基团具有十四个环碳原子(“c14芳基”；如蒽基)。“芳基”还包括环系统，其中芳基环，如上所定义，与一个或多个碳环基或杂环基基团稠合，其中连接基团或连接点位于芳基环上，且在该情况下，碳原子的数目继续被指定为芳基环系统中的碳原子数目。在某些实施方案中，芳基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的芳基")或取代有一个或多个取代基(“取代的芳基")。在某些实施方案中，芳基为未取代的c6-14芳基。在某些实施方案中，芳基为取代的c6-14芳基。"杂芳基"是指5-14元单环或多环(如二环或三环)的4n+2芳香环系统(如具有6或10个在环形排列中共享的π电子)并在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4个环杂原子的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-14元杂芳基")。在某些实施方案中，杂芳基是指具有环碳原子和在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-10元单环或双环的4n+2芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂芳基")。在含有一个或多个氮原子的杂芳基基团中，只要原子价允许，连接点可为碳或氮原子。杂芳基二环系统可在一个或两个环内包含一个或多个杂原子。“杂芳基”包括这样的环系统，其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个碳环基或杂环基基团稠合，其中连接点位于杂芳基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为杂芳基环系统中环成员的数目。“杂芳基”还包括这样的环系统，其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个芳基基团稠合，其中连接点位于芳基或杂芳基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为稠合(芳基/杂芳基)环系统中环成员的数目。二环杂芳基基团中的一个环不含有杂原子(如吲哚基，喹啉基，咔唑基等)，连接点可位于两环之一上，例如位于具有杂原子的环(如2–吲哚基)上或位于不含有杂原子的环(如5–吲哚基)上。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-14元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-14元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-10元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-8元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-8元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-6元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-6元杂芳基")。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1-3个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1-2个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1个选自氮、氧和硫的环杂原子。在某些实施方案中，杂芳基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的("未取代的杂芳基")或取代有一个或多个取代基("取代的杂芳基")。在某些实施方案中，杂芳基为未取代的5-14元杂芳基。在某些实施方案中，杂芳基为取代的5-14元杂芳基。包含一个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，吡咯基，呋喃基和噻吩基。包含2个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基和异噻唑基。包含3个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，三唑基、噁二唑基和噻二唑基。包含4个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，四唑基。包含1个杂原子的示例性6-元杂芳基包括，但不限于，吡啶基。包含2个杂原子的示例性6-元杂芳基包括，但不限于，哒嗪基，嘧啶基和吡嗪基。包含3或4个杂原子的示例性6-元杂芳基分别包括，但不限于，三嗪基和四嗪基。包含1个杂原子的示例性7-元杂芳基包括，但不限于，氮杂环庚三烯基、氧杂环庚三烯基和硫杂环庚三烯基。示例性6,6-双环杂芳基包括，但不限于，二氮杂萘基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹喔啉基、酞嗪基和喹唑啉基。示例性5,6-双环杂芳基包括，但不限于，下式任一种：在单环或双环杂芳基基团的任一个中，连接点可为任何碳或氮原子，只要化合价允许。“部分不饱和”是指包含至少一个双键或三键的基团。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但并不包括如本文所定义的芳族基(例如，芳基或杂芳基基团)。同样，“饱和”是指不包含双键或三键的基团，即全包含单键。在一些实施方案中，本文所定义的烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基，为任选取代的(例如，“取代”或“未取代的”脂族基团，“取代”或“未取代的”烷基，“取代”或“未取代的”烯基，“取代”或“未取代的”炔基，“取代”或“未取代的”碳环基，“取代”或“未取代的”杂环基，“取代”或“未取代的”芳基或“取代”或“未取代的”杂芳基)。通常，术语“取代的”，不管其前面是否有术语“任选地”，是指基团(如碳或氮原子)上存在的至少一个氢被可允许的取代基代替，如其取代产生稳定化合物的取代基，所述化合物例如为不自发进行转化的化合物，所述转化例如为重排、环化、消除或其它反应。除非另外说明，“取代的”基团在该基团的一个或多个可取代的位置具有取代基，且当在任何给定结构中的多于一个位置被取代时，每个位置上的取代基相同或不同。术语“取代的”被认为包括被有机化合物所有可允许的取代基取代，包括导致形成稳定的化合物的任何本文所述的取代基。本发明考虑到任何以及所有的该组合以获得稳定化合物。为了本文的目的，例如氮的杂原子可具有氢取代基和/或如本文所述的任何合适的取代基，其满足杂原子的原子价并导致形成稳定部分。示例性碳原子取代基包括，但不限于，卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-so3h、-oh、-oraa、-on(rbb)2、-n(rbb)2、-n(rbb)3+x、-n(orcc)rbb、-sh、-sraa、-ssrcc、-c(＝o)raa、-co2h、-cho、-c(orcc)2、-co2raa、-oc(＝o)raa、-oco2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-oc(＝o)n(rbb)2、-nrbbc(＝o)raa、-nrbbco2raa、-nrbbc(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-oc(＝nrbb)raa、-oc(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-oc(＝nrbb)n(rbb)2、-nrbbc(＝nrbb)n(rbb)2、-c(＝o)nrbbso2raa、-nrbbso2raa、-so2n(rbb)2、-so2raa、-so2oraa、-oso2raa、-s(＝o)raa、-os(＝o)raa、-si(raa)3、-osi(raa)3-c(＝s)n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝s)sraa、-sc(＝s)sraa、-sc(＝o)sraa、-oc(＝o)sraa、-sc(＝o)oraa、-sc(＝o)raa、-p(＝o)2raa、-op(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-op(＝o)(raa)2、-op(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2、-op(＝o)2n(rbb)2、-p(＝o)(nrbb)2、-op(＝o)(nrbb)2、-nrbbp(＝o)(orcc)2、-nrbbp(＝o)(nrbb)2、-p(rcc)2、-p(rcc)3、-op(rcc)2、-op(rcc)3、-b(raa)2、-b(orcc)2、-braa(orcc)、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；或碳原子上的两个偕位氢被基团＝o、＝s、＝nn(rbb)2、＝nnrbbc(＝o)raa、＝nnrbbc(＝o)oraa、＝nnrbbs(＝o)2raa、＝nrbb、或＝norcc替代；raa的每种情况独立选自c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个raa基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rbb的每种情况独立选自氢、-oh、-oraa、-n(rcc)2、-cn、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)2n(rcc)2、-p(＝o)(nrcc)2、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个rbb基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rcc的每种情况独立选自氢、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个rcc基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rdd的每种情况独立选自卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-so3h、-oh、-oree、-on(rff)2、-n(rff)2、-n(rff)3+x、-n(oree)rff、-sh、-sree、-ssree、-c(＝o)ree、-co2h、-co2ree、-oc(＝o)ree、-oco2ree、-c(＝o)n(rff)2、-oc(＝o)n(rff)2、-nrffc(＝o)ree、-nrffco2ree、-nrffc(＝o)n(rff)2、-c(＝nrff)oree、-oc(＝nrff)ree、-oc(＝nrff)oree、-c(＝nrff)n(rff)2、-oc(＝nrff)n(rff)2、-nrffc(＝nrff)n(rff)2,-nrffso2ree、-so2n(rff)2、-so2ree、-so2oree、-oso2ree、-s(＝o)ree、-si(ree)3、-osi(ree)3、-c(＝s)n(rff)2、-c(＝o)sree、-c(＝s)sree、-sc(＝s)sree、-p(＝o)2ree、-p(＝o)(ree)2、-op(＝o)(ree)2、-op(＝o)(oree)2、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3-10元杂环基、c6-10芳基、5-10元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团，或两个偕位rdd取代基可连接以形成＝o或＝s；ree的每种情况独立选自c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、c6-10芳基、3-10元杂环基和3-10元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团；rff的每种情况独立选自氢、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3-10元杂环基、c1-6芳基和5-10元杂芳基，或两个rff基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团；且rgg的每种情况独立地为，卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-so3h、-oh、-o1-6烷基、-on(c1-6烷基)2、-n(c1-6烷基)2、-n(c1-6烷基)3+x-、-nh(c1-6烷基)2+x-、-nh2(c1-6烷基)+x-、-nh3+x、-n(oc1-6烷基)(c1-6烷基)、-n(oh)(c1-6烷基)、-nh(oh)、-sh、-s1-6烷基、-ss(c1-6烷基)、-c(＝o)(c1-6烷基)、-co2h、-co2(c1-6烷基)、-oc(＝o)(c1-6烷基)、-oco2(c1-6烷基)、-c(＝o)nh2、-c(＝o)n(c1-6烷基)2、-oc(＝o)nh(c1-6烷基)、-nhc(＝o)(c1-6烷基)、-n(c1-6烷基)c(＝o)(c1-6烷基)、-nhco2(c1-6烷基)、-nhc(＝o)n(c1-6烷基)2、-nhc(＝o)nh(c1-6烷基)、-nhc(＝o)nh2、-c(＝nh)o(c1-6烷基)、-oc(＝nh)(c1-6烷基)、-oc(＝nh)oc1-6烷基、-c(＝nh)n(c1-6烷基)2、-c(＝nh)nh(c1-6烷基)、-c(＝nh)nh2、-oc(＝nh)n(c1-6烷基)2、-oc(nh)nh(c1-6烷基)、-oc(nh)nh2、-nhc(nh)n(c1-6烷基)2、-nhc(＝nh)nh2、-nhso2(c1-6烷基)、-so2n(c1-6烷基)2、-so2nh(c1-6烷基)、-so2nh2,-so2c1-6烷基、-so2oc1-6烷基、-oso2c1-6烷基、-soc1-6烷基、-si(c1-6烷基)3、-osi(c1-6烷基)3-c(＝s)n(c1-6烷基)2、c(＝s)nh(c1-6烷基)、c(＝s)nh2、-c(＝o)s(c1-6烷基)、-c(＝s)sc1-6烷基、-sc(＝s)sc1-6烷基、-p(＝o)2(c1-6烷基)、-p(＝o)(c1-6烷基)2、-op(＝o)(c1-6烷基)2、-op(＝o)(oc1-6烷基)2、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、c6-10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基；或两个偕位rgg取代基可连接以形成＝o或＝s；其中x为抗衡离子。“抗衡离子”或“阴离子抗衡离子”为与阳离子季氨基相缔合以保持电中性的带负电荷的基团。示例性的抗衡离子包括卤素离子(如f–、cl–、br–、i–)、no3–、clo4–、oh–、h2po4–、hso4–、so4–2、磺酸根离子(如甲磺酸根、三氟甲磺酸根、对甲苯磺酸根、苯磺酸根、10–樟脑磺酸根、萘–2–磺酸根、萘–1–磺酸–5–磺酸根、乙烷–1–磺酸–2–磺酸根等)和羧酸根离子(如醋酸根、乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、乳酸根、酒石酸根、羟乙酸根等)。"卤代"或"卤素"是指氟(氟代、-f)、氯(氯代、-ci)、溴(溴代、-br)、或碘(碘代、-i)。只要化合价允许，氮原子可为取代或未取代的，且包括伯氮、仲氮、叔氮和季氮原子。示例性的氮原子取代基包括但不限于，氢、-oh、-oraa、-n(rcc)2、-cn、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)2n(rcc)2、-p(＝o)(nrcc)2、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或连接至氮原子的两个rcc基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团，且其中raa、rbb、rcc和rdd如上定义。在某些实施方案中，氮原子上存在的取代基为氮保护基(也称为氨基保护基)。氮保护基包括，但不限于，-oh、-oraa、-n(rcc)2、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrcc)raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、c1-10烷基{例如、芳烷基、杂芳烷基)、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基基团，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳烷基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个r基团，且其中raa、rbb、rcc和rdd如本文所定义。氮保护基是本领域众所周知的且包括protectinggroupsinorganicsynthesis,t.w.greeneandp.g.m.wuts,第3版,johnwiley&sons,1999中所述的那些，在此引入作为参考。酰胺氮保护基(例如，-c(＝o)raa)包括，但不限于，甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯基乙酰胺、3-苯基丙酰胺、吡啶酰胺、3-吡啶基甲酰胺、n-苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、苯甲酰胺、对苯基苯甲酰胺、邻硝基苯基乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、乙酰乙酰胺、(n'-二硫基苄基氧基酰基氨基)乙酰胺、3-{对-羟基苯基)丙酰胺、3-(邻-硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻-苯偶氮基苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻-硝基肉桂酰胺、n-乙酰基甲硫氨酸、邻硝基苯甲酰胺、和邻-(苯甲酰基氧基甲基)苯甲酰胺。氨基甲酸酯氮保护基(例如，-c(＝o)oraa)包括，但不限于，氨基甲酸甲基酯、氨基甲酸乙基酯、氨基甲酸9-芴基甲基酯(fmoc)、氨基甲酸9-(2-磺基)芴基甲基酯、氨基甲酸9-(2,7-二溴)芴基甲基酯、氨基甲酸2,7-二-叔丁基-[9-(10,10-二氧代-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲基酯(dbd-tmoc)、氨基甲酸4-甲氧基苯甲酰甲基酯(phenoc)、氨基甲酸2,2,2-三氯乙基酯(troc)、氨基甲酸2-三甲基甲硅烷基乙基酯(teoc)、氨基甲酸2-苯基乙基酯(hz)、氨基甲酸1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基酯(adpoc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2-卤代乙基酯、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2-二溴乙基酯(db-t-boc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基酯(tcboc)、氨基甲酸1-甲基-1-(4-联苯基)乙基酯(bpoc)、氨基甲酸1-(3,5-二-叔丁基苯基)-1-甲基乙基酯(t-bumeoc)、氨基甲酸2-(2’-和4’-吡啶基)乙基酯(pyoc)、氨基甲酸2-(n,n-二环己基甲酰胺基)乙基酯、氨基甲酸叔丁基酯(boc)、氨基甲酸1-金刚烷基酯(adoc)、氨基甲酸乙烯基酯(voc)、氨基甲酸烯丙基酯(alloc)、氨基甲酸1-异丙基烯丙基酯(ipaoc)、氨基甲酸肉桂基酯(coc)、氨基甲酸4-硝基肉桂基酯(noc)、氨基甲酸8-喹啉基酯、氨基甲酸n-羟基哌啶基酯、氨基甲酸烷基二硫基酯、氨基甲酸苄基酯(cbz)、氨基甲酸对甲氧基苄基酯(moz)、氨基甲酸对硝基苄基酯、氨基甲酸对溴苄基酯、氨基甲酸对氯苄基酯、氨基甲酸2,4-二氯苄基酯、氨基甲酸4-甲基亚磺酰基苄基酯(msz)、氨基甲酸9-蒽基甲基酯、氨基甲酸二苯基甲基酯、氨基甲酸2-甲基硫基乙基酯、氨基甲酸2-甲基磺酰基乙基酯、氨基甲酸2-(对甲苯磺酰基)乙基酯、氨基甲酸[2-(1,3-二噻烷基)]甲基酯(dmoc)、氨基甲酸4-甲基噻吩基酯(mtpc)、氨基甲酸2,4-二甲基噻吩基酯(bmpc)、氨基甲酸2-磷基乙基酯(peoc)、氨基甲酸2-三苯基磷基异丙基酯(ppoc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2-氰基乙基酯、氨基甲酸间氯-对酰基氧基苄基酯、氨基甲酸对(二羟基硼基)苄基酯、氨基甲酸5-苯并异噁唑基甲基酯、氨基甲酸2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基酯(tcroc)、氨基甲酸间硝基苯基酯、氨基甲酸3,5-二甲氧基苄基酯、氨基甲酸邻硝基苄基酯、氨基甲酸3,4-二甲氧基-6-硝基苄基酯、氨基甲酸苯基(邻硝基苯基)甲基酯、氨基甲酸叔戊基酯、氨基硫代甲酸s-苄基酯、氨基甲酸对氰基苄基酯、氨基甲酸环丁基酯、氨基甲酸环己基酯、氨基甲酸环戊基酯、氨基甲酸环丙基甲基酯、氨基甲酸对癸基氧基苄基酯、氨基甲酸2,2-二甲氧基酰基乙烯基酯、氨基甲酸邻(n,n-二甲基甲酰胺基)苄基酯、氨基甲酸1,1-二甲基-3-(n,n-二甲基甲酰胺基)丙基酯、氨基甲酸1,1-二甲基丙炔基酯、氨基甲酸二(2-吡啶基)甲基酯、氨基甲酸2-呋喃基甲基酯、氨基甲酸2-碘乙基酯、氨基甲酸异冰片基酯、氨基甲酸异丁基酯、氨基甲酸异烟酰基酯、氨基甲酸p-(p’-甲氧基苯偶氮基)苄基酯、氨基甲酸1-甲基环丁基酯、氨基甲酸1-甲基环己基酯、氨基甲酸1-甲基-1-环丙基甲基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(对苯偶氮基苯基)乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-苯基乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基酯、氨基甲酸苯基酯、氨基甲酸对(苯偶氮基)苄基酯、氨基甲酸2,4,6-三-叔丁基苯基酯、氨基甲酸4-(三甲基铵)苄基酯和氨基甲酸2,4,6-三甲基苄基酯。磺酰胺氮保护基(例如，-s(＝o)2raa)包括，但不限于，对甲苯磺酰胺(ts)、苯磺酰胺、2,3,6,-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(imds)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰胺(pmc)、甲烷磺酰胺(ms)、β-三甲基甲硅烷基乙烷磺酰胺(ses)、9-蒽磺酰胺、4-(4’,8’-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(dnmbs)、苄基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺和苯甲酰甲基磺酰胺。其它氮保护基包括，但不限于，吩噻嗪基-(10)-酰基衍生物、n’-对甲苯磺酰基氨基酰基衍生物、n’-苯基氨基硫代酰基衍生物、n-苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、n-乙酰基蛋氨酸衍生物、4,5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、n-邻苯二甲酰亚胺、n-二硫代琥珀酰亚胺(dts)、n-2,3-二苯基马来酰亚胺、n-2,5-二甲基吡咯、n-1,1,4,4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物(stabase)、5-取代的1,3-二甲基-1,3,5-三氮杂环己-2-酮、5-取代的1,3-二苄基-1,3,5-三氮杂环己-2-酮、1-取代的3,5-二硝基-4-吡啶酮、n-甲基胺、n-烯丙基胺、n-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺(sem)、n-3-乙酰氧基丙基胺、n-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯烷-3-基)胺、季铵盐、n-苄基胺、n-二(4-甲氧基苯基)甲基胺、n-5-二苯并环庚三烯基胺、n-三苯基甲基胺(tr)、n-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(mmtr)、n-9-苯基芴基胺(phf)、n-2,7-二氯-9-芴基亚甲基胺、n-二茂铁基甲基氨基(fcm)、n-2-吡啶甲基氨基n’-氧化物、n-1,1-二甲基硫基亚甲基胺、n-亚苄基胺、n-对甲氧基亚苄基胺、n-二苯基亚甲基胺、n-[(2-吡啶基)基]亚甲基胺、n-(n’,n’-二甲基氨基亚甲基)胺、n,n’-亚异丙基二胺、n-对硝基亚苄基胺、n-亚水杨基胺、n-5-氯亚水杨基胺、n-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基胺、n-亚环己基胺、n-(5,5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺、n-硼烷衍生物、n-二苯基硼酸衍生物、n-[苯基(五酰基铬-或钨)酰基]胺、n-铜螯合物、n-锌螯合物、n-硝基胺、n-亚硝胺、胺n-氧化物、二苯基膦酰胺(dpp)、二甲基硫代膦酰胺(mpt)、二苯基硫代膦酰胺(ppt)、二烷基氨基磷酸酯、二苄基氨基磷酸酯、二苯基氨基磷酸酯、苯亚磺酰胺、邻硝基苯亚磺酰胺(nps)、2,4-二硝基苯亚磺酰胺、五氯苯亚磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯亚磺酰胺、三苯基甲基亚磺酰胺和3-硝基吡啶亚磺酰胺(npys)。在一些实施方案中，存在于氧原子上的取代基为氧保护基(也称作羟基保护基)。氧保护基包括，但不限于，-raa、-n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝o)raa、-co2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-s(＝o)raa、-so2raa、-si(raa)3、-p(rcc)2、-p(rcc)3、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2和-p(＝o)(nrbb)2，其中raa、rbb和rcc如本文所定义。氧保护基是本领域中公知的且包括在protectinggroupsinorganicsynthesis，t.w.greene和p.g.m.wuts，第3版，johnwiley&sons，1999中详细描述的那些，将该文献通过参考引入本文中。示例性的氧保护基包括，但不限于，甲基、甲氧基甲基(mom)、甲基硫基甲基(mtm)、叔丁基硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(smom)、苄基氧基甲基(bom)、对甲氧基苄基氧基甲基(pmbm)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(对-aom)、愈创木酚甲基(gum)、叔丁氧基甲基、4-戊烯基氧基甲基(pom)、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(mem)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、二(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(semor)、四氢吡喃基(thp)、3-溴代四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基(mthp)、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基s,s-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(ctmp)、1,4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-甲桥苯并呋喃(methanobenzofuran)-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苄基氧基乙基、1-甲基-1-苄基氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基氢硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苄基(bn)、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基、对苯基苄基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基n-氧化物、二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚三烯基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4′-溴代苯甲酰基氧基苯基)二苯基甲基、4,4′,4″-三(4,5-二氯苯二酰亚氨基苯基)甲基、4,4′,4″-三(乙酰丙酰基氧基苯基)甲基、4,4′,4″-三(苯甲酰基氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)二(4′,4″-二甲氧基苯基)甲基、1,1-二(4-甲氧基苯基)-1′-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二硫杂噻吩(disulfuran)-2-基、苯并异噻唑基s,s-二氧化物、三甲基甲硅烷基(tms)、三乙基甲硅烷基(tes)、三异丙基甲硅烷基(tips)、二甲基异丙基甲硅烷基(ipdms)、二乙基异丙基甲硅烷基(deips)、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)、叔丁基二苯基甲硅烷基(tbdps)、三苄基甲硅烷基、三-对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(dpms)、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(tbmps)、甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-戊酮酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(亚乙基二硫基)戊酸酯(乙酰丙酰基二硫缩醛)、新戊酸酯、金刚酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(酸酯(mesitoate))、叔丁基碳酸酯(boc)、烷基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(fmoc)、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2-三氯乙基碳酸酯(troc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯(tmsec)、2-(苯基磺酰基)乙基碳酸酯(psec)、2-(三苯基磷基)乙基碳酸酯(peoc)、烷基异丁基碳酸酯、烷基乙烯基碳酸酯、烷基烯丙基碳酸酯、烷基对硝基苯基碳酸酯、烷基苄基碳酸酯、烷基对甲氧基苄基碳酸酯、烷基3,4-二甲氧基苄基碳酸酯、烷基邻硝基苄基碳酸酯、烷基对硝基苄基碳酸酯、烷基s-苄基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基碳酸酯、甲基二硫代碳酸酯、2-碘代苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲基硫基甲氧基)乙基、4-(甲基硫基甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-二(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(e)-2-甲基-2-丁烯酸酯、o-(甲氧基酰基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基n,n,n’,n’-四甲基磷酰二胺酯(phosphorodiamidate)、烷基n-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基膦基亚硫酰基、烷基2,4-二硝基苯基次磺酸酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苄基磺酸酯和甲苯磺酸酯(ts)。在某些实施方案中，存在于硫原子上的取代基为硫保护基(也称作硫醇保护基)。硫保护基包括，但不限于，-raa、-n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝o)raa、-co2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-s(＝o)raa、-so2raa、-si(raa)3-p(rcc)2、-p(rcc)3、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2和-p(＝o)(nrbb)2，其中raa、rbb和rcc如本文所定义。硫保护基是本领域中公知的并且包括在protectinggroupsinorganicsynthesis，t.w.greene和p.g.m.wuts，第3版，johnwiley&sons，1999中详细描述的那些，将该文献通过参考引入本文中。“药学上可接受的盐”是指那些在合理的医学判断范围内适用于与人和其它动物的组织接触而没有过多毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的利益/风险比相称的盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，berge等人在j.pharmaceuticalsciences(1977)66:1–19中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自适当的无机和有机酸和无机和有机碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐或使用本领域使用的其他方法(例如离子交换)形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、双葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。衍生自适当的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和n+(c1-4烷基)4-盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。当合适时，其他药学上可接受的盐包括季铵盐。本发明提供i型prmt抑制剂。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为式(i)的化合物:或其药学上可接受的盐，其中x为n，z为nr4，且y为cr5；或x为nr4，z为n，且y为cr5；或x为cr5，z为nr4，且y为n；或x为cr5，z为n，且y为nr4；rx为任选取代的c1-4烷基或任选取代的c3-4环烷基；l1为键、-o-、-n(rb)-、-s-、-c(o)-、-c(o)o-、-c(o)s-、-c(o)n(rb)-、-c(o)n(rb)n(rb)-、-oc(o)-、-oc(o)n(rb)-、-nrbc(o)-、-nrbc(o)n(rb)-、-nrbc(o)n(rb)n(rb)-、-nrbc(o)o-、-sc(o)-、-c(＝nrb)-、-c(＝nnrb)-、-c(＝nora)-、-c(＝nrb)n(rb)-、-nrbc(＝nrb)-、-c(s)-、-c(s)n(rb)-、-nrbc(s)-、-s(o)-、-os(o)2-、-s(o)2o-、-so2-、-n(rb)so2-、-so2n(rb)-、或任选取代的c1-6饱和或不饱和烃链，其中该烃链的一个或多个亚甲基单元任选且独立被以下替代：-o-、-n(rb)-、-s-、-c(o)-、-c(o)o-、-c(o)s-、-c(o)n(rb)-、-c(o)n(rb)n(rb)-、-oc(o)-、-oc(o)n(rb)-、-nrbc(o)-、-nrbc(o)n(rb)-、-nrbc(o)n(rb)n(rb)-、-nrbc(o)o-、-sc(o)-、-c(＝nrb)-、-c(＝nnrb)-、-c(＝nora)-、-c(＝nrb)n(rb)-、-nrbc(＝nrb)-、-c(s)-、-c(s)n(rb)-、-nrbc(s)-、-s(o)-、-os(o)2-、-s(o)2o-、-so2-、-n(rb)so2-、或-so2n(rb)-；各个ra独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、连接至氧原子时的氧保护基和连接至硫原子时的硫保护基；各个rb独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和氮保护基，或相同氮原子上的rb和rw可与介于其中间的氮一起形成任选取代的杂环；rw为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；条件是当l1为键时，rw不为氢、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；r3为氢、c1-4烷基、或c3-4环烷基；r4为氢、任选取代的c1-6烷基、任选取代的c2-6烯基、任选取代的c2-6炔基、任选取代的c3-7环烷基、任选取代的4-至7-元杂环基；或任选取代的c1-4烷基-cy；cy为任选取代的c3-7环烷基、任选取代的4-至7-元杂环基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；且r5为氢、卤素、-cn、任选取代的c1-4烷基、或任选取代的c3-4环烷基。在一方面，r3为c1-4烷基。在一方面，r3为甲基。在一方面，r4为氢。在一方面，r5为氢。在一方面，l1为键。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为式(i)的化合物，其中-l1-rw为任选取代的碳环基。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为式(v)的化合物或其药学上可接受的盐，其中环a为任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基。在一方面，环a为任选取代的碳环基。在一方面，r3为c1-4烷基。在一方面，r3为甲基。在一方面，rx为未取代的c1-4烷基。在一方面，rx为甲基。在一方面，l1为键。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为式(vi)的化合物或其药学上可接受的盐。在一方面，环a为任选取代的碳环基。在一方面，r3为c1-4烷基。在一方面，r3为甲基。在一方面，rx为未取代的c1-4烷基。在一方面，rx为甲基。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为式(ii)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，-l1-rw为任选取代的碳环基。在一方面，r3为c1-4烷基。在一方面，r3为甲基。在一方面，rx为未取代的c1-4烷基。在一方面，rx为甲基。在一方面，r4为氢。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物a:或其药学上可接受的盐。化合物a和制备化合物a的方法公开于pct/us2014/029710，至少在第171页(化合物158)和第266页，第[00331]段。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物a-三-hcl，其为化合物a的三hcl盐形式。在另一实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物a-单-hcl，其为化合物a的单hcl盐形式。在另一实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物a-游离碱，其为化合物a的游离碱形式。在另一实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物a-二-hcl，其为化合物a的二hcl盐形式。在一个实施方案中，所述i型prmt抑制剂为化合物d:或其药学上可接受的盐。i型prmt抑制剂进一步公开在pct/us2014/029710中，其通过引用并入本文。示例性的i型prmt抑制剂公开于pct/us2014/029710的表1a和表1b中，且制备i型prmt抑制剂的方法至少描述于pct/us2014/029710的第226页第[00274]段至第328页第[00050]段中。“抗原结合蛋白(abp)”是指结合抗原的蛋白质，包括以与抗体相似的方式起作用的抗体或工程化分子。此类供选抗体形式包括三链抗体、四链抗体、微型抗体和微抗体。还包括替代性支架，其中根据本发明的任何分子的一个或多个cdr可以排列在合适的非免疫球蛋白蛋白质支架或骨架上，例如亲和体、spa支架、ldl受体a类结构域、avimer(参见，例如，美国专利申请公开号2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301)或egf结构域。abp还包括此类抗体或其他分子的抗原结合片段。此外，abp可以包含本发明的vh区，当与适当的轻链配对时，其成形为全长抗体、(fab’)2片段、fab片段、双特异性或双互补位(biparatopic)分子或其等同物(如scfv，双链抗体、三链抗体或四链抗体、tandabs，等)。abp可包含抗体，其为igg1、igg2、igg3或igg4；或igm；iga、ige或igd或其修饰变体。可以相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定域可以是κ或λ恒定域。abp也可以是wo86/01533中所述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区和非免疫球蛋白区。术语“abp”、“抗原结合蛋白”和“结合蛋白”在本文中可互换使用。蛋白质程序性死亡受体1(pd-1)是cd28受体家族的抑制成员，其还包括cd28、ctla-4、icos和btla。pd-1在活化的b细胞、t细胞和骨髓细胞上表达(agata等人，同上；okazaki等人(2002)curr.opin.immunol14:391779-82；bennett等人(2003)jimmunol170:711-8)。该家族的初始成员cd28和icos是通过添加单克隆抗体后增强t细胞增殖的功能性作用而发现的(hutloff等人(1999)nature397:263-266；hansen等人(1980)immunogenics10:247-260)。通过筛选凋亡细胞中的差异表达来发现pd-1(ishida等人(1992)emboj11:3887-95)。该家族的其他成员，ctla-4和btla，通过分别筛选细胞毒性t淋巴细胞和th1细胞中的差异表达来发现。cd28、icos和ctla-4都具有未配对的半胱氨酸残基，允许同源二聚化。相反，暗示pd-1作为单体存在，缺乏其他cd28家族成员中未配对的半胱氨酸残基特征。pd-1抗体和用于治疗疾病的方法描述于美国专利号：us7,595,048；us8,168,179；us8,728,474；us7,722,868；us8,008,449；us7,488,802；us7,521,051；us8,088,905；us8,168,757；us8,354,509；和美国公开号us20110171220；us20110171215；和us20110271358。ctla-4和pd-1抗体的组合描述于美国专利号9,084,776中。如本文所用，“pd-1拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的pd-l1与免疫细胞(t细胞、b细胞或nkt细胞)上表达的pd-1结合的任何化学化合物或生物分子，并且优选还阻断癌细胞上表达的pd-l2与免疫细胞表达的pd-1的结合。pd-1及其配体的替代名称或同义词包括：对于pd-1的pdcd1、pd1、cd279和sleb2；对于pd-l1的pdcd1l1、pdl1、b7h1、b7-4、cd274和b7-h；和对于pd-l2的pdcd1l2、pdl2、b7-dc、btdc和cd273。人pd-1氨基酸序列可以在ncbi基因座号(locusno.)：np_005009中找到。人pd-l1和pd-l2氨基酸序列可分别在ncbi基因座号：np_054862和np_079515中找到。可用于本发明任何方面的pd-1拮抗剂包括单克隆抗体(mab)或其抗原结合片段，其特异性结合pd-1或pd-l1，并且优选特异性结合人pd-1或人pd-l1。mab可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自igg1、igg2、igg3和igg4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是igg1或igg4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自fab、fab'-sh、f(ab')2、scfv和fv片段。结合人pd-1并且可用于本发明的各个方面和实施方案的mab的实例描述于美国专利号8,552,154；美国专利号8,354,509；美国专利号8,168,757；美国专利号8,008,449；美国专利号7,521,051；美国专利号7,488,802；wo2004072286；wo2004056875；和wo2004004771。可用于本发明任何方面和实施方案的其他pd-1拮抗剂包括特异性结合pd-1的免疫粘附素，并且优选特异性结合人pd-1，例如含有细胞外或pd-l1或pd-l2的pd-1结合部分的融合蛋白，其与免疫球蛋白分子的恒定区如fc区融合。在wo2010027827和wo2011066342中描述了特异性结合pd-1的免疫粘附素分子的实例。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作pd-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括amp-224(也称为b7-dcig)，其是pd-l2-fc融合蛋白并且与人pd-1结合。纳武单抗是一种人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。纳武单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。纳武单抗通过其配体pd-l1和pd-l2结合并阻断pd-1(ig超家族跨膜蛋白)的活化，导致t细胞的活化和针对肿瘤细胞或病原体的细胞介导的免疫应答。活化的pd-1通过抑制p13k/akt途径激活来负调节t细胞活化和效应功能。纳武单抗的其他名称包括：bms-936558、mdx-1106和ono-4538。纳武单抗的氨基酸序列以及使用和制备方法公开于美国专利us8,008,449中。派姆单抗为人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。派姆单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。派姆单抗的氨基酸序列和使用方法公开于美国专利号8,168,757。pd-l1是b7家族成员，其在许多细胞类型上表达，包括apc和活化的t细胞(yamazaki等人(2002)j.immunol.169:5538)。pd-l1与pd-1和b7-1结合。通过pd-l1结合t细胞表达的b7-1和通过b7-1结合t细胞表达的pd-l1都导致t细胞抑制(butte等人(2007)immunity27:111)。还有证据表明，与其他b7家族成员一样，pd-l1也可以向t细胞提供共刺激信号(subudhi等人(2004)j.clin.invest.113:694；tamura等人(2001)blood97:1809)。作为pd-1的配体的pd-l1(人pd-l1cdna由embl/genbank登录号af233516所示的碱基序列组成，小鼠pd-l1cdna由nm.sub.--021893所示的碱基序列组成)在所谓的抗原呈递细胞如活化的单核细胞和树突细胞中表达(journalofexperimentalmedicine(2000)，第19卷，第7期，第1027-1034页)。这些细胞呈递相互作用分子，其向t淋巴细胞诱导多种免疫诱导信号，并且pd-l1是这些分子中的一种，其通过pd-1诱导抑制信号。已经揭示pd-l1配体刺激抑制了表达pd-1的t淋巴细胞的活化(细胞增殖且诱导各种细胞因子产生)。pd-l1表达不仅在免疫活性细胞中得到证实，而且在某种肿瘤细胞系中得到证实(来自单核细胞白血病的细胞系，来自肥大细胞的细胞系，来自肝癌的细胞系，来自成神经细胞的细胞系，和来自乳腺癌的细胞系)(natureimmunology(2001)，第2卷，第3期，第261-267页)。抗pd-l1抗体及其制备方法是本领域已知的。这种针对pd-l1的抗体可以是多克隆的或单克隆的，和/或重组的，和/或人源化的。pd-l1抗体作为用于治疗癌症的免疫调节剂正在开发中。示例性pd-l1抗体公开于美国专利号9,212,224；美国专利号8,779,108；美国专利no8,552,154；美国专利号8,383,796；美国专利号8,217,149；美国专利公开号20110280877；wo2013079174；和wo2013019906。pd-l1(也称为cd274或b7-h1)的其它示例性抗体和使用方法公开于美国专利号8,168,179；美国专利号7,943,743；美国专利号7,595,048；wo2014055897；wo2013019906；和wo2010077634。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的pd-1拮抗剂的特异性抗人pd-l1单克隆抗体包括mpdl3280a、bms-936559、medi4736、msb0010718c。阿特珠单抗为完全人源化单克隆抗pd-l1抗体，以tecentriqtm商购。阿特珠单抗适用于治疗一些局部晚期或转移性尿路上皮癌。阿特珠单抗阻断pd-l1与pd-1和cd80的相互作用。cd134，也称为ox40，是受体的tnfr-超家族的成员，与cd28不同，其在静息的幼稚t细胞上不组成型表达。ox40是次级共刺激分子，在激活后24至72小时表达；其配体ox40l也不在静息抗原呈递细胞上表达，而是在其活化后表达。ox40的表达依赖于t细胞的完全活化；没有cd28，ox40的表达被延迟并且水平降低至四分之一。ox40/ox40-配体(ox40受体)/(ox40l)是一对对t细胞增殖、存活、细胞因子产生和记忆细胞生成至关重要的共刺激分子。早期体外实验证明，通过ox40在cd4+t细胞上的信号转导导致th2，但不导致th1发育。这些结果得到了体内研究的支持，这些研究表明阻断ox40/ox40l相互作用阻止了th2介导的过敏性免疫应答的诱导和维持。然而，阻断ox40/ox40l相互作用可改善或预防th1介导的疾病。此外，可溶性ox40l的施用或ox40l基因转移到肿瘤中显示出强烈增强小鼠的抗肿瘤免疫力。最近的研究还表明，ox40/ox40l可能在促进cd8t细胞介导的免疫反应中发挥作用。如本文所讨论的，ox40信号转导阻断cd4+cd25+天然存在的调节性t细胞的抑制功能，并且ox40/ox40l对在外周免疫相对于耐受性的全局调节中起关键作用。ox-40抗体、ox-40融合蛋白及其使用方法公开于美国专利号：us7,504,101；us7,758,852；us7,858,765；us7,550,140；us7,960,515；和us9,006,399和国际公开：wo2003082919；wo2003068819；wo2006063067；wo2007084559；wo2008051424；wo2012027328；和wo2013028231。本文中，本发明的抗原结合蛋白(abp)或抗ox40抗原结合蛋白是结合ox40的蛋白，并且在一些实施方案中，进行以下一种或多种：通过ox40调节信号转导，调节ox40的功能，激动ox40信号转导，刺激ox40功能，或共刺激ox40信号转导。美国专利9,006,399的实施例1公开了ox40结合试验。本领域技术人员将容易地认识到建立这些功能的各种其他熟知的测定法。在一个实施方案中，所述ox40抗原结合蛋白为wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的蛋白。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的cdr，或与公开的cdr序列具有90％同一性的cdr。在另一实施方案中所述抗原结合蛋白包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的vh、vl或这二者，或与公开的vh或vl序列具有90％同一性的vh或vl。在另一实施方案中，所述ox40抗原结合蛋白公开于wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的cdr，或与公开的cdr序列具有90％同一性的cdr。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的vh、vl或这二者，或与公开的vh或vl序列具有90％同一性的vh或vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含本文图28至39所示的cdr或vh或vl序列或与其具有90％同一性的序列中的一种或多种。在一个实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含以下cdr任一种或其组合:cdrh1：dysmh(seqidno:1)cdrh2：wintetgeptyaddfkg(seqidno:2)cdrh3：pyydyvsyyamdy(seqidno:3)cdrl1：kasqdvstava(seqidno:7)cdrl2：sasylyt(seqidno:8)cdrl3：qqhystprt(seqidno:9)在一些实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:5具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的重链可变区。人源化重链(vh)可变区:qvqlvqsgselkkpgasvkvsckasgytftdysmhwvrqapgqglkwmgwintetgeptyaddfkgrfvfsldtsvstaylqisslkaedtavyycanpyydyvsyyamdywgqgttvtvss(seqidno:5)在本发明一个实施方案中，所述ox40abp或抗体在具有seqidno:11所述的氨基酸序列的轻链可变区包含cdrl1(seqidno:7)、cdrl2(seqidno:8)和cdrl3(seqidno:9)。在一些实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:11所述的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:5的重链可变区和seqidno:11的轻链可变区。人源化轻链(vl)可变区diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvstavawyqqkpgkapklliysasylytgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqhystprtfgqgtkleik(seqidno:11)在一些实施方案中，所述本发明的ox40结合蛋白包含与seqidno:11所述的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:11具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含以下cdr任一种或其组合:cdrh1：shdms(seqidno:13)cdrh2：ainsdggstyypdtmer(seqidno:14)cdrh3：hyddyyawfay(seqidno:15)cdrl1：rasksvstsgysymh(seqidno:19)cdrl2：lasnles(seqidno:20)cdrl3：qhsrelplt(seqidno:21)在一些实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有与seqidno:17至少90％序列同一性的重链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:17具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的重链可变区。人源化重链(vh)可变区:evqlvesggglvqpggslrlscaaseyefpshdmswvrqapgkglelvaainsdggstyypdtmerrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarhyddyyawfaywgqgtmvtvss(seqidno:17)在本发明一个实施方案中所述ox40abp或抗体在具有seqidno:23所述的氨基酸序列的轻链可变区包含cdrl1(seqidno:19)、cdrl2(seqidno:20)和cdrl3(seqidno:21)。在一些实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:23所述的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:17的重链可变区和seqidno:23的轻链可变区。人源化轻链(vl)可变区eivltqspatlslspgeratlscrasksvstsgysymhwyqqkpgqaprlliylasnlesgvparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqhsrelpltfgggtkveik(seqidno:23)在一些实施方案中，所述本发明的ox40结合蛋白包含与seqidno:23所述的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:23具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的轻链可变区。cdr或最小结合单元可以通过至少一个氨基酸取代、删除或添加来修饰，其中变体抗原结合蛋白基本上保留未修饰蛋白的生物学特征，例如包含seqidno：5和seqidno:11的抗体或包含seqidno：17和seqidno：23的抗体。应当理解，cdrh1、h2、h3、l1、l2、l3中的每一个可以以任何排列或组合单独修饰或与任何其他cdr组合修饰。在一个实施方案中，通过取代、删除或添加至多3个氨基酸(例如1或2个氨基酸，例如1个氨基酸)来修饰cdr。通常，修饰是取代，特别是保守取代，例如如下表1中所示。表1侧链成员疏水的met，ala，val，leu，ile中性亲水的cys，ser，thr酸性asp，glu碱性asn，gln，his，lys，arg影响链取向的残基gly，pro芳族trp，tyr，phe在一个实施方案中，本发明的abp或抗体包含106-222抗体的cdr，例如，如本发明图28-29所示，例如，具有如图28所公开的seqidno1、2和3的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3，和例如分别具有seqidno7、8和9的序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3。在一个实施方案中，本发明的abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的106-222、hu106或hu106-222抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含本发明图28-29所示的106-222抗体的vh和vl区，例如，具有seqidno:4的氨基酸序列的vh和如图29所示具有seqidno:10的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含具有本发明图28中seqidno:5的氨基酸序列的vh，和具有本发明图29中seqidno:11的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的hu106-222抗体或106-222抗体或hu106抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体为106-222，hu106-222或hu106，例如，如wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日所公开。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含119-122抗体的cdr，例如，如本发明图32-33所示，例如，分别具有seqidno13、14和15的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的119-122或hu119或hu119-222抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有本发明图32中的seqidno:16的氨基酸序列的vh，和具有本发明图33中的seqidno:22的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有seqidno:17的氨基酸序列的vh和具有seqidno:23的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的119-122或hu119或hu119-222抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体为119-222或hu119或hu119-222抗体，例如，如wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日所公开。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含119-43-1抗体的cdr，例如，如本发明图36-37所示。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含图36-39所示的119-43-1抗体的vh区之一和vl区之一。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体为本发明图36-39公开的119-43-1或119-43-1嵌合体(chimeric)。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体如wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开。在其它实施方案中，该段落所述的abp或抗体的任一个是人源化的。在其它实施方案中，该段落所述的abp或抗体的任一个被设计为制备人源化抗体。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明任何抗ox40abp或抗体的任何小鼠或嵌合序列被改造以制备人源化抗体。在一个实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：(a)包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；(b)包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；(c)包含seqidno.3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；(d)包含seqidno.7的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；(e)包含seqidno.8的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和(f)包含seqidno.9的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：(a)包含seqidno：13的氨基酸序列的重链可变区cdr1；(b)包含seqidno：14的氨基酸序列的重链可变区cdr2；(c)包含seqidno.15的氨基酸序列的重链可变区cdr3；(d)包含seqidno.19的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；(e)包含seqidno.20的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和(f)包含seqidno.21的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：1或13的氨基酸序列的重链可变区cdr1；包含seqidno：2或14的氨基酸序列的重链可变区cdr2；和/或包含seqidno：3或15的氨基酸序列的重链可变区cdr3，或与其具有90％同一性的重链可变区cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：7或19的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；包含seqidno：8或20的氨基酸序列的轻链可变区cdr2和/或包含seqidno：9或21的氨基酸序列的轻链可变区cdr3，或与其具有90％同一性的重链可变区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：10、11、22或23的氨基酸序列的轻链可变区(“vl”)，或与seqidno：10，11，22或23的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含含有seqidno：4、5、16和17的氨基酸序列，或与seqidno：4、5、16和17的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区(“vh”)。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno:5的可变重链序列和seqidno：11的可变轻链序列，或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno:17的可变重链序列和seqidno：23的可变轻链序列或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含由seqidno：12或24的核酸序列或与seqidno：12或24的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变轻链。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno：6或18的核酸序列或与seqidno：6或18的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变重链。本文还提供单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含含有seqidno：10或22的氨基酸序列或与seqidno：10或22的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的可变轻链。还提供单克隆抗体，其包含含有seqidno：4或16的氨基酸序列或与seqidno：4或16的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的可变重链。ctla-4是t细胞表面分子，其最初通过鼠细胞溶解性t细胞cdna文库的差异筛选来鉴定(brunet等人，nature328:267-270(1987))。ctla-4也是免疫球蛋白(ig)超家族的成员；ctla-4包含单个胞外ig结构域。已经在具有细胞毒活性的t细胞群中发现ctla-4转录物，表明ctla-4可能在细胞溶解反应中起作用(brunet等人，以上；brunet等人，immunol.rev.103-(21-36(1988))。研究人员报道了ctla-4(dariavach等人，eur.j.immunol.18:1901-1905(1988))的人类对应物基因的克隆和定位到同一染色体区域(2q33-34)作为cd28(lafage-pochitaloff等人，immunogenetics31:198-201(1990))。该人ctla-4dna与编码cd28蛋白的序列比较揭示了序列的显著同源性，在近膜和细胞质区域中具有最大程度的同源性(brunet等，1988，同上；dariavach等，1988，同上)。yervoy(易普利姆玛)是由bristolmyerssquibb销售的完全人ctla-4抗体。易普利姆玛的蛋白质结构和使用的方法描述于美国专利号6,984,720和7,605,238中。用于本发明的方法合适的抗ctla4抗体包括，但不限于，抗ctla4抗体、人抗ctla4抗体、小鼠抗ctla4抗体、哺乳动物抗ctla4抗体、人源化抗ctla4抗体、单克隆抗ctla4抗体、多克隆抗ctla4抗体、嵌和抗ctla4抗体、易普利姆玛、曲美目单抗、抗cd28抗体、抗ctla4adnectins、抗ctla4结构域抗体、单链抗ctla4片段、重链抗ctla4片段、轻链抗ctla4片段、激动共刺激途径的ctla4抑制剂、pct公开号wo2001/014424公开的抗体、pct公开号wo2004/035607公开的抗体、u.s.公开的申请号us2005/0201994公开的抗体、和授权欧洲专利号ep1212422b1公开的抗体。其它ctla-4抗体描述于u.s.pat.nos.5,811,097、5,855,887、6,051,227和6,984,720；pct公开号wo01/14424和wo00/37504；和u.s.公开号us2002/0039581和us2002/086014。可用于本发明方法的其它抗ctla-4抗体包括，例如，以下公开的那些：wo98/42752；u.s.pat.nos.6,682,736和6,207,156；hurwitz等人，proc.natl.acad.sci.usa，95(17):10067-10071(1998)；camacho等人，j.clin.oncology，22(145):abstractno.2505(2004)(抗体cp-675206)；mokyr等人，癌症res.，58:5301-5304(1998)，和u.s.pat.nos.5,977,318，6,682,736，7,109,003和7,132,281。如本文所用，“免疫调节剂”或“免疫调节试剂”是指包括影响免疫系统的单克隆抗体的任何物质。在一些实施方案中，免疫调节剂或免疫调节试剂上调免疫系统。免疫调节剂可用作抗肿瘤剂用于治疗癌症。例如，免疫调节剂包括但不限于抗pd-1抗体(opdivo/纳武单抗和keytruda/派姆单抗)、抗ctla-4抗体如易普利姆玛(yervoy)、和抗ox40抗体。如本发明所用，术语“激动剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共同信号转导受体接触时引起以下中的一种或多种：(1)刺激或活化icos受体；(2)增强、增加或促进、诱导或延长受体的活性、功能或存在；和/或(3)增强、增加、促进或诱导受体的表达。可以通过本领域已知的各种分析在体外测量激动剂活性，例如但不限于测量细胞信号转导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生。还可以通过测量替代终点(例如但不限于测量t细胞增殖或细胞因子产生)的各种分析在体内测量激动剂活性。如本文所用，术语“拮抗剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共信号受体接触时引起以下一种或多种：(1)通过其天然配体减弱、阻断或灭活受体和/或或阻断受体的活化，(2)减少、降低或缩短受体的活性、功能或存在和/或(3)减少、降低、消除受体的表达。拮抗剂活性可以通过本领域已知的各种测定在体外测量，例如但不限于测量细胞信号转导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生的增加或减少。拮抗剂活性还可以通过测量替代终点的各种测定在体内测量，例如但不限于t细胞增殖或细胞因子产生的测量。如本发明所用，术语“交叉竞争结合”是指将与本发明的任何试剂竞争结合至靶点的试剂如抗体。针对两种抗体之间的结合竞争可以通过本领域已知的各种方法测试，包括流式细胞测量术、mesoscalediscovery和elisa。结合可被直接测量，意味着可以将两种或更多种结合蛋白与共同信号转导受体接触，并且可以测量其中一种或每种蛋白的结合。或者，可以针对结合或天然配体来测试感兴趣的分子的结合，并彼此进行定量比较。术语“抗体”在本发明中就最广义来说是指具有免疫球蛋白样结构域(例如igg、igm、iga、igd或ige)的分子，并且包括单克隆、重组、多克隆、嵌合、人、人源化、多特异性的抗体，包括双特异性抗体和异源缀合抗体；单个可变结构域(例如vh、vhh、vl、结构域抗体(dabtm))、抗原结合抗体片段、fab、f(ab')2、fv、二硫键连接的fv、单链fv、二硫键连接的scfv、双抗体、tandabstm等，以及上述任一种的修改版本(可选的“抗体”形式的综述参见，例如，holliger和hudson，naturebiotechnology，2005，vol23，no.9，1126-1136)。可选择的抗体形式包括可选择骨架，其中抗原结合蛋白的一个或多个cdr可以被排列在合适的非免疫球蛋白骨架或基本部分上，例如亲合体、spa骨架、ldl受体型a型结构域、avimer(参见，例如，美国专利申请公开号2005/0053973，2005/0089932，2005/0164301)或egf结构域。术语“结构域”是指折叠的蛋白质结构，其保留其的三级结构，独立于蛋白质的其余部分。结构域一般是负责蛋白质的离散的功能性质，并且在许多情况下可以被添加、除去或转移到其他蛋白质，而不损失蛋白质和/或结构域的其余部分的功能。术语“单一可变域”是指包含抗体可变域特征序列的折叠多肽结构域。因此，其包括例如vh、vhh和vl的完整抗体可变域以及经修饰的抗体可变域(例如，其中一个或多个环已经被抗体可变域的非特征序列替代)，或已被截短或包含n-或c-末端延伸的抗体可变域，以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变域的折叠片段。单一可变域能够独立结合不同的可变区或可变域的抗原或表位。“域抗体”或“dabtm”可以被认为与“单一可变域”相同。单一可变域可为人的单一可变域，但也包括来自其他物种的单一可变域，如啮齿类铰口鲨和骆驼科vhhdabtm。骆驼科vhh是衍生自包括骆驼，美洲驼，羊驼，单峰骆驼和原驼的物种的免疫球蛋白单一可变域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。这样的vhh结构域可以根据本领域可用的标准技术被人源化，并且这样的结构域被认为是“单一可变域”。如本发明所用，vh包括骆驼科vhh域。可以通过在非抗体蛋白骨架上布置一个或多个cdr来提供抗原结合片段。如本发明所用，“蛋白质骨架”包括但不限于免疫球蛋白(ig)骨架，例如可以是四链或二链抗体的igg骨架，或可仅包含抗体的fc区，或其可以包含来自抗体的一个或多个恒定区，其中该恒定区可以是人或灵长类来源，或者可以是人和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。蛋白质骨架可以是ig骨架，例如igg或iga骨架。igg骨架可以包含抗体的一些或全部结构域(即，ch1、ch2、ch3、vh、vl)。抗原结合蛋白可以包含选自igg1、igg2、igg3、igg4或igg4pe的igg骨架。例如，骨架可以是igg1。骨架可以由抗体的fc区组成或包含抗体的fc区，或者是其一部分。亲和力是一个分子(例如本发明的抗原结合蛋白)与另一分子(例如其目标抗原)在单一结合位点的结合强度。可以通过平衡方法(例如酶联免疫吸附测定(elisa)或放射性免疫测定(ria))或动力学(例如biacoretm分析)来确定抗原结合蛋白与其靶标的结合亲和力。例如，实施例5中描述的biacoretm方法可用于测量结合亲和力。亲合力(avidity)是两个分子在多个位点彼此结合的强度的总和，例如，考虑到相互作用的价数。“分离”是指将该分子，例如抗原结合蛋白或核酸，从发现其的自然界环境中移出。例如，分子可以从与其一起正常存在于自然界中的物质中纯化出来。例如，样品中分子的质量可以是总质量的95％。如本发明所用术语“表达载体”，是指分离的核酸，其可用于将感兴趣的核酸引入细胞(如真核细胞或原核细胞)或无细胞表达系统中，其中感兴趣的核酸序列被表达为肽链，如蛋白质。这样的表达载体可以是例如包含感兴趣的核酸的粘粒、质粒、病毒序列、转座子和线性核酸。一旦将表达载体导入细胞或无细胞表达系统(例如网织红细胞裂解物)中，由感兴趣的核酸编码的蛋白质通过转录/翻译机制产生。本发明范围内的表达载体可为真核或原核表达提供必要的元件，并且包括病毒启动子驱动的载体，例如cmv启动子驱动的载体(例如pcdna3.1、pcep4及其衍生物)、杆状病毒表达载体，果蝇表达载体；以及由哺乳动物基因启动子，如人ig基因启动子驱动的表达载体。其他实例包括原核表达载体，例如t7启动子驱动的载体(例如pet41)、乳糖启动子驱动的载体和阿拉伯糖基因启动子驱动的载体。本领域普通技术人员将认识到许多其它合适的表达载体和表达系统。术语“重组宿主细胞”如本发明所用，是指包含感兴趣的核酸序列的细胞，所述核酸序列在将其引入细胞之前被分离。例如，感兴趣的核酸序列可以是表达载体，而细胞可以是原核的或真核的。示例性真核细胞是哺乳动物细胞，例如但不限于cos-1、cos-7、hek293、bhk21、cho、bsc-1、hepg2、653、sp2/0、ns0、293、hela、骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞或其衍生物。最优选地，真核细胞是hek293、ns0、sp2/0或cho细胞。大肠杆菌是示例性的原核细胞。根据本发明的重组t细胞可以通过转染、细胞融合、永生化或本领域熟知的其它方法产生。转染入细胞的感兴趣的核酸序列，例如表达载体，可以是染色体外的或被稳定整合到细胞染色体中。“嵌合抗体”是指一种工程化抗体，其含有衍生自供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)，其与衍生自受体抗体的轻链和重链恒定区缔合。“人源化抗体”是指具有衍生自非人供体免疫球蛋白的cdr的工程化抗体类型，该分子的其它免疫球蛋白衍生部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支撑残基以保持结合亲和力(参见例如，queen等人，proc.natlacadsciusa,86:10029-10032(1989),hodgson等人，bio/technology,9:421(1991))。根据与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性，可以由常规数据库中选择合适的人受体抗体，例如kabattm数据库、losalamos数据库和swissprotein数据库。特征在于与供体抗体的框架区同源(基于氨基酸)的人抗体可适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区以用于插入供体cdr。可以类似的方式选择能够提供轻链恒定区或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，受体抗体的重链和轻链不需要来源于相同的受体抗体。现有技术描述了生产这种人源化抗体的几种方法-例如参见ep-a-0239400和ep-a-054951。术语“完全人抗体”包括具有源自人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在)的抗体。本发明的人序列抗体可以包括不被人生殖系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变引入的突变，或通过体内体细胞突变引入的突变)。完全人抗体包含仅由最终人类来源的多核苷酸编码的氨基酸序列或与这些序列相同的氨基酸序列。如本发明所述，插入到转基因小鼠中产生的小鼠基因组中的抗体(由编码人免疫球蛋白的dna编码)是完全人抗体，因为它们由最终为人类来源的dna编码。在这种情况下，编码人免疫球蛋白的dna可以在小鼠内重排(以编码抗体)，并且也可能发生体细胞突变。由在小鼠中经历这种变化的人类来源的dna编码的抗体是本发明所指的完全人抗体。使用这样的转基因小鼠使得可以针对人抗原选择完全人抗体。如本领域所理解的，可以使用噬菌体展示技术制备完全人抗体，其中将人dna库插入噬菌体中以产生包含人生殖系dna序列的抗体。术语“供体抗体”是指将其可变区、cdr或其它功能片段或类似物的氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶体的抗体。因此，供体提供了改变的免疫球蛋白编码区，并导致所表达改变的抗体，该表达改变的抗体具有供体抗体的抗原特异性和中和活性特征。术语“受体抗体”是指与供体抗体异源的抗体，其向第一免疫球蛋白配偶体贡献编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的全部(或任何部分)氨基酸序列。人抗体可以是受体抗体。本发明所用的术语“vh”和“vl”分别指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。“cdr”被定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链cdr和三个轻链cdr(或cdr区)。因此，“cdr”，如本发明所用，是指全部三个重链cdr、全部三个轻链cdr、全部重链cdr和轻链cdr、或至少两个cdr。在本说明书中，可变域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据kabat编号惯例编号。类似地，实施例中使用的术语“cdr”、“cdrl1”、“cdrl2”、“cdrl3”、“cdrh1”、“cdrh2”、“cdrh3”遵循kabat编号惯例。有关更多信息，请参见kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第五版，u.s.departmentofhealthandhumanservices,nationalinstitutesofhealth(1991)。对于本领域技术人员显而易见的是，在可变域序列和全长抗体序列中存在氨基酸残基的替代性编号惯例。也有cdr序列的替代编号惯例，例如在chothia等人(1989)nature342:877-883中列出的那些。抗体的结构和蛋白质折叠可意味着其他残基被认为是cdr序列的一部分，且为本领域技术人员所理解。本领域技术人员可获得的cdr序列的其他编号惯例包括“abm”(universityofbath)和“接触(contact)”(universitycollegelondon)方法。可使用kabat、chothia、abm和接触方法中的至少两种确定最小重叠区域以提供“最小结合单元”。最小结合单元可以是cdr的子部分。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，所述i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在另一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为拮抗性抗pd1-抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗pd1-抗体或其抗原结合片段，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的选自以下的免疫调节剂的第二药物组合物：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一实施方案中，提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为拮抗性抗pd1-抗体。在一个实施方案中，提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供药物组合物，其包含：治疗有效量的i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗pd1-抗体或其抗原结合片段，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，以及以下至少一种：药学上可接受的载体和药学上可接受的稀释剂，从而治疗人的癌症。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，所述i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物a和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物a和拮抗剂抗pd1抗体或其抗原结合片段的组合。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物a和抗pd1抗体或其抗原结合片段的组合，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和包含选自以下的免疫调节剂的药物组合物：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，从而治疗人的癌症。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，该i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物a的药物组合物和包含激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的药物组合物。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物a的药物组合物和包含抗ox40抗体或其抗原结合片段的药物组合物，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物a的药物组合物和包含抗ox40抗体或其抗原结合片段的药物组合物，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物a的药物组合物和包含拮抗剂抗pd1抗体或其抗原结合片段的药物组合物。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物a的药物组合物和包含抗pd1抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合的用途：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其用于制备药物。在一个实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合的用途：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其用于治疗癌症。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合制备药物的用途，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为拮抗性抗pd1-抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗pd1-抗体或其抗原结合片段，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在一个实施方案中，本发明提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和选自以下的免疫调节剂的组合：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其用于治疗癌症。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，该i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为拮抗性抗pd1-抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(i型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述i型prmt抑制剂为化合物a且所述免疫调节剂为抗pd1-抗体或其抗原结合片段，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在一个实施方案中，提供包含i型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于在用药中同时、分开或相继使用。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，该i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供包含化合物a和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用。在另一实施方案中，提供包含化合物a和拮抗剂抗pd1抗体的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供包含化合物a和抗pd1抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在一个实施方案中，提供包含i型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，该i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供包含化合物a和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症。在另一实施方案中，提供包含化合物a和拮抗剂抗pd1抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供包含化合物a和抗pd1抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在一个实施方案中，提供包含i型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为黑素瘤，结肠癌，或淋巴瘤。在一方面，i型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(prmt1)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶3(prmt3)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶4(prmt4)抑制剂、蛋白质精氨酸甲基转移酶6(prmt6)抑制剂、或蛋白质精氨酸甲基转移酶8(prmt8)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为ox40激动剂。在一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一方面，该i型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，该i型prmt抑制剂口服给药。在一方面，i型prmt抑制剂为式i、ii、v或vi的化合物。在一方面，i型prmt抑制剂为化合物a。在另一方面，i型prmt抑制剂为化合物d。在一个实施方案中，提供包含化合物a和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤。在另一实施方案中，提供包含化合物a和拮抗剂抗pd1抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为黑素瘤。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤，且其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物a和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤，且其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供包含化合物a和抗pd1抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为黑素瘤，且其中所述抗pd1-抗体为派姆单抗或纳武单抗。在本文任一个实施方案的一方面，癌症为实体瘤或血液癌症。在一方面，癌症为黑素瘤、淋巴瘤或结肠癌。在一方面，癌症选自头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、肾癌、肝癌、黑素瘤、胰腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞肿瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性t细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、aml、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性t细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞性白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性t细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌(nasopharangealcancer)、颊癌(buccalcancer)、口腔癌(cancerofthemouth)、gist(胃肠道间质瘤)、和睾丸癌。在一方面，本发明的方法进一步包括向所述人给药至少一种肿瘤药物。在一方面所述人具有实体瘤。在一方面，肿瘤选自头颈癌、胃癌、黑素瘤、肾细胞癌(rcc)、食管癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌和胰腺癌。在另一方面所述人具有液体肿瘤如弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、滤泡性淋巴瘤、急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病。本发明还涉及治疗或减轻选自以下的癌症的严重性的方法：脑(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠、头与颈、肾、肺、肝、黑素瘤、卵巢、胰腺、前列腺、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞肿瘤、甲状腺、成淋巴细胞性t-细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性t-细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞性白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性t细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、gist(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。本发明所用术语“治疗”及其语法变化形式是指治疗性治疗。在提到特定病症时，治疗意味着(1)改善或预防病症或该病症的一种或多种生物学表现；(2)干扰(a)引发或造成该病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现；(3)缓解与病症或其治疗相关的一种或多种症状、效应或副作用；或(4)延缓病症的发展或该病症的一种或多种生物学表现。从而也能推想预防性治疗。技术人员将会意识到，“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”被理解为是指药物的预防性给药，以基本上降低病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延迟该病症或其生物学表现的发生。例如当认为受试者是处于发展为癌症的高风险时，预防性治疗是适当的(例如当受试者具有极强的癌症家族病史或当受试者暴露于致癌物质时)。如本发明所用，术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”可以单数或复数形式互换使用，是指经历恶性转化使其变为对宿主生物体具有病理性的细胞。可以通过成熟的技术，特别是组织学检查，容易地将原发性癌细胞与非癌细胞区分开来。如本发明所用的癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，还包括衍生自前驱癌细胞的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，“临床可检测”的肿瘤是基于肿瘤块可检测到的肿瘤；例如，通过诸如计算机断层摄影(ct)扫描、磁共振成像(mri)、x射线、超声或物理检查触诊的程序，和/或由于可检测到从患者获得的样品中一种或多种癌症特异性抗原的表达。肿瘤可能是造血性(或血液学或血液或血液相关的)癌症，例如衍生自血细胞或免疫细胞的癌症，其可被称为“液体肿瘤”。基于血液肿瘤的临床病症的具体实例包括：白血病，如慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病；浆细胞恶性肿瘤，如多发性骨髓瘤、mgus和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；等等。癌症可以是其中存在异常数量的母细胞或不期望的细胞增殖或被诊断为造血系统癌症(包括淋巴性和骨髓性恶性肿瘤)的任何癌症。骨髓性恶性肿瘤包括但不限于：急性骨髓性(或髓细胞性或骨髓性或成髓细胞性)白血病(未分化或分化的)、急性早幼粒细胞(或早幼粒细胞性或前髓细胞性或前髓母细胞性)白血病、急性骨髓单核细胞性(或骨髓单核母细胞性)白血病、急性单核细胞性(或单核母细胞性)白血病、红细胞白血病和巨核细胞性(或巨核母细胞性)白血病。这些白血病可以一起称为急性骨髓性(或髓细胞性或骨髓性的)白血病(aml)。骨髓恶性肿瘤还包括骨髓增生性疾病(mpd)，其包括但不限于：慢性骨髓性(或髓细胞性)白血病(cml)、慢性骨髓单核细胞性白血病(cmml)、原发性血小板增多症(或血小板增多症)和真性红细胞增多症(pcv)。骨髓恶性肿瘤还包括：骨髓发育不良(或骨髓增生异常综合征或mds)，其可被称为难治性贫血(ra)、具有过量母细胞的难治性贫血(raeb)以及具有过量转化中的母细胞的难治性贫血(raebt)；以及伴有或不伴有原因不明性髓样化生的骨髓纤维化(mfs)。造血系统癌症还包括淋巴恶性病，其会影响淋巴结、脾脏、骨髓、外周血和/或结外位点。淋巴癌包括b细胞恶性病，包括但不限于b细胞非霍奇金淋巴瘤(b-nhl)。b-nhl可以是无痛的(或低度)、中度(或侵袭性)或高度(高侵袭性)。无痛b细胞淋巴瘤包括：滤泡性淋巴瘤(fl)；小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)；边缘区淋巴瘤(mzl)，包括结节mzl、结外mzl、脾mzl和具有绒毛状淋巴细胞的脾mzl；淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)；以及粘膜相关淋巴样组织(malt或结外边缘区)淋巴瘤。中度b-nhl包括：涉及或不涉及白血病的套细胞性淋巴瘤(mcl)、弥漫性大细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性大细胞(或3级或3b级)淋巴瘤和原发性纵隔淋巴瘤(pml)。高度b-nhl包括伯基特淋巴瘤(bl)、伯基特样淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤(snccl)和成淋巴细胞性淋巴瘤。其它b-nhl包括免疫母细胞性淋巴瘤(或免疫细胞瘤)、原发性渗出性淋巴瘤、hiv相关(或aids相关)的淋巴瘤和移植后淋巴增生性病症(ptld)或淋巴瘤。b细胞恶性病还包括但不限于：慢性淋巴细胞性白血病(cll)、幼淋巴细胞性白血病(pll)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(wm)、毛细胞白血病(hcl)、大颗粒淋巴细胞性(lgl)白血病、急性淋巴性(或淋巴细胞性或成淋巴细胞性)白血病和卡斯尔曼氏病。nhl还可包括：t细胞非霍奇金淋巴瘤(t-nhl)，其包括但不限于未列名(nos)的t细胞非霍奇金淋巴瘤、外周t细胞淋巴瘤(ptcl)、间变性大细胞淋巴瘤(alcl)、血管免疫母细胞性淋巴样病(aild)、鼻腔型自然杀伤(nk)细胞/t细胞淋巴瘤、γ/δ淋巴瘤、皮肤型t细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿和塞扎里综合征(sezarysyndrome)。造血系统癌症还包括霍奇金淋巴瘤(或疾病)，其包括典型霍奇金淋巴瘤,结节硬化型霍奇金淋巴瘤,混合细胞型霍奇金淋巴瘤,淋巴细胞主导型(lp)霍奇金淋巴瘤,结节lp霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞缺乏型霍奇金淋巴瘤。造血系统癌症还包括浆细胞疾病或癌症，如多发性骨髓瘤(mm)，其包括郁积型mm,意义未确定(或未知或未明)的单克隆丙种球蛋白病(mgus),浆细胞瘤(骨,髓外),淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl),瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症,浆细胞白血病和原发性淀粉样变性病(al)。造血系统癌症还可包括其它造血细胞的其它癌症，包括多形核白细胞(或中性粒细胞),嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,树突状细胞,血小板,红细胞和自然杀伤细胞。包括造血细胞的组织在本发明中被称为“造血细胞组织”，其包括骨髓；外周血；胸腺；和外周淋巴组织，诸如脾脏、淋巴结、与粘膜相关的淋巴组织(例如与肠相关淋巴组织)、扁桃体，派伊尔淋巴集结和阑尾，以及与其他粘膜相关的淋巴组织，例如支气管内衬。如本文所用，术语“化合物a2”是指选自以下的免疫调节剂：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、抗ctla4抗体或其抗原结合片段，或抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，化合物a2为抗pd-1抗体。适当地，化合物a2可选自纳武单抗和派姆单抗。在一些实施方案中，化合物a2为针对ox40或其抗原结合部分的激动剂抗体，该ox40或其抗原结合部分包含含有与seqidno:5所述的氨基酸序列至少90％等同的氨基酸序列的vh结构域；和与seqidno:11所述的氨基酸序列至少90％等同的氨基酸序列的vl结构域。在其它实施方案中，化合物a2为针对ox40或其抗原结合部分的激动剂抗体，包括包含以下一个或多个的抗ox40抗体或其抗原结合片段：seqidno:1所示的cdrh1；seqidno:2所示的cdrh2；seqidno:3所示的cdrh3；seqidno:7所示的cdrl1；seqidno:8所示的cdrl2和/或seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。如本文所用，术语“化合物b2”是指i型prmt抑制剂。在一些实施方案中，化合物b2为式i、ii、v或vi的化合物。适当地，化合物b2为化合物a.适当地，本发明的组合“在规定的期间内”给药。如本文所使用的术语“规定的期间(specifiedperiod)”及其语法变形，表示给药化合物a2和化合物b2中的一种以及给药化合物a2和化合物b2中的另一种之间的时间间隔。除非另有说明，规定的期间可以包括同时给药。除非另有说明，规定的期间是指在一天内给药化合物a2和化合物b2。适当地，如果在“规定的期间”内给药所述化合物而不同时给药，它们均可以在彼此相隔约24小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约24小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约12小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约12小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约11小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约11小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约10小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约10小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约9小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约9小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约8小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约8小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约7小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约7小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约6小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约6小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约5小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约5小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约4小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约4小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约3小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约3小时；适当地，它们可以在彼此相隔约2小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约2小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约1小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约1小时。如本发明所使用的，化合物a2和化合物b2的给药相隔小于约45分钟被认为是同时给药。适当地，当本发明的组合以一段“规定的期间”给药时，各化合物共同给药一段“持续时间”。如本发明所使用的术语“持续时间”及其语法变形，表示本发明的两种化合物连续给药指定数目的天数。除非另有说明，连续的天数不必须是在治疗起点开始或治疗终点结束，它只需要在治疗过程中的某时间点出现连续的天数。关于“规定的期间”给药：适当地，两种化合物在规定的期间内给药至少一天–在该情况中，所述持续时间为至少一天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续3天–在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续5天–在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续7天–在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续14天–在该情况中，所述持续时间为至少14天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续30天–在该情况中，所述持续时间为至少30天。适当地，如果所述化合物“不历经规定的期间内(duringaspecifiledperiod)”给药，那么它们就是顺序给药。如本发明所使用的术语“顺序给药”及其语法变形，表示每天给药一次化合物a2和化合物b2中的一种，连续两天或更多天，接着每天给药一次化合物a2和化合物b2中的另一种，连续两天或更多天。同样地，本发明还包括在顺序给药化合物a2和化合物b2中的一种以及给药化合物a2和化合物b2中的另一种之间所使用的休药期。如本发明所使用的，休药期为在顺序给药化合物a2和化合物b2中的一种之后和在给药化合物a2和化合物b2中的另一种之前不给药化合物a2也不给药化合物b2的间隔天数。休药期为选自以下的一段天数：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。关于顺序给药(sequentialadministration)：适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至30天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至30天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至21天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至14天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至7天，接着是1至10天的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至7天。适当地，在该顺序中化合物b2首先给药，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2连续14天。适当地，给药化合物b2连续14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2连续14天。适当地，给药化合物b2连续7天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物a2连续7天。适当地，给药化合物b2连续3天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物a2连续7天。适当地，给药化合物b2连续3天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物a2连续3天。应当理解，“规定的期间”给药和“顺序”给药之后可以为重复给药(dosing)或者可以接着交替的给药方案，休药期可以在重复给药或交替的给药方案之前。本发明的方法还可以与其他治疗癌症的治疗方法一起使用。化合物a2和化合物b2可以通过任何适合的途径给药。合适的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服(buccal)和舌下)、瘤内、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。可以理解优选途径可随着例如该组合的受试者的状况和所治疗的癌症而变化。还可以理解所施用的各个药物可以通过相同或不同的途径给药，化合物a2和化合物b2可以一起配制成药物组合物/制剂。在一个实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分静脉内给药。在一个实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分口服给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分经瘤内给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分全身性给药，如静脉内，以及本发明组合中的一种或多种其它成分经瘤内给药。在该实施方案的任一者中，如在此段中，本发明的各成分作为一种或多种药物组合物给药。典型地，在本发明中，对所治疗的易感肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可以在癌症治疗中被共同施用。该药物的实例可以在cancerprinciplesandpracticeofoncologybyv.t.devita，t.s.lawrence，和s.a.rosenberg(编辑)，第10版(2014年12月5日)，lippincottwilliams&wilkinspublishers中找到。本领域普通技术人员将能够基于药物的特定特征和所涉及的癌症来辨别可使用哪些药物组合。可用于本发明的典型的抗肿瘤剂包括但不限于：抗微管或抗有丝分裂剂如二萜和长春花生物碱；铂配位络合物；烷化剂如氮芥、氧氮磷环类(oxazaphosphorine)、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯；抗生素如放线菌素、蒽环类和博来霉素；拓扑异构酶i抑制剂如喜树碱；拓扑异构酶ii抑制剂如表鬼臼毒素；抗代谢物如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；细胞周期信号转导抑制剂；蛋白酶体抑制剂；热休克蛋白抑制剂；癌症代谢抑制剂；和癌症基因治疗剂如基因修饰的t细胞。用于与本发明方法或组合联合或共同施用的其他活性成分的实例是抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的实例包括但不限于化学治疗剂；免疫调控剂(immuno-modulatoryagent)；免疫调节剂(immune-modulator)；和免疫刺激佐剂。实施例以下实施例示出本发明的多个非限制性方面。实施例1精氨酸甲基化和prmt精氨酸甲基化是对参与多种细胞过程的蛋白质的重要翻译后修饰，例如基因调控、rna加工、dna损伤应答和信号转导。含有甲基化精氨酸的蛋白质存在于细胞核和胞质组分中，这表明催化甲基转移到精氨酸上的酶也存在于这些亚细胞腔隙中(综述于yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；lee,y.h.&stallcup,m.r.minireview:proteinargininemethylationofnonhistoneproteinsintranscriptionalregulation.molendocrinol23,425-433,doi:10.1210/me.2008-0380(2009))。在哺乳动物细胞中，甲基化精氨酸以三种主要形式存在：ω-ng-单甲基-精氨酸(mma)、ω-ng,ng-不对称二甲基精氨酸(adma)或ω-ng,n’g-对称的二甲基精氨酸(sdma)。每种甲基化状态都可以以不同方式影响蛋白质-蛋白质相互作用，因此有可能为底物的生物活性赋予不同的功能性后果(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。精氨酸甲基化主要在富含甘氨酸、精氨酸(gar)基序的情况下通过蛋白质精氨酸甲基转移酶(prmt)家族的活性发生，所述蛋白质精氨酸甲基转移酶将甲基从s-腺苷-l-甲硫氨酸(sam)转移至底物精氨酸侧链，产生s-腺苷-高半胱氨酸(sah)和甲基化精氨酸(图1)。该蛋白质家族由10个成员组成，其中9个已被证明具有酶活性(bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。根据酶促反应的产物，prmt家族分为四种亚型(i-iv型)(图1)。iv型酶甲基化内部胍基氮并且仅在酵母中描述(fisk,j.c.&read,l.k.proteinargininemethylationinparasiticprotozoa.eukaryotcell10,1013-1022,doi:10.1128/ec.05103-11(2011))；i-iii型酶通过单一甲基化事件产生单甲基-精氨酸(mma，rme1)。mma中间体被认为是相对低丰度的中间体，然而，prmt7的主要iii型活性的选择底物可以保持单甲基化，而i型和ii型酶分别催化从mma向不对称二甲基精氨酸(adma，rme2a)或对称的二甲基精氨酸(sdma，rme2s)的进展。ii型prmt包括prmt5和prmt9，然而，prmt5是负责形成对称二甲基化的主要酶。i型酶包括prmt1、prmt3、prmt4、prmt6和prmt8。prmt1、prmt3、prmt4和prmt6普遍表达，而prmt8主要限于脑(综述于bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。prmt1是主要的1型酶，能够在许多细胞底物上催化mma和adma的形成(bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。在许多情况下，prmt1依赖性adma修饰是其底物的生物活性和运输所必需的(nicholson,t.b.,chen,t.&richard,s.thephysiologicalandpathophysiologicalroleofprmt1-mediatedproteinargininemethylation.pharmacolres60,466-474,doi:10.1016/j.phrs.2009.07.006(2009))，且prmt1的活性占细胞adma水平的～85％(dhar,s.等人，lossofthemajortypeiargininemethyltransferaseprmt1causessubstratescavengingbyotherprmts.scirep3,1311,doi:10.1038/srep01311(2013)；pawlak,m.r.,scherer,c.a.,chen,j.,roshon,m.j.&ruley,h.e.argininen-methyltransferase1isrequiredforearlypostimplantationmousedevelopment,butcellsdeficientintheenzymeareviable.molcellbiol20,4859-4869(2000))。prmt1的完全敲除导致许多底物中mma的显著增加，表明prmt1的主要生物学功能是将mma转化为adma，而其他prmt可以建立和维持mma(dhar,s.等人，lossofthemajortypeiargininemethyltransferaseprmt1causessubstratescavengingbyotherprmts.scirep3,1311,doi:10.1038/srep01311(2013))。此外，在prmt1丢失时sdma水平增加，这可能是adma损失和mma相应增加的结果，mma可作为产生sdma的ii型prmt的底物。i型prmt的抑制可能通过adma的丧失、mma的增加、或者转换为与sdma相关的不同甲基化模式而导致底物功能改变(dhar,s.等人，lossofthemajortypeiargininemethyltransferaseprmt1causessubstratescavengingbyotherprmts.scirep3,1311,doi:10.1038/srep01311(2013))。小鼠中prmt1基因座的破坏导致早期胚胎致死，并且纯合胚胎未能发育超过e6.5，表明prmt1在正常发育中的需要(pawlak,m.r.,scherer,c.a.,chen,j.,roshon,m.j.&ruley,h.e.argininen-methyltransferase1isrequiredforearlypostimplantationmousedevelopment,butcellsdeficientintheenzymeareviable.molcellbiol20,4859-4869(2000)；yu,z.,chen,t.,hebert,j.,li,e.&richard,s.amouseprmt1nullalleledefinesanessentialroleforargininemethylationingenomemaintenanceandcellproliferation.molcellbiol29,2982-2996,doi:10.1128/mcb.00042-09(2009))。需要条件或组织特异性敲除以更好地理解prmt1在成人中的作用。源自prmt1缺失小鼠的小鼠胚胎成纤维细胞经历生长停滞，多倍化，染色体不稳定性和与dna损伤应答蛋白mre11的低甲基化相关的自发dna损伤，表明prmt1在基因组维持和细胞增殖中的作用(yu,z.,chen,t.,hebert,j.,li,e.&richard,s.amouseprmt1nullalleledefinesanessentialroleforargininemethylationingenomemaintenanceandcellproliferation.molcellbiol29,2982-2996,doi:10.1128/mcb.00042-09(2009))。prmt1蛋白和mrna可以在广泛的胚胎和成体组织中检测到，与其作为负责大多数细胞精氨酸甲基化的酶的功能一致。尽管prmt本身可以进行翻译后修饰并与相互作用的调节蛋白相关，但prmt1保留基础活性而无需进行额外修饰(综述于yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。prmt1和癌症prmt1的错误调节和过表达与许多实体和造血系统癌症有关(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；yoshimatsu,m.等人，dysregulationofprmt1andprmt6,typeiargininemethyltransferases,isinvolvedinvarioustypesofhumancancers.intjcancer128,562-573,doi:10.1002/ijc.25366(2011))。prmt1与癌症生物学之间的联系主要是通过调节相关底物上发现的精氨酸残基的甲基化(图2)。在几种肿瘤类型中，prmt1可以通过组蛋白h4的甲基化驱动异常致癌程序的表达(takai,h.等人，5-hydroxymethylcytosineplaysacriticalroleinglioblastomagenesisbyrecruitingthechtop-methylosomecomplex.cellrep9,48-60,doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071(2014)；shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012)；zhao,x.等人，methylationofrunx1byprmt1abrogatessin3abindingandpotentiatesitstranscriptionalactivity.genesdev22,640-653,doi:10.1101/gad.1632608(2008),以及通过其对非组蛋白底物的活性驱动异常致癌程序的表达(wei,h.,mundade,r.,lange,k.c.&lu,t.proteinargininemethylationofnon-histoneproteinsanditsroleindiseases.cellcycle13,32-41,doi:10.4161/cc.27353(2014))。在许多这些实验系统中，其底物的prmt1依赖性adma修饰的破坏降低了癌细胞的增殖能力(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。一些研究已将prmt1与血液和实体肿瘤的发展联系起来。prmt1通过mll和aml1-eto融合等关键驱动因子的甲基化与白血病发展相关，导致致癌途径的激活(shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012)；cheung,n.etal.targetingaberrantepigeneticnetworksmediatedbyprmt1andkdm4cinacutemyeloidleukemia.cancercell29,32-48,doi:10.1016/j.ccell.2015.12.007(2016))。来自表达aml1-eto的小鼠的骨髓细胞中prmt1的敲低抑制了克隆形成，证明了prmt1维持该模型的白血病表型的关键要求(shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012))。prmt1也是mll融合复合物的一个组成部分，促进与h4r3甲基化相关的异常转录激活，并且prmt1的敲低可以抑制mll-een介导的造血干细胞转化(cheung,n.,chan,l.c.,thompson,a.,cleary,m.l.&so,c.w.proteinarginine-methyltransferase-dependentoncogenesis.natcellbiol9,1208-1215,doi:10.1038/ncb1642(2007))。在乳腺癌患者中，发现prmt1的高表达与较短的无疾病存活期和具有晚期组织学分级的肿瘤相关(mathioudaki,k.etal.clinicalevaluationofprmt1geneexpressioninbreastcancer.tumourbiol32,575-582,doi:10.1007/s13277-010-0153-2(2011))。为此，prmt1已参与促进转移和癌细胞侵袭(gao,y.等人，thedualfunctionofprmt1inmodulatingepithelial-mesenchymaltransitionandcellularsenescenceinbreastcancercellsthroughregulationofzeb1.scirep6,19874,doi:10.1038/srep19874(2016)；avasarala,s.等人，prmt1isanovelregulatorofepithelial-mesenchymal-transitioninnon-smallcelllungcancer.jbiolchem290,13479-13489,doi:10.1074/jbc.m114.636050(2015))，且prmt1介导的雌激素受体α(erα)甲基化可以增强生长促进信号转导途径。即使在存在抗雌激素的情况下，这种甲基化驱动机制也可为乳腺癌细胞提供生长优势(leromancer,m.等人，regulationofestrogenrapidsignalingthroughargininemethylationbyprmt1.molcell31,212-221,doi:10.1016/j.molcel.2008.05.025(2008))。此外，prmt1通过调节同源重组和非同源末端连接dna修复途径来促进基因组稳定性和对dna损伤剂的抗性(boisvert,f.m.,rhie,a.,richard,s.&doherty,a.j.thegarmotifof53bp1isargininemethylatedbyprmt1andisnecessaryfor53bp1dnabindingactivity.cellcycle4,1834-1841,doi:10.4161/cc.4.12.2250(2005)；boisvert,f.m.,dery,u.,masson,j.y.&richard,s.argininemethylationofmre11byprmt1isrequiredfordnadamagecheckpointcontrol.genesdev19,671-676,doi:10.1101/gad.1279805(2005))。因此，prmt1的抑制可能使癌症对dna损伤因子敏感，特别是在dna修复机制可能受突变影响的肿瘤中(如乳腺癌中的brca1)(o'donovan,p.j.&livingston,d.m.brca1andbrca2:breast/ovariancancersusceptibilitygeneproductsandparticipantsindnadouble-strandbreakrepair.carcinogenesis31,961-967,doi:10.1093/carcin/bgq069(2010))。总之，这些观察结果证明了prmt1在肿瘤生物学的临床相关方面的关键作用，并提出了探索与例如促进dna损伤的治疗相结合的理论基础。rna结合蛋白和剪接机制是prmt1底物的主要类别，并且通过其生物学功能以及白血病的复发突变与癌症生物学有关(bressan,g.c.等人，argininemethylationanalysisofthesplicing-associatedsrproteinsfrs9/srp30c.cellmolbiollett14,657-669,doi:10.2478/s11658-009-0024-2(2009)；sveen,a.,kilpinen,s.,ruusulehto,a.,lothe,r.a.&skotheim,r.i.aberrantrnasplicingincancer；expressionchangesanddrivermutationsofsplicingfactorgenes.oncogene35,2413-2427,doi:10.1038/onc.2015.318(2016)；hsu,t.y.等人，thespliceosomeisatherapeuticvulnerabilityinmyc-drivencancer.nature525,384-388,doi:10.1038/nature14985(2015))。在最近的一项研究中，prmt1显示在急性巨核细胞白血病中甲基化rna结合蛋白rbm15(zhang,l.等人，cross-talkbetweenprmt1-mediatedmethylationandubiquitylationonrbm15controlsrnasplicing.elife4,doi:10.7554/elife.07938(2015))。prmt1介导的rbm15甲基化调节其表达；因此，显示aml细胞系中prmt1的过表达通过下调rbm15来阻断分化，从而阻止其结合对分化重要的基因的前mrna内含子区域的能力。为了鉴定推定的prmt1底物，利用蛋白质组学方法(methylscan，cellsignalingtechnology)鉴定具有响应于工具prmt1抑制剂(化合物d)的精氨酸甲基化状态变化的蛋白质。来自化合物d-和dsmo处理的细胞提取物的蛋白质片段使用甲基精氨酸特异性抗体(adma，mma，sdma)免疫沉淀，并通过质谱法鉴定肽。虽然许多蛋白质经历精氨酸甲基化的变化，但鉴定的大多数底物是用工具化合物处理的aml细胞系中的转录调节因子和rna加工蛋白质(图3)。总之，prmt1对癌症相关途径的影响表明抑制可能导致抗肿瘤活性，为治疗aml、淋巴瘤和实体肿瘤适应症提供了新的治疗机制。如新兴文献中所述，几种机制支持在血液学和实体瘤中使用prmt1抑制剂的基本原理，包括：抑制白血病中aml-eto驱动的肿瘤发生，抑制乳腺癌中生长促进信号转导，以及通过rna结合蛋白的甲基化和剪接体机制调节剪接。抑制包括prmt1在内的i型prmt代表了一种易于控制的抑制异常癌细胞增殖和存活的策略。生物化学用化合物a进行详细的体外生物化学研究，以表征对i型prmt的抑制效力和机制。抑制机制通过底物竞争实验探索了化合物a对prmt1的抑制机制。通过将化合物aic50值作为底物浓度的函数除以其kmapp绘图，且将得到的图与竞争性、非竞争性和未竞争性抑制的cheng-prusoff关系进行比较，来检查抑制剂形态(copeland,r.a.evaluationofenzymeinhibitorsindrugdiscovery.aguideformedicinalchemistsandpharmacologists.methodsbiochemanal46,1-265(2005))。化合物a的ic50值随着sam浓度的增加而降低，表明化合物a对prmt1的抑制与sam是非竞争性的，当拟合至非竞争性抑制的方程时，kiapp值为15nm(图4a)。当化合物aic50值作为h41-21肽的函数作图(图4b)，未观察到明确的形态趋势，表明混合型抑制。使用全局分析进行进一步分析，得到3.7的α值，证实肽机理是混合的并且得到19nm的kiapp值(图4b，插图)。时间依赖性和可逆性在变化的sam：prmt1：化合物a预孵育时间和20分钟反应后，通过测量ic50值来评估化合物a的时间依赖性抑制。与sam无竞争性的抑制机制意味着需要产生sam：prmt1复合物以支持化合物a的结合，因此在预孵育期间包括sam(保持在kmapp)。化合物a显示prmt1甲基化的时间依赖性抑制，其通过较长的预孵育时间的效力增加而证明(图5a)。由于观察到时间依赖性抑制，进一步的ic50测定包括60分钟sam：prmt1：化合物a预孵育和40分钟反应时间以提供化合物效力的更好表示。这些条件产生的ic50为3.1±0.4nm(n＝29)，其大于该测试的理论紧密结合极限(0.25nm)10倍。在不同的prmt1浓度下检查ic50值表明，由于活性部分较低，实际的紧密结合限度将显著低于0.25nm(图5b)。化合物a的盐形式没有显著影响针对prmt1测定的ic50值(图5b)。对时间依赖性抑制的两种解释是缓慢结合的可逆抑制和不可逆抑制。为了区分这两种机制，使用亲和选择质谱法(asms)检查化合物a与prmt1的结合。asms首先分离结合的配体与未结合配体，然后通过ms检测可逆结合的配体。使用prmt1：sam与化合物a的2小时预孵育来确保完全形成时间依赖性复合物(esi*)，其基于(图5a)中所示的曲线。其中在预孵育20分钟后观察到最大效力。在这些条件下，使用asms可检测化合物a。这表明主要机制本质上是可逆的，因为asms将无法检测到不可逆结合的化合物a。尚未进行包括解离速率(off-rate)分析在内的确定性可逆性研究，并将进一步验证该机制。结晶学为了确定抑制剂结合模式，确定与prmt1和sah结合的化合物a的共晶结构(分辨率)(图6)。sah是prmt1从sam中除去甲基后形成的产物；因此，sah和sam应该同样占据prmt1的相同口袋。抑制剂在通常由直接与sah袋相邻的底物肽占据的裂隙中结合，并且其二胺侧链占据推定的精氨酸底物位点。末端甲胺与距sah的硫醚的glu162侧链残基形成氢键，并且sah结合口袋通过tyr57和met66桥接至化合物a。化合物a通过在化合物a的吡唑氮的质子和glu65的酸性侧链之间形成氢键来结合prmt1；二乙氧基支链环己基部分位于由tyr57、ile62、tyr166和tyr170形成的疏水沟槽中的溶剂暴露表面。sah和抑制剂结合之间的空间分离，以及与诸如tyr57的残基的相互作用可以支持酶研究中揭示的sam非竞争机制。发现化合物a结合在底物肽口袋中并且二胺侧链可以模拟底物精氨酸残基的胺，意味着抑制剂形式可能与肽竞争。生物化学抑制模式研究支持化合物a是关于肽的混合抑制剂(图4b)。化合物a的时间依赖性行为以及肽裂缝外的底物肽的外部位点结合的可能性都可以导致与肽不竞争的抑制模式，解释了结构和生化研究所暗示的形态差异。直系同源为了便于解释毒理学研究，针对prmt1的大鼠和狗直系同源物评估化合物a的效力。与人prmt1一样，化合物a显示出对大鼠和狗prmt1的时间依赖性抑制，ic50值随着预孵育的增加而降低(图7a)。另外，在一系列酶浓度(0.25-32nm)中未观察到化合物a效力的变化，表明测量的ic50值未接近人、大鼠或狗的测定的紧密结合极限(图7b)。使用与用于评估人prmt1的条件相当的条件测定ic50值，并显示化合物a效力在所有物种中变化<2倍(图7c)。选择性在一组prmt家族成员中评估化合物a的选择性。在60分钟sam：酶：化合物a预孵育后，针对代表性的i型(prmt3，prmt4，prmt6和prmt8)和ii型(prmt5/mep50和prmt9)家族成员测定ic50值。化合物a以不同效力抑制了测试的所有i型prmt的活性，但未能抑制ii型家族成员(图8a)。i型prmt的另外表征显示化合物a是prmt4、prmt6和prmt8的时间依赖性抑制剂，这是由于增加酶:sam:化合物a预孵育时间后观察到效力增加；然而，prmt3没有显示出时间依赖性行为(图8b)。为了进一步表征化合物a的选择性，在单一浓度的化合物a(10μm，反应生物学)下评估二十一种甲基转移酶的抑制。对prdm9观察到最高抑制程度，18％。总之，化合物a显示对测试的甲基转移酶的最小抑制，表明它是i型prmt的选择性抑制剂(表2)。安全性部分描述了其他选择性测定。表2针对对化合物a的抑制测试的甲基转移酶。在固定浓度的sam(1μm)测定酶，独立于samkm值。总之，化合物a是i型prmt家族成员的有效、可逆、选择性抑制剂，显示出对prmt1、prmt6和prmt8的等效生化能力，ic50值在3-5nm之间。与化合物a复合的prmt1的晶体结构显示化合物a在肽口袋中结合，并且晶体结构以及酶学研究都与sam非竞争机制一致。生物学细胞机制效应预计prmt1的抑制导致细胞prmt1底物上的adma降低，包括组蛋白h4的精氨酸3(h4r3me2a)，伴随mma和sdma的增加(dhar,s.等人，lossofthemajortypeiargininemethyltransferaseprmt1causessubstratescavengingbyotherprmts.scirep3,1311,doi:10.1038/srep01311(2013))。为了评估化合物a对精氨酸甲基化的影响，使用抗体检测mma。在细胞内-western测定(in-cell-westernassay)中评估与增加的mma相关的剂量响应，并测定细胞机理性ec50为10.1+4.4nm的(图9)。剂量响应似乎是双相的，可能是由于i型prmt之间的差异活性或对特定底物亚组的差异效力。使用描述双相曲线的方程来拟合数据，并且因为在测试的浓度范围内没有与第二拐点相关的明显平台，报告了第一个拐点。在该测定形式中测试了各种盐形式，并且所有盐形式都显示出相似的ec50值，因此，对于所有生物学研究，认为它们是可互换的(图9)。进行另外的研究以检查选择的肿瘤类型中的时机、持续性和对其他甲基化状态的影响，如下所示。化合物a对mma诱导的效力表明化合物a可用于研究与抑制细胞中1型prmt相关的生物学机制。癌症中的i型prmt表达通过癌症基因组图谱(tcga)和cbioportal代表的其他原发肿瘤数据库从>100个癌症研究中收集的多种肿瘤类型的基因表达数据分析表明prmt1在癌症中高度表达，淋巴瘤中水平最高(弥漫型大b-细胞淋巴瘤，dlbcl)，相对于其他实体和血液恶性肿瘤(图10)。还调查了actb(一种常见的管家基因)和tyr(一种在皮肤中选择性表达的基因)的表达，以分别表征与高遍在表达或组织限制性表达相关的范围。淋巴瘤在其他癌症中的高表达提供额外的置信度，即化合物a抑制的靶标存在于对应于临床前研究中评估的细胞系的原发性肿瘤中。prmt3、4和6也在一系列肿瘤类型中表达，而如预测的那样，prmt8表达似乎更受限，因为其组织特异性表达(lee,j.,sayegh,j.,daniel,j.,clarke,s.&bedford,m.t.prmt8,anewmembrane-boundtissue-specificmemberoftheproteinargininemethyltransferasefamily.jbiolchem280,32890-32896,doi:10.1074/jbc.m506944200(2005))。细胞表型效应使用celltiterglo(promega)分析化合物a在6天生长-死亡测定中抑制培养的肿瘤细胞系生长的能力，该celltiterglo(promega)定量atp作为细胞数的替代。在广泛的接种密度范围内评估所有细胞系随时间的生长，以鉴定在整个6天测定中允许增殖的条件。将细胞以最佳接种密度铺板，并在孵育过夜后，加入20点2倍滴定的化合物并将板孵育6天。在加入化合物时收获细胞的复制平板以定量细胞的起始数(t0)。将6天处理后获得的值表示为t0值的函数，并相对于化合物浓度作图。将t0值归一化至100％并表示化合物添加时的细胞数。将数据与4参数方程拟合以产生浓度响应曲线，并测定生长ic50(gic50)。gic50是“生长窗口”的中点，即化合物添加时的细胞数(t0)与6天后的细胞数(dmso对照)之间的差异。生长-死亡测定法可用于量化净种群变化，明确地将细胞死亡(细胞毒性)定义为与化合物添加时的数量(t0)相比更少的细胞。负ymin-t0值表示细胞死亡，而gic100值表示100％抑制生长所需的化合物浓度。使用该测定法在196种代表实体和血液恶性肿瘤的人癌细胞系中评估化合物a的生长抑制作用(图11)。化合物a在大多数细胞系中诱导接近或完全生长抑制，其中亚组显示细胞毒性响应，如负ymin-t0值所示(图11b)。这种作用在aml和淋巴瘤癌细胞系中最为明显，其中50和54％的细胞系分别显示出细胞毒性响应。从大鼠14天mtd(150mg/kg，cave＝2.1μm)计算的总auc或暴露(cave)用作化合物a的临床相关浓度估计值以评估敏感度。虽然淋巴瘤细胞系显示细胞毒性，且gic100值低于2.1μm，但评估的所有肿瘤类型中的许多细胞系显示gic50值<2.1μm，表明与抗肿瘤活性相关的浓度可在患者中实现。狗21天mtd稍高(25mg/kg；总auc或cave＝3.2μm)，因此来自大鼠的较低浓度提供了更保守的靶标以鉴别细胞系敏感性。淋巴瘤细胞系对i型prmt抑制高度敏感，中值gic50为0.57μm，细胞毒性在54％中观察到。在实体瘤类型中，在黑素瘤和肾癌细胞系(主要代表透明细胞肾癌)中观察到化合物a的有效抗增殖活性，然而，在该测定形式中，响应主要是细胞抑制的(图11，表3)。表3化合物a的6天增殖概述。基于在大鼠14天mtd(150mg/kg，cave＝2.1μm)中实现的浓度，gic50<2.1μm用作靶标。评价化合物a的抗增殖作用表明prmt1的抑制导致代表一系列实体和血液恶性肿瘤的细胞系的有效抗肿瘤活性。总之，这些数据表明实体和血液恶性肿瘤的临床开发是必要的。优先适应症包括：·淋巴瘤：在54％的细胞系中有细胞毒性·aml：在50％的细胞系中有细胞毒性·肾细胞癌：在60％的细胞系中gic50≤2.1μm·黑素瘤：在71％的细胞系中gic50≤2.1μm·乳腺癌，包括tnbc：在41％的细胞系中gic50≤2.1μm淋巴瘤生物学细胞机理效应为了评估化合物a对淋巴瘤中精氨酸甲基化的影响，用0.4μm化合物a或媒介物处理人dlbcl细胞系(toledo)长达120小时，之后通过western分析使用针对各种精氨酸甲基化状态的抗体评估蛋白质裂解物。如所预测的，在化合物暴露时adma甲基化降低，而mma增加(图12)。还观察到sdma水平的增加，表明mma的增加可能导致prmt5的潜在底物池中的积累，prmt5是sdma形成的主要催化剂。鉴于检测到具有不同动力学的多种底物，以及dmso处理的样品中adma水平的可变性，全泳道和显著的45kda条带均被表征以评估adma。mma的增加在24小时内明显，到48小时接近最大值，而45kdaadma带的减少需要72-96小时才能达到最大效果。在化合物暴露48小时后sdma的增加是明显的并且持续增加至120小时，这与mma到adma(通过i型prmt)的转化至sdma(通过ii型prmt)的潜在转变一致(图12)。在一组淋巴瘤细胞系中测定与化合物a对精氨酸甲基化(mma，adma，sdma)的作用相关的剂量响应(图13)。在整个泳道和在评估的所有细胞系中降低至不可检测的水平的单个45kda条带上测量adma降低。总体而言，实现50％最大效应所需的浓度在细胞系中是相似的，并且在6天生长死亡测定中与gic50不相符，表明缺乏敏感性不能通过靶标接合不良解释。为了确定响应化合物a的精氨酸甲基化的全局变化的耐久性，在化合物冲洗后用化合物a处理的细胞中评估adma、sdma和mma水平(图14)。将toledo细胞与0.4μm化合物a一起培养72小时，以对精氨酸甲基化标记建立稳健的作用。然后洗涤细胞，在无化合物a的培养基中培养，每天收集样品至120小时，并通过western分析检查精氨酸甲基化水平。mma水平迅速下降，在化合物a冲洗后24小时回到基线，而adma和sdma分别在24和96小时后恢复到基线。值得注意的是，相对于adma蛋白质印迹中的大多数其他种类，45kdaadma条带的恢复似乎延迟，表明化合物a的精氨酸甲基化变化的耐久性可能因底物而异。即使在冲洗6小时后，sdma似乎仍继续增加。这与到120小时观察到的持续增加且没有任何明显的平稳期(图12)以及在冲洗后尚未恢复到基线的mma的持久增加相一致。每种修饰的耐久性通常反映化合物a引起的精氨酸甲基化变化的动力学，其中mma是最快的。细胞表型效应为了评估与化合物a抑制生长相关的时间过程，在淋巴瘤细胞系的亚组中进行延长持续时间的生长-死亡测定。类似于先前描述的6天增殖测定，优化接种密度以确保在整个测定期间的生长，并且在从第3-10天开始的选定时间点通过ctg评估细胞数。早在6天就观察到生长抑制，在toledo和daudi淋巴瘤细胞系中最多为8天(图15)。在第6天和第10天评估更大的细胞系组以测量长期暴露于化合物a的效果，并确定在6天测定中显示细胞抑制响应的细胞系是否可能在稍后的时间点发生细胞毒性。延长暴露于化合物a的时间对评估的淋巴瘤细胞系的效力(gic50)或细胞毒性(ymin-t0)具有最小影响(图16)，表明6天增殖评估可用于评估敏感性。鉴于生长抑制在第6天是明显的并且延长暴露对效力或抑制百分比的影响最小，代表霍奇金和非霍奇金亚型的一组广泛的淋巴瘤细胞系以6天生长-死亡测定形式进行评估(图17)。所有亚型在这种形式下似乎同样敏感，并且许多细胞系经历细胞毒性(如负ymin-t0所示)，独立于分类，表明化合物a在评估的所有淋巴瘤亚型中具有抗肿瘤作用。增殖测定结果表明prmt1的抑制在淋巴瘤细胞系的亚组中诱导明显的细胞毒性。为了进一步阐明这种效果，使用碘化丙锭染色然后流式细胞术评估用化合物a处理的淋巴瘤细胞系中的细胞周期分布。在6天增殖试验中显示一系列ymin-t0和gic50值的细胞系以低密度接种以允许在试验期间进行对数生长，并用不同浓度的化合物a处理。与生长-死亡测定结果一致，以时间和剂量依赖性方式在toledo细胞中观察到亚g1(<g1)中细胞的积累(指示细胞死亡)，在用化合物a浓度≥1000nm处理3天后开始(图18)。到第7天，在浓度≥100nm时，亚g1群体的增加明显。在u2932和oci-ly1(在6天增殖试验中经历明显的细胞抑制性生长抑制的细胞系)中，这种作用仅在10μm化合物a时才明显。在该试验形式中没有显示任何其他细胞周期阶段的显著影响。为了确认细胞周期的facs分析，在10天的时间过程中进行胱天蛋白酶断裂的评估作为细胞凋亡的额外测量。优化接种密度以确保在整个测定期间的一致生长，并使用发光胱天蛋白酶-glo3/7测定(promega)评估胱天蛋白酶活化。将胱天蛋白酶-glo3/7信号归一化为细胞数(通过ctg评估)并显示为相对于对照(dmso处理的)细胞的倍数诱导。在dlbcl细胞系中的10天时间过程中监测胱天蛋白酶3/7活性，该dlbcl细胞系显示对化合物a的细胞毒性(toledo)和细胞抑制(daudi)响应(图19)。与在生长-死亡测定中观察到的情况一致，toledo细胞系显示出稳健的胱天蛋白酶活化，同时在所有时间点细胞数量减少，而daudi细胞系中胱天蛋白酶活性的诱导不太明显并且限于最高浓度的化合物a。与细胞周期谱一起，这些数据表明化合物a在toledodlbcl细胞系中诱导胱天蛋白酶介导的细胞凋亡，表明在其他淋巴瘤细胞系中观察到的细胞毒性可能反映化合物a对凋亡途径的激活。小鼠异种移植物中的抗肿瘤作用在toledo(人dlbcl)异种移植模型中评估化合物a对肿瘤生长的影响。将带有皮下toledo肿瘤的雌性scid小鼠称重，用测径器测量肿瘤，并根据肿瘤大小将小鼠随机分组到每组10只小鼠的治疗组中。每天给小鼠口服媒介物或化合物a(150mg/kg-600mg/kg)达28天。在整个研究中，每周两次进行称重小鼠和肿瘤测量。在所有剂量下观察到显著的肿瘤生长抑制(tgi)，并且在>300mg/kg的剂量下观察到消退(图20，表5)。在任何剂量组中没有显著的体重减轻。鉴于在评估的所有剂量下观察到完整的tgi，进行第二项研究以测试化合物a在较低剂量下的抗肿瘤作用以及相对于每日(qd)比较每日两次(bid)给药。在该第二项研究中，给小鼠口服媒介物或化合物a(37.5mg/kg-150mg/kg)达24天qd或75mg/kgbid。在该研究中，75mg/kg的bid给药导致与150mg/kg相同的tgi(分别为95％和96％)，而≤75mg/kgqd导致部分tgi(≤79％)(图20，表5)。在任何剂量组中未观察到显著的体重减轻。这些数据表明，用相同的总日剂量给药的bid或qd应该产生相似的功效。其它肿瘤类型aml除淋巴瘤细胞系外，化合物a在6天增殖试验中检测的aml细胞系亚组中具有有效的细胞毒活性(表3)。10个细胞系中的8个具有<2μm的gic50值，并且化合物a在5个细胞系中诱导细胞毒性。尽管prmt1与m2aml亚型的aml-eto融合特征相互作用(shia,w.j.等人，prmt1interactswithaml1-etotopromoteitstranscriptionalactivationandprogenitorcellproliferativepotential.blood119,4953-4962,doi:10.1182/blood-2011-04-347476(2012))，但携带该融合蛋白(kasumi-1和skno-1)的细胞系不是通过gic50测量而显示对化合物a的敏感性或经历细胞毒性的唯一细胞系(表4，图21)。因此，这种致癌融合蛋白的存在并不能仅仅预测aml细胞系对化合物a的敏感性。表4aml细胞系中化合物a活性的概述与淋巴瘤研究类似，在第6天和第10天评估一组细胞系以测量长期暴露于化合物a的效果，并确定在6天测定中显示细胞抑制响应的aml细胞系是否可能在稍后时间点发生细胞毒性。与淋巴瘤结果一致，延长暴露于化合物a的时间对评估的aml细胞系的效力(gic50)或细胞毒性(ymin-t0)具有最小影响(图21)。肾细胞癌与其他实体瘤类型相比，肾细胞癌细胞系具有最低的中值gic50。尽管在用化合物a处理时，所测试的细胞系均未显示出细胞毒性响应，但均显示完全生长抑制，并且10个中的6个具有≤2μm的gic50值(表5)。所描述的10个细胞系中的7个代表透明细胞肾癌(ccrcc)，其是肾癌的主要临床亚型。表5化合物a在肾细胞癌细胞中的抗增殖作用的概述为了评估化合物a对肾癌细胞系中生长抑制的时间过程，在第3、4、5和6天通过一组4个ccrcc细胞系中的ctg评估细胞生长(图22)。活性的最大变化发生在第3天和第4天之间，其中所有细胞系显示降低gic50值并增加生长抑制。化合物a的效力(通过gic50评估)在4个细胞系中的3个到第4天最大，并且在6天测定持续时间内进一步没有变化。另外，在评估的所有细胞系中，生长抑制百分比达到100％。因此，ccrcc细胞系中的最大生长抑制在细胞系筛选策略中使用的6天生长窗口内是明显的。在增殖期间评估胱天蛋白酶活化，并且与ymin-t0值所示的缺乏明显细胞毒性一致，胱天蛋白酶断裂仅发生在最高浓度(30μm)，表明凋亡可能对化合物a在ccrcc细胞系中诱导的整体生长抑制作用影响最小。在携带人肾细胞癌异种移植物(achn)的小鼠中评估化合物a对肿瘤生长的影响。将带有皮下achn细胞系肿瘤的雌性scid小鼠称重，并通过测径器测量肿瘤，并根据肿瘤大小随机分组到每组10只小鼠的治疗组中。小鼠每天口服给予媒介物或化合物a(150mg/kg-600mg/kg)，最多59天。在整个研究中，称重小鼠并每周两次进行肿瘤测量。在所有剂量下观察到显著的肿瘤生长抑制，并且在≥300mg/kg的剂量下观察到消退。在每天600mg/kg治疗的动物中观察到显著的体重减轻，因此，给药组在第31天终止(图23，表6)。表6化合物a体内功效*p<0.05，双尾t检验**achn功效研究的600qd组在第31天终止总之，这些数据表明在人类实体和血液肿瘤的皮下异种移植物中可以以相似剂量实现100％tgi。乳腺癌乳腺癌细胞系显示出对化合物a的一系列敏感性，并且在许多情况下，在6天增殖测定中显示出部分生长抑制(图24)。代表三阴性乳腺癌(tnbc)的细胞系与非tnbc细胞系相比具有略低的中值gic50值(对于tnbc和非tnbc分别为3.6μm和6.8μm)。由于化合物a对增殖的作用是细胞抑制的并且在大多数乳腺癌细胞系中没有导致完全生长抑制，因此进行延长的持续时间生长-死亡测定以确定对化合物a的敏感性是否会随着延长的暴露而增加。在测试的17种细胞系中有7种最大抑制百分比增加≥10％，且gic50减少≥2倍(图25)。在延长的暴露测定中，17种细胞系中有11种gic50≤2μm(65％)，而17种细胞系中有7种(41％)在7天测定形式中符合该标准。黑素瘤在实体瘤类型中，化合物a在黑素瘤细胞系中具有最有效的抗增殖作用(图11)。评估的7个细胞系中的6个具有小于2μm的gic50值(表7)。无论gic50值如何，化合物a在所有黑素瘤细胞系中均具有细胞抑制作用。表7黑素瘤细胞系中化合物a活性的概述实施例2组合采用两种合理的方法来研究与化合物a的潜在组合。用于评价与化合物a的组合的第二种方法涉及探索免疫疗法与prmt1抑制的组合益处。prmt1通过调节tlr受体信号转导途径参与免疫调节，由此prmt1敲低导致促炎分子的表达增加(tikhanovich,i.等人，dynamicargininemethylationoftumornecrosisfactor(tnf)receptor-associatedfactor6regulatestoll-likereceptorsignaling.jbiolchem290,22236-22249,doi:10.1074/jbc.m115.653543(2015))。用prmt1抑制剂工具化合物(化合物d)进行的初步rna-seq研究表明免疫应答基因家族如aml细胞系中的趋化因子、细胞因子、干扰素和白细胞介素的表达改变。鉴于与免疫疗法相关的新兴临床功效，在同系免疫活性小鼠模型中检查了化合物a与抗pd-1的组合抗肿瘤活性。携带皮下鼠黑素瘤(cloudmans91)肿瘤的雌性dba/2ntac小鼠口服给药媒介物或300mg/kg化化合物a，每天一次，持续3周。给小鼠腹膜内施用抗-pd1、igg或相应的媒介物10mg/kg，每周两次，持续21天。另外一组给予抗-pd121天，但继续接受化合物a至50天。在整个研究期间每周两次进行肿瘤测量。单独的化合物a和与抗pd1的组合在第21天对肿瘤生长抑制具有显著作用(图26；表8)。这种效果在化合物a/抗pd1组合组中最为显著，其中在几乎所有动物中观察到肿瘤消退(图26)。在组合治疗组中的一些动物中观察到对体重和发病率的影响。表8第21天肿瘤生长抑制的统计学比较。对于每次比较，指示p值(t-检验)。为了确定观察到的对肿瘤生长的影响是否反映了细胞系的敏感性，评估了化合物a对培养物中cloudmans91细胞生长的影响。在96孔优化的6天测定形式中，化合物a对该小鼠衍生细胞系的生长具有弱影响(gic50＝9.5μm)，表明在同系小鼠模型中观察到的抗肿瘤活性不是细胞自发的并且可能需要完整的免疫系统(图27)。目前正在进行使用cloudmans91的免疫受损小鼠异种移植模型证实免疫系统对抗肿瘤作用的贡献的研究。总的来说，这些数据表明化合物a可以参与免疫系统，并且可以与目前批准用于患者以及正在开发的免疫系统检查点调节剂协同作用。这种机制可以补充化合物a对癌细胞增殖和活力的任何直接影响。实施例3组合测定用化合物d和抗ox40作为单一试剂和组合治疗的ct-26(结肠癌)肿瘤模型小鼠和a20(淋巴瘤)肿瘤模型小鼠的存活优势。小鼠口服给药媒介物或300mg/kg化合物d，每天一次，持续3周。给小鼠腹膜内施用抗ox40(克隆ox86)5mg/kg或相应的媒介物，每周两次，持续21天。克隆ox86是大鼠抗小鼠ox40受体抗体。图40显示用相应媒介物(第1组和第3组)、化合物d(第5组)、抗ox40(第2组)和化合物d与抗ox40的组合(第10组)治疗的a20肿瘤模型中的平均存活率。图41显示用相应媒介物(第1组和第3组)、化合物a(第5组)、抗ox40(第2组)和化合物d与抗ox40(第10组)的组合治疗的ct-26肿瘤模型的平均存活率。用抗ox-40抗体和化合物d的组合治疗ct-26异种移植肿瘤导致存活增加，突出了两种药物之间潜在的协同相互作用。序列表<110>葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司<120>组合疗法<130>pu66170<150>us62/428,757<151>2016-12-01<150>us62/433,359<151>2016-12-13<160>38<170>patentin版本3.5<210>1<211>5<212>prt<213>mussp.<400>1asptyrsermethis15<210>2<211>17<212>prt<213>mussp.<400>2trpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphelys151015gly<210>3<211>13<212>prt<213>mussp.<400>3protyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyr1510<210>4<211>122<212>prt<213>mussp.<400>4glnileglnleuvalglnserglyprogluleulyslysproglyglu151015thrvallysilesercyslysalaserglytyrthrphethrasptyr202530sermethistrpvallysglnalaproglylysglyleulystrpmet354045glytrpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphe505560lysglyargphealapheserleugluthrseralaserthralatyr65707580leuglnileasnasnleulysasngluaspthralathrtyrphecys859095alaasnprotyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyrtrp100105110glyhisglythrservalthrvalserser115120<210>5<211>122<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多肽<400>5glnvalglnleuvalglnserglysergluleulyslysproglyala151015servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrasptyr202530sermethistrpvalargglnalaproglyglnglyleulystrpmet354045glytrpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphe505560lysglyargphevalpheserleuaspthrservalserthralatyr65707580leuglnileserserleulysalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaasnprotyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyrtrp100105110glyglnglythrthrvalthrvalserser115120<210>6<211>458<212>dna<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多核苷酸<400>6actagtaccaccatggcttgggtgtggaccttgctattcctgatggcagctgcccaaagt60atccaagcacaggttcagttggtgcagtctggatctgagctgaagaagcctggagcctca120gtcaaggtttcctgcaaggcttctggttataccttcacagactattcaatgcactgggtg180cgacaggctccaggacaaggtttaaagtggatgggctggataaacactgagactggtgag240ccaacatatgcagatgacttcaagggacggtttgtcttctctttggacacctctgtcagc300actgcctatttgcagatcagcagcctcaaagctgaggacacggctgtgtattactgtgct360aatccctactatgattacgtctcttactatgctatggactactggggtcagggaaccacg420gtcaccgtctcctcaggtaagaatggcctctcaagctt458<210>7<211>11<212>prt<213>mussp.<400>7lysalaserglnaspvalserthralavalala1510<210>8<211>7<212>prt<213>mussp.<400>8seralasertyrleutyrthr15<210>9<211>9<212>prt<213>mussp.<400>9glnglnhistyrserthrproargthr15<210>10<211>107<212>prt<213>mussp.<400>10aspilevalmetthrglnserhislysphemetserthrservalarg151015aspargvalserilethrcyslysalaserglnaspvalserthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglyglnserprolysleuleuile354045tyrseralasertyrleutyrthrglyvalproaspargphethrgly505560serglyserglythraspphethrphethrileserservalglnala65707580gluaspleualavaltyrtyrcysglnglnhistyrserthrproarg859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105<210>11<211>107<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多肽<400>11aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcyslysalaserglnaspvalserthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrseralasertyrleutyrthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrphethrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglnhistyrserthrproarg859095thrpheglyglnglythrlysleugluilelys100105<210>12<211>416<212>dna<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多核苷酸<400>12gctagcaccaccatggagtcacagattcaggtctttgtattcgtgtttctctggttgtct60ggtgttgacggagacattcagatgacccagtctccatcctccctgtccgcatcagtggga120gacagggtcaccatcacctgcaaggccagtcaggatgtgagtactgctgtagcctggtat180caacagaaaccaggaaaagcccctaaactactgatttactcggcatcctacctctacact240ggagtcccttcacgcttcagtggcagtggatctgggacggatttcactttcaccatcagc300agtctgcagcctgaagacattgcaacatattactgtcagcaacattatagtactcctcgg360acgttcggtcagggcaccaagctggaaatcaaacgtaagtagaatccaaagaattc416<210>13<211>5<212>prt<213>mussp.<400>13serhisaspmetser15<210>14<211>17<212>prt<213>mussp.<400>14alaileasnseraspglyglyserthrtyrtyrproaspthrmetglu151015arg<210>15<211>11<212>prt<213>mussp.<400>15histyraspasptyrtyralatrpphealatyr1510<210>16<211>120<212>prt<213>mussp.<400>16gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglyglu151015serleulysleusercysgluserasnglutyrglupheproserhis202530aspmetsertrpvalarglysthrproglulysargleugluleuval354045alaalaileasnseraspglyglyserthrtyrtyrproaspthrmet505560gluargargpheileileserargaspasnthrlyslysthrleutyr65707580leuglnmetserserleuargsergluaspthralaleutyrtyrcys859095alaarghistyraspasptyrtyralatrpp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