一种健胃散配方及其功效的测试方法与流程

文档序号:14875656发布日期:2018-07-07 05:59阅读:324来源:国知局
本发明涉及医药
技术领域
,特别是涉及一种健胃散配方及其功效的测试方法。
背景技术
:近年来由于生活水平的提高,人们饮食作息不规律。在多方面因素影响下,胃的自我保护能力下降,出现胃出血、胃溃疡、胃绞痛等情况频繁。针对此情况,健胃散按照中医理论指导,调节提高胃粘膜的自我保护能力,有良好的防治作用,能减轻胃不舒适带来的痛苦,有利于现代人的健康。然而,已有的化学药物均具有不同程度副作用。而具有健胃作用中成药多采用山楂、麦芽、六神曲、槟榔制作而成(例如专利cn304394554s中),偏重于促进机体消化功能,或者是采用姜粉与香附分混合制成的简易配方(例如专利cn105797038),而后者所使用的均是药材自身的功效居多。例如其中香附具有理气解郁的功效,用于治疗肝郁气,滞胸,胁脘腹胀痛,消化不良,调经止痛功能;良姜具有主治脾胃中寒,脘腹冷痛,呕吐止泻,食滞,温胃散寒,治胃寒痛,腹痛,燥湿祛邪,治风湿关节痛,消化不良的功能。现有技术中的健胃散,主要用于腹痛泻泄,呕吐反胃,消化不良,食欲减退,久泻便溏,慢性疳疾等,并未见酒精等物质所致的胃粘膜损伤存在保护作用。在我国,酒文化源远流长,推出一款具有针对乙醇造成胃粘膜损伤保护的健胃散成为目前亟待解决的问题。技术实现要素:本发明实施例要解决的技术问题是现有技术中的健胃散的使用目的均是针对消化不良、止泻利湿等传统问题的改善,缺少一种针对性强的,且能有效改善酒精乙醇所造成胃粘膜损伤的健胃散配方。本发明实施例采用如下技术方案:第一方面,本发明提供了一种健胃散配方,配方按照以下的各成分的比重关系进行配比,包括:海螵蛸100-130g,鸡内金90-110g,黄芪90-110g,三七40-60g,乌梅40-60g和制元胡40-60g,以及制白术,大黄,猪茯和白芨各5-10g。优选的,各成分以相应重量配比,并被打成粉末混合;其中,所述配方在使用时,与蜂蜜混合后食用。第二方面,一种健胃散配方功效的测试方法,对于第一方面所述的健胃散配方,采用km小鼠、性别和分组为3只公鼠和3只母作为一分组、体重为20±5g,健胃散成人日用剂量为6-9g/60kg,小鼠用量为人的10倍,其中,测试方法设置为:低剂量设为成人用量6g/60kg的10倍;中剂量设为成人用量9g/60kg的10倍;高剂量设为成人用量9g/60kg的15倍;空白对照组采用生理盐水对照;其中,给药方式为灌胃给药;给药体积为0.2ml/kg;给药次数为每天一次,连续给药5天;其中,测试的观察指标为体重变化及增长率、胃黏膜损伤发生率、损伤积分指数和损伤抑制率中的一项或者多项。优选的,所述损伤发生率的计算方法为:各分组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100%;损伤积分指数的计算方法为:组损伤评分总和/组动物数量;损伤抑制率的计算方法为:(a-b)/a×100%,其中,a和b分别为模型组与试验组的损伤积分。优选的,所述损伤评分由肉眼观察评分标准和急性胃黏膜损伤镜下评分标准中的一种或者两种构成。优选的,所述肉眼观察评分标准具体为:满足出血点为1个、出血带长度为1-5mm和出血带宽度为1-2mm的任一一个条件均可获得1积分;满足出血带长度为6-10mm和出血带宽度大于2mm中任一一个条件均可获得2积分;满足出血带长度为10-15mm的条件即可获得3积分;满足出血带长度大于15mm的条件即可获得4积分;其中,所述肉眼观察评分的总积分为:出血点积分值+出血带长度积分值+出血带宽度积分值×2。优选的,所述急性胃黏膜损伤镜下评分标准具体为:满足上皮层充血面积小于1/5、上皮层出血面积小于1/5和上皮细胞变形坏死占比<1/5中的任一一个条件均可获得1积分;满足上皮层充血面积为1/5-2/5、上皮层出血面积为1/5-2/5和上皮细胞变形坏死占比为1/5-2/5中的任一一个条件均可获得2积分;满足上皮层充血面积为2/5-3/5、上皮层出血面积为2/5-3/5和上皮细胞变形坏死占比为2/5-3/5中的任一一个条件均可获得3积分;满足上皮层充血面积为3/5-4/5、上皮层出血面积为3/5-4/5和上皮细胞变形坏死占比为3/5-4/5中的任一一个条件均可获得4积分;满足上皮层充血面积为全层、上皮层出血面积为全层和上皮细胞变形坏死占比为100%中的任一一个条件均可获得5积分;其中,所述急性胃黏膜损伤镜下病变总积分=充血面积积分+出血面积积分×2+上皮细胞变性坏死面积积分×3。优选的,所述急性胃黏膜损伤镜下评分具体为:将每只动物胃黏膜损伤最严重的部位切下,固定于10%甲醛溶液,常规制片,he染色,镜下观察相应的充血、出血和上皮细胞变形坏死的占比。优选的,空白组小鼠损伤发生率为0,低剂量组和中剂量组的胃黏膜损伤发生率均为100%,高剂量组损伤发生率为40%;健胃散各个剂量组损伤抑制率分别为低剂量组50%,中剂量组62.5%,高剂量组90%,确认健胃散对胃黏膜损伤的保护具有剂量依赖性;其中,测试得出在成人用量9g/60kg的30倍剂量下出现测试km小鼠的药物毒性。优选的,通过测量小肠的总长度和幽门至碳末距的长度,求出推进率来观测药品对小鼠胃肠的推进作用;其中,推进率=(幽门至碳末距的长度/小肠的总长度)*100%。与现有技术相比,本发明实施例的有益效果在于:本发明所提出的健胃散能够收敛止血,止痛解痉,增强胃黏膜的保护作用,对胃损伤有预治疗作用。并且,本发明所提出的健胃散配方相比较现有技术的,具有更强的针对性,能够针对因为乙醇产生的胃粘膜受损起到更好的修复作用。【附图说明】为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。图1是本发明实施例提供的各组动物胃解剖图;图2是本发明实施例提供的各组小鼠胃粘膜损伤积分比较结果柱状图;图3是本发明实施例提供的各组动物胃黏膜病理图;图4是本发明实施例提供的模型组动物胃黏膜病理图;图5是本发明实施例提供的低剂量组动物胃黏膜病理图;图6是本发明实施例提供的中剂量组动物胃黏膜病理图;图7是本发明实施例提供的高剂量组动物胃黏膜病理图;图8是本发明实施例提供的各组胃肠推进率比较结果图;图9是本发明实施例提供的小鼠小肠碳末推进照片;图10是本发明实施例提供的实验动物合格证明。【具体实施方式】为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。在本发明的描述中,术语“内”、“外”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明而不是要求本发明必须以特定的方位构造和操作,因此不应当理解为对本发明的限制。通过对有关治疗胃溃疡胃出血资料的查找,了解导致胃损伤的原因,深究其原因并根据所掌握的有关中药材使用及配伍知识,研究出健胃散的配方,通过实验研究发现,健胃散对胃黏膜损伤有预保护作用,能抑制胃损伤,并根据实验的结果调整配方的剂量,通过多次实验最终研究确定健胃散的配方,对胃黏膜保护起到良好的效果。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。实施例1:本发明实施例提出了一种健胃散配方,配方按照以下的各成分的比重关系进行配比,包括:海螵蛸100-130g,鸡内金90-110g,黄芪90-110g,三七40-60g,乌梅40-60g和制元胡40-60g,以及制白术,大黄,猪茯和白芨各5-10g。本发明实施例所提出的所述健胃散配方在食用时,可以并被打成粉末混合存放,并在服用时与蜂蜜混合后食用。本发明实施例所提出的健胃散配方相比较现有技术的,具有更强的针对性,能够针对因为乙醇产生的胃粘膜受损起到更好的修复作用。为了证实上述本发明所能带来的有益效果,本发明实施例还提供了另一实施例2,使用如实施例1所述的健胃散的作用效果作为测试对象进行的测试实验。实施例2:本发明实施例在提供了如实施例1所述的一种健胃散配方后,进一步的通过本发明实施例提出一种健胃散配方功效的测试方法,使用如实施例1所述的健胃散配方,采用km小鼠、性别和分组为3只公鼠和3只母作为一分组、体重为20±5g,健胃散成人日用剂量为6-9g/60kg,小鼠用量为人的10倍,其中,测试方法设置为:低剂量设为成人用量6g/60kg的10倍;中剂量设为成人用量9g/60kg的10倍;高剂量设为成人用量9g/60kg的15倍;空白对照组采用溶媒对照;其中,给药方式为灌胃给药;给药体积为0.2ml/kg;给药次数为每天一次,连续给药5天;其中,测试的观察指标为体重变化及增长率、胃黏膜损伤发生率、损伤积分指数和损伤抑制率中的一项或者多项。通过本发明实施例提出的测试结果,证实了空白组小鼠损伤发生率为0,低剂量组和中剂量组的胃黏膜损伤发生率均为100%,高剂量组损伤发生率为40%;健胃散各个剂量组损伤抑制率分别为低剂量组50%,中剂量组62.5%,高剂量组90%,表明健胃散对胃黏膜损伤的保护具有剂量依赖性;其中,测试还得出在成人用量9g/60kg的30倍剂量下出现测试km小鼠的药物毒性。在本发明实施例中,优选的,所述损伤发生率的计算方法为:各分组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100%;损伤积分指数的计算方法为:组损伤评分总和/组动物数量;损伤抑制率的计算方法为:(a-b)/a×100%,其中,a和b分别为模型组与试验组的损伤积分。在本发明实施例中,优选的,所述损伤评分由肉眼观察评分标准和急性胃黏膜损伤镜下评分标准中的一种或者两种构成。在本发明实施例中,优选的,所述肉眼观察评分标准具体为:满足出血点为1个、出血带长度为1-5mm和出血带宽度为1-2mm的任一一个条件均可获得1积分;满足出血带长度为6-10mm和出血带宽度大于2mm中任一一个条件均可获得2积分;满足出血带长度为10-15mm的条件即可获得3积分;满足出血带长度大于15mm的条件即可获得4积分;其中,所述肉眼观察评分的总积分为:出血点积分值+出血带长度积分值+出血带宽度积分值×2。在本发明实施例中,优选的,所述急性胃黏膜损伤镜下评分标准具体为:满足上皮层充血面积小于1/5、上皮层出血面积小于1/5和上皮细胞变形坏死占比<1/5中的任一一个条件均可获得1积分;满足上皮层充血面积为1/5-2/5、上皮层出血面积为1/5-2/5和上皮细胞变形坏死占比为1/5-2/5中的任一一个条件均可获得2积分;满足上皮层充血面积为2/5-3/5、上皮层出血面积为2/5-3/5和上皮细胞变形坏死占比为2/5-3/5中的任一一个条件均可获得3积分;满足上皮层充血面积为3/5-4/5、上皮层出血面积为3/5-4/5和上皮细胞变形坏死占比为3/5-4/5中的任一一个条件均可获得4积分;满足上皮层充血面积为全层、上皮层出血面积为全层和上皮细胞变形坏死占比为100%中的任一一个条件均可获得5积分;其中,所述急性胃黏膜损伤镜下病变总积分=充血面积积分+出血面积积分×2+上皮细胞变性坏死面积积分×3。在本发明实施例中,优选的,所述急性胃黏膜损伤镜下评分具体为:将每只动物胃黏膜损伤最严重的部位切下,固定于10%甲醛溶液,常规制片,he染色,镜下观察相应的充血、出血和上皮细胞变形坏死的占比。结合本发明实施例,为了进一步验证健胃散的效果,还通过测量小肠的总长度和幽门至碳末距的长度,求出推进率来观测药品对小鼠胃肠的推进作用;其中,推进率=(幽门至碳末距的长度/小肠的总长度)*100%。实施例3:本发明实施例采用实施例2所提出的测试思路和方法,并采用其中具体一种计算方式完成实施例1所提出的健胃散的效果验证。在本发明实施例中,所述健胃散的配方为:海螵蛸120g,鸡内金100g,黄芪100g,三七50g,乌梅50g,制元胡50g,以及制白术,大黄,猪茯,白芨各5g,将原药材打成粉末制成健胃散,与蜂蜜同用。实验过程如下:1、给药其中,动物许可证明如图10所示。2、观察指标体重变化及增长率;胃黏膜损伤发生率(%)、损伤积分指数和损伤抑制率;病理组织学观察及积分。表1肉眼观察酒精损伤评分标准损伤程度1分2分3分4分出血点1个---出血带长度1-5mm6-10mm10-15mm>15mm出血带宽度1-2mm>2mm--总积分=出血点分值+长度分值+(宽度分值×2)观察指标:各实验组胃黏膜损伤程度以损伤发生率(%)、损伤积分指数和损伤抑制率表示。损伤发生率(%)=某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100%;损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量;损伤抑制率(%)=(a-b)/a×100%(a、b分别为模型组与试验组的损伤积分)。病理组织学观察及评分:大体检查完毕,将每只动物胃黏膜损伤最严重的部位切下,固定于10%甲醛溶液,常规制片,he染色,镜下观察。注意选择胃黏膜正横切面,包括粘膜全层的区域观察。评分方法:以充血、出血、粘膜细胞变性坏死在整个粘膜上皮层的累积程度分为5级。充血权重为1,出血权重为2,上皮细胞变性坏死权重为3,评分标准及病变总积分公式见表2.表2急性胃黏膜损伤镜下评分标准病变1分2分3分4分5分充血<1/51/5-2/52/5-3/53/5-4/5上皮全层出血<1/51/5-2/52/5-3/53/5-4/5上皮全层上皮细胞变性坏死<1/51/5-2/52/5-3/53/5-4/5上皮全层病变总积分=充血积分+出血积分×2+上皮细胞变性坏死积分×33、结果3.1健胃散对小鼠体重的影响在本实验室条件下,健胃散对小鼠的生长无显著影响,如表3所示。表3.小鼠体重增长情况组别对照组模型组低剂量组中剂量组高剂量组0天(g)24±1.4723.08±3.2126.5±0.8926.4±2.4523.58±3.725天(g)22.2±1.5720.2±20.7424.5±1.7324.75±3.9321.9±2.43.2健胃散对无水乙醇所致胃粘膜损伤的影响通过预实验发现,在成人用量9g/60kg的30倍剂量下出现药毒性,因此该药使用量不得超出成人用量9g/60kg的30倍。无水乙醇损伤1h后,解剖各小鼠胃部,肉眼可见对照组小鼠胃粘膜光滑完整,没有出血现象。其余各组小鼠均出现了粘膜出血、组织坏死。模型组动物损伤最为严重,表现为大块的出血面积,呈鲜红色。高、中、低剂量给药组则表现为点状或条状出血,出血面积明显缩小(图1中,a为对照组胃部粘膜出血效果示意图、b为模型组胃部粘膜出血效果示意图、c为低剂量组胃部粘膜出血效果示意图、d为中剂量组胃部粘膜出血效果示意图、f为高剂量组胃部粘膜出血效果示意图)。根据评分标准计算各组动物损伤评分如表4。胃黏膜保护产品可剂量依赖性地减轻无水乙醇所致的胃黏膜损伤,减轻胃黏膜损伤程度,具有良好的胃黏膜保护作用,且呈现剂量依赖性,如图2所示,随着剂量的增加,胃损伤积分逐渐下降,低中高三个给药剂量组与模型组比较都有显著性差异,高剂量组损伤积分最低,作用效果最好。其中,与模型组比较,***p<0.001。表4各组动物胃粘膜损伤评分情况备注:k代表空白组;m代表模型组;d代表低剂量组;z代表中剂量组;g代表高剂量组3.3.健胃散对无水乙醇所致胃病理组织学影响病理学检查结果与肉眼大体观察结果一致,模型组动物胃粘膜损伤最为严重。健胃散各个给药组对胃粘膜损伤均有改善作用,且呈现剂量依赖性,如图3所示为对照组动物胃黏膜病理图,组织整体结构基本正常,粘膜层无明显坏死及变形,组织无明显炎症。图4为模型组动物胃黏膜病理图,组织整体结构重度异常,粘膜层广泛糜烂坏死,并可见大量红细胞,如图4中虚线圆圈所示;粘膜下层重度水肿,如图4中黑色圆圈所示。图5为低剂量组(6g/60kg的10倍)动物胃黏膜病理图,胃组织整体结构中度异常,粘膜层可见上皮细胞点状坏死,并可见少量出血,如图5中黑色方框所示;粘膜层可见少量炎症细胞浸润,炎症细胞已中性粒细胞为主,如图5中虚线圆圈所示;粘膜下层可见水肿,如图5中黑色圆圈所示;粘膜层部分动脉可见充血,如图5中黑色虚线方框所示。图6为中剂量组(9g/60kg的10倍)动物胃黏膜病理图,组织整体结构轻度异常,粘膜层结构基本正常,粘膜上皮无明显坏死变性;粘膜下层轻度水肿,部分肠壁脱落,如图6中黑色实线圆圈所示;粘膜层部分动脉可见充血,如图6中黑色虚线圆圈所示。图7为高剂量(9g/60kg的15倍)组动物胃黏膜病理图,组织整体结构轻度异常,粘膜层无明显坏死及变形;粘膜下层可见轻度水肿,如图7中黑色实体圆圈所示;组织无明显炎症细胞浸润。实施例4:本发明实施例采用实施例2所提出的测试思路和方法,并采用其中具体一种计算方式完成实施例1所提出的健胃散的效果验证。在本发明实施例中,所述健胃散的配方为:海螵蛸120g,鸡内金100g,黄芪100g,三七50g,乌梅50g,制元胡50g,以及制白术,大黄,猪茯,白芨各5g,将原药材打成粉末制成健胃散,与蜂蜜同用。实验主要针对健胃散对小鼠胃肠推进功能的影响进行实验,过程如下:1、主要研究结果溶剂对照度组小鼠推进率为37.96%,健胃散各个剂量组推进率分别为低剂量组63.9%,中剂量组58.2%,高剂量组57.5%,结果证实健胃散对胃肠有推进作用,并且作用具有剂量依赖性,如图8所示为各组胃肠推进率比较。平均值±sd,n=5,与对照组比较,**p<0.01。2、给药其中,动物许可证明如图10所示。3、观察指标通过测量小肠的总长度和幽门至碳末距的长度,求出推进率来观测药品对小鼠胃肠的推进作用。推进率=(幽门至碳末距的长度/小肠的总长度)*100%4、结果在本实验室条件下,从实验数据(表5和表6,图8和图9)可看出,低中高三个给药组的推进率都大于溶剂对照组,说明健胃散推进胃肠蠕动的作用,且具有剂量依赖性。表5各组小鼠胃肠推进情况(原始数据)备注:k代表空白组;m代表模型组;d代表低剂量组;z代表中剂量组;g代表高剂量组表6各组动物胃肠推进率比较注:平均值±sd,n=5,与对照组比较,**p<0.01以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12
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