本发明涉及锁阳药品制备领域，具体地说是一种锁阳抗缺氧口含片及其制备方法。
背景技术：
缺氧(hypoxia)是指因机体组织供氧不足或用氧障碍导致组织代谢、功能和形态结构异常的病理过程，涉及高原环境医学、航空与航天医学、运动医学等各个学科，许多病理过程如休克、栓塞、缺血-再灌注等也与器官组织的缺血缺氧有关。高原地区特有的低压、低氧环境使初到高原的人极易出现头痛、心悸、胸闷、气短、乏力、睡眠障碍、恶心、呕吐等急性高原反应，严重时还会出现高原肺水肿、高原脑水肿等致命性疾病，同时由于低氧、低压而形成的慢性高原病也严重危害着世居高原人民的身体健康。
机体在缺氧、寒冷、紫外线照射、运动等环境因素的刺激下，通过酶系统和非酶系统可产生氧自由基作用于生物体而产生过多的自由基，并消耗体内产生的抗氧化剂等物质。自由基增加不仅可以氧化细胞不饱和脂肪酸，造成细胞结构和功能的损伤，同时也可破坏核酸、蛋白质(酶)，导致了体内氧自由基的蓄积。氧自由基对机体不断的累积性损害可能是慢性高原病患者体内组织结构、功能受损的一个重要因素之一。同时，当平原地区的人急速进入高原时，由于对高原低氧等环境不适应，造成机体氧供应不足，氧的运输和利用受到阻碍，有些人员就会产生急性缺氧反应，缺氧可引起交感神经兴奋和儿茶酚胺释放，引起心率加快，同时，可使脑血流量显著增高。在缺氧环境下，血管内皮释放一氧化氮减少，导致肺血管收缩。持续的肺血管收缩可导致肺血管阻力增加，并由此导致高原性肺水肿等严重的致命性并发症。
随着我国西部大开发战略的实施与青藏铁路的开通，高原地区经济建设的加速发展、旅游资源的开发，随着青藏高原经济的不断发展，定居高原的人数在不断增加，且每年有数以万计的游客或务工者前往青藏高原，而急慢性高原病为这些人们带来极大的伤害或心理恐惧，因此，如何预防急性高原病和慢性高原病成为了当前的一个公共健康问题，并可能导致经济学的不利结果。随着越来越多的人到达高海拔地区，对于高海拔地区潜在健康问题的有效药物防治成为医药界所面临的重要挑战，越来越多的高原居民、从业者及旅游者对高原相关疾病的预防和治疗信息需求日益增长，高原相关疾病的有效防治成为制约高原地方经济、社会和军事发展的瓶颈。
当前，治疗急慢性高原病的药物主要有两大类：化学合成药物及中草药。化学合成药物如乙酰唑胺，地塞米松、西地那非、茶碱缓释片、硝苯地平等。其中使用时间较长且疗效确切的为乙酰唑胺和地塞米松，但是由于碳酸酐酶抑制剂和激素类药物的副作用，二者作为预防和治疗高原病的药物并不理想，开发副作用小疗效确切的候选药物仍是目前抗高原缺氧防治药物研发的热点。近年来抗氧化剂类和传统中药类抗高原缺氧药物作为一个新的领域成为了研究的热点。其中，一些传统中藏药是千百年来高原人民在与高原病作斗争过程中吸取传统中藏药理论而形成的宝贵财富，其以副作用小，疗效确切，服用简便等特色优势，越来越受到人们重视。如红景天、蕨麻、唐古特青兰、锁阳、异叶青兰、枸杞、沙棘等。因此，从中藏药药用植物中寻找开发高效低毒的抗缺氧药物是切实可行的有效途径。
锁阳(cynomoriumsongaricumrupr．)是锁阳科(cynomoriaceae)锁阳属单科单属植物，为多年生肉质全寄生药用植物，分布干旱、荒漠及盐碱地带，多寄生于蒺藜科(zygoph，llaceae)白刺属(nitrarial．)植物根部。在我国主要分布在内蒙古、宁夏、新疆、甘肃、青海等地。其中，青海锁阳储藏量近5000吨，锁阳以干燥肉质茎入药，《本草纲目》记述：“锁阳性温、补肾、益精血、润燥养精治痿弱”。临床用锁阳补阳气，治阳痿精虚，阴衰血竭，老年气弱阴虚，大便燥结等。近年来研究证明，它还有防癌、抗癌，免疫调节，延缓衰老，对防治心血管疾病有明显的效果。同时，民间也一直将锁阳作为药食同源的植物，很早就有民间采挖锁阳习俗，或鲜吃，或去皮切片晾干，泡茶泡酒、入药入汤，由于锁阳保健功效神奇，流传有“三九三的锁阳赛人参”之民谣。百姓早就有锁阳晒干泡水喝，熬粥吃，蒸着吃等民间传统习俗。近年来，又有商家把它做成锁阳酒、锁阳咖啡等产品出售到全国各地。
多年来，锁阳一直被视为补肾壮阳的药材，专用于男性。但是大量的现代药理学实验研究表明，锁阳除对动物性功能和肾功能有一定促进作用外，还具有更广泛的生物活性，如抗衰老、抗氧化及抗应激作用。实验表明，锁阳可降低老年小鼠nnos活性，减少no含量，提高sod活性，激活bcl-2基因表达，抑制bax基因表达，有显著抑制神经元细胞凋亡及延缓衰老的作用；锁阳能显著抑制酒精损伤造成的血清和线粒体内超氧化物歧化酶(sod)活性的降低及过氧化脂质(lpo)的升高，体外实验也表明提取物具有直接清除羟基自由基作用；锁阳醇提物能显著提高衰老小鼠过氧化氢酶(cat)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh．px)活性，增强小鼠抗氧化能力；锁阳水提物partⅲ可减轻缺氧小鼠脑水肿程度，增加心肌蛋白含量，能够有效保护缺氧时小鼠心脑组织细胞的结构。锁阳对机体非特异性免疫功能及细胞免疫功能均有调节作用，可增加阳虚小鼠脾脏重量，增加脾脏淋巴细胞数目，使中性粒细胞数升高，从而增加机体的防御能力；通过复制常压密闭缺氧模型、高原低压缺氧模型筛选出锁阳水提物的大孔树脂95%乙醇洗脱物（partⅲ）具有较强的抗缺氧活性，能预防高原缺氧对脑与心肌的损伤，其机制与提高缺氧时脑和心肌的sod活性，防止膜脂质过氧化、减轻缺氧时脑中乳酸积累和增加心肌蛋白有关。
因此，锁阳除作为一种补肾中药外，其保健功能也非常显著。随着人们保健意识的增强，锁阳的利用也不再局限于它的药用价值，而是更多地着眼于锁阳广泛的生物活性，研发保健产品。近几年，虽然市场上有关锁阳的药品及保健品不断出现，但总体研究水平不高，产品档次较大，大多是一些锁阳提取物或以原药材入药组成复方制剂，如锁阳三味片、锁阳固精丸、锁阳补肾胶囊、复方锁阳口服液、抗衰老锁阳茶、锁阳养生茶、锁阳咖啡、锁阳啤酒等。缺乏以锁阳主要活性成分多糖及黄酮为药效物质基础或保健活性基础的产品。
现有技术存在的问题：现有技术中未见锁阳抗缺氧口含片，本申请提供一种锁阳抗缺氧口含片及其优化的制备方法。
技术实现要素：
鉴于现有技术的不足，本发明提供了一种锁阳抗缺氧口含片及其制备方法，通过采用二氧化碳超临界萃取技术萃取锁阳抗缺氧活性组分，并以其为主药，选择黄芪、山药、红景天三种药物，组成锁阳抗缺氧复方口含片，以期通过性能功效相类似的药物配合应用，可以增强其原有疗效。实验采用合理的配比将四种药物组方，选择适当的辅料，制片而成。并通过国家相关规定进行食品功能性、安全性及毒理评价。
为了达到上述目的，本发明采用了如下的技术方案：
一种锁阳抗缺氧口含片，采用二氧化碳超临界萃取技术萃取锁阳抗缺氧活性组分，并以锁阳抗缺氧活性组分为主药辅以锁阳萃取物20g、黄芪水萃取物20个、红景天水萃取物9个、山药水萃取物26g，配以淀粉、糊精、蔗糖、低取代羧丙纤维素、羧甲基纤维素钠、薄荷脑等辅料通过压片粉碎-润湿-干燥-整粒-压片而成。
一种锁阳抗缺氧口含片制备方法，包括如下步骤：
1、锁阳抗缺氧活性组分二氧化碳超临界萃取工艺优化
超临界萃取中，物料的粒度对提取效率有较大的影响，通常不同质地的物料需选择不同的粒度，才能保证较佳的提取效率。实验制备不同粒度的锁阳粉，萃取压力25mpa，萃取温度45℃，解析压4mpa等相同条件下萃取2h。考察粉碎粒度对锁阳活性成分得率的影响。并以芬顿法检测提取物抗氧化活性。结果如附图1（表1）所示。
实验结果表明，药材粒度为100～200目时，提取时提取率较好，但羟自由基清除率能力较弱，而80~100目时，虽然提取率不及100～200目时高，但羟自由基清除率能力相对较高。故锁阳粉碎粒度确定为80~100目。
在确定二氧化碳超临界萃取药材粉碎粒度的情况下，影响二氧化碳超临界萃取工艺的因素主要有温度、压力、夹带剂用量、萃取时间四个因素。实验在考察上述四个因素单因素水平的基础上，设计进行l9（34）正交实验，并以锁阳萃取物的羟自由基清除能力为评价指标，优选二氧化碳超临界萃取锁阳抗缺氧活性组分最佳工艺。因素水平如附图2（表2）所示，结果如附图3（表3）。分离釜ⅰ、ⅱ压力均为4mpa.
如附图3（表3）所示，极差中a项最大，其次为b项，d项最小，即该4个因素中对工艺的影响有大到小为a>b>c>d，说明温度和压力是影响工艺的主要因素。主要是由于在锁阳中起抗氧化作用的主要是多糖、黄酮等大极性化合物，随着萃取温度和压力的提高，对多糖、黄酮的萃取率增加。在a2b3c2d1为条件所得萃取物抗氧化活性最佳，即温度40℃，压力30mpa，夹带剂乙醇用量10ml/g，萃取时间1小时。实验在此工艺条件下重复3次，所得萃取物对羟自由基的清除率平均为64.5%。
2、锁阳抗缺氧口含片的工艺优化
（1）复方设计
将黄芪、山药、红景天分别用75%乙醇和蒸馏水按料液比1：10加热回流萃取3次，所得萃取液喷雾干燥，制备3种药材的萃取物。
将锁阳萃取物与黄芪、山药、红景天3种药材萃取物如附图4和5（表4和5）所示，配比组方，并辅以合适量的淀粉、糊精、蔗糖、低取代羧丙纤维素、羧甲基纤维素钠、薄荷脑等辅料，制备软材，并经制粒，干燥，压片，控制每片锁阳萃取物含量20mg，总片重400~500mg.
（2）复方筛选
通过考察5个组方的抗缺氧功能筛选出合理的抗缺氧复方。将小鼠随机分成11组，每组10只，按表4、5组方方案设计实验组别，对照组（生理盐水组）。各组灌胃按其体重（0.1ml/10g）给药，每天上午开始灌胃，每天灌胃一次，连续灌胃28天。于末次给药半小时后，将小鼠放入250ml广口瓶中，瓶口和瓶塞涂抹凡士林后盖严，立即计时，以小鼠呼吸停止时间为指标，观察并记录小鼠存活时间。
如附图6（表6）所示，，组方f1、t1、t2及t4对缺氧小鼠存活时间延长较明显，考虑到以水为溶剂提取方便，喷雾干燥操作简单，故实验选t1组方。
3、锁阳抗缺氧口含片功能学考察
实验以d－半乳糖氧化损伤小鼠模型为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设3个剂量组和1个溶剂对照组，考虑到临床多以水作为提取溶剂，故锁阳抗缺氧口含片功能学考察实验以锁阳萃取物与黄芪、山药、红景天水提物组成复方为受试药物，以人体推荐量（3片）的10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以实验动物体重、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原性谷胱甘肽以及其他一些抗氧化相关指标为评价指标。脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。
（1）小鼠体征和行为的变化
造模前各实验组小鼠皮毛光亮、活泼、纳食正常。造模1周后，与对照组相比，各组小鼠食欲减退、形体消瘦、体重减轻，毛色灰暗、竖毛，活动减少。呈现明显的衰老体征。给药后，随着给药时间的延长，与衰老模型组相比，给药组小鼠皮毛较光亮、活泼、纳食正常，与空白对照组小鼠相比，行为体征无明显差异。
（2）血清抗氧化相关指标的影响
如附图7（表7）所示，连续注射d-半乳糖49天后，衰老模型组血清gsh-px、t-aoc、sod、gsh-st活性与对照组比较均显著降低(p<0.01)，而grac、mda及h2o2含量均显著高于对照组(p<0.01)。锁阳抗缺氧口含片各剂量组与衰老模型组比较，低剂量中剂量组及高剂量组grac、mda及h2o2含量与衰老模型组比较均显著降低（p<0.05或p<0.01）；而gsh-px、t-aoc、sod、gsh-st活性与衰老模型组比较均显著升高（p<0.05或p<0.01）。
4、锁阳抗缺氧口含片安全性与毒理学评价
实验以清洁级昆明种小鼠为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的5~10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以脏器/体重比值、常压密闭小鼠生存时间、血(或组织)中过氧化脂质降解产物丙二醛(mda)含量测定、血(或组织)中超氧化物歧化(sod)活力测定、血(或组织)中谷胱甘过氧化物(gsh-px)活力测定。以小鼠生存试验为阳性，过氧化脂质和抗氧化两项为阳性，可判定该受试物具有抗氧化作用。
（1）组织no含量检测
如附图8（表8）所示，通过试剂盒测定缺氧环境小鼠肝、心、脑组织的no含量，通过空白组与给药组比较，看出肝、心、脑中no含量变化降低，说明锁阳抗缺氧口含片对组织no含量表达变化减少，提高机体抗缺氧能力。肝的低剂量变化率是50.2%，中剂量变化率是77.2%（p<0.05）高剂量为81.8%（p<0.05）。心的各剂量变化率分别为2%、49.8%（p<0.05）、64.4%（p<0.05）。脑的变化率是69.1%、63.2%、70.9%。均具有统计学意义。
（2）总抗氧化能力（t-aoc）测定
如附图9（表9）所示，小鼠密闭缺氧肝心脑组织高剂量变化明显，趋势明显。肝的变化率分别是84.4%(p<0.05)、98%(p<0.05)、34.4%(p<0.05)，心的变化率48.9%(p<0.05)、45.1%(p<0.05)、72%(p<0.05)，脑的变化率是25.8%(p<0.05)、125%(p<0.05)、74%(p<0.05），具有统计学意义。和空白组相比，药物组总抗氧化能力提高，提高机体抗缺氧能力。
（3）密闭缺氧存活时间的影响
如附图10（表10）所示，锁阳抗缺氧口含片低、中剂量组与空白组比较，密闭缺氧存活时间分别延长14.50%和17.60(p<0.05)，而高剂量组存活时间延长4.3%（p<0.05）差异不大，但是都具有统计学意义。
（4）小鼠脂质过氧化物（lpo）含量测定
如附图11（表11）所示，小鼠密闭缺氧肝中脂质过氧化物中高剂量变化率是54.8%，高剂量组变化明显，而中剂量组变化率为10.5%变化不是很明显，但是具有统计学意义。脂质过氧化物低、中、高剂量含量降低，提高机体抗缺氧能力。
（5）小鼠组织蛋白含量测定
如附图12（表12）所示，小鼠密闭缺氧肝、心、脑组织蛋白含量变化中高剂量组变化明显，其中肝的变化率为52.6%、102.3%、105.6%；心的变化率为40.7%、83.7%、117.8%、；脑的变化率为78.5%、104.9%、188.4%。
有益效果：
本项目的主要研究内容是通过采用二氧化碳超临界萃取技术萃取锁阳抗缺氧活性组分，并以其为主药，选择黄芪、山药、红景天三种药物，组成锁阳抗缺氧复方口含片，以期通过性能功效相类似的药物配合应用，可以增强其原有疗效。实验采用合理的配比将四种药物组方，选择适当的辅料，制片而成。并通过国家相关规定进行食品功能性、安全性及毒理评价。
锁阳抗缺氧口含片抗缺氧功能学评价与检测结果：实验以d－半乳糖氧化损伤小鼠模型为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以实验动物体重、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原性谷胱甘肽为评价指标。脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。
锁阳抗缺氧口含片安全性与毒理学评价：实验以清洁级昆明种小鼠为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的5~10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以脏器/体重比值、常压密闭小鼠生存时间、血(或组织)中过氧化脂质降解产物丙二醛(mda)含量测定、血(或组织)中超氧化物歧化(sod)活力测定、血(或组织)中谷胱甘过氧化物(gsh-px)活力测定。以小鼠生存试验为阳性，过氧化脂质和抗氧化两项为阳性，可判定该受试物具有抗氧化作用。
附图说明
图1是锁阳粉碎粒度对得率及羟自由基清除率的影响。
图2是因素水平设计。
图3是正交实验结果。
图4是锁阳抗缺氧复方配比。
图5是锁阳抗缺氧复方配比。
图6是不同剂量组小鼠的存活时间。
图7是血清抗氧化相关指标的影响。
图8是组织no含量的影响。
图9是总抗氧化能力的影响。
图10是密闭缺氧存活时间的影响。
图11是肝脂质过氧化物的影响。
图12是组织蛋白含量的影响。
具体实施方式
为使发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在附图中进行了例示。附图中所示和根据附图描述的本发明的实施方式仅仅是示例性的，并且本发明并不限于这些实施方式。
在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明的技术方案，在附图中仅仅示出了与根据本发明的方案密切相关的结构和/或处理步骤，而省略了关系不大的其他细节。
实施例1
一种锁阳抗缺氧口含片，采用二氧化碳超临界萃取技术萃取锁阳抗缺氧活性组分，并以锁阳抗缺氧活性组分为主药辅以锁阳萃取物20g、黄芪水萃取物20个、红景天水萃取物9个、山药水萃取物26g，配以淀粉、糊精、蔗糖、低取代羧丙纤维素、羧甲基纤维素钠、薄荷脑等辅料通过压片粉碎-润湿-干燥-整粒-压片而成。
实施例2
本实施例提供了一种锁阳抗缺氧口含片制备方法，包括如下步骤：
1、锁阳抗缺氧活性组分二氧化碳超临界萃取工艺优化
超临界萃取中，物料的粒度对提取效率有较大的影响，通常不同质地的物料需选择不同的粒度，才能保证较佳的提取效率。实验制备不同粒度的锁阳粉，萃取压力25mpa，萃取温度45℃，解析压4mpa等相同条件下萃取2h。考察粉碎粒度对锁阳活性成分得率的影响。并以芬顿法检测提取物抗氧化活性。结果如附图1（表1）所示。
实验结果表明，药材粒度为100～200目时，提取时提取率较好，但羟自由基清除率能力较弱，而80~100目时，虽然提取率不及100～200目时高，但羟自由基清除率能力相对较高。故锁阳粉碎粒度确定为80~100目。
在确定二氧化碳超临界萃取药材粉碎粒度的情况下，影响二氧化碳超临界萃取工艺的因素主要有温度、压力、夹带剂用量、萃取时间四个因素。实验在考察上述四个因素单因素水平的基础上，设计进行l9（34）正交实验，并以锁阳萃取物的羟自由基清除能力为评价指标，优选二氧化碳超临界萃取锁阳抗缺氧活性组分最佳工艺。因素水平如附图2（表2）所示，结果如附图3（表3）。分离釜ⅰ、ⅱ压力均为4mpa.
如附图3（表3）所示，极差中a项最大，其次为b项，d项最小，即该4个因素中对工艺的影响有大到小为a>b>c>d，说明温度和压力是影响工艺的主要因素。主要是由于在锁阳中起抗氧化作用的主要是多糖、黄酮等大极性化合物，随着萃取温度和压力的提高，对多糖、黄酮的萃取率增加。在a2b3c2d1为条件所得萃取物抗氧化活性最佳，即温度40℃，压力30mpa，夹带剂乙醇用量10ml/g，萃取时间1小时。实验在此工艺条件下重复3次，所得萃取物对羟自由基的清除率平均为64.5%。
2、锁阳抗缺氧口含片的工艺优化
（1）复方设计
将黄芪、山药、红景天分别用75%乙醇和蒸馏水按料液比1：10加热回流萃取3次，所得萃取液喷雾干燥，制备3种药材的萃取物。
将锁阳萃取物与黄芪、山药、红景天3种药材萃取物如附图4和5（表4和5）所示，配比组方，并辅以合适量的淀粉、糊精、蔗糖、低取代羧丙纤维素、羧甲基纤维素钠、薄荷脑等辅料，制备软材，并经制粒，干燥，压片，控制每片锁阳萃取物含量20mg，总片重400~500mg.
（2）复方筛选
通过考察5个组方的抗缺氧功能筛选出合理的抗缺氧复方。将小鼠随机分成11组，每组10只，按表4、5组方方案设计实验组别，对照组（生理盐水组）。各组灌胃按其体重（0.1ml/10g）给药，每天上午开始灌胃，每天灌胃一次，连续灌胃28天。于末次给药半小时后，将小鼠放入250ml广口瓶中，瓶口和瓶塞涂抹凡士林后盖严，立即计时，以小鼠呼吸停止时间为指标，观察并记录小鼠存活时间。
如附图6（表6）所示，，组方f1、t1、t2及t4对缺氧小鼠存活时间延长较明显，考虑到以水为溶剂提取方便，喷雾干燥操作简单，故实验选t1组方。
3、锁阳抗缺氧口含片功能学考察
实验以d－半乳糖氧化损伤小鼠模型为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设3个剂量组和1个溶剂对照组，考虑到临床多以水作为提取溶剂，故锁阳抗缺氧口含片功能学考察实验以锁阳萃取物与黄芪、山药、红景天水提物组成复方为受试药物，以人体推荐量（3片）的10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以实验动物体重、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原性谷胱甘肽以及其他一些抗氧化相关指标为评价指标。脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。
（1）小鼠体征和行为的变化
造模前各实验组小鼠皮毛光亮、活泼、纳食正常。造模1周后，与对照组相比，各组小鼠食欲减退、形体消瘦、体重减轻，毛色灰暗、竖毛，活动减少。呈现明显的衰老体征。给药后，随着给药时间的延长，与衰老模型组相比，给药组小鼠皮毛较光亮、活泼、纳食正常，与空白对照组小鼠相比，行为体征无明显差异。
（2）血清抗氧化相关指标的影响
如附图7（表7）所示，连续注射d-半乳糖49天后，衰老模型组血清gsh-px、t-aoc、sod、gsh-st活性与对照组比较均显著降低(p<0.01)，而grac、mda及h2o2含量均显著高于对照组(p<0.01)。锁阳抗缺氧口含片各剂量组与衰老模型组比较，低剂量中剂量组及高剂量组grac、mda及h2o2含量与衰老模型组比较均显著降低（p<0.05或p<0.01）；而gsh-px、t-aoc、sod、gsh-st活性与衰老模型组比较均显著升高（p<0.05或p<0.01）。
4、锁阳抗缺氧口含片安全性与毒理学评价
实验以清洁级昆明种小鼠为实验动物，雄性，每组10只，实验设实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的5~10倍（小鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍。受试样品给予时间45天。以脏器/体重比值、常压密闭小鼠生存时间、血(或组织)中过氧化脂质降解产物丙二醛(mda)含量测定、血(或组织)中超氧化物歧化(sod)活力测定、血(或组织)中谷胱甘过氧化物(gsh-px)活力测定。以小鼠生存试验为阳性，过氧化脂质和抗氧化两项为阳性，可判定该受试物具有抗氧化作用。
（1）组织no含量检测
如附图8（表8）所示，通过试剂盒测定缺氧环境小鼠肝、心、脑组织的no含量，通过空白组与给药组比较，看出肝、心、脑中no含量变化降低，说明锁阳抗缺氧口含片对组织no含量表达变化减少，提高机体抗缺氧能力。肝的低剂量变化率是50.2%，中剂量变化率是77.2%（p<0.05）高剂量为81.8%（p<0.05）。心的各剂量变化率分别为2%、49.8%（p<0.05）、64.4%（p<0.05）。脑的变化率是69.1%、63.2%、70.9%。均具有统计学意义。
（2）总抗氧化能力（t-aoc）测定
如附图9（表9）所示，小鼠密闭缺氧肝心脑组织高剂量变化明显，趋势明显。肝的变化率分别是84.4%(p<0.05)、98%(p<0.05)、34.4%(p<0.05)，心的变化率48.9%(p<0.05)、45.1%(p<0.05)、72%(p<0.05)，脑的变化率是25.8%(p<0.05)、125%(p<0.05)、74%(p<0.05），具有统计学意义。和空白组相比，药物组总抗氧化能力提高，提高机体抗缺氧能力。
（3）密闭缺氧存活时间的影响
如附图10（表10）所示，锁阳抗缺氧口含片低、中剂量组与空白组比较，密闭缺氧存活时间分别延长14.50%和17.60(p<0.05)，而高剂量组存活时间延长4.3%（p<0.05）差异不大，但是都具有统计学意义。
（4）小鼠脂质过氧化物（lpo）含量测定
如附图11（表11）所示，小鼠密闭缺氧肝中脂质过氧化物中高剂量变化率是54.8%，高剂量组变化明显，而中剂量组变化率为10.5%变化不是很明显，但是具有统计学意义。脂质过氧化物低、中、高剂量含量降低，提高机体抗缺氧能力。
（5）小鼠组织蛋白含量测定
如附图12（表12）所示，小鼠密闭缺氧肝、心、脑组织蛋白含量变化中高剂量组变化明显，其中肝的变化率为52.6%、102.3%、105.6%；心的变化率为40.7%、83.7%、117.8%、；脑的变化率为78.5%、104.9%、188.4%。
以上所述仅是本申请的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。