黑西红柿萃取物降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度的用途的制作方法

本发明是关于一种西红柿萃取物的用途，特别是关于一种黑西红柿萃取物用于制备降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度的组合物或活性氧物质清除剂的用途。

背景技术

眼睛是视觉器官，负责接收环境中的光线并产生视觉。在视觉形成的过程中，光线首先通过眼睛中透明的角膜及水晶体，藉由此二构造的聚光功能，光线会聚焦在视网膜上形成影像，并且刺激视网膜中的感光细胞将光刺激转换成电讯号，经由视神经的传导，电讯号抵达大脑视觉区，在该处神经细胞的讯号处理下形成视觉。

眼睛可感受到的光线称为可见光，包含红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫的七色光。各种色光有不同的波长范围及能量大小，其中，以波长较短且能量较大的蓝光(波长主峰在425-475nm)及紫光最容易对视网膜造成伤害。这类短波长光线对视网膜细胞造成的伤害一方面是起因于光线本身的高能量会破坏细胞内分子的结构，另一方面是因为视网膜细胞在运作过程中进行氧化反应而产生能量时，容易因为短波长光线的照射而产生许多活性氧物质(reactiveoxygenspecies，ros)，包括超氧自由基、氢氧自由基、过氧化氢、及过氧化物，因此对细胞造成氧化伤害。由于视网膜的感光细胞具有构造特殊的细胞膜而富含脂肪酸，其在蓝光过度照射下，特别容易发生过氧化反应与累积自由基，最终造成视网膜相关疾病，例如黄斑部病变。

为了减少环境中蓝光对视网膜造成的损伤、推迟视网膜的老化、及预防眼部疾病发生，开发一种可增强视网膜细胞的自由基清除能力的组成物，实有其必要。特别是在现代人经常性地使用诸如手机、平板计算机等3c产品的状况下，保护眼睛免于蓝光伤害尤为重要，因为这些产品的屏幕皆以发射高能量蓝光的发光二极管为光源。

技术实现要素：

缘此，本发明的一目的在提供一种黑西红柿萃取物用于制备降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度(accommodativefacility)的组合物的用途，其中该黑西红柿萃取物是以一溶剂萃取一黑西红柿所获得。

黑西红柿(blacktomato，又名黑番茄)，属于被子植物门双子叶植物纲茄目茄科(solanaceae)番茄属(lycopersicon)，原产南美洲，有“沙漠黑金刚”之称，是番茄家族的珍品，因其果色和果实均为红黑色而得名。其果实药食兼用，水果香味浓郁，口感酸甜适度，营养价值高,特别适合鲜食,并以其独特的口感和丰富的营养价值受到消费者追捧，在欧美更有“希腊神哥”的美誉(请参考张哲奇，庞雪滢，荣红国，王玉等人的论文「黑番茄营养成分分析及营养评价」，第516页～518页，actanutrimentasinica,oct.,2013,vol.35no.5)。

本发明的另一目的在提供一种黑西红柿萃取物作为活性氧物质清除剂的用途。

在本发明的一实施例中，该溶剂为水、醇、或醇水混合物，该溶剂与黑西红柿的液固比为5～20：1～5，且该萃取步骤是在40℃～60℃进行。

在本发明的一实施例中，该黑西红柿萃取物的剂量为每日5-10g。

在本发明的另一实施例中，该黑西红柿萃取物的作用浓度为至少0.5mg/ml。

本发明证实前述黑西红柿萃取物能有效减少蓝光照射下视网膜中的活性氧物质含量，因此减少视网膜所遭受的氧化伤害。此外，该黑西红柿萃取物亦能降低眼压及提升眼睛调节灵活度，具有降低罹患青光眼的风险及减少近视发生率或推迟近视恶化的潜力。因此，本发明黑西红柿萃取物可用于制备降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度的组合物，例如护眼保健食品或饮品。

以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明的发明特点及应用，而非以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1是比较人类视网膜色素上皮细胞arpe-19经过本发明黑西红柿萃取物处理、或经过一般红西红柿萃取物处理、或不予处理，且在照射蓝光后，其于活性氧物质含量测试中表现的平均荧光强度；

图2显示成人连续食用本发明黑西红柿萃取物14日前后的眼压变化；

图3显示成人连续食用本发明黑西红柿萃取物14日前后的眼睛调节灵活度变化。

具体实施方式

本发明提供一种黑西红柿萃取物用于制备降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度的组合物的用途，亦提供一种黑西红柿萃取物作为活性氧物质清除剂的用途。本发明所谓黑西红柿萃取物是以一溶剂萃取一黑西红柿的果实而获得，其中，该溶剂为水、醇、或醇水混合物，该溶剂与黑西红柿的液固比为5～20：1～5，且该萃取步骤是在40℃～60℃进行。以下实施例显示施予本发明黑西红柿萃取物可以减少视网膜色素上皮细胞中因蓝光照射所诱导生成的活性氧物质。同时，食用该黑西红柿萃取物的受试者呈现较低的眼压，以及较佳的眼睛调节灵活度。因此，本发明的黑西红柿萃取物适合用于制备护眼保健食品。

定义

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。

材料与方法

材料

自gibco购买dmem培养基(dulbecco'smodifiedeagle’smedium)及汉氏f12培养基(ham’sf12medium)，胎牛血清(fetalbovineserum，简称fbs)，2-[4-(羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonicacid，简称hepes)缓冲溶液，丙酮酸钠(sodiumpyruvate)，及磷酸缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline；商品编号14200-075)。自sigma购买二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-dichloro-dihydro-fluoresceindiacetate，简称dcfh-da；商品编号si-d6883)，使用前将其溶于二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，简称dmso)以配制为5mg/mldcfh-da溶液。

细胞培养

黑西红柿萃取物对活性氧物质产生的抑制作用是利用人类视网膜色素上皮细胞株arpe-19(atcccrl-2302)进行体外实验。arpe-19细胞在37℃、5％二氧化碳的环境下培养于dmem培养基与汉氏f12培养基依1：1比例混和的dmem/f12培养基，其中添加0.5mm丙酮酸钠、15mmhepes缓冲溶液、及10％fbs。

统计分析

统计上的显著差异是透过excel软件的学生t检定进行判定。

实施例1

黑西红柿萃取物的制备

首先，将黑西红柿洗净、晾干、切块，再以均质机将黑西红柿磨碎。其次，以水、醇类、或醇水混合物为溶剂对黑西红柿均质物进行萃取，该溶剂与黑西红柿均质物的液固比为5～20：1～5。萃取温度为介于40℃～60℃，较佳为40℃～45℃。本实施例中萃取时间为0.5～2小时。

经上述萃取步骤所得黑西红柿萃取物冷却至室温后，可进一步以800～1000rpm的转速在15℃～25℃下离心5～10分钟而获得一上清液，该上清液可以400目(mesh)的滤网过滤，以移除残余固体物。该过滤后的黑西红柿萃取物可进一步在40℃～60℃进行减压浓缩而获得一浓缩产物。为获得固态的黑西红柿萃取物，可将前述经减压浓缩的黑西红柿萃取物以喷雾干燥方式去除溶剂，因此获得黑西红柿萃取物粉末。

实施例2

黑西红柿萃取物减少蓝光照射下视网膜细胞中的活性氧物质的累积

为验证本发明黑西红柿萃取物对视网膜细胞中氧化压力的影响，本实施例以荧光探针dcfh-da配合流式细胞仪(flowcytometry，beckman)，测定人类视网膜色素上皮细胞arpe-19经黑西红柿萃取物处理后，其活性氧物质含量的变化。

首先，将arpe-19细胞依1.5×105个细胞/孔接种于含2mldmem/f12培养基的6孔培养盘，在37℃下培养24小时后，移除该培养基。其次，在37℃下以添加0.5mg/ml黑西红柿萃取物或一般红西红柿萃取物(依实施例一的萃取方法制备)的dmem/f12培养基处理细胞1小时，再以5μg/mldcfh-da处理细胞15分钟。将经过前述处理的6孔培养盘置于蓝光箱中，在室温下接受蓝光照射15分钟后，取出培养基并移入15ml试管以置于暗处。同时，以1ml磷酸缓冲盐溶液(简称pbs溶液)清洗细胞2次，将200μl胰蛋白酶加至细胞并在暗处反应5分钟，再将细胞收集至置于暗处的15ml试管。该含有细胞与培养基的试管以300g离心10分钟后移除上清液，经pbs溶液清洗一次，再以300g离心10分钟并移除上清液。最终，于暗处以pbs溶液再次悬浮细胞，并使用流式细胞仪侦测细胞的荧光强度。进行荧光侦测的激发波长为450-490nm，放射波长为510-550nm。由于dcfh-da进入细胞后会先被水解为dcfh(二氯二氢荧光素)，再被活性氧物质氧化为可发出绿色荧光的dcf(二氯荧光素)，经dcfh-da处理的细胞的荧光强度可反映细胞内活性氧物质含量。作为蓝光照射组的arpe-19细胞是以不含黑西红柿萃取物的dmem/f12培养基处理并且经蓝光照射；作为控制组的细胞是以不含黑西红柿萃取物的dmem/f12培养基处理但未经蓝光照射。

图1显示前述控制组、蓝光照射组、经蓝光照射且经过本发明黑西红柿萃取物或一般红西红柿萃取物处理的arpe-19细胞的平均荧光强度，图中*表示与控制组相比，p＜0.05；#表示与蓝光照射组相比，p＜0.05。依据图1，蓝光照射组相对于控制组的arpe-19细胞呈现出明显上升的平均荧光强度，显示蓝光照射会导致细胞内活性氧物质增加。此外，蓝光照射组以及经过一般红西红柿萃取物处理的arpe-19细胞呈现近似的平均荧光强度，二者间无显著差异，显示一般红西红柿萃取物无法减少经蓝光照射的细胞内的活性氧物质含量。然而，经过黑西红柿萃取物处理的arpe-19细胞较蓝光照射组具有显著较低的荧光强度，且此荧光强度的降幅达到63％，显示本发明黑西红柿萃取物能有效减少活性氧物质在细胞内累积，可作为一种活性氧物质清除剂。此结果亦显示本发明黑西红柿萃取物能透过降低细胞内活性氧物质含量而减少蓝光所导致的视网膜氧化伤害，因此，本发明黑西红柿萃取物具有推迟视网膜老化疾病(例如黄斑部病变)发生的潜力。

实施例3

黑西红柿萃取物降低眼压

为进一步探讨本发明黑西红柿萃取物对眼睛的其他保护作用，本实施例测试摄取黑西红柿萃取物是否对人类眼压造成影响。本实施例以年龄范围20至40岁的成年人6名为样本，使其每日饮用一次含本发明黑西红柿萃取物的饮品连续14天，该黑西红柿萃取物的每日剂量为9g，并且以非接触式眼压计(nideknt-2000noncontacttonometer)每日测量其眼压。

图2显示成人连续食用本发明黑西红柿萃取物14日前后的眼压变化。依据图2，连续食用黑西红柿萃取物14日可使受试者的眼压下降10.2％，且当长期食用，效果更显著(数据未显示)。由于医学研究指出青光眼视神经病变较容易发生于眼压偏高者，而摄取本发明黑西红柿萃取物能有效降低眼压，因此，本发明黑西红柿萃取物有助于降低人们罹患青光眼的风险。

实施例4

黑西红柿萃取物提高眼睛调节灵活度

本实施例进一步测试摄取黑西红柿萃取物对眼睛调节灵活度的影响。本文中所谓调节灵活度是指眼睛自动调整聚焦的反应速度。本实施例以年龄范围20至40岁的成年人6名为样本，使其每日饮用一次含本发明黑西红柿萃取物的饮品连续14天，该黑西红柿萃取物的每日剂量为9g，并且以一般眼科检查所采用的镜片摆动法每日测量其眼睛调节灵活度。

图3显示成人连续食用本发明黑西红柿萃取物14日前后的眼睛调节灵活度变化。如图3所示，连续食用黑西红柿萃取物14日可提升受试者的眼睛调节灵活度约3.4％，且当长期食用，效果更显著(数据未显示)。有鉴于医学研究指出眼睛调节灵活度不足是近视形成和发展的重要因素，本发明黑西红柿萃取物透过提升眼睛调节灵活度，将有助于减少近视发生率或推迟近视恶化。

综上所述，本发明以水、醇类、或醇水混合物为溶剂所萃取得的黑西红柿萃取物能有效减少视网膜细胞在蓝光照射下所累积的活性氧物质，具备减少视网膜所受氧化伤害的功效。此外，该黑西红柿萃取物亦能降低眼压及提升眼睛调节灵活度，具有降低罹患青光眼的风险及减少近视发生率或推迟近视恶化的潜力。因此，本发明黑西红柿萃取物可用于制备降低眼压、减少蓝光所致视网膜损伤、及提升眼睛调节灵活度的组合物，例如护眼保健食品或饮品。