本发明涉及一种治疗帕金森病的药物组合物，具体涉及一种以植物中草药——石菖蒲、白芷和辛夷，为原料制成的滴鼻剂，首先提取石菖蒲、白芷和辛夷中的有效成分，然后将有效成分混合，制成鼻腔喷雾或鼻腔栓剂，经鼻腔给药，通过对嗅觉的治疗，保护多巴胺能神经元免受进行性损伤。
背景技术：
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嗅觉障碍是帕金森病(parkinson’sdisease，pd)的早期特征之一，多表现在嗅觉的减退以及嗅觉的丧失，对气味识别、察觉、记忆多方位损伤，愈来愈多的研究证明随着疾病发生发展变化，这种减退会越来越严重，严重影响了患者的心理状况和生活质量。帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病，在55岁以上的人群中患病率约为1/100，65岁以上人群总体患病率为1700/10万。2015年国际帕金森病和运动障碍协会(internationalparkinsonandmovementdisordersociety)把嗅觉减退作为帕金森病诊断的支持诊断写入诊断标准中。目前没有治疗嗅觉减退的药物。在嗅觉障碍的帕金森病患者中，嗅皮质和杏仁核等部位可见异常蛋白神经纤维和包涵体的聚集。从炎症角度考虑，神经炎症在帕金森病的发病和多巴胺能神经元选择性损伤中起着重要作用，比如帕金森病患者嗅球中存在的酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞(th)的数量通常会高于正常人嗅球中存在的酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞的数量的两倍。环境因素中的农药、金属离子、病毒感染等通过各种途径侵入帕金森病患者的脑内，从而继发一系列的炎性反应，导致患者在前脑其他区域和嗅球产生类似帕金森病的神经性病理反应，诱导疾病的发生和发展。保护多巴胺能神经元免受进行性损伤的治疗策略已经获得了很多人的关注。
中草药通过抗炎，抗氧化和抗氧化作用，保护多巴胺能神经元，具有极大的潜力，比如姜黄素，白藜芦醇和人参皂苷等具有神经保护作用。石菖蒲对中枢神经系统具有兴奋镇静双重作用，临床广泛应用白芷、辛夷治疗鼻部疾病，脑保护作用与抗氧化、抗炎、抗癌等多种生理活性有关。专利cn103720959b公开了一种防治帕金森病的药物组合物及其制备方法，组合物中含有石菖蒲和龟板的有效成分。专利cn104435465a公开了一种治疗帕金森病的中药组合物，其配方中含有肉苁蓉和石菖蒲。专利cn101658601b公开了用于帕金森病治疗和辅助治疗的中药制剂，其含有熟地黄，白芍，钩藤，珍珠母，丹参，石菖蒲，全蝎粉和绿茶。然而上述中药制剂均为口服药，不是直接给药，存在经胃肠道暴露神经毒物经肝脏的首过效应，同时中药水溶性差的有效成分，稳定性低。
技术实现要素：
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本发明的目的在于制备了一种治疗帕金森病的滴鼻剂及其制备方法，克服了现有治疗帕金森病中药制剂均为口服药，难以直接作用给药部位，同时对肝脏等器官造成毒副作用的问题。
为了实现上述目的，本发明涉及的治疗帕金森病的滴鼻剂，由以下重量份的原料制成：石菖蒲7-13份、白芷7-13份和辛夷10-20份。
优选地，本发明涉及的治疗帕金森病的滴鼻剂，由以下重量份的原料制成：石菖蒲10份、白芷10份和辛夷15份。
本发明涉及的治疗帕金森病滴鼻剂的制备方法，具备包括以下步骤：
(1)石菖蒲提取液：称取石菖蒲粗粉10g，加入75％乙醇60g搅拌均匀，水浴加热，在60℃温度下，回流提取3次，每次提取2小时，将3次提取液合并过滤后，用旋转蒸发仪回收乙醇，向滤液中加纯化水至20ml，稀释至浓度0.5g/ml，再通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以1～2bv/h流速吸附，流出液即为石菖蒲提取液；
(2)白芷提取液：称取白芷粗粉10g，加入75％乙醇搅拌均匀，溶胀60min，然后装入渗漉筒，向渗漉筒中继续添加75％乙醇，充分浸泡24h后渗漉，以3ml/min滴速收集渗漉液，渗漉40-60分钟，渗漉液静置过夜后加纯化水至100ml，稀释至浓度0.1g/ml，然后通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以3～4bv/h流速吸附，先用蒸馏水10bv洗脱后，再用20％乙醇10bv洗脱，收集两次的洗脱液即为白芷提取液；
(3)辛夷提取液：称取辛夷粗粉15g，加入75％乙醇搅拌均匀，溶胀60min，然后装入渗漉筒，向渗漉筒中继续添加75％乙醇，充分浸泡24h后渗漉，以3ml/min滴速收集渗漉液，渗漉40-60分钟，渗漉液静置过夜后加纯化水至150ml，稀释至浓度0.1g/ml，然后通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以3～4bv/h流速吸附，先用蒸馏水10bv洗脱后，再用20％乙醇10bv洗脱，收集两次的洗脱液即为辛夷提取液；
(4)将步骤(1)至(3)得到的石菖蒲提取液、白芷提取液和辛夷提取液静止，待乙醇挥发至无味后混合均匀，得到治疗帕金森病滴鼻剂，所述百分数为体积百分数，所用纯化水为经过处理的超纯水。
进一步地，所述治疗帕金森病滴鼻剂可直接给药，也可加入医用辅料能够制备成滴鼻液和鼻腔喷雾，所用医用辅料具体为吸收促进剂、抗氧化剂和纯化水。所述治疗帕金森病滴鼻剂，加入医用辅料能够制备成鼻腔栓剂，所用医用辅料具体为吸收促进剂、抗氧化剂、纯化水和凝胶剂。所述吸收促进剂为丙二醇和冰片，抗氧化剂为亚硫酸氢钠，凝胶剂为乙酰结冷胶。
本发明中，石菖蒲为天南星科多年生草本植物石菖蒲的干燥根茎，味辛性温，具芳香之气，行散之力强，为宣气通窍之佳品，临床上用于痰厥、健忘、痴呆等。石菖蒲对中枢神经系统具有兴奋与镇静的双重作用，表现为抗痴呆、改善学习记忆等。石菖蒲中水溶性成分能有效清除自由基、阻止过氧化物形成，减少一氧化氮的神经毒性，对脑细胞具有良好的保护作用。白芷是伞形科植物白芷的干燥根，性温，气芳香，味辛，微苦，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，临床广泛应用于感冒头痛、鼻塞等病症。药理研究表明，白芷具有抗菌等作用。辛夷为木兰科植物望春花、或武当玉兰的干燥花蕾，其性温味辛，具有祛风发散，通鼻窍之功效，可用于风寒头痛、鼻塞。辛夷花蕾中化学成分主要包括挥发油中的桉油精、木脂素、丁香酚、樟脑、石竹烯等，改善嗅觉减退，抑菌抗病毒，改善局部血液循环，促进分泌物的吸收等作用。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：(1)通过对中药天然成分提取，原料来源广泛，成本低，可替代现有昂贵药物的使用，具有推广应用价值。(2)将其制成鼻经鼻剂，通过经鼻给药技术实现对慢性病的预防控制，使药物绕过血脑屏障，直达中枢，更好地发挥疗效。(3)采用现代制药技术，制备工艺合理、可靠，质量控制方法可行，安全性较高，提高中药粗提物对生物的利用度，避免传统中药煎服过程。(4)制剂配方成分合理，改善控制急性症状，经过动物实验以及临床病例证明其对嗅觉减退具有较好的疗效。(5)经过制备工艺、质量标准、鼻粘膜毒性等方面测试，为以后研究中药经鼻剂，以及进一步开发治疗帕金森病嗅觉减退药物新型给药系统打下一定的基础。
附图说明：
图1为实施例2中未经给药和经鼻给药后wistar雄性大鼠嗅球部多巴胺能神经元对比图。
具体实施方式：
下面结合具体实施例进一步描述本发明的具体技术方案。
实施例1：
本实施例涉及的治疗帕金森病的滴鼻剂，由以下重量份的原料制成：石菖蒲7-13份、白芷7-13份和辛夷10-20份。
优选地，本实施例涉及的治疗帕金森病的滴鼻剂，由以下重量份的原料制成：石菖蒲10份、白芷10份和辛夷15份。
本实施例涉及的治疗帕金森病滴鼻剂的制备方法，具备包括以下步骤：
(1)石菖蒲提取液：称取石菖蒲粗粉10g，加入75％乙醇60g搅拌均匀，水浴加热，在60℃温度下，回流提取3次，每次提取2小时，将3次提取液合并过滤后，用旋转蒸发仪回收乙醇，向滤液中加纯化水至20ml，稀释至浓度0.5g/ml，再通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以1～2bv/h流速吸附，流出液即为石菖蒲提取液；
(2)白芷提取液：称取白芷粗粉10g，加入75％乙醇搅拌均匀，溶胀60min，然后装入渗漉筒，向渗漉筒中继续添加75％乙醇，充分浸泡24h后渗漉，以3ml/min滴速收集渗漉液，渗漉40-60分钟，渗漉液静置过夜后加纯化水至100ml，稀释至浓度0.1g/ml，然后通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以3～4bv/h流速吸附，先用蒸馏水10bv洗脱后，再用20％乙醇10bv洗脱，收集两次的洗脱液即为白芷提取液；
(3)辛夷提取液：称取辛夷粗粉15g，加入75％乙醇搅拌均匀，溶胀60min，然后装入渗漉筒，向渗漉筒中继续添加75％乙醇，充分浸泡24h后渗漉，以3ml/min滴速收集渗漉液，渗漉40-60分钟，渗漉液静置过夜后加纯化水至150ml，稀释至浓度0.1g/ml，然后通过ab-8大孔树脂的吸附柱中，以3～4bv/h流速吸附，先用蒸馏水10bv洗脱后，再用20％乙醇10bv洗脱，收集两次的洗脱液即为辛夷提取液；
(4)将步骤(1)至(3)得到的石菖蒲提取液、白芷提取液和辛夷提取液静止，待乙醇挥发至无味后混合均匀，得到治疗帕金森病滴鼻剂，所述百分数为体积百分数，所用纯化水为经过处理的超纯水。
进一步地，所述治疗帕金森病滴鼻剂可直接给药，也可加入医用辅料能够制备成滴鼻液和鼻腔喷雾，所用医用辅料具体为吸收促进剂、抗氧化剂和纯化水。所述治疗帕金森病滴鼻剂，加入医用辅料能够制备成鼻腔栓剂，所用医用辅料具体为吸收促进剂、抗氧化剂、纯化水和凝胶剂。所述吸收促进剂为丙二醇和冰片，抗氧化剂为亚硫酸氢钠，凝胶剂为乙酰结冷胶。
实施例2：
取体重在200-250g的wistar雄性大鼠10只，随机分为2组，分别为(1)6-ohda组；(2)6-phda+药物组，每组5只。
6-ohda定位注射：大鼠称重，10％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射，将大鼠头部固定于脑立体定位仪上，用10ul微量注射器吸取6-ohda溶液(8ug/2ul)进行大鼠头部左侧黑质定位注射。
行为学检测，造模1周后腹腔注射阿朴吗啡(0.5mg/kg)，观察大鼠行为变化，记录30分钟内向健侧旋转次数，向健侧旋转速率>210r/30min的大鼠视为成功的pd大鼠模型。每周诱发1次，连续3周。
成果造模后各组处理方法：
(1)6-ohda组：不给药处理。
(2)6-ohda+药物组：给造模大鼠经鼻给药，每天1次，每次左右鼻腔各给5微升的实施例1制备的治疗帕金森病滴鼻剂，连续3周。
造模后6周，每组大鼠称重后以10％水合氯醛麻醉，开胸暴露心脏，4％多聚甲醛溶液经左心室灌注断头，取脑组织后在4％多聚甲醛溶液中4℃固定24小时，分别在20％蔗糖溶液、30％蔗糖溶液中脱水后，置于-80℃冰箱保存。参照大鼠脑立体定位图谱，对大鼠脑组织进行修整，冠状冰冻切片，片厚20μm，温度-20℃，按前后次序用细针粘入盛有0.01mol·l-1pbs的24孔板中。冰冻切片用pbst冲洗3次，每次5min，加入th一抗(1:2000)，4℃摇床孵育过夜后，用pbst冲洗3次，每次5min，加山羊抗兔荧光二抗(1:500)，室温避光摇床孵育2h后，用pbst冲洗3次，每次5min。蒸馏水冲洗，自然干燥后用70％甘油磷酸盐缓冲液进行封片，荧光显微镜下观察。用荧光染色观察了经鼻小鼠嗅球内多巴胺能神经元的变化。结果发现，使用配制药品3周后，与对照组相比，嗅球内多巴胺能能神经元丢失明显改善。
实施例3：
2018.5赵某，女，63岁
主诉：行动迟缓伴下肢不自主抖动2年余。
伴随症状：患者2年余前无明显诱因出现左下肢不自主抖动，逐渐进展双下肢及右上肢不自主抖动，伴行动迟缓，翻身缓慢，精细动作差，嗅觉减退，便秘，口干，腰膝酸软，下肢力弱，时有头晕乏力，站立不稳，睡眠较差。舌红苔白，脉弦细。
既往史：既往高血压病史3年余。否认药物、食物过敏史。否认乙肝、结核传染病史。否认家族史。否认农药等有毒制剂接触史。
神经系统查体：神清，精神可，颅神经(-)，四肢肌力v级，双下肢及右上肢肌张力增高，疲劳试验(+)，静止性震颤，右指鼻实验欠稳准，感觉检查可。
辅助检查：
h-y分级：2.5级
updrs评分：32分
西医诊断：帕金森病
中医诊断：颤病
证候诊断：肝血亏虚，风阳内动
一诊处方：
方解：本病的基本病机为肝风内动，筋脉失养。“肝主身之筋膜”，为风木之脏，肝风内动，筋脉不能任持自主，随风而动，牵动肢体及头颈颤抖摇动。本病的病理性质总属本虚标实，本为气血阴阳亏虚，其中以阴津精血亏虚为主，标为风、火、痰、瘀为患，标本之间密切联系，风、火、痰、瘀可因虚而生，诸邪又进一步耗伤阴津气血。
方中以石菖蒲化湿而开窍豁痰，醒神益智；辛夷性味辛温，走气入肺，能助胃中清阳上行通鼻窍，散风寒，通窍而上走于脑舍；白芷祛风燥湿，消肿止痛，《疡医大全》记载辛夷、白芷、防风等药物治疗鼻疾。柴胡、黄芩疏风清热，半夏、陈皮、茯苓化痰健脾、渗湿利水,宁心安神；龟甲滋阴清热；当归、川牛膝活血养血；防风，白蒺藜疏散风邪；天麻，生牡蛎平肝潜阳熄风，熟地、黄精填精补肾；白芍柔肝缓急；木瓜舒筋活络，和胃化湿；炙甘草调和诸药。分解上方，其中石菖蒲、白芷、辛夷开肺窍以治疗嗅觉减退，属于对症经验用药；柴胡、白芍、防风等药物祛风柔痉以祛邪；熟地、黄精、龟甲等药填精补肾以扶正；佐以半夏、陈皮等化痰之剂，整方结合脏腑经络辩证，加以经验对症用药，共奏良效。
上药服5剂后，患者双下肢及右上肢不自主抖动减轻，行动较前稍快，翻身缓慢，精细动作欠佳，嗅觉改善，大便结出，口干，腰膝下肢力气改善，头晕乏力减轻，睡眠改善。舌红苔白，脉弦细。分析：抖动减轻，风象之势减弱，拟前方去白蒺藜，加远志以安神益智，整方如下：
二诊处方：
继服上药5剂后，患者肢体不自主抖动减轻，行动较前稍快，翻身缓慢，精细动作欠佳，嗅觉改善，可闻食臭，情绪改善，大便结出，无明显头晕乏力，站立可，起身可，睡眠改善。舌红苔白，脉弦细。
疗效评价：
h-y分级：2级
updrs评分：23分
h-y分级下降，updrs检查的总评分治疗后相对基线的减少≥30％，证明疗效改善较好。其中嗅觉减退症状有较好改善。采用食醋测试，分为原液、生理盐水稀释10倍、20倍、30倍、40倍、50倍，喷雾至卡片进行嗅觉测试，治疗前患者可闻及原液，治疗后患者可闻及稀释10倍食醋，证明嗅觉改善。