本发明涉及化妆品领域和医药领域，具体涉及一种具有保湿、美白、抗炎、防晒及晒后修复等作用的透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质的组合物及其在化妆品及皮肤病学药物中的应用。
背景技术：
：皮肤是人体最大的一个器官，由表皮、真皮和皮下组织所构成，并含有附属器官。皮肤作为机体对外界环境的首道屏障，不断受到各种微生物、化学和物理因素的影响。光照造成的光老化以及现代社会的环境污染、电子产品的辐射等问题，使得越来越多的人出现色素失调性疾病，美白、防晒、晒后修复成了研究热点之一，而炎症性皮肤病，特别是痤疮等慢性炎症性皮肤病也是困扰现代人士的高发性疾病。透明质酸是一种由n-乙酰氨基葡萄糖和d-葡萄糖醛酸为结构单元的高分子黏多糖，具有优异的保湿特性，在化妆品及相关医疗领域应用较多，分子量一般为105-107da（道尔顿）。目前一般将分子量在104da-106da的透明质酸称为低分子透明质酸（lmw-ha）。分子量低于104da的透明质酸称为寡聚透明质酸。lmw-ha因其相对分子质量较小，外用时可被皮肤更好的吸收，促进皮肤营养的供给和废物排泄，从而防止皮肤老化，达到深层保湿和美容养颜的效果，而且还可促进表皮细胞的增殖和分化，清除氧自由基，修复日光或紫外线伤害的皮肤。口服lmw-ha易于吸收，不仅可以活化皮肤细胞，保持表皮湿润，同时具有良好的增强免疫功能和抗衰老功能。因此化妆品用及保健食品用ha多为lmw-ha。另外，lmw-ha还具有促血管生成、细胞免疫活化和促进骨生成的作用，对治疗细菌性角膜溃疡具也有良好的疗效，在医药领域应用广泛。低分子透明质酸和寡聚透明质酸是由高分子量ha降解得到的，降解的方法主要有物理降解、化学降解、生物降解三大类。物理降解法很难将高分子量ha降解至分子量200kda以下（覃彩凤，王淼，陈晓峰.透明质酸的降解方法及工艺条件研究[j].2007,4:32-36）。化学降解法会造成结构破坏，这时不但糖链上的糖苷键断裂，而且单糖(葡糖醛酸和乙酰氨基葡糖)残基的结构也可能遭到破坏，如乙酰基被水解掉、单糖六元环断裂等。专利cn103255076b公开了一种用芽孢杆菌cgmccno.5744产生的透明质酸酶进行生物降解高分子透明质酸生产寡聚透明质酸和低分子透明质酸的方法。该法制备的低分子透明质酸和寡聚透明质酸具有透皮吸收性好、纯度高、抗氧化能力强、防晒及晒后修复的作用，尤其是该酶法制备的寡聚透明质酸效果更优。生存在高盐环境中的微生物（如海洋、盐湖等），会面对高盐环境中失去胞内外渗透压平衡的威胁。大多数嗜盐微生物为了维持细胞内外的渗透压平衡，防止细胞脱水，会通过在胞内合成并积累相容性溶质来调节渗透压的变化并维持细胞正常代谢活动。四氢嘧啶是目前发现的细菌界分布最广泛的相容性溶质，它与细胞内的新陈代谢相容，并不影响细胞的生物大分子功能或生理过程。四氢嘧啶不仅是一种重要的渗透压补偿溶质，而且对处于高温、高盐、冷冻、干燥、辐射等不良环境刺激下的细胞和生物大分子（生物膜、蛋白质、酶和核酸）有着很好的保护作用，因此四氢嘧啶在化妆品、细胞保护剂、生物制剂稳定剂、药物制剂等领域具有重要的应用价值和广阔的应用前景。然而，目前尚未见到透明质酸和四氢嘧啶类物质在美白、抗炎、保湿、防晒、晒后损伤修复方面有协同增效的报道。技术实现要素：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种包含透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质的协同性组合物，具有美白、保湿、抗敏舒炎、防晒并修复晒伤的协同作用。本发明的另一目的是提供一种包含透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质的协同组合物在化妆品与皮肤类药物中的用途。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。一种含透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质的组合物。所述透明质酸类物质包括透明质酸、透明质酸衍生物和透明质酸盐中的至少一种。所述透明质酸类物质与所述四氢嘧啶类物质的质量比为50:1-1:50，优选为20:1-1:20或10:1-1:10，更优选为5:1-1:5。所述透明质酸类物质与四氢嘧啶类物质在组合物中所占的质量百分比为0.001%-100%；优选为0.01%-10%，更优选为0.05%-1%。所述组合物可以采用常规的混合方式制备而成。所述透明质酸或其盐的分子量小于1×106da，优选小于5×105da或小于4×105da或小于3×105da，更优选为小于2×105da或小于1×105da，进一步优选为小于5×104da或小于1×104da。进一步地，所述透明质酸或其盐为酶解法制得；更具体地，由专利cn103255076b公开的芽孢杆菌cgmccno.5744产生的透明质酸酶制得。透明质酸盐种类并不特别限定，包括但不限于钠盐、钾盐、钙盐、锌盐或镁盐。所述透明质酸衍生物，包括但不限于乙酰化透明质酸、烷基化透明质酸、交联透明质酸。所述四氢嘧啶类物质为四氢嘧啶及其化妆品或医学领域可接受的盐或/和酯，羟基四氢嘧啶及其化妆品或医学领域可接受的盐或/和酯，或者以上任意的组合。上述组合物还包含化妆品和医学领域可接受的载体或辅料。所述可接受的辅料包括但不限于溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、ph调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精和色素。一种上述组合物在化妆品或医药中作为美白、抗炎、保湿、防晒、晒后损伤修复成分的用途。一种含有上述组合物的化妆品或者药物。所述化妆品的种类包括但不限于香皂、洗面奶、沐浴露、化妆水、护肤乳液、护肤霜、精华液、眼霜、面膜、气雾/喷雾剂。所述药物优选为皮肤、眼科或鼻腔的保湿和抗炎药物。本发明具有以下优点：本发明提供一种包含透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质的协同性组合物。所述组合物在保湿、美白、抗炎、防晒及晒后修复上具有协同增效作用，形成协同性组合物，能有抑制黑色素形成，减少色素沉积及色斑形成；保护皮肤免疫屏障，减少微生物侵袭等造成的炎症反应及预防和治疗痤疮、粉刺等与炎症反应相关的皮肤问题。所述组合物同时还兼具保湿，防晒及晒后修复，减少放射性皮肤损伤，修复皮肤创伤，加快伤口愈合等作用。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。实施例1组合物的抗炎功效抗炎修复实验为针对十二烷基磺酸钠（sds）所诱导炎症的人体斑贴试验，斑贴试验采用常规方法（24小时人体斑贴）进行。1.实验材料透明质酸钠（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钾（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钙（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、乙酰化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、烷基化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、交联透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、四氢嘧啶（sigma）、羟基四氢嘧啶（sigma）、十二烷基磺酸钠（国药集团）。2.实验方法2.1溶液配制5%sds溶液：用纯水配制5%的sds溶液；透明质酸钠溶液：用5%sds溶液配制浓度为1%的透明质酸钠样品溶液；四氢嘧啶溶液：用5%sds溶液配制浓度为1%的四氢嘧啶样品溶液；样品混合溶液：根据目标浓度将透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、乙酰化透明质酸、烷基化透明质酸、交联透明质酸和四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶粉末添加到5%sds溶液中溶解混匀。2.2斑贴实验在每个斑贴器中分别添加20微升纯水对照或者目标样品。然后，将此斑贴器置20-40岁之间年龄的20名男女试验志愿者前臂屈侧，贴敷24小时。之后，将斑贴器从志愿者前臂取下，放置30分钟后，经过目视观察判定各溶液对志愿者皮肤造成的红疹面积及严重程度等炎症状态。判定标准：(+++++)与对照物有同等程度的炎症现象；(++++)与对照物比较发现，红疹面积和色度有一项稍有减轻；(+++)与对照物比较发现，红疹面积和色度都稍有减轻；(++)与对照物比较发现，红疹面积和色度一项明显减轻，另一项稍有减轻；(+)与对照物比较发现，红疹面积和色度都明显减轻。3.实验结果表1不同比例透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质对sds诱导炎症的影响表2含不同分子量透明质酸盐的组合物对sds诱导炎症的影响由表1可知，24h5%sds斑贴诱导后，对照组皮肤出现红疹，同时添加透明质酸钠或四氢嘧啶则能有效降低红疹面积及色度；如果将二者混合，特别是透明质酸钠和四氢嘧啶质量比为5:1、1:1、1:5、1:10、1:20时，相当于将两种原料均减量使用，实验皮肤的红疹面积及色度相对于透明质酸钠和四氢嘧啶单独添加又有明显降低，说明两者复配后抗炎能力相比透明质酸钠和四氢嘧啶单独使用有显著的提升，说明透明质酸钠和四氢嘧啶具有协同抗炎功效，其形成的组合物抗炎效果优于两种原料的单独使用。不同透明质酸盐、透明质酸衍生物与四氢嘧啶或者透明质酸与四氢嘧啶类物质复配使用后，抗炎能力相比透明质酸和四氢嘧啶单独使用也有显著的提升。由表2可知，不同分子量的透明质酸钠和四氢嘧啶复配，透明质酸钠和四氢嘧啶复配比例相同时，组合物抗炎性能与透明质酸钠分子量有关，随着分子量降低，组合物的抗炎性能有所增加，但都优于两种原料单独使用，说明不同分子量透明质酸钠都与四氢嘧啶具有协同抗炎功效。实施例2组合物的保湿功效保湿功效采用皮肤水分测定仪测定样品涂抹前及涂抹后时皮肤的水分含量考察其短时保湿效果，并考察其是否与ha具有协同增效的作用。1.实验材料透明质酸钠（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钾（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钙（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、乙酰化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、烷基化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、交联透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、四氢嘧啶（sigma）、羟基四氢嘧啶（sigma）、基础保湿乳液（华熙福瑞达生物医药有限公司）。2.仪器设备皮肤水分测试仪corneometercm825(couragekhazaka公司，德国)。3.实验方法3.1.乳液样品配制根据目标浓度将透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、乙酰化透明质酸、烷基化透明质酸、交联透明质酸和四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶粉末混合后均匀充分溶于基础保湿乳液；3.2.保湿性的测定每个乳液样品招募20名志愿者，年龄20-40岁，男女不限。在受试者左、右前臂屈侧标记4cm×4cm的试验区域，分别涂抹样品。涂抹量为3.0mg/cm2，轻轻按摩至样品吸收。使用皮肤水分测定仪测定涂抹前及涂后1、3、6小时的皮肤水分含量；3.3.数据处理。4.实验结果表3不同比例透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质样品乳液涂抹前后皮肤水分含量增加率表4含不同分子量透明质酸盐的组合物的乳液涂抹前后皮肤水分含量增加率由表3数据可知，透明质酸钠和四氢嘧啶都具有良好的保湿性能，而透明质酸钠和四氢嘧啶混合配制所得乳液，其保湿性能相较于单种原料使用有明显的提升，特别是透明质酸钠和四氢嘧啶质量比为10:1、5:1、1:1、1:5、1:10、1:20、1:50混合配制所得溶液，皮肤水分含量显著增加，表明四氢嘧啶和透明质酸钠具有协同增效的保湿效果，适于复配应用于有保湿需求的化妆品及皮肤病学药物中。不同透明质酸盐、透明质酸衍生物与四氢嘧啶或者透明质酸钠与四氢嘧啶类物质复配使用后，保湿性能相比透明质酸钠和四氢嘧啶单独使用也有显著的提升。由表4不同分子量的透明质酸钠和四氢嘧啶复配实验数据可知，透明质酸钠和四氢嘧啶复配比例相同时，组合物保湿性能与透明质酸钠分子量有关，随着分子量增大，组合物的保湿性能有所增加，但都优于两种原料单独使用，说明不同分子量透明质酸钠都与四氢嘧啶具有协同保湿功能。实施例3组合物对黑色素生成的影响1.实验材料透明质酸钠（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钾（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钙（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、乙酰化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、烷基化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、交联透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、四氢嘧啶（sigma）、羟基四氢嘧啶（sigma）、b16小鼠黑色素瘤细胞株、1640培养基（gibco）、胎牛血清（gibco）、naoh（国药集团）。2.仪器设备倒置显微镜(olympus，ckx41)，超净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司，scb-1520)，二氧化碳培养箱（sanyo），数显恒温水浴锅（金坛市中大仪器厂），恒温微孔板快速振荡器（海门市麒麟医用仪器厂），酶标仪（bio-rad）。3.实验方法3.1.细胞培养及加样品处理将b16小鼠黑色素瘤细胞株接种于96孔板，37℃、5%co2条件下进行培养24h。加入样品接触培养72h后，用naoh裂解液裂解细胞，80℃加热30min，酶标仪450nm检测吸光度。同时在96孔板内接种相同体积密度的细胞作为增殖对照。3.2.数据处理实验组黑色素生成总量增加率与相应增殖对照的增殖率之比，即为单位细胞黑色素生成率。单位细胞黑色素抑制率（%）=100%-单位细胞黑色素生成率。4.实验结果表5不同比例透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质对黑色素生成的影响表6含不同分子量透明质酸盐组合物（质量比1：1）对黑色素生成的影响由表5可知，将透明质酸钠和四氢嘧啶按1:1的比例混合配制成溶液使用，相当于将两种原料均减半使用，其抑制黑色素形成的能力将显著提升，优于四氢嘧啶单独使用，表明透明质酸钠增强了四氢嘧啶的美白功效，与四氢嘧啶形成了具有优异美白功效的协同性组合物。透明质酸钠和四氢嘧啶以10:1、5:1、1:5、1:10比例混合配制所得溶液，其抑制黑色素的能力同样有显著提高，进一步表明四氢嘧啶和透明质酸钠的协同美白功效。不同透明质酸盐、透明质酸衍生物与四氢嘧啶或者透明质酸钠与四氢嘧啶类物质复配使用后，抑制黑色素形成的能力相比透明质酸钠和四氢嘧啶单独使用也有显著的提升。由表6可知，不同分子量的透明质酸钠和四氢嘧啶复配后，分子量1.1×106、5.5×105、1.2×105、5.1×104、0.83×104的透明质酸和四氢嘧啶的组合物（质量比1:1）对黑色素抑制率基本相近且显著优于四氢嘧啶单独使用，说明透明质酸钠和四氢嘧啶的协同美白功效不受透明质酸钠分子量大小所影响。实施例4组合物的防晒及晒后修复功效防晒及晒后修复功效采用以一定剂量的紫外线照射细胞，并通过分别照射前后添加样品处理细胞，从细胞增殖水平角度考察四氢嘧啶对细胞紫外线损伤的防护与修复作用。1.实验材料透明质酸钠（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钾（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、透明质酸钙（mw0.83×104da，华熙福瑞达生物医药有限公司）、乙酰化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、烷基化透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、交联透明质酸(华熙福瑞达生物医药有限公司）、四氢嘧啶（sigma）、羟基四氢嘧啶（sigma）、人永生化表皮角质形成细胞（hacat）、96孔板（corning）、mtt（sigma）、胎牛血清（gibco）、dmem干粉培养基（gibco）。2.仪器设备倒置显微镜（olympus，ckx41）、超净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司，scb-1520）、二氧化碳培养箱（sanyo，mco-18aic（uv））、数显恒温水浴锅（金坛市中大仪器厂）、酶标仪（bio-rad，imark）、uv-8型紫外线灯箱（北京电光源研究所）、st-513型紫外线测量仪（台湾先驰）。3.实验方法3.1.样品溶液的配制样品溶液：将透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、乙酰化透明质酸、烷基化透明质酸、交联透明质酸和四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶分别溶解于无血清培养基，配制浓度为0.5%的样品溶液，0.22µm滤膜过滤除菌，使用前用无血清培养基稀释到指定浓度。mtt溶液：用pbs配制浓度为5mg/ml的mtt作用液，0.22µm滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存备用。3.2.对uv照射损伤的防护作用铺板：取处于对数生长期hacat细胞，胰酶消化后，调细胞密度5×104/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔100μl细胞悬液，置二氧化碳培养箱37℃、5%co2常规培养过夜。样品处理：常规培养过夜后，弃去培养液，每孔分别加入100μl目标浓度样品溶液，对照组加入等量的新鲜培养液，放入细胞培养箱中孵育16h。实验分组如下：表7对uv照射损伤的防护实验分组分组处理方法对照组1不照射，只换新鲜培养液对照组2在对照组1基础上，uv照射实验组加入样品溶液后，uv照射照射：采用7.2j/cm2uva加126mj/cm2uvb对对照组2及实验组hacat细胞进行联合照射。照射后，换为无血清培养基培养过夜，然后每孔加入15μlmtt，放入细胞培养箱中继续孵育4h。弃去培养液，每孔加入100μldmso，避光震荡10min，于490nm波长处用酶标仪测定吸光度。3.3.对uv照射损伤的修复作用铺板：取处于对数生长期hacat细胞，胰酶消化后，调细胞密度5×104/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔100μl细胞悬液，置二氧化碳培养箱37℃、5%co2常规培养过夜。照射：采用7.2j/cm2uva加126mj/cm2uvb对对照组2及实验组hacat细胞进行联合照射。实验分组如下：表8对uv照射后损伤的修复实验分组分组处理方法对照组1不照射，只换新鲜培养液对照组2uv照射后，更换新鲜培养液实验组uv照射后，加入样品溶液样品处理：实验组照射结束后，弃去培养液，每孔加入100μl目标浓度样品溶液，对照组加入等量的新鲜培养液，放入培养箱中继续培养。24h后，每孔加入15μlmtt，放入细胞培养箱中继续孵育4h。弃去培养液，每孔加入100μldmso，避光震荡10min，于490nm波长处用酶标仪测定吸光度。4.实验结果表9不同比例透明质酸类物质和四氢嘧啶类物质对hacat细胞uv照射损伤的防护作用及uv照射损伤后的修复作用表10含不同分子量透明质酸盐的组合物（质量比1：1）对hacat细胞uv照射损伤的防护作用及uv照射损伤后的修复作用透明质酸钠分子量（da）总样品浓度（%）uv照射损伤防护作用uv照射损伤修复作用1.1×1060.0688.94%78.49%5.5×1050.0676.38%75.55%1.2×1050.0679.97%73.32%5.1×1040.0682.35%75.85%0.83×1040.0697.19%88.21%由表9数据可知，透明质酸钠和四氢嘧啶都能够增强细胞的uv耐受性并修复uv造成的皮肤损伤，具有良好的防晒及晒后修复能力。透明质酸钠和四氢嘧啶复配后，其防晒及晒后修复能力相较于单种原料使用均有明显的提升，特别是晒后修复能力，增幅显著，特别是透明质酸钠和四氢嘧啶质量比为10:1、5:1、1:1、1:5混合配制所得溶液，细胞增殖率明显提高，表明四氢嘧啶和透明质酸钠具有协同增效的防晒及晒后修复效果，适于复配应用于防晒及晒后修复的化妆品及有防uv及uv辐射后损伤修复需求的皮肤病学药物中。不同透明质酸盐、透明质酸衍生物与四氢嘧啶或者透明质酸钠与四氢嘧啶类物质复配使用后，细胞增殖率相比透明质酸钠和四氢嘧啶单独使用也有显著的提升，说明其防晒及晒后修复能力相较于单种原料使用均有明显的提升。由表10数据可知，透明质酸钠和四氢嘧啶复配比例相同时，组合物防晒及晒后修复性能与透明质酸钠分子量有关，分子量为0.83×104da时，组合物防晒及晒后修复功能最佳，分子量为1.1×106da时，组合物防晒及晒后修复功能次之，分子量为5.1×104da-5.5×105da间透明质酸钠与四氢嘧啶复配后组合物防晒及晒后修复功能相对较小，但仍优于两种原料单独使用，说明不同分子量透明质酸钠都与四氢嘧啶具有协同防晒及晒后修复功能。当前第1页12