废糖蜜用于发酵生产四氢嘧啶羟化酶的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种废糖蜜的发酵利用方法，尤其是一种废糖蜜海洋微生物发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法。
【背景技术】
[0002]糖蜜是生产蔗糖的副产物，如果将糖蜜应用于发酵工业，将大大降低玉米等使用量，能够节约成本，并且减少了糖蜜处理的难度和降低污染风险。
[0003]四氢嘧啶羟化酶是四氢嘧啶合成羟基四氢嘧啶的关键酶，四氢嘧啶是嗜盐或者耐盐微生物在受到外界高盐浓度胁迫时合成的能够抵御外界高渗透压的一种相容性溶质，羟基四氢嘧啶作为四氢嘧啶的衍生物，除了和四氢嘧啶一样能够抵御外界高渗透压对细菌细胞的胁迫，还能够提高细菌对高温的耐受性，其应用更广，对帕金森等疾病也具有一定的治疗作用，在生物工业和医药等领域具有应用前景。
[0004]因此，利用糖蜜来发酵生产四氢嘧啶羟化酶，能够降低生产成本和开辟了糖蜜处理的新途径。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种利用废糖蜜为主要碳源发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法。
[0006]实现本发明目的的一种通过海洋微生物发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法，包括以下步骤。
[0007]将能够产四氢嘧啶羟化酶的海洋微生物菌种接种在试管中活化18-26h，然后接种到摇瓶中扩大培养，将摇瓶中的菌种接种到种子罐扩大培养，接种量为3-5%，然后种子罐培养24h后以5-10%的接种量接入发酵罐发酵。发酵罐发酵36小时，在发酵过程中流加糖蜜。将发酵液离心收集细胞然后将收集到的湿细胞加入为其20倍的水中释放2-10分钟，然后离心，收集液体，即为粗酶液，根据用途将粗酶液进一步纯化分离结晶。
[0008]实现本发明所用的糖蜜为糖厂生产蔗糖的下脚料。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
(I)菌种活化，选用德国菌种保藏中心的ih 1morms ο I onga ieDSM 258 It作为发酵菌种，选用营养培养基作为试管和三角瓶培养的活化培养基，比例如下(g/L):5g酵母膏，5g蛋白胨，2M NaCl，pH调整到7.2。试管装液量6ml，500ml锥形瓶装液量100ml。
[0010](2)发酵培养基(g/L)，糖蜜20g，豆柏粉，5g，葡萄糖lg，硫酸镁0.0lg，硫酸亚铁，0.005g, 2M NaCl，pH 调整到 7.2。
(3)将保存于-80度冰箱的种子取出到试管中活化20h，240转/秒摇床培养。然后接种于锥形瓶中，240转/秒摇床摇瓶培养24h。
[0011](4)将摇瓶培养的种子接入35升种子罐发酵培养基中，培养20h后接种到350升发酵培养基中发酵36h，发酵12小时后通过补料方式流加糖蜜10-30升。
[0012](5)将步骤四得到的发酵液通过高速离心机10000转离心收集菌体，然后将菌体置入储藏罐加入20倍水，搅拌2-5分钟，离心收集液体即为粗酶液。粗酶液进一步纯化为目的酶制剂。
【主权项】
1.一种利用废糖蜜发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法，包括以下步骤: (1)发酵培养基主要包括将废糖蜜、豆柏粉、硫酸盐； (2)将能够产四氢嘧啶羟化酶的海洋微生物菌种接种在试管中活化18-26h，然后接种到摇瓶中扩大培养，将摇瓶中的菌种接种到种子罐扩大培养，接种量为3-5%，然后种子罐培养24h后以5-10%的接种量接入发酵罐发酵； (3)发酵罐发酵过程中流加糖蜜，发酵时间为36小时； (4)将发酵液离心收集细胞然后将收集到的湿细胞加入为其20倍的水中释放2-10分钟，然后离心，收集液体，即为粗酶液，根据用途将粗酶液进一步纯化分离结晶。
2.根据权利要求1所述的一种利用废糖蜜发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法，其特征在于:所述糖蜜的添加量为5-15%。
3.根据权利要求1和2所述的一种利用废糖蜜发酵生产四氢嘧啶羟化酶的方法，其特征在于:糖蜜作为主要碳源发酵前添加到发酵培养基中，并且发酵过程中通过补料方式继续流加废糖蜜。
【专利摘要】本发明提供一种利用废糖蜜作为主要原料生产四氢嘧啶羟化酶的方法，主要包括以糖蜜作为主要碳源，添加豆粕粉作为氮源，高密度发酵生产四氢嘧啶羟化酶。本发明用废糖蜜代替了玉米粉和部分豆粕粉等原料，使得发酵生产四氢嘧啶羟化酶成本大大降低。
【IPC分类】C12N9-02
【公开号】CN104560902
【申请号】CN201310483668
【发明人】朱道辰, 陈焱, 朱淑静, 洪好
【申请人】镇江拜因诺生物科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月16日