本发明涉及一种菲牛蛭的炮制方法，属于中药
技术领域：
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背景技术：
：菲牛蛭(poecilobdellamanillensis)是一种吸血水蛭，俗称金边蚂蝗，是蛭纲无吻蛭目医蛭科动物菲牛蛭的干燥全体，是一味传统的中药，始载于《神农本草经》。《名医别录》、《神农本草经集注》、《本草图经》、《唐本草》、《本草纲目》等历代本草均有记载。《唐本草》云“有水蛭、草蛭。大者长尺许，腹中有血者，干之为佳。”菲牛蛭主要分布于广西、广东、海南和福建等省区,自然环境下以吸食人、畜、蛙类等脊椎动物血液为生。菲牛蛭具有显著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集等药理活性，主要化学成分为脂肪酸、氨基酸和蛋白质，其中已报道的活性成分为水蛭素p6、水蛭素p18、菲牛蛭素a和菲牛蛭素b。急性毒性试验表明菲牛蛭没有明显的毒副作用，因此其具有显著的药用价值。水蛭素(hirudin)是存在于吸血水蛭菲牛蛭(金边蚂蝗)的唾液腺中的一种蛋白质，具有高度特异的抗凝血酶活性，抑制凝血酶结合底物，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。现代研究也证实，与《中国药典》非吸血的品种比较，吸血的菲牛蛭(金边蚂蟥)中含有更为丰富的水蛭素，抗凝活性也较其他非吸血类蛭更高。目前，菲牛蛭作为体内水蛭素含量比较高的水蛭品种之一，临床常用于治疗脑血肿、脑水肿、皮下血肿、脑血栓、脑溢血、高黏血症、高血压病、冠心病、心绞痛，是治疗脑卒中、脑中风后遗症的一线用药。近年来在市场上越发紧俏，且多以活体和冷冻体出售。现有技术的菲牛蛭的炮制方法收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》(第二卷)dyb45-gxzyc0117-2011,即于夏、秋二季捕捉菲牛蛭，洗净，用沸水烫死，晒干或者低温干燥。本申请的发明人经研究发现，若将菲牛蛭用沸水直接烫死并且不挤血直接干燥的话，会造成菲牛蛭的抗凝血酶活性即水蛭素大大降低，进而直接影响菲牛蛭的疗效。菲牛蛭多以单方用药，临床表明生用效果最佳，但大多数患者反映服用时极为恶心，甚至产生呕吐现象，不仅影响了患者的用药感受，更降低了疗效。本申请的发明人经研究发现，菲牛蛭体内的抗凝血酶的活性受温度和体内是否存血而影响。活体菲牛蛭若是直接烫死，由于温度较高会使体内的抗凝血酶活性降低；若不将死后的菲牛蛭体内的存血放干，也会使抗凝血酶活性降低；若通过低温干燥常温打粉也会使抗凝血酶活性降低。综上，现有技术的菲牛蛭的炮制方法存在的缺点是：菲牛蛭在烫死、存血、干燥粉碎等加工过程中，造成其有效成分即水蛭素大大降低，进而直接影响菲牛蛭的疗效。因此，目前亟需提供一种新的菲牛蛭的炮制方法，以解决现有技术的不足。技术实现要素：本发明的目的，是提供一种菲牛蛭的炮制方法。本发明的菲牛蛭的炮制方法，既解决了高温抗凝血酶活性降低的问题，又实现了去腥存效，可以最大限度的保留菲牛蛭中的活性成分，在提高患者对产品的接受度的同时，也最大限度地确保了产品的疗效。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种菲牛蛭的炮制方法，包括如下步骤：步骤1：冷冻取活体菲牛蛭，洗净后，称重，进行冷冻，得到菲牛蛭冻品；步骤2：浸泡将步骤1得到的菲牛蛭冻品，完全解冻后，控水，加入步骤1所述活体菲牛蛭重量1～3％的陈醋和4～10％的食用明矾，搅匀，加水浸泡至菲水蛭表面层，再搅匀，浸泡5～7小时，得到浸泡后的菲牛蛭；步骤3：摆放将步骤2得到的浸泡后的菲牛蛭捞出，按头尾顺序依次摆放在筛网上；步骤4：放血将步骤3筛网上摆放的每条菲牛蛭的腹部至后端吸盘1cm处剪开，剪口为腹部宽度的1/3～1/4，然后将菲牛蛭的腹部向下摆放，同时将菲牛蛭从头到尾挤压放血，然后冲洗菲牛蛭和筛网，第一次干燥至菲牛蛭的颜色变黑且身体未变硬时，将菲牛蛭从筛网上取下，放至另外的干净筛网上，按头尾顺序依次摆放，第二次干燥后，得到放血后的菲牛蛭；步骤5：冷冻干燥打粉将步骤4得到的放血后的菲牛蛭冷冻干燥，打粉后，得到炮制后的菲牛蛭。本发明的原理说明：步骤1中，活体菲牛蛭的性状：长椭圆形、长条形，或扭曲，扁平，柳叶状，长4～13cm，体宽0.3～1.2cm，体厚0.05～0.1cm，背部黑色或黑褐色，有少许环节突起；腹面黑色，较光滑。前端略尖，后端钝圆，两端各具一吸盘，前吸盘不显著，后吸盘圆大。质脆，断面胶质状，黑色。气腥臭，味咸。步骤1中，进行冰冻，是为了将活体菲水蛭灭活、低温杀菌。步骤2中，如果活体菲牛蛭冷冻后直接放血，不仅耗时而且体内血液存在放不干净的问题，因此在浸泡过程中加入陈醋和食用明矾。加入陈醋，是为了矫臭矫味和灭菌。加入食用明矾，是为了收敛，便于放血和干燥。步骤5中，将放血后的菲牛蛭冷冻干燥打粉后服用，既解决了高温抗凝血酶活性降低的问题，又实现了去腥存效。因此冷冻打粉后提高患者产品的接受度的同时，最大限度确保了产品的疗效。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。进一步，步骤1中，所述冷冻的温度为-20℃至-26℃，冷冻的时间为48小时。采用上述进一步的有益效果是：上述参数，可以实现活体菲牛蛭的速冻。一般在冷冻室中进行活体菲牛蛭的速冻。进一步，步骤2中，所述完全解冻是在室温流动清水中进行。采用上述进一步的有益效果是：可以再次清洁菲牛蛭的表面的杂质，保证解冻过程中不会有污染。进一步，步骤3中，所述筛网为纱网或不锈钢网，目数为20目。采用上述进一步的有益效果是：可以加快干燥并且也可以保证干燥体的完整。进一步，步骤4中，所述第一次干燥后的含水率≤18％wt；所述第二次干燥后的含水率≤15％wt。进一步，步骤5中，所述冷冻干燥的温度为-10～18℃，时间为30～60min；所述打粉的粒径为200目。本发明的有益效果是：(1)本发明的菲牛蛭的炮制方法，既解决了高温抗凝血酶活性降低的问题，又实现了去腥存效，可以最大限度的保留菲牛蛭中的活性成分，在提高患者对产品的接受度的同时，也最大限度地确保了产品的疗效。(2)本发明的炮制过程简便，生产条件易于操控，产品质量可控性好，产品质量稳定。市场前景广阔，适合规模化生产和推广。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1：本实施例的菲牛蛭的炮制方法，包括如下步骤：步骤1：冷冻取活体菲牛蛭，洗净后，称重50kg，于-20℃进行冷冻48小时，得到菲牛蛭冻品；步骤2：浸泡将步骤1得到的菲牛蛭冻品，在室温流动清水中进行完全解冻后，控水，再加入步骤1所述活体菲牛蛭重量1％的陈醋和5％的食用明矾，搅匀，加水浸泡至菲水蛭表面层，再搅匀，浸泡5小时，得到浸泡后的菲牛蛭；步骤3：摆放将步骤2得到的浸泡后的菲牛蛭捞出，按头尾顺序依次摆放在20目的纱网上；步骤4：放血将步骤3纱网上摆放的每条菲牛蛭的腹部至后端吸盘1cm处剪开，剪口为腹部宽度的1/3，然后将菲牛蛭的腹部向下摆放，同时将菲牛蛭从头到尾挤压放血，然后冲洗菲牛蛭和筛网，第一次干燥至含水率为18％wt，此时菲牛蛭的颜色变黑且身体未变硬时，将菲牛蛭从筛网上取下，放至另外的干净筛网上，按头尾顺序依次摆放，第二次干燥至含水率为15％wt后，得到放血后的菲牛蛭；步骤5：冷冻干燥打粉将步骤4得到的放血后的菲牛蛭于-10℃冷冻干燥30min，打粉至200目后，得到炮制后的菲牛蛭8.5kg。实施例2：本实施例的菲牛蛭的炮制方法，包括如下步骤：步骤1：冷冻取活体菲牛蛭，洗净后，称重50kg，于-23℃进行冷冻48小时，得到菲牛蛭冻品；步骤2：浸泡将步骤1得到的菲牛蛭冻品，在室温流动清水中进行完全解冻后，控水，再加入步骤1所述活体菲牛蛭重量2％的陈醋和4％的食用明矾，搅匀，加水浸泡至菲水蛭表面层，再搅匀，浸泡6小时，得到浸泡后的菲牛蛭；步骤3：摆放将步骤2得到的浸泡后的菲牛蛭捞出，按头尾顺序依次摆放在20目的纱网上；步骤4：放血将步骤3纱网上摆放的每条菲牛蛭的腹部至后端吸盘1cm处剪开，剪口为腹部宽度的1/4，然后将菲牛蛭的腹部向下摆放，同时将菲牛蛭从头到尾挤压放血，然后冲洗菲牛蛭和筛网，第一次干燥至含水率为16％wt，此时菲牛蛭的颜色变黑且身体未变硬时，将菲牛蛭从筛网上取下，放至另外的干净筛网上，按头尾顺序依次摆放，第二次干燥至含水率为13％wt后，得到放血后的菲牛蛭；步骤5：冷冻干燥打粉将步骤4得到的放血后的菲牛蛭于-15℃冷冻干燥45min，打粉至200目后，得到炮制后的菲牛蛭7.5kg。实施例3：本实施例的菲牛蛭的炮制方法，包括如下步骤：步骤1：冷冻取活体菲牛蛭，洗净后，称重50kg，于-26℃进行冷冻48小时，得到菲牛蛭冻品；步骤2：浸泡将步骤1得到的菲牛蛭冻品，在室温流动清水中进行完全解冻后，控水，再加入步骤1所述活体菲牛蛭重量3％的陈醋和10％的食用明矾，搅匀，加水浸泡至菲水蛭表面层，再搅匀，浸泡7小时，得到浸泡后的菲牛蛭；步骤3：摆放将步骤2得到的浸泡后的菲牛蛭捞出，按头尾顺序依次摆放在20目的不锈钢网上；步骤4：放血将步骤3不锈钢网上摆放的每条菲牛蛭的腹部至后端吸盘1cm处剪开，剪口为腹部宽度的1/4，然后将菲牛蛭的腹部向下摆放，同时将菲牛蛭从头到尾挤压放血，然后冲洗菲牛蛭和筛网，第一次干燥至含水率为17％wt，此时菲牛蛭的颜色变黑且身体未变硬时，将菲牛蛭从筛网上取下，放至另外的干净筛网上，按头尾顺序依次摆放，第二次干燥至含水率为14％wt后，得到放血后的菲牛蛭；步骤5：冷冻干燥打粉将步骤4得到的放血后的菲牛蛭于-18℃冷冻干燥60min，打粉至200目后，得到炮制后的菲牛蛭10kg。检测方法菲牛蛭(金边蚂蟥)中主要活性成分是水蛭素，用markwardt凝血酶直接滴定法可检测其含量。其原理是：水蛭素能与凝血酶特异性结合，使凝血酶失活，其结合比例为1:1，水蛭素的计量单位为国际单位，以atu表示，凝血酶活性的国际单位为nih，即1个atu等于中和1个nih凝血酶的水蛭素量。取本品粉末(过三号筛)约1g，精密称定，精密加入0.9％氯化钠溶液5ml，充分搅拌，浸提30min，并时时振摇，离心，精密量取上清夜100μl，置试管(8mm×38mm)中，加入0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(临用现配)(取0.2mol/l三羟甲基氨基甲烷溶液25ml与0.1mol/l盐酸溶液约40ml，加水至100ml，调节ph值至7.4)200μl，摇匀，置水浴(37℃±0.5℃)中温浸5min，滴加每1ml中含40u(单位)的凝血酶溶液(取凝血酶试剂适量，加生理盐水制成每1ml含凝血酶40个单位或10个单位的溶液，临用现配)(每4min滴加1次，每次2μl，边滴加边轻轻摇匀)至凝固，记录消耗凝血酶溶液的体积，按下式计算：式中：u---每1g含凝血酶活性单位，即水蛭素含量，u/g；c1---凝血酶溶液的浓度，μ/ml；c2---供试品溶液的浓度，g/ml；v1---消耗凝血酶溶液的体积，μl；v2---供试品溶液的加入量，μl；w---取样量。现有技术的菲牛蛭(金边蚂蟥)的质量标准收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》(第二卷)dyb45-gxzyc0117-2011，其中要求本品每1g含抗凝血酶活性应不低于220.0u。对比试验1跟实施例2不同的是，对比试验1的步骤1中，活体菲牛蛭不是采用冷冻方式，而是采用烫死方式，其余都相同。对比试验2跟实施例2不同的是，对比试验2的步骤1中，活体菲牛蛭不是采用冷冻方式，而是采用烫死方式，且无步骤4将菲牛蛭从头到尾挤压放血这个环节，其余都相同。对比试验3跟实施例3不同的是，对比试验3的步骤4中，没有将菲牛蛭从头到尾挤压放血这个环节，其余都相同。实施例1-3和对比试验1-3得到的菲牛蛭的抗凝血酶活性，分别如表1所示。表1实施例1-3和对比试验1-3得到的菲牛蛭的抗凝血酶活性分组抗凝血酶活性(u/g)实施例1824.8实施例21160.3实施例3782.9对比试验1601.5对比试验2300.6对比试验3612.1由此可见，活体菲牛蛭冻死比烫死的抗凝血酶活性提高，由于抗凝血酶受温度的影响；用一定比例的陈醋和食用明矾进行浸泡处理不仅可以调整菲牛蛭的ph值，更便于后期的挤血工序，挤血也做到了去腥存效的效果；冷冻干燥打粉保证了菲牛蛭在低温的环境中进行，确保了菲牛蛭体内的抗凝血酶不受破坏，提高了产品的有效性。通过多批次的对比试验和最佳参数的试验后得到：活体菲牛蛭在-23℃进行冷冻并且用1％陈醋和4％食用明矾进行浸泡后进行挤血冷冻干燥粉碎后所得的菲牛蛭粉，不仅提高了抗凝血酶活性，又实现了去腥存效。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12