WS6对TRP通道的作用的制作方法

本发明属于医学技术领域，涉及ws6(促胰岛素分泌药物格列本脲、正钒酸钠及促胰岛细胞增殖药物)对trp离子通道的作用。

背景技术：

研究发现，ws6能够通过erb3结合蛋白-1和iκb激酶路径，促进胰岛β细胞的增值。体外实验表明，ws6能够诱导r7t1细胞增殖，ec50为0.28μm，并且能够促进啮齿动物和人源胰岛的β细胞增殖。erb3结合蛋白-1和iκb激酶信号通路被证实在ws6作用机制中发挥作用。在体实验表明，在切除β细胞的rip-dta小鼠模型中，ws6能够改善糖尿病症状，并促进β细胞增殖和细胞数量的增加。

trp(transientreceptorpotential)通道是一类在外周和中枢神经系统中分布很广泛的通道蛋白。trp通道为六次跨膜蛋白，其n末端和c末端均在胞内，由第五和第六跨膜结构域共同构成非选择性阳离子孔道，这些通道可以被多种因素调节，包括温度、渗透压、ph值、机械力，以及一些内、外源性配体和细胞内信号分子。trp通道的功能包括介导感觉信号的传递、调节细胞钙平衡、影响发育等。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供ws6对trp通道的作用，本发明的有益效果是对于临床治疗有指导作用。

本发明揭示了ws6对trp通道的作用。

进一步，trp离子通道为trp4。

进一步，ws6能够抑制trpv4离子通道活性。

附图说明

图1是ws6对trpv4作用的全细胞膜片钳实验；

图2是ws6对trpv4抑制作用可逆性全细胞膜片钳实验；

图3是全膜片钳实验测定ic50曲线图；

图4是ws6对trpv1作用的全细胞膜片钳实验；

图5是ws6对trpv2作用的全细胞膜片钳实验；

图6是ws6对trpv3作用的全细胞膜片钳实验。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

1全细胞膜片钳证实ws6对trpv4的抑制作用

作为电生理实验“金标准”的膜片钳技术，用来确认化合物对trp通道的作用。本实验利用全细胞膜片钳技术，测定了转染htrpv4的hek293t细胞，深入研究了ws6对trpv4离子通道的抑制作用。

结果如图1、图2所示，在细胞封接、破膜，完成细胞钳制，系统电流稳定后，利用重力灌流系统往细胞外液中加入trpv4离子通道激动剂100nmgsk101，电流信号显著上升，说明trpv4离子通道激活。在电流达到稳定状态后，加入250um浓度的化合物ws6，可以观察到电流随着时间逐渐降低直至达到基线(图1)。当灌流系统中ws6的加入停止后，细胞电流会有一定程度的恢复，当再次加入ws6，细胞电流重新降低直至基线。

全细胞膜片钳实验结果证实，ws6能够抑制trpv4离子通道活性，也进一步证实了ws6对trpv4离子通道的抑制作用有一定的可逆性。

2全细胞膜片钳实验测定ic50

全膜片钳实验证实了ws6能够抑制trpv4离子通道活性，进一步利用全膜片钳电生理学实验测定了ws6抑制trpv4离子通道活性的ic50值。

如图3所示，考察了在不同ws6浓度存在条件下全细胞膜片钳的电流变化。结果显示，随着ws6浓度的升高，细胞电流逐步降低，到100μm浓度时，基本抑制到基线位置。对测定得到的浓度-电流数据进行拟合，得到了类指数的曲线，可以看到在10-100μm浓度范围内，曲线呈现出指数降低的趋势，ws6对trpv4电流被抑制的量效比最为明显。对浓度依赖的曲线进行统计计算，得到ws6对trpv4离子通道ic50值为26.87±3.18μm(hillcoefficient＝2.68,n＝14)。

3ws6抑制trpv4离子通道的特异性

利用flexstation和全膜片钳实验确认了ws6能够抑制trpv4离子通道活性，并且测定了ws6抑制trpv4离子通道活性的ic50值，接下来利用全细胞膜片钳考察了ws6抑制trpv4离子通道的特异性。

如图4-6所示，考察了在100μmws6浓度存在条件下trpv1、trpv2、trpv3等3种离子通道全细胞膜片钳的电流变化。结果显示，与ws6对trpv4的快速抑制相比，它对trpv1、trpv2、trpv3等离子通道的抑制并不明显，表明ws6对trpv4离子通道活性的抑制有一定的特异性。

本发明研究了促胰岛素分泌药物格列本脲、正钒酸钠及促胰岛细胞增殖药物ws6，通过flexstation3快速动力学高通量钙荧光测定化合物对trpv1、trpv2、trpv3、trpv4通道的作用，并通过全细胞膜片钳对活性分子进行活性确认和选择性的评价。

结果表明，ws6对trpv4有明显的抑制作用，ic50为26.87±3.18μm。

以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

技术特征：

技术总结
本发明公开了WS6对TRP通道的作用，TRP通道为TRP4。WS6能够抑制TRPV4离子通道活性,TRP离子通道为TRP4。本发明的有益效果是对于临床治疗有指导作用。

技术研发人员：张从晓;王克威;卫宁宁;孙晓颖;孙晓梅
受保护的技术使用者：青岛大学
技术研发日：2018.08.16
技术公布日：2018.11.20