一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法及其产品与应用与流程

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法，还涉及一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是当今世界直接危及人类生命的一种常见疾病，寻找高效低毒、能作用于特定靶标的新型抗肿瘤药一直是人类不懈奋斗的目标。

近年来，作为抗肿瘤药物的芳烃钌配合物一直是国内外研究者关注的重点，目前已经有大量的文献报道。其中所采用的钌配合物对正常细胞的毒性小、易于被肿瘤组织吸收，并且对转移瘤具有明显的效果；国际上也普遍认为，钌配合物将成为最有前途的抗肿瘤药物之一。

现有技术中，广东药学院研究报道了菲并咪唑及其衍生物为配体的芳烃钌配合物对肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移具有很好的抑制作用。例如，专利cn103709202b公开了一种钌(ii)配合物，还公开了该化合物的制备方法。又如，中国专利申请cn103788134a披露了一种含炔基钌(ii)配合物，其具有较强的荧光发射，与dna相互作用的荧光变化明显、结合力强，从而可用于制备预防或治疗癌症的药物。

此外，经研究证实，不同结构的芳烃钌配合物能够通过诱导dna损伤、诱导细胞凋亡等方式抑制肿瘤细胞的增殖；并且，特定结构的芳烃钌配合物能够诱导肿瘤细胞s-期阻滞。也有报道表明，特定结构的芳烃钌配合物能够结合并稳定g4dna。

因此，如何设计出一系列新型的芳烃钌配合物类抗肿瘤药物，使得其既具有优异的抗肿瘤活性，也能表现出高靶向性与低毒性的优点，成为当今医药研发人员的重点研究方向之一。

技术实现要素：

本发明旨在利用芳烃钌配合物诱导dna或rna自组装成纳米结构，作为靶向抗肿瘤试剂，并应用于肿瘤疾病的治疗中。

因此，本发明的第一方面，提供了一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法，其包括以下步骤：

s1：配制tri-hcl溶液；

s2：称取芳烃钌配合物并溶于二甲基亚砜，得到体积摩尔浓度c1的芳烃钌配合物母液；接着，用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物母液稀释成体积摩尔浓度c的芳烃钌配合物溶液；

s3：称取核酸，并用所述tri-hcl溶液配制成体积摩尔浓度c2的核酸母液；接着，用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成体积摩尔浓度c的核酸溶液；其中，c2为c1的十分之一；

s4：分别取相同体积的所述芳烃钌配合物溶液和所述核酸溶液，置于ep管中，混合均匀，80～95℃孵育20～30min；冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得所述芳烃钌配合物-核酸纳米复合物；

其中，所述芳烃钌配合物结构式如下：

其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6各自独立地选自：h，c1-c6的链烷基，c2-c6的链烯基，c2-c6的链炔基；

其中，r7选自：h，c1-c6的链烷基，c1-c6的烷氧基，c2-c6的链炔基，卤素；

其中，x选自f，cl，br，i。

优选地，在上述制备方法中，所述核酸的序列选自以下任一种：

如seqidno.1所示的c-mycg4序列，如seqidno.2所示的bcl-2序列，如seqidno.3所示的c-kit1序列，如seqidno.4所示的c-kit2序列，如seqidno.5所示的kras序列，如seqidno.6所示的as1411序列，如seqidno.7所示的mir-21rna序列，如seqidno.8所示的mir-34arna序列，如seqidno.9所示的par-1sirna序列，如seqidno.10所示的端粒dna序列。

以上优选实施方式中所使用的核苷酸序列如下表1所示：

表1

进一步优选地，在上述制备方法中，所述芳烃钌配合物选自以下任一种：

进一步优选地，在上述制备方法中，所述tri-hcl溶液的配制步骤包括：准确称量三羟甲基氨基甲烷和nacl或kcl，并用蒸馏水溶解；然后，用1mm的稀盐酸调节ph至7.0-7.5，转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容。

进一步优选地，在上述制备方法中，所述体积摩尔浓度c＝100μm。

同时，本发明的第二方面提供了一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物，其通过第一方面所述的制备方法制得。例如，所述芳烃钌配合物-核酸纳米复合物可以是芳烃钌配合物(i)与c-mycg4的纳米复合物，芳烃钌配合物(ii)与bcl-2的纳米复合物，芳烃钌配合物(ii)与par-1sirna的纳米复合物，芳烃钌配合物(iii)与c-kit1的纳米复合物，芳烃钌配合物(iv)与c-kit2的纳米复合物，芳烃钌配合物(iv)与mir-21rna的纳米复合物，芳烃钌配合物(iv)与mir-34arna的纳米复合物。

此外，本发明的第三方面提供了所述芳烃钌配合物-核酸纳米复合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

优选地，在上述应用中，所述的肿瘤选自：肝肿瘤、乳腺肿瘤以及肺肿瘤。

综上所述，本发明所提供的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法的操作简单，制备条件温和，从而能够快速便捷地制备目标纳米复合物。依据本发明所述制备方法制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物既具有优异的抗肿瘤活性，也能表现出高靶向性与低毒性的优点，因此，该芳烃钌配合物-核酸纳米复合物适于制备各种抗癌药物或dna/rna插入试剂，从而具有广阔的临床应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例1制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图2为本发明实施例2制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图3为本发明实施例3制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图4为本发明实施例4制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图5为本发明实施例5制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图6为本发明实施例6制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图7为本发明实施例7制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图8为本发明实施例8制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图9为本发明实施例9制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图；

图10为本发明实施例10制得的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的原子力图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。

在一个优选实施例中，芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法包括以下步骤：

s1：配制tri-hcl溶液；

s2：称取芳烃钌配合物并溶于二甲基亚砜，得到体积摩尔浓度c1的芳烃钌配合物母液；接着，用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物母液稀释成体积摩尔浓度c的芳烃钌配合物溶液；

s3：称取核酸，并用所述tri-hcl溶液配制成体积摩尔浓度c2的核酸母液；接着，用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成体积摩尔浓度c的核酸溶液；其中，c2为c1的十分之一；

s4：分别取相同体积的所述芳烃钌配合物溶液和所述核酸溶液，置于ep管中，混合均匀，90℃孵育30min；冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得所述芳烃钌配合物-核酸纳米复合物；

其中，所述芳烃钌配合物结构式如下：

其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6各自独立地选自：h，c1-c6的链烷基，c2-c6的链烯基，c2-c6的链炔基；r7选自：h，c1-c6的链烷基，c1-c6的烷氧基，c2-c6的链炔基，卤素；x选自f，cl，br，i；

其中，所述芳烃钌配合物可参照现有技术(如中国专利申请cn103709202a、cn103788134a中所记载的合成方法)或其它公知的方法合成得到。

实施例1

芳烃钌配合物(i)与c-mycg4的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gnacl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(i)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(i)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(i)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(i)溶液以备用。

③称取2.5mgc-mycg4dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(i)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(i)与c-mycg4的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(i)与c-mycg4的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图1所示，可见其形貌比较均一。

实施例2

芳烃钌配合物(ii)与c-mycg4的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gnacl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(ii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(ii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(ii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(ii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-mycg4dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(ii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(ii)与c-mycg4的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(ii)与c-mycg4的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图2所示，可见其形貌比较均一。

实施例3

芳烃钌配合物(ii)与c-kit1的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(ii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(ii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(ii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(ii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-kit1dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(ii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(ii)与c-kit1的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(ii)与c-kit1的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图3所示，可见其形貌比较均一。

实施例4

芳烃钌配合物(ii)与c-kit2的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gnacl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(ii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(ii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(ii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(ii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-kit2dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(ii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(ii)与c-kit2的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(ii)与c-kit2的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图4所示，可见其形貌比较均一。

实施例5

芳烃钌配合物(ii)与bcl-2的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gnacl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(ii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(ii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(ii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(ii)溶液以备用。

③称取2.5mgbcl-2dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(ii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(ii)与bcl-2的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(ii)与bcl-2的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图5所示，可见其形貌比较均一。

实施例6

芳烃钌配合物(iii)与c-mycg4的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(iii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(iii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(iii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(iii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-mycg4dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(iii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(iii)与c-mycg4的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(iii)与c-mycg4的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图6所示，可见其形貌比较均一。

实施例7

芳烃钌配合物(iii)与c-kit1的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(iii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(iii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(iii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(iii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-kit1dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(iii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(iii)与c-kit1的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(iii)与c-kit1的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图7所示，可见其形貌比较均一。

实施例8

芳烃钌配合物(iii)与c-kit2的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(iii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(iii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(iii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(iii)溶液以备用。

③称取2.5mgc-kit2dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(iii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(iii)与c-kit2的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(iii)与c-kit2的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图8所示，可见其形貌比较均一。

实施例9

芳烃钌配合物(iii)与bcl-2的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(iii)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(iii)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(iii)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(iii)溶液以备用。

③称取2.5mgbcl-2dna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(iii)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(iii)与bcl-2的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(iii)与bcl-2的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图9所示，可见其形貌比较均一。

实施例10

芳烃钌配合物(iv)与kras的纳米复合物的制备与检测

①准确称量1.21gtris(三羟甲基氨基甲烷)与4.68gkcl置于1l烧杯中，加入约800ml蒸馏水，充分搅拌溶解。配制1mm的稀盐酸，调节ph至7.0-7.5，再转移至1l容量瓶中，并用蒸馏水定容至1l，即制得tri-hcl溶液，备用。

②称取2.5mg芳烃钌配合物(iv)，溶于二甲基亚砜，配制成10mm的芳烃钌配合物(iv)母液。用所述tri-hcl溶液将所述芳烃钌配合物(iv)母液稀释成100μm芳烃钌配合物(iv)溶液以备用。

③称取2.5mgkrasdna，并用所述tri-hcl溶液配制成1mm的核酸母液。用所述tri-hcl溶液将所述核酸母液稀释成100μm的核酸溶液以备用。

④取1ml100μm的芳烃钌配合物(iv)溶液置于ep管中，并向同一ep管中加入1ml100μm的核酸溶液，混合均匀，90℃孵育30min，冷却至室温，然后，4℃下保持过夜，即得芳烃钌配合物(iv)与kras的纳米复合物的溶液。

⑤取芳烃钌配合物(iv)与kras的纳米复合物的溶液2μl，滴加到云母片上，并用10μl的无水乙醇展开，晾干后，实施afm检测，即在原子力显微镜下观察形貌，结果如图10所示，可见其形貌比较均一。

实施例11

芳烃钌配合物-核酸纳米复合物对肿瘤细胞的抑制作用

将所述芳烃钌配合物-核酸纳米复合物以1mm的储备溶液溶解于dmso中，通过测定细胞将mtt转化成紫色甲瓒染料的能力来测定细胞活力。具体地，将细胞接种在96孔组织培养板中24小时，然后将细胞与不同浓度的复合物温育72小时；在更高温度下，加入20ml/孔的mtt溶液(5mg/ml磷酸盐缓冲盐水)并温育5小时；然后，使用微孔板分光光度计(spectroamaxt250)在570nm处测量反应细胞生长条件的甲瓒溶液的颜色强度。不同的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物对肿瘤细胞的抑制作用如下表2所示。

表2不同的芳烃钌配合物-核酸纳米复合物对肿瘤细胞的抑制作用

由此可见，芳烃钌配合物(ii)/c-kit1，芳烃钌配合物(iii)/c-mycg4，芳烃钌配合物(iii)/bcl-2，芳烃钌配合物(iv)/kras的纳米复合物对肝癌细胞hepg2具有较好的抑制作用，同时芳烃钌配合物(iii)/bcl-2的纳米复合物对乳腺癌细胞具有较好的抑制作用。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

序列表

<110>广东药科大学

<120>一种芳烃钌配合物-核酸纳米复合物的制备方法及其产品与应用

<160>10

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>22

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

tgagggtggggagggtggggaa22

<210>2

<211>27

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

cgggcgcgggaggaagggggcgggagc27

<210>3

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>3

gggagggcgctgggaggaggg21

<210>4

<211>27

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>4

cccgggcgggcgcgagggaggggaggt27

<210>5

<211>32

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>5

gcggtgtgggaagagggaagagggggaggcag32

<210>6

<211>26

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>6

ggtggtggtggttgtggtggtggtgg26

<210>7

<211>22

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>7

uagcuuaucagacugauguuga22

<210>8

<211>22

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>8

uggcagugucuuagcugguugu22

<210>9

<211>18

<212>rna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>9

agauuagucuccaucaua18

<210>10

<211>6

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>10

ttaggg6