本发明涉及妇科药物技术领域，尤其涉及一种抗菌妇科外用药物组合物及其制备方法与应用。
背景技术
妇科炎症是女性最常见的疾病，主要是指女性生殖器的炎症，女性的多种器官都可以发生急性和慢性炎症，具体包括女性外阴炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎；依据病原体又可以分为真菌性阴道炎、细菌性阴道炎和滴虫性阴道炎，其有发病率高、根治困难、易复发等特点。
随着生活方式的改变，工作节奏加快、免疫力下降等因素，导致妇科炎症发病率持续攀升，且呈年轻化趋势。妇科炎症不仅伴随瘙痒、灼热感影响女性日常生活，而且会危害身体健康，甚至波及家人。
目前治疗妇科炎症的给药方式分为注射、口服和外用，由于注射和口服毒副作用大且起效慢，患者更倾向于用外用药品。外用药品又分为中成药、化药和中西药合剂。化药主要是抗生素类，这类药物抗菌消炎效果非常明显、见效快，但是过度依赖抗生素导致的耐药性会增加治疗难度，且对妇科炎症的并发症并无效果；中成药由纯中药提取制备而来，其成分复杂，抑菌效果难以控制；中西药合剂是中成药的基础上添加适量的化药，这样保证了抑菌效果，但是仍然面临耐药性的问题。
对比文件1：申请号为“cn201310233570.0”，名称为“一种用于治疗妇科炎症的药物组合物”，涉及一种用于治疗妇科炎症的药物组合物，以红豆杉活性提取物、樟脑、薄荷油为原料，与作为基质的可药用载体一起制备而成。本发明提供的药物组合物既可以提高红豆杉的综合利用价值，同时制得的药物组合物的消炎效果更优。然而该组合物中存在红豆杉对革兰氏阳性菌抑制效果不理想的弊端，基本不能治疗妇科炎症并发症，药效有待提高。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种抗菌妇科外用药物组合物，以红豆杉作为君药，佐以黄芩、蛇床子、苦参等中药，即保证了复方中药组合物抗菌消炎作用，同时也可以清热除湿、杀虫止痒、散结消肿，提高药效，缩减痊愈时间，改善生活质量，具体地，以黄芩作为臣药，克服了红豆杉对革兰氏阳性菌抑制效果不理想的弊端，保证了药物抑菌性能；以苦参、蛇床子为佐药，辅助治疗妇科炎症并发症，提高药效，加快痊愈。
本发明是这样实现的：
本发明目的之一在于提供一种抗菌妇科外用药物组合物，所述药物组合物包括下列重量份的物质：红豆杉提取物1-10份，黄芩提取物1-10份，苦参提取物0.5-5份，蛇床子提取物0.5-5份。
本发明的目的之二在于提供一种抗菌妇科外用药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、分别取所述的红豆杉、黄芩、苦参和蛇床子，烘干后粉碎；
步骤2、在步骤1所得的中药粉末热水浸提，得到不同中药的浸提液；
步骤3、合并步骤2所得相应中药浸提液，真空浓缩，将浓缩液喷雾干燥后即得所述抗菌妇科外用药物组合物。
本发明的目的之三在于提供所述的药物组合物制备的剂型，它包括所述的药物组合物和药学上可接受的载体，所述剂型为洗剂、凝胶剂、阴道泡腾片、乳剂、乳膏剂、酊剂、露剂、搽剂、涂膜剂或喷雾剂。
优选地，所述洗剂包括下列重量份的物质组成：所述的药物组合物8-15份，薄荷脑0.1-0.5份，冰片0.1-0.5份，乙醇1-3份。
优选地，所述凝胶剂包括下列重量份的物质组成：所述的药物组合物0.5-1.4份，薄荷脑0.05-0.2份，冰片0.05-0.2份，凝胶基质0.5-1份，乙醇1-5份。
优选地，所述阴道泡腾片包括下列重量份的物质组成：所述的药物组合物5-10份，泡腾崩解剂25-35份，填充剂20-30份，助流剂1-5份，润滑剂0.2-0.6份，粘合剂24-32份。
本发明中各主要原料药的功效活性如下：
1、红豆杉：又名紫杉。红豆杉的枝叶入药，味微甘、苦、平，有消肿散结、通经利尿等功效，主治癓瘕积聚，水肿，小便不利、风湿痹痛等症。《本草纲目》记载其有治疗霍乱、伤寒及排毒等功效。现代中医药发现红豆杉中富含紫杉烷类化合物、多糖、黄酮、红杉醇等，使其具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎、杀菌、抗病毒、抗风湿、降血糖等作用。
(1)消炎抑菌：红豆杉中含有大量的鞣质，该类物质具有抑菌、消炎作用，对空气中的多种有害细菌具有抑制作用，对肾炎、肝炎、胃炎、肠炎、咽喉炎、妇科炎症、前列腺炎、痔疮、类风湿等有非常显著的治疗作用；
(2)提高免疫力：红豆杉中含有人体所需的90多种有效成份，能提高人体的免疫、抗病毒能力。不但对高血糖者有降血糖的作用，对高血压、高血脂、血粘度高、肾病、肝病、痛经等效果也非常显著，特别是能减少尿蛋白流失，使人体自然功能恢复，免疫力增强，将各种疾病都消灭在萌芽之中；
(3)抗氧化剂：红豆杉果富含紫杉醇蛋白质和钙、磷、铁等多种矿物质及多种维生素物质，为迄今为止找到的最佳的具有抗有天然抗氧化(抗衰老)物质植物；
(4)防癌治癌：南方红豆杉中含有的紫杉醇，具有独特的抗癌机制和较高的抗癌活性，能阻止癌细胞的繁殖、抑制肿瘤细胞的迁移，而且无明显的不良反应，被公认是当今天然药物领域中最重要的抗癌活性物质，美国的临床研究证明对卵巢和乳腺癌有突出的疗效。此外，对高血压、糖尿病、冠心病也有一定效果；
2、黄芩：根入药，味苦，性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩煎剂对大肠杆菌、葡萄球菌、白色念球菌、痢疾杆菌、白色念珠菌等有抑制作用，研究者还发现其水煎液对一些特异性炎症有抑制作用。
3、苦参：根入药，味苦，性寒。有清热燥湿，杀虫止痒，利尿的功效。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风，滴虫性阴道炎等症。苦参煎剂对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、结核杆菌等有明显抑制作用。外治滴虫性阴道炎。
4、蛇床子：果实入药，味辛、苦，性温。具有燥湿祛风、杀虫止痒、温肾壮阳等功效。用于阴痒、疥癣、湿疹瘙痒、阳痿、宫冷、寒湿带下、湿痹腰痛等症；外治阴湿疹、阴痒、滴虫性阴道炎。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：
1、本发明提供的一种抗菌妇科外用药物组合物，以红豆杉作为君药，以黄芩作为臣药，克服了红豆杉对革兰氏阳性菌抑制效果不理想的弊端，保证了药物抑菌性能；红豆杉特有红豆杉多糖和红豆杉黄酮等化合物具有抗氧化、提高免疫力等功效，亦可促使阴道菌群平衡；以苦参、蛇床子为佐药，辅助治疗妇科炎症并发症，提高药效，加快痊愈。既可以有效杀灭病菌、止痒杀虫，还能维护阴道酸碱平衡、清热除湿、杀虫止痒、散结消肿。适用于细菌、真菌、原虫等致病原所引起的妇科炎症。
2、本发明提供的一种抗菌妇科外用药物组合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有较强的抑制作用，对金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度仅为0.8mg/ml，对大肠杆菌的最低抑制浓度仅为1.6mg/ml，对枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度仅为1.6mg/ml，对白色念珠菌的最低抑制浓度仅为0.8mg/ml；本发明提供的抗菌妇科外用药物组合物中的四种组分相互配合，协同增效，使得其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的最低抑制浓度大大降低，抑菌率大大增加。
3、本发明所述药用组合物中红豆杉提取物1-10份，黄芩提取物1-10份，苦参提取物0.5-5份，蛇床子提取物0.5-5份，其配方中各组分是合理的分配的：大部分妇科炎症是由于菌群失调所引起的，杀灭致病菌、维持阴道内菌群平衡是首要任务，发明人选择了抑菌性非常好的红豆杉提取物作为主要抑菌剂，考虑到红豆杉提取物对以大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌抑制效果较差，所以选择抑制大肠杆菌效果较好的黄芩作为辅助抑菌剂。妇科炎症还伴随着外阴及阴道瘙痒、灼痛、红肿等并发症，所以发明人选用蛇床子和苦参做为辅助用药，用以清热燥湿，杀虫止痒，解毒止痛，防腐消肿，可以极大的改善生活质量。
4、本发明提供的药物组合物的制备方法中，首先单独浸提中药的有效成分，单独提取可以根据中药的性能，制定不同的浸提温度和时间，确保提取时各中药成分中有效成分不被过度破坏，同时确保提取程度最大化，减少原料用量，降低成本。其次，采用喷雾干燥的方法，能保证提取物分散均匀，在制备制剂是确保不同中药有效成分充分混合，有利于制成药物制剂时有效成分的均匀分散，提高药物组合物的抗菌消炎作用；提供的红豆杉提取物为水溶性提取物，提取后的残渣仍用于提取紫杉醇，可以提高红豆杉的利用率和经济效益。
具体实施方式
实施例1抗菌妇科外用药物组合物的配方
一、抗菌妇科外用药物组合物成分的探索
(1)制备中药有效成分的提取物
按如下步骤制备中药提取物：①红豆杉、苦参、黄芩和蛇床子干燥后，分别采用粉碎机粉碎，得到中药材粉料，粉料径控制为60-80目；②分别取中药材粉料，加入投料量5倍的水进行浸提；浸提3次、每次5h，得到中药材浸提液，提取温度为根据不同中药材进行调整；③将步骤2得到的中药材浸提液打入到循环真空浓缩罐中浓缩，控制浓缩温度80℃，真空度0.008mpa，浓缩液的密度达到1.0g/ml时，停止浓缩；④将步骤3所得浓缩液120℃，喷雾干燥，得到对应中药提取物。
(2)体外抑菌实验菌种选择
枯草芽孢杆菌(atcc6633)、大肠杆菌(atcc35218)、金黄色葡萄球菌(atcc29213)、白色念珠菌(atcc10231).
(3)抑菌剂制备
分别精密称取红豆杉、黄芩、蛇床子、苦参提取物各512mg，加水溶解(可滴加少量dmso促溶解)，用10ml容量瓶定容，摇匀即得浓度为51.2mg/ml的中药提取液，抑菌剂只供当天使用。
(4)菌悬液的配制
取实验菌的2代营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml液体培养基内，制成悬液，在36±1℃培养18～24h后，按比浊法将菌悬液稀释至0.5个麦氏比用双倍浓度的液体培养基将菌液稀释至5×105～5×106cfu/ml，此菌液只供当天使用。
(5)最低抑菌浓度的检测
取48支无菌试管，平均分为4组平行试验，编号。取第一组无菌试管(13×100mm)12支，排成一排，在1号和2号管加入浓度为51.2mg/ml的红豆杉提取液，2号管中加水1ml，混合均匀后，吸取1ml至3号管中，如法依次稀释，11号管加水1ml，此时1～11号各管药物浓度依次为51.2、25.6、12.8、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0mg/ml,。然后在11个试管内加入上述制备好的菌悬液各1ml，摇匀。第1管至第11管药物浓度分别为25.6、12.8、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0mg/ml,12号管加入空白肉汤培养基最为阴性对照。37℃恒温箱中培养24h，在培养结束后，观察培养基，记录液体培养基不出现浑浊的最小抑菌剂浓度，即为最小抑菌浓度。
(6)黄芩、蛇床子和苦参最低抑菌浓度依法测定结果
红豆杉、黄芩、蛇床子和苦参对四种细菌的最低抑菌浓度结果如下表所示：
表1-四种中药材提取物最低抑菌浓度(mg/ml)
由四种中药提取物的mic实验可知，红豆杉、黄芩、蛇床子和苦参提取物均有一定的抑菌性，但是红豆杉和黄芩的抑菌性明显高于蛇床子和苦参。其中红豆杉提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有非常好的抑菌性，但是对大肠杆菌(革兰氏阴性菌)抑制效果较差，而黄芩对大肠杆菌的抑制效果较好。
此外，发明人以mic值作为指标，还考察了黄柏、百步、龙胆、川椒、白矾、苍术等十多种妇科用中药材提取物的抑菌性，除川椒外，其他中药材的抑菌性均不能达到红豆杉和黄芩提取物的水平，但以川椒作为组合药物进行家兔阴道粘膜刺激性实验时，发现川椒提取物有一定的刺激性，所以红豆杉和黄芩提取物作为抑菌成分。
二、抗菌妇科外用药物组合物含量的探索
表2
由表2可知，实验组4即红豆杉提取物6份，黄芩提取物4份，苦参提取物2份，蛇床子提取物2份时，为最佳配比。
由以上药物组合的选择与搭配结果可知，本发明提供的抗菌妇科外用药物组合物中的四种组分相互配合，协同增效，使得其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的最低抑制浓度大大降低，抑菌率大大增加。
大部分妇科炎症是由于菌群失调所引起的，杀灭致病菌、维持阴道内菌群平衡是首要任务，发明人选择了抑菌性非常好的红豆杉提取物作为主要抑菌剂，考虑到红豆杉提取物对以大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌抑制效果较差，所以选择抑制大肠杆菌效果较好的黄芩作为辅助抑菌剂。
妇科炎症还伴随着外阴及阴道瘙痒、灼痛、红肿等并发症，所以发明人选用蛇床子和苦参做为辅助用药，用以清热燥湿，杀虫止痒，解毒止痛，防腐消肿，可以极大的改善生活质量。
实施例2：抗菌妇科外用药物组合物的制备
一、提取工艺的考察
1、发明人通过正交试验考察了料液比(1:5、1:10、1:15)、提取温度(50℃、60℃、70℃、80℃)、提取次数(1、2、3)对提取收得率和提取物抑菌性的影响，再结合提取成本，提出了经济高效的提取工艺，即料液比1:5，分三次提取；提取温度，红豆杉提取温度为60℃，黄芩、蛇床子和苦参的提取温度为75℃。
二、单独提取和混合提取对抑菌的影响
1、红豆杉、苦参、黄芩和蛇床子提取物的制备步骤：①红豆杉、苦参、黄芩和蛇床子干燥后，分别采用粉碎机粉碎，得到中药材粉料，粉料径控制为60-80目；②分别取中药材粉料，加入投料量5倍的水进行浸提；浸提3次、每次5h，得到中药材浸提液，提取温度为根据不同中药材进行调整；③将步骤2得到的中药材浸提液打入到循环真空浓缩罐中浓缩，控制浓缩温度80℃，真空度0.008mpa，浓缩液的密度达到1.0g/ml时，停止浓缩；④将步骤3所得浓缩液120℃，喷雾干燥，得到对应中药提取物；再将所得中药提取物按红豆杉：苦参：黄芩：蛇床子(6:4:2:2)的比例混合均匀，备用。
2、红豆杉、苦参、黄芩和蛇床子复合提取物的制备步骤：①将红豆杉、苦参、黄芩和蛇床子按6:4:2:2的比例混合，用粉碎机粉碎，得到中药材粉料，粉料径控制为60-80目；②取中药材粉料，加入投料量5倍的水进行浸提；浸提3次、每次5h，得到中药材浸提液，提取温度为80℃；③将步骤2得到的中药材浸提液打入到循环真空浓缩罐中浓缩，控制浓缩温度80℃，真空度0.008mpa，浓缩液的密度达到1.0g/ml时，停止浓缩；④将步骤3所得浓缩液120℃，喷雾干燥，得到复合中药提取物。
3、取两种工艺获得的中药提取物，按对比例1所示mic测试法测定两种提取物对枯草芽孢杆菌(atcc6633)、大肠杆菌(atcc35218)、金黄色葡萄球菌(atcc29213)、白色念珠菌(atcc10231)最低抑菌浓度，结果如下：
表3-两种复合中药提取物最低抑菌浓度(mg/ml)
由测试结果可知，中药分别提取后再混合所得提取物的抑菌性明显高于混合提取的提取物，因此选择中药分别提取后再混合的方式。分别提取不同中药组分之后进行等比例的混合，其抗菌性能要优于将原料共混后浸提得到的中药提取物，这主要是因为分别浸提可以更加精准的控制各种中药成分的含量，使得中药之间的配伍效果凸显，增加了中药的药效。并且，由于中药配伍作用的存在，制备得到的抗菌妇科外用药物组合还能发挥不同中药各自独有的性能，如清热除湿、止痒杀虫，能够治疗因妇科疾病所带来的并发症。
实施例3洗剂的制备
制备中药有效成分的提取物，药物组合物8-15份，薄荷脑0.1-0.5份，冰片0.1-0.5份，乙醇1-3份。
作为以上实施方式之一，药物组合物14份(红豆杉提取物6份、黄芩提取物4份、蛇床子提取物2份、苦参提取物2份)、薄荷脑0.1份、冰片0.1份，乙醇2份。
按照以下步骤操作：
(1)红豆杉、黄芩、苦参和蛇床子干燥后，分别采用粉碎机粉碎，得到中药材粉料，粉料径控制为60-80目；
(2)分别取10份中药材粉料，加入投料量5倍的水进行浸提；浸提3次、每次5h，得到中药材浸提液，红豆杉的提取温度60℃，黄芩、苦参和蛇床子的提取温度为80℃；
(3)将步骤(2)得到的相应中药材浸提液，打入到循环真空浓缩罐中浓缩，控制浓缩温度80℃(红豆杉为60℃)，真空度0.008mpa，浓缩液的密度达到1.0g/ml时，停止浓缩；
(4)将步骤(3)所得相应中药材浓缩液120℃喷雾干燥，得到相应的中药提取物。
(5)制备洗剂的抗菌妇科外用药物组合物：中药提取物用适量水溶解，将冰片、薄荷脑溶于适量乙醇，混匀，溶液加水调整至100ml，用乳酸调节至ph5.5-6.5，静置，滤过，灭菌，分装即得。
实施例4凝胶剂的制备
1、采用实施例3制备中药有效成分的提取物的操作，制备得到红豆杉提取物、黄芩提取物、苦参提取物和蛇床子提取物。
2、制备凝胶制剂
该凝胶制剂的原料包括药物组合物0.5-1.4份，薄荷脑0.05-0.2份，冰片0.05-0.2份，凝胶基质0.5-1份，乙醇1-5份。
作为以上实施方式之一，红豆杉提取物0.6份、黄芩提取物0.4份、苦参提取物0.2份、蛇床子提取0.2份、冰片0.05份、薄荷脑0.05份、卡波姆940(凝胶基质)0.5份、乙醇2份。具体方法为：取卡波姆940加入适量水溶胀，成胶体后，加入盐酸调节至ph2.3-2.5；加入四种中药提取物、冰片、乙醇，搅拌均匀，再将氢氧化钠溶液轻轻引流至上述溶液中至ph5.5-6.5即可，调整液体总量为100ml，拌匀，灭菌，分装即得。
实施例5泡腾剂的制备
本采用实施例3制备中药有效成分的提取物的操作，制备得到红豆杉提取物、黄芩提取物、苦参提取物和蛇床子提取物。
所述阴道泡腾片包括下列重量份的物质组成：所述的药物组合物5-10份，泡腾崩解剂25-35份，填充剂20-30份，助流剂1-5份，润滑剂0.2-0.6份，粘合剂24-32份。
所述泡腾崩解剂由有机酸和碱组成，具体为枸橼酸、酒石酸、富马酸中的一种或几种与碳酸钠或碳酸氢钠组成。
阴道泡腾片常用的填充剂有淀粉、微晶纤维素、糊精等。
常用粘合剂有羟丙甲纤维素(兼有发泡功能)水溶液、甘露醇等
润滑剂分为水溶性和水不溶性两类，常用的水溶性润滑剂包括聚乙二醇4000或6000、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸镁、l-亮氨酸、苯甲酸钠、油酸钠、氯化钠、醋酸钠、硼酸等；常用的水不溶性润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酰富马酸钠等。
该抗菌妇科外用药组合物包括红豆杉提取物3份、黄芩提取物2份、苦参提取物1份、蛇床子提取物1份、微晶纤维素(填充剂)30份、甘露醇(粘合剂)25.5份、枸橼酸(泡腾崩解剂)10份、碳酸氢钠(泡腾崩解剂)20份、聚维酮(助流剂)5份、硬脂酸镁(润滑剂)0.5份。将中药提取物、甘露醇和碳酸氢钠混合均匀得混合物1，再将微晶纤维素和枸橼酸混合均匀得混合物2；混合物1和2中分别加入聚维酮的水溶液，制粒；干燥，整粒；将两组干颗粒混合，加入硬脂酸镁，混匀，压片即可。
实验例1抗菌妇科外用药物组合物的抑菌功能测试
(1)菌种的选择
选择体外抑菌试验的菌种分别为：大肠杆菌(atcc35218)、金黄色葡萄球菌(atcc29213)及白色念珠菌(atcc10231)。本发明中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠菌均购自中国药品生物制品检定所。
(2)载体定量杀菌实验
按《消毒技术规范》(2002年版)载体定量杀菌试验要求，取上述制备的凝胶的抗菌妇科外用药物组合，作用5min、10min、60min，结果见下表：
表4
从表4测试结果可以看出，本发明制备的制剂(实施例3的洗剂、实施例4的凝胶、实施例5的阴道泡腾片)具有快速杀菌性能，能在短时间内高效杀菌，并且能长时间抑菌。需要说明的是，本本发明中实施例3-实施例5中的配方范围内的其他实施方式(未列出)均能实现相同或相似的技术效果，在这里不再赘述。
实验例2毒理实验
1、使用实施例3-实施例5的制剂对实验动物进行毒理实验，测试结果如下：
表5
2、从表5的实验结果可以看出，使用实施例3-实施例5的制剂对实验动物安全性高，具有较好的应用前景。
所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。